微生物常用生化实验
微生物常用生化实验
胆汁-七叶苷试验
原理：培养基中的胆汁对某些细菌有抑制作用，只有既能在胆汁中生长，又能水解七叶苷的细菌才能表现出对七叶苷的水解活性。肠球菌和D群链球菌都能在含有胆汁的培养基中生长并水解七叶苷，生成七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁的Fe3+反应形成黑色沉淀，使培养基变黑。
65g/L NaCl生长试验
原理：肠球菌具有很强的耐盐能力，能在上述培养基生长，并且分解培养基中的葡萄糖产酸，使指示剂溴甲酚紫变黄。而链球菌的耐盐能力较弱，在此培养基不能生长。
原理：培养基中葡萄糖和乳糖的比例为1︰10，指示剂为酚红，酚红变色范围在pH6.4~8.2（黄~红），而KIA的pH为7.4，产少量的酸就可导致颜色改变。斜面部分为有氧环境，底层与空气隔绝是相对厌氧的环境。如接种的是能发酵葡萄糖和乳糖的细菌，因产生大量的酸，使斜面与底层均成黄色。如接种的是只发酵葡萄糖不发酵乳糖的细菌，培养基内仅有0.1%葡萄糖可产酸。开始的8~12h时，产生的酸足以引起斜面和底层的颜色变黄。在接下来的时间里，葡萄糖被完全消耗，斜面部分所生成的酸可因接触空气而氧化挥发，细菌在有氧的条件下开始分解蛋白质，氧化降解氨基酸，产生碱性化合物，18~24h整个斜面又转换成碱性颜色—红色。底层（相对缺氧状态），细菌发酵葡萄糖所生成的酸类物质不被氧化而氨基酸降解产生的碱性化合物不足以中和形成的酸，所以培养基仍为黄色。细菌如分解蛋白质产生硫化氢，则与培养基中枸橼酸铁形成黑色的硫化铁。细菌产气时，在底层还可看到有气泡或裂口现象。
苯丙氨酸脱氨酶试验
培养基：苯丙氨酸微量液体培养基
2）原理：细菌分解氨基酸可通过脱氨或脱羧基生成反应物。某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基生成苯丙酮酸，与10%三氯化铁试剂产生深绿色反应。
3）方法：待检菌用接种针以无菌操作接种于上述培养基中，35 ℃培养18~24h，滴加入10%三氯化铁试剂3-4滴。
4）结果：立即（延长时间颜色会退去）观察结果，出现绿色环者为阳性，阴性为黄色。5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。在肠杆菌科细菌中变形杆菌属、普罗维登斯菌属、摩根菌属均为阳性，其它肠杆菌科细菌为阴性
氨基酸脱羧酶试验
原理：细菌凭借其特异脱羧酶作用于相应氨基酸的羧基，以产生胺类物质和二氧化碳的反应过程。脱羧作用的结果使pH移向碱侧，使指示剂溴甲酚紫变紫。脱羧的过程是在厌氧环境进行的，故接种完后培养基需封液体石蜡。
3）方法：待检菌用接种针以无菌操作接种于氨基酸脱羧酶和氨基酸对照培养基中，并加入无菌液体石蜡数滴于35 ℃培养18~24h，观察结果。
【结果】对照管应呈黄色，测定管呈紫色为阳性；对照管呈黄色，测定管也呈黄色为阴性。若对照管呈紫色则试验无意义，不能作出判断。
【应用】主要用于肠杆菌科细菌的鉴定
葡萄糖酸盐试验
1）培养基：葡萄糖酸盐微量液体培养基
2）原理：某些细菌利用培养基中葡萄糖酸盐作为惟一碳源，将葡萄糖酸钾（钠）分解成α-酮基葡萄糖，α-酮基葡萄糖是一种还原性物质，可与班氏试剂（硫酸铜）起反应，出现棕色或砖红色的氧化亚铜沉淀。
3）方法：待检菌接种于上述培养基中，35 ℃培养18~24h后，往培养基中，加入等量班氏试剂（硫酸铜）约10滴，于沸水中水浴10分钟。
4）结果：产生黄-橙色沉淀为阳性，蓝色为阴性。
5）应用：肠杆菌科属间的鉴别。肺炎克雷伯（+），大肠埃希菌（-）
特殊试验：拉丝试验
【原理】由于革兰阴性杆菌细胞壁肽聚糖层数少，较薄，易被4%的KOH破坏，释放出DNA，从而使DNA被拉成细丝状物。
【试剂】4%的KOH。
【方法】取4%的KOH和盐水各一滴，分别置于一张洁净玻片两端，用接种环挑去被检菌分别与4%的KOH和盐水研磨，同时向上拉细菌。
【结果】可见细丝状物被拉起者为阳性。
【应用】革兰阴性杆菌和革兰阳性杆菌的鉴别。
3、DNA酶试验
1）培养基：DNA酶微量液体培养基·。
2）原理：DNA与甲基绿结合形成绿色化合物。细菌如果产生DNA酶，可使长链DNA水解成单核苷酸，从而使绿色的化合物颜色变浅，根据细菌分解DNA能力的大小不同，颜色的变化可由深绿至浅绿（无色）。
3）方法：待检菌接种于上述培养基中，35 ℃培养18~24h。
4）结果：与未接种细菌的DNA酶微量管作对照，凡是颜色较之原培养基管变浅者都算为阳性。
5）应用：用于细菌的鉴别。金黄色葡萄球菌（+）。沙雷菌（+）。
硝酸盐还原试验
1）培养基：硝酸盐微量液体培养基
2）原理：某些细菌可将硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨和氮等。如亚硝酸盐与醋酸作用生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸（甲液）作用，成为偶氮苯磺酸，后者再与α-萘胺（乙液）结合为红色的N- α-萘胺偶氮苯磺酸。
3）方法：待检菌接种于上述培养基中，35 ℃培养18~24h后，将甲、乙液等量混合后加入培养基内，立刻观察结果甲液（对氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸100ml）；乙液（α-萘胺0.5g+5mol/L醋酸100mlml）。
4）结果：阳性者立刻或数秒内显红色；阴性可能①细菌不能将硝酸盐还原为亚硝酸盐（真正的阴性）②细菌可将硝酸盐还原为氨和氮等（假阴性）。区别两者：向原来的阴性试管中加入锌粉，锌离子能还原硝酸盐为亚硝酸盐，与试剂作用显红色，若是红色说明有硝酸盐的存在属第一种情况。
5）应用：本试验在细菌鉴定中广泛应用。大肠埃希菌
各种微生物生化试验方法原理
各种微生物生化试验方法原理 通常利用生化试验的方法，检测细菌对各种物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反应，常用于细菌的鉴别。 1、糖类分解产物 （1）糖发酵试验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一般以能否分解某种糖，是否产酸产气等现象来鉴别。例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。 （2）VP试验（V oges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培养液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反应，生成红色的化合物，此为VP试验阳性。大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP试验阴性。 （3）甲基红试验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。但两者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。故大肠杆菌培养液PH在4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性；产气杆菌培养液PH在5.4以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红试验阴性。 （4）枸橼酸盐利用试验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培养基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变为碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培养基由淡绿色变为深兰色，此为枸橼酸盐利用试验阳性。大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培养基上不能生长，培养基仍为绿色。 2、蛋白质及氨基酸的分解产物 （1）硫化氢试验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢试验阳性。本试验常用于区别肠道杆菌的种类。沙门氏菌属通常为阳性;大肠杆菌、产气杆菌、志贺氏菌为阴性。 （2）明胶液化试验（gelatin liguefaction test）有些细菌具有明胶酶，能分解明胶使其失去凝固能力而液化。变形杆菌、霍乱弧菌、绿脓杆菌、枯草杆菌等能液化明胶；大肠杆菌、沙门氏菌则不能。 （3）吲哚试验（indole test）有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成无色吲哚，加入对-二甲基氨基苯甲醛，无色吲哚生成红色玫瑰吲哚， 为吲哚试验阳性。大肠杆菌、霍乱弧菌等吲哚试验阳性；产气杆菌、伤寒沙门氏菌为吲哚试验阴性。 吲哚对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚 细菌的生化反应是鉴别细菌的重要手段：其中吲哚试验（I）、甲基红试验（M）、VP试验(V)和枸橼酸盐利用试验（C），简称为IMVIC试验，常用于大肠杆菌与产气杆菌的鉴别。典型的大肠杆菌的IMViC试验结果为“++--”，而产气杆菌是“--++”。 0票票数
微生物生理生化实验
【实验题目】 微生物生理生化实验 【实验目的】 1.了解生理生化的意义。 2.掌握几种常用生理生化的实验方法。 【实验器材】 1、菌种： 枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌，变形杆菌，产气肠杆菌 2、试剂： 卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等 3、仪器和用具： 酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等 4、培养基 淀粉培养基、油脂培养基（大分子物质水解实验） 葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内附倒置的德汉氏小管）（糖发酵实验） 蛋白胨水培养基（吲哚实验） 葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红培养基） 【实验原理】 在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程。具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶。许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以促进细胞外的化学反应。各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出他们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。具体实验原理如下： 一、大分子物质的水解实验原理 1、淀粉水解 由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，所以必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精,双糖和单糖，能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉。已知淀粉遇到碘会显现蓝色，因此可通过在淀粉培养基上滴加碘液来判断微生物是否能产生淀粉酶分解淀粉，菌落周围不呈蓝色，出现无色透明
微生物生化鉴定
常用生化试验 一．糖、醇发酵试验 1.糖、醇发酵试验原理：各种细菌因含有发酵不同糖、醇的酶，所以分解糖、醇的能力个不相同。有的能分解某些糖、醇类，有的则不能分解。有的分解某些糖、醇类发酵产酸产气，有的仅产酸，而不产气。根据这些特点，可鉴别细菌。 培养基：糖发酵试验应用的培养基种类很多，大致可分为液体，半固体，固体（高层、斜面）等几类。可根据试验的要求和细菌的特性来选择。 2.乙酰甲基甲醇试验（V-P 试验） 原理：某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，并将丙酮酸脱羧，变为乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境下，被空气中的氧氧化成二乙酰，二乙酰与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红色的化合物。故在培养基中加入少量含胍基的化合物，如肌酸、肌酐可增加胍基含量。试验中加入的 a -萘酚为催化剂，可加速此反应，使反应颜色增加， 提高反应的敏感性。大肠埃希菌不能将丙酮酸脱羧，故V-P 试验呈阴性。培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基 3.甲基红试验（MR 试验）原理：许多细菌如大肠埃希菌等，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再次被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，这样使培养基的PH 降至 4.5 以下。这时加入甲基红指示剂呈红色。若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、酮、醛、气体和水等），则培养基的酸度仍在PH6.2 以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性反应。培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基 MUG 葡萄糖醛酸苷酶试验 原理：细菌的葡萄糖醛酸苷酶在碱性条件下，作用于4-甲基伞形酮-3 -D葡萄糖醛酸甘 （4-Methylumbelliferyl- 3 -D-glucuronide简称MUG ）的3葡萄糖醛酸甘键，使其水解，释 放的4-甲基伞形酮在366nm 紫外灯下产生蓝白色荧光。 培养基：MUG 培养基 4.3-半乳糖苷酶试验 原理：肠杆菌科细菌发酵乳糖，依靠半乳糖苷渗透酶和3-半乳糖苷酶两种不同的酶作用， 能水解邻硝酸酚-3-D 半乳糖苷（O-nitrophenyl- 3-D-galactopyranoside,ONPG ），而释放出黄色 的邻硝酸酚。发酵乳糖的细菌具有上述两种酶，可迅速分解乳糖。迟缓发酵乳糖的细菌只有 3■半乳糖苷酶，而缺少半乳糖苷渗透酶或是其活性很弱，不能将乳糖很快运送到菌细胞内，
微生物常用实验3篇
微生物常用实验 第一篇：细菌涂片染色实验 细菌涂片染色实验是微生物学中最基本的实验之一。通过染色方法，使细菌变得可见，便于观察形态、结构、数量等特征，有利于研究其生长、代谢、致病性等方面。下面，我们来介绍细菌涂片染色实验的具体步骤： 一、制备细菌涂片 1.取出培养基上生长良好的细菌菌落，用不锈钢嵌片环沿中心点轻压一下。 2.将嵌片环中的菌落涂匀于无菌载玻片上，制备成直径约1厘米的薄片。 3.待载玻片上的细菌涂片晾干，并用火焰消毒。 二、涂片染色 1.用火焰将铺有细菌涂片的玻片烤干。 2.将烤干的玻片浸入甲醇中，固定一分钟，再用水漱洗。 3.将玻片浸入碘酒中，固定一分钟，再用水漱洗。 4.将玻片浸入乙醇中，使背景颜色褪去，再用水漱洗。 5.将玻片浸入洋红染色液中，染色时间不超过1分钟。 6.用水冲洗干净，晾干后可以在显微镜下观察。 通过细菌涂片染色实验，我们可以直观地观察到细菌的形态、大小、聚集情况、颜色等，有助于鉴定细菌种类，并进一步深入研究其生物学特性。 第二篇：厌氧培养实验 厌氧菌是一类生长需要在完全无氧条件下进行的微生物。
在许多疾病的发病机制中，厌氧菌都发挥着重要作用，因此，研究厌氧菌对于认识疾病的发病机制具有极其重要的意义。下面，我们来介绍厌氧培养实验的具体步骤： 一、制备厌氧培养基 制备厌氧培养基是进行厌氧菌培养的关键。具体操作步骤如下： 1.准备培养基，并在其中加入培养菌株所需的配方和其他适宜的添加剂。 2.将培养基分装到无菌针筒或暗口瓶中。 3.在体积的一半至三分之二处加入去氧剂（一般为Thioglycolate或Dithiothreitol）。 二、厌氧细菌接种与培养 1.准备厌氧细菌培养物的接种种子。一般情况下，把生长适应在厌氧条件下的细菌进行分生处理来获得设计数量的细胞，并将其重新悬浮在与培养基相同的缓冲液中。 2.在无氧条件下接种厌氧菌，避免暴露于空气中。可以通过使用瓶盖和橡胶塞的局部替代或全封闭气密容器的方法来实现无氧条件。放入预热至适当温度（通常为35℃）的恒温箱中，进行培养。 3.观察培养物的生长情况，并在不同时间点进行采样观察。根据需要添加适当的营养物质（如血清、香豆素等）促进细菌生长。 厌氧培养实验需要极为严格的无菌操作，否则会导致结果出现误差或者实验失败。同时，体积、温度和营养物质等条件的控制也非常重要。 第三篇：病原菌鉴定实验 病原菌鉴定是微生物学中的一项重要技术，可以判断病
微生物鉴定之生化实验大全
微生物鉴定之生化实验 大全 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】
（一）碳水化合物代谢实验糖（醇、苷）类发酵实验 （1)原理：细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，故分解糖的能力各不相同，细菌分解糖类后的终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。 （2)基本培养基：在培养基中加入%-1%的糖类（单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类（水杨苷、菊糖等).培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。 （3)实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内，37℃培养24h，观察结果并记录。 （4)结果判定：如果接种进去的细菌可以发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养基由紫色变成黄色，如果不发酵，则仍保持紫色。如发酵的同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。 （5)应用：是鉴定细菌最主要最基本的实验，特别是对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。 氧化型与发酵型（O/F)的测定 （1）原理：细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有氧的参加，称为氧化型（O），细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解的，称为发酵型(F)。发酵型细菌无论在有氧无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的细菌称为产碱型(-)。这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。
（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5g，磷酸氢二钾，葡萄糖10g，琼脂3g，1%溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水1000mL。将蛋白胨、盐、琼脂和水混合，加热溶解，校正PH至，然后加葡萄糖和指示剂，加热溶解，分装试管，3-4mL/管；115℃，高压蒸汽灭菌20min，取出冷却成琼脂柱。 （3）试验方法：挑取18-24h的幼龄斜面培养物，穿刺接种，每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1mL液体石蜡，37℃培养24h或更长时间。 （4）结果判定： （5）应用：O/F试验主要适用于G-肠道杆菌的鉴别。肠杆菌科的细菌为发酵型，其他肠道菌为非发酵型，非发酵型细菌为氧化型或产碱型。该试验也用于鉴别葡萄球菌（F）和微球菌（O）。 β-半乳糖苷（ONPG)实验 （1）原理：有的细菌可以产生β-半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷,而生成黄色的邻-硝基酚，在很低的浓度下也可以检测出。 （2）培养基：邻硝基酚β-半乳糖苷，L 的灭菌1%蛋白胨水300mL。先将前两种成分混合溶解，过滤除菌，在无菌条件下与1%蛋白胨水混合，分装试管，每管2-3mL。无菌检验后备用。 （3）实验方法：取一环细菌纯培养物接种在ONPG培养基上置37℃培养1-3h或24h如有β-半乳糖苷酶，会在3h内产生黄色的邻硝基酚；如无此酶，则在24h内不变色。
微生物鉴定中的生理生化试验
微生物鉴定中的生理生化试验 一．实验目的 1.证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不 同的酶系统。 2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 4.了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 二．实验原理 由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。具体的原理如下： 1.大分子水解试验 微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸，蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等，这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。如淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘液测定时，不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使pH 降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色转变为深红色，说明细胞外存在脂肪酶。 2. 糖发酵试验 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要，绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、加完、二氧化碳等），有些细菌只产酸不产气。例如，大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌能分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。发酵培养基含有蛋白胨、指示剂（溴甲酚紫）、倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）转变为黄色（pH5.2）。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。 3．IMViC试验 IMViC是吲哚（indol）、甲基红（methyl red test）、伏-普（Voges-Prokauer test）和柠檬酸盐（citrate test）四个实验的缩写，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水细菌学检查。硫化氢试验也是检查肠道杆菌的生化试验。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水中超过一定数量，则表示受粪便污染，产气肠杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水时要将两者分开。 吲哚试验是用于检测吲哚的产生，某些细菌可产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲
微生物常用生化实验
微生物常用生化实验 胆汁-七叶苷试验 原理：培养基中的胆汁对某些细菌有抑制作用，只有既能在胆汁中生长，又能水解七叶苷的细菌才能表现出对七叶苷的水解活性。肠球菌和D群链球菌都能在含有胆汁的培养基中生长并水解七叶苷，生成七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁的Fe3+反应形成黑色沉淀，使培养基变黑。 65g/L NaCl生长试验 原理：肠球菌具有很强的耐盐能力，能在上述培养基生长，并且分解培养基中的葡萄糖产酸，使指示剂溴甲酚紫变黄。而链球菌的耐盐能力较弱，在此培养基不能生长。 原理：培养基中葡萄糖和乳糖的比例为1︰10，指示剂为酚红，酚红变色范围在pH6.4~8.2（黄~红），而KIA的pH为7.4，产少量的酸就可导致颜色改变。斜面部分为有氧环境，底层与空气隔绝是相对厌氧的环境。如接种的是能发酵葡萄糖和乳糖的细菌，因产生大量的酸，使斜面与底层均成黄色。如接种的是只发酵葡萄糖不发酵乳糖的细菌，培养基内仅有0.1%葡萄糖可产酸。开始的8~12h时，产生的酸足以引起斜面和底层的颜色变黄。在接下来的时间里，葡萄糖被完全消耗，斜面部分所生成的酸可因接触空气而氧化挥发，细菌在有氧的条件下开始分解蛋白质，氧化降解氨基酸，产生碱性化合物，18~24h整个斜面又转换成碱性颜色—红色。底层（相对缺氧状态），细菌发酵葡萄糖所生成的酸类物质不被氧化而氨基酸降解产生的碱性化合物不足以中和形成的酸，所以培养基仍为黄色。细菌如分解蛋白质产生硫化氢，则与培养基中枸橼酸铁形成黑色的硫化铁。细菌产气时，在底层还可看到有气泡或裂口现象。 苯丙氨酸脱氨酶试验 培养基：苯丙氨酸微量液体培养基 2）原理：细菌分解氨基酸可通过脱氨或脱羧基生成反应物。某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基生成苯丙酮酸，与10%三氯化铁试剂产生深绿色反应。 3）方法：待检菌用接种针以无菌操作接种于上述培养基中，35 ℃培养18~24h，滴加入10%三氯化铁试剂3-4滴。 4）结果：立即（延长时间颜色会退去）观察结果，出现绿色环者为阳性，阴性为黄色。5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。在肠杆菌科细菌中变形杆菌属、普罗维登斯菌属、摩根菌属均为阳性，其它肠杆菌科细菌为阴性 氨基酸脱羧酶试验 原理：细菌凭借其特异脱羧酶作用于相应氨基酸的羧基，以产生胺类物质和二氧化碳的反应过程。脱羧作用的结果使pH移向碱侧，使指示剂溴甲酚紫变紫。脱羧的过程是在厌氧环境进行的，故接种完后培养基需封液体石蜡。 3）方法：待检菌用接种针以无菌操作接种于氨基酸脱羧酶和氨基酸对照培养基中，并加入无菌液体石蜡数滴于35 ℃培养18~24h，观察结果。 【结果】对照管应呈黄色，测定管呈紫色为阳性；对照管呈黄色，测定管也呈黄色为阴性。若对照管呈紫色则试验无意义，不能作出判断。 【应用】主要用于肠杆菌科细菌的鉴定
微生物检验中常用的生化反应
微生物检验中常用的生化反应 各种细菌所具有的酶系统各不相同，对养分物质的利用力量各异， 因而在代谢过程中所产生的合成或分解产物也不同。应用生物化学 方法检测细菌的代谢产物，有助于细菌的种、属鉴定。这种利用生 化方法来鉴别细菌的试验，统称为细菌的生化试验或生化反应，是 识别细菌的重要方法之一。微生物生化反应是指用化学反应来测定 微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其他方面不 易区分的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要 依据之一。 微生物检验中常用的生化反应有： (一)糖酵解试验 各种微生物因含有不同的分解糖(醇、苷)类的酶，所以分解糖类 的力量各不相同，而且分解相应糖类后形成的终末产物亦随细菌种 类而异，有的产酸，有的还可以产生气体，因此可作为鉴别细菌的 依据，对肠道杆菌的鉴别尤为常见。可用指示剂及发酵管检验。 试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培育物少许，接种 于发酵液体培育基鲁，若为半固体培育基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36℃ 1.0 ℃培育，每天观看结果，检视培育基颜色有 无转变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若 为半固体培育基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有 时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培育物可呈弥散生长。
本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵力量，从而 进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常 用的指示剂为酚红、溴甲酚紫、溴百里蓝和An-drade指示剂。 (二)淀粉水解试验 某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 试验方法：以18h~24h的纯培育物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或 平板（一个平板可分区接种，试验数种培育物）或直接移种于淀粉 肉汤中，于36℃ 1 ℃培育24 h ~48 h,或于20℃培育5d。然后将 碘试剂直接滴浸于培育基表面，若为液体培育物，则加数滴碘试剂 于试管中。马上检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培育基 呈深蓝色、菌落或培育物四周消失无色透亮环、或肉汤 颜色无变化。阴性反应则无透亮环或肉汤呈深蓝色。 淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的 力量、培育时间、培育基含有淀粉量和pH等均有肯定关系。培育基pH必需为中性或微酸性，以pH7. 2最适。淀粉琼脂平板不宜保存 于冰箱，因而以临用时制备为妥。 (三) V-P试验
微生物鉴定中常用的生理生化实验
微生物鉴定中常用的生理生化实验 摘要：大分子物质水解试验中，将所要检测的菌种（枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）接种到淀粉培养基和油脂培养基上，培养一段时间后在淀粉培养基滴上碘液，通过比较透明圈来判断各微生物水解淀粉能力的强弱；观察油脂培养基上是否有红斑点产生来判断微生物是产生脂肪酶。 糖发酵试验中向葡萄糖发酵培养基试管和乳糖培养基试管中各接种大肠杆菌和变形杆菌，并留一空白培养基试管对照。经过一段时间培养后对试管中的颜色变化和产气情况进行观察。 IMVIC 试验中向蛋白胨培养基和葡萄糖蛋白胨水培养基中各接种上大肠杆菌和产 气杆菌，经过一段时间培养后，向葡萄糖培养基的培养物中滴上甲基红试剂，通过颜色变化来判断微生物生长代谢产物中是否有有机酸产生；向蛋白胨培养基中先加入适量的乙醚后再沿壁加入对二甲基氨基苯甲醛试剂，根据产生红色反应层与否来判断微生物生长代谢中是否有产生吲哚，进而来判断微生物对色氨酸是否有分解能力。 关键词接种无菌操作 前言微生物必须依靠包外酶对大分子物质进行水解后才能被其加以利用，这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。淀粉遇碘液时显蓝色，当滴有碘液后不显蓝色则说明细菌产生了淀粉酶；脂肪水解后会产生脂肪酸降低培养基的PH值，使培养基中含有的中性红试剂由淡红色转变为深红色，说明细胞外存在脂肪酶。 绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖产生的有机酸和气体，有些细菌只产酸不产气。大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖并产酸产气；变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。当发酵产酸时，培养基试管中的培养液会由紫色转变为黄色，当产气时，试管中的倒置德汉氏小管中会有气泡。 有些细菌能产生分解蛋白胨中色氨酸的色氨酸酶，分解产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。在细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变使加入培养基中的甲基红指示剂变红。 在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。代谢过程主要是酶促返反应过程。具有酶功能的蛋白质多数在细胞内。许多细菌产生包外酶，这些酶从细胞中释放出来，以催化细胞外的化学反应。各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异性，反应除出它们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被作为细菌鉴定和分类的内容。 材料与方法 1.1材料 1.1.1培养基 淀粉培养基：蛋白胨10g、NaCl5g、牛肉膏5g、可溶性淀粉2g、蒸馏水1000ml、琼脂15-20g。 油脂培养基：蛋白胨10g、牛肉膏5g、NaCl5g、香油或花生油10g、1.6%中性红水溶液1ml、琼脂15-20g、蒸馏水1000ml、PH 7.2。
细菌常见的生化反应试验
细菌常见的生化反应试验 （一）什么是生化试验? 指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。 生化试验或称生化反应：细菌的酶不完全相同，对营养物质的分解能力不一致，因此其代谢产物各异。在培养基中加入可与被测终产物反应的指示剂，产生肉眼可见的变化，如颜色的改变等，利用生化方法来鉴定细菌的试验，统称为细菌的生化试验或称生化反应 （二）生化试验的方法： 1在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化。 2在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。 3根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。 4根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。
（三）生化试验的注意事项 1.待检菌应是新鲜培养物，培养18~24h。 2.待检菌应是纯种培养物。 3.遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48 小时。 4.应做必要的对照试验。 5.提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进 行试验。 （四）检验细菌的生化试验范围 :1、糖（醇）类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验 二、糖醇类代谢试验 （一）糖醇类发酵试验 （二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验 （三）V-P试验 （四）甲基红（Methyl Red）试验MR
（五）七叶苷水解试验（六）甘油品红试验（一）糖醇类发酵试验 1、原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖(醇)，有的只能分解1~2种糖(醇) ，有的分解糖(醇)能产酸产气，有的分解糖(醇)只产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌。 常用的糖醇 单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖 双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖 三糖：棉子糖 多糖：菊糖、肝糖、淀粉 醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇 2试验方法：用接种针或环移取纯培养物少许，接种于糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。置36±1.0℃培养1~3天，每天观察结果。 3、结果观察和记录： •产酸产气，阳性，以“⊕”表示
微生物生理生化实验
姓名班级13级生命基地班学号同组者： 科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别3 【实验题目】 微生物生理生化实验 【实验目的】 1.了解生理生化的意义。 2.掌握几种常用生理生化的实验方法。 【实验器材】 1、菌种： 枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌，变形杆菌，产气肠杆菌 2、试剂： 卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等 3、仪器和用具： 酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等 4、培养基 淀粉培养基、油脂培养基（大分子物质水解实验） 葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内附倒置的德汉氏小管）（糖发酵实验） 蛋白胨水培养基（吲哚实验） 葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红培养基） 【实验原理】 在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程。具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶。许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以促进细胞外的化学反应。各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出他们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。具体实验原理如下：一、大分子物质的水解实验原理
姓名班级13级生命基地班学号同组者： 科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别3 1、淀粉水解 由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，所以必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精,双糖和单糖，能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉。已知淀粉遇到碘会显现蓝色，因此可通过在淀粉培养基上滴加碘液来判断微生物是否能产生淀粉酶分解淀粉，菌落周围不呈蓝色，出现无色透明圈，则该菌种能够水解淀粉。 2、油脂水解 脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，而产生的脂肪酸可改变培养基的PH,因此在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后可通过观察菌苔的颜色判断菌种是否能够水解油脂，若出现红色斑点，则说明这种菌可产生分解油脂的酶。 二、糖发酵实验原理 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌 能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等); 有些细 菌只产酸不产气.例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。 图1：糖发酵实验A 培养前的情况 B 培养后产酸不产气 C 培养后产酸产气
微生物常用生化实验
胆汁-七叶苷试验 原理：培养基中的胆汁对某些细菌有抑制作用，只有既能在胆汁中生长，又能水解七叶苷的细菌才能表现出对七叶苷的水解活性。肠球菌和D群链球菌都能在含有胆汁的培养基中生长并水解七叶苷，生成七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁的Fe3+反应形成黑色沉淀，使培养基变黑。 65g/L NaCl生长试验 原理：肠球菌具有很强的耐盐能力，能在上述培养基生长，并且分解培养基中的葡萄糖产酸，使指示剂溴甲酚紫变黄。而链球菌的耐盐能力较弱，在此培养基不能生长。 原理：培养基中葡萄糖和乳糖的比例为1︰10，指示剂为酚红，酚红变色范围在pH6.4~8.2（黄~红），而KIA的pH为7.4，产少量的酸就可导致颜色改变。斜面部分为有氧环境，底层与空气隔绝是相对厌氧的环境。如接种的是能发酵葡萄糖和乳糖的细菌，因产生大量的酸，使斜面与底层均成黄色。如接种的是只发酵葡萄糖不发酵乳糖的细菌，培养基内仅有0.1%葡萄糖可产酸。开始的8~12h时，产生的酸足以引起斜面和底层的颜色变黄。在接下来的时间里，葡萄糖被完全消耗，斜面部分所生成的酸可因接触空气而氧化挥发，细菌在有氧的条件下开始分解蛋白质，氧化降解氨基酸，产生碱性化合物，18~24h整个斜面又转换成碱性颜色—红色。底层（相对缺氧状态），细菌发酵葡萄糖所生成的酸类物质不被氧化而氨基酸降解产生的碱性化合物不足以中和形成的酸，所以培养基仍为黄色。细菌如分解蛋白质产生硫化氢，则与培养基中枸橼酸铁形成黑色的硫化铁。细菌产气时，在底层还可看到有气泡或裂口现象。 苯丙氨酸脱氨酶试验 培养基：苯丙氨酸微量液体培养基 2）原理：细菌分解氨基酸可通过脱氨或脱羧基生成反应物。某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基生成苯丙酮酸，与10%三氯化铁试剂产生深绿色反应。 3）方法：待检菌用接种针以无菌操作接种于上述培养基中，35 ℃培养18~24h，滴加入10%三氯化铁试剂3-4滴。 4）结果：立即（延长时间颜色会退去）观察结果，出现绿色环者为阳性，阴性为黄色。5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。在肠杆菌科细菌中变形杆菌属、普罗维登斯菌属、摩根菌属均为阳性，其它肠杆菌科细菌为阴性 氨基酸脱羧酶试验 原理：细菌凭借其特异脱羧酶作用于相应氨基酸的羧基，以产生胺类物质和二氧化碳的反应过程。脱羧作用的结果使pH移向碱侧，使指示剂溴甲酚紫变紫。脱羧的过程是在厌氧环境进行的，故接种完后培养基需封液体石蜡。 3）方法：待检菌用接种针以无菌操作接种于氨基酸脱羧酶和氨基酸对照培养基中，并加入无菌液体石蜡数滴于35 ℃培养18~24h，观察结果。 【结果】对照管应呈黄色，测定管呈紫色为阳性；对照管呈黄色，测定管也呈黄色为阴性。若对照管呈紫色则试验无意义，不能作出判断。 【应用】主要用于肠杆菌科细菌的鉴定 葡萄糖酸盐试验
各类微生物生化实验方式原理
各类微生物生化实验方式原理 通常利用生化实验的方式，检测细菌对各类物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反映，经常使用于细菌的辨别。 一、糖类分解产物 （1）糖发酵实验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一样以可否分解某种糖，是不是产酸产气等现象来辨别。例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。 （2）VP实验（Voges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培育液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反映，生成红色的化合物，此为VP实验阳性。大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP实验阴性。 （3）甲基红实验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。但二者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。故大肠杆菌培育液PH在以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红实验阳性；产气杆菌培育液PH在以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红实验阴性。 （4）枸橼酸盐利用实验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培育基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变成碳酸盐，使培育基由中性变成碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培育基由淡绿色变成深兰色，此为枸橼酸盐利用实验阳性。大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培育基上不能生长，培育基仍为绿色。 二、蛋白质及氨基酸的分解产物 （1）硫化氢实验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培育基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢实验阳性。本实验经常使用于区别肠道杆菌的种类。沙门氏菌属一样为阳性;大肠杆菌、产气杆菌、志贺氏菌为阴性。 （2）明胶液化实验（gelatin liguefaction test）有些细菌具有明胶酶，能分解明胶使其失去凝固能力而液化。变形杆菌、霍乱弧菌、绿脓杆菌、枯草杆菌等能液化明胶；大肠杆菌、沙门氏菌那么不能。
细菌生理生化实验
细菌生理生化试验—小木虫 微生物生理生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生理生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区分的微生物。因此微生物生理生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一,微生物鉴定中常用的生理生化反应如下所示： (一) 糖、醇发酵试验 原理： 不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸（符号：+）、产气（符号：○），培养基由紫（蓝）变黄（指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：－），培养基仍为紫（蓝）色。 培养基配制： 一般细菌常用休和李夫森二氏培养基： 蛋白胨：2g ，K2HPO4 :0.2g ，NaCl:5g ，糖（醇、糖苷）：1% ，水洗琼脂：5～6g，蒸馏水：1000mL，PH:6.8～7.0，溴百里酚蓝：1%水溶液3mL(先用少量的95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液)。先调PH后再加指示剂。 芽孢杆菌培养基配制： (NH4)2HPO4:1g ，MgSO4:0.2g ，KCl:0.2g ，酵母膏：0.2g ，糖（醇、糖苷）：1%水洗琼脂：5～6g ，蒸馏水：1000mL ，溴甲酚紫：0.4%乙醇液2mL，PH:6.8～7.0。先调PH后再加指示剂。 将以上培养基分装试管，培养基高度约为4～5cm ，115℃灭菌20min。 测定的糖（醇、糖苷）类可以包括：葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖（1.5%）、半乳糖（1.5%）、D-山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。 注意：以上亦可用液体培养基。 接种和观察结果： 用18～24h的幼龄菌种，用穿刺针接种于培养基中，适温培养1d，3d，5d后观察，颜色变黄为阳性，不变为阴性；有气泡产生为产气。 结果记录： 产酸：+，产气：○，不产酸长气：-。 (二) 淀粉水解试验 原理： 某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 培养基配制： 牛肉膏5g；NaCl:5g；可溶性淀粉5g；琼脂:20g；蒸馏水1000mL。PH:7.2 121℃灭菌20min。 试验方法： 以18~24h的纯培养物，点接于淀粉琼脂平板（一个平板可分区接种）或直接移种于淀粉肉汤中，于36±1℃培养24～48h，或于20℃培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明圈、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明圈或肉汤呈深蓝色。 淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养时间，培养
微生物鉴定中常用生理生化试验
微生物常规生理生化试验 摘要利用大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）、铜绿假单 胞菌（Pseudomonas aeruginosa）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）进行淀粉和油脂实验，证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力的不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子水解实验的原理和方法；使用大肠杆菌（Escherichia coli）和普通变形杆菌（Proteus vulgaris）进行葡萄糖和乳糖发酵试验，了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法；利用大肠杆菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）进行吲哚试验和甲基红试验，了解两个实验的反应原理以及在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 关键词生理生化大分子试验糖发酵试验吲哚试验甲基红试验 前言微生物代谢与其他生物代谢有着许多相似之处，也有不同之处。微生物代谢重要特 征之一，就是代谢类型的多样性，因此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。人们在微生物的分类鉴定工作中，常利用其生理生化反应作用作为重要依据。 微生物对大分子淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内，这些过程均可以通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因而发酵糖(醇)的能力各不相同，其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。 IMViC试验是吲哚（indol test）、甲基红（methyl red test）、伏-普（Voges-Prokarer test）和柠檬酸盐（cirate test）4个试验的缩写，这4个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水的细菌检查。 1、材料与方法 1.1材料 1.1.1菌种 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）、大肠杆菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。 1.1.2试剂 固体油脂培养基3个、固体淀粉培养基2个、葡萄糖发酵培养基试管和乳糖培养基试管各3支（内装有倒置的德汉氏小管）、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、革兰氏染色用卢戈氏碘染液、甲基红指示剂、乙醚和吲哚试剂等 1.1.3仪器和其他用品 无菌平皿、无菌试管、接种环、试管架等 1.2方法
微生物检验之生化实验
微生物检验之生化实验 微生物检验之生化实验大全 不同的细菌具有各自的独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又具有不同的生物化学特性，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。掌握各种生化反应的原理和应用是细菌鉴定的基础。生理生化特性的测定主要根据Shirling & Gottlieb《InternationalJournal of Systematic Bacteriology》中鉴定的有关试验。下面是yjbys店铺为大家带来的微生物鉴定之生化实验大全的知识，欢迎阅读。 碳水化合物代谢实验 糖(醇、苷)类发酵实验 (1)原理： 细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，故分解糖的能力各不相同，细菌分解糖类后的终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物 (2)基本培养基： 在培养基中加入0.5%～1%的糖类(单糖、双糖、或者多糖)、醇类(甘露醇、肌醇)苷类(水杨苷、菊糖等)。培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。 (3)实验方法： 取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内，37℃培养24h，观察结果并记录。 (4)结果判定： 如果接种进去的细菌可发酵某种糖或醇，则可产酸，使培养基由紫色变成黄色，如果不发酵，则仍保持紫色。如，发酵的同时又产生气体，则在微量发酵管顶部积有气泡。 (5)应用： 是鉴定细菌最主要最基本的实验，特别是对肠杆菌科细菌的鉴定
尤为重要。 氧化型与发酵型(O/F)的测定 (1)原理： 细菌在分解葡萄糖的过程中，必需有氧的参加的，称为氧化型，细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解的，称为发酵型。发酵型细菌无论在有氧或者无氧的环境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。 (2)培养基： 培养基蛋白胨2g，氯化钠5g，磷酸氢二钾0.3g，葡萄糖10g，琼脂3g，1%溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水1000mL。将蛋白胨、盐、琼脂和水混合，加热溶解，校正pH至7.2，然后加葡萄糖和指示剂，加热溶解;分装试管，3～4mL/管;115℃，高压蒸汽灭菌20min，取出后冷却成琼脂柱。 (3)实验方法： 挑取18～24h的幼龄斜面培养物，穿刺接种，每种细菌接种两管，于其中1管覆盖1mL灭菌的液体石蜡，37℃培养24小时或更长时间。 (4)结果判定。 Β-半乳糖苷(ONPG)实验 (1)原理： 有的细菌可以产生β一半乳糖苷酶，能分解邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷，而生成黄色的邻-硝基酚，在很低浓度下也可以检测出。 (2)培养基： 邻硝基酚β-半乳糖苷0.6g，0.01mol/L pH7.5磷酸缓冲液1000mL，pH7.5的灭菌1%蛋白胨水300mL。先将前两种成分混合溶解，过滤除菌，在无菌条件下与1%蛋白胨水混合，分装试管，每管2～3mL，无菌检验后备用。 (3)实验方法： 取一环细菌纯培养物接种在ONPG培养基上置37℃培养1～3h 或24h，如有β-半乳糖苷酶，会在3h内产生黄色的邻硝基酚;如无此