pFBDM昆虫表达载体说明
真核细胞常见表达载体
真核细胞常见表达载体真核细胞, 表达载体1、pCMVp-NEO-BAN载体特点:该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对，主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成，在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。
更重要的是，由于该真核细胞表达载体中抗neo 基因存在，转染细胞后，用G418筛选，可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。
插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。
注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。
2、pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector)特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40 T抗原的真核细胞内进行复制。
Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。
此外，载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。
用途: 该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点，将外源基因扦入这些位点，将合成外源基因和EGFP的融合基因。
借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。
亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子,Acet1-Nhe1)。
3、pEGFT-Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体特点:pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。
pCoBlast昆虫表达载体说明
pCoBlast编号 载体名称北京华越洋生物KCVECT105 pCoBlastpCoBlast载体基本信息载体名称: pCoBlast质粒类型: 昆虫表达载体；筛选载体克隆方法: --启动子: copia载体大小: 3907 bp5' 测序引物及序列: --3' 测序引物及序列: --载体标签: 无载体抗性: 氨苄青霉素真核筛选标记: Blasticidin克隆菌株: TOP10；DH5-T1R宿主细胞（系）: 果蝇细胞系S2备注: pCoBlast载体与昆虫表达载体共转染，建立稳表达细胞系。
瞬表达/稳表达: --组成型/诱导型: 组成型病毒/非病毒: 非病毒pCoBlast载体质粒图谱和多克隆位点信息pCoBlast载体简介pCoBlast is a 3907 bp selection vector that can be cotransfected with the expression vector of choice to to create stable cell lines in Drosophila. It contains the Streptomyces griseochromogenes bsd gene under control of the Drosophila copia promoter to confer resistance to blasticidin in S2 cells.引用及参考文献A novel allelic variant of the human TSG-6 gene encoding an amino acid difference in the CUB module. Chromosomal localization, frequency analysis, modeling, and expression.Nentwich Hilke A; Mustafa Zehra; Rugg Marilyn S; Marsden Brian D; Cordell Martin R; Mahoney David J; Jenkins Suzanne C; Dowling Barbara; Fries Erik; Milner Caroline M; Loughlin John; Day Anthony J;J Biol Chem (2002) 277:15354-15416Product usage: The full-length coding sequence of human TSG-6 (A431 allele encoding Gln at amino acid 144), including the signal sequence and stop codon,was excised from the pAcCL29-1 vector by digestion with KpnI/XbaI and cloned into the corresponding sites in the Drosophila Expression SystempCoBlast载体序列TCGCGCGTTTCGGTGATGACGGTGAAAACCTCTGACACATGCAGCTCCCGGAGACGGTCACAGCTTGTCT GTAAGCGGATGCCGGGAGCAGACAAGCCCGTCAGGGCGCGTCAGCGGGTGTTGGCGGGTGTCGGGGCTGG CTTAACTATGCGGCATCAGAGCAGATTGTACTGAGAGTGCACCATATGCGGTGTGAAATACCGCACAGAT GCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGGCGCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATC GGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTA ACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGCCAAGCTTGCATGCCTGCAGGTCG ACTCTAGAGGATCCGGTGCGTGGTGGTTTCATGCTTCTGGGAACGGCAAATGGGTTTAGGATTGGGAACC CCTCATCATCTGTTGGAATATACTATTCAACCTACAAAAATAACGTTAAACAACACTACTTTATATTTGA TATGAATGGCCACACCTTTTATGCCATAAAACATATTGTAAGAGAATACCACTCTTTTTATTCCTTCTTT CCTTCTTGTACGTTTTTTGCTGTGAGTAGGTCGTGGTGCTGGTGTTGCAGTTGAAATAACTTAAAATATA AATCATAAAACTCAAACATAAACTTGACTATTTATTTATTTATTAAGAAAGGAAATATAAATTATAAATT ACAACAGGTTCCCTTTATGCGAAGGGATGGCCAAGCCTTTGTCTCAAGAAGAATCCACCCTCATTGAAAG AGCAACGGCTACAATCAACAGCATCCCCATCTCTGAAGACTACAGCGTCGCCAGCGCAGCTCTCTCTAGC GACGGCCGCATCTTCACTGGTGTCAATGTATATCATTTTACTGGGGGACCTTGCGCAGAACTCGTGGTGC TGGGCACTGCTGCTGCTGCGGCAGCTGGCAACCTGACTTGTATCGTCGCGATCGGAAATGAGAACAGGGG CATCTTGAGCCCCTGCGGACGGTGCCGACAGGTTCTTCTCGATCTGCATCCTGGGATCAAAGCCATAGTG AAGGACAGTGATGGACAGCCGACGGCAGTTGGGATTCGTGAATTGCTGCCCTCTGGTTATGTGTGGGAGG GCTAACCCTTATACGCAAGGGAGTAGATGCCGACCGAACAAGAGCTGATTTCGAGAACGCCTCAGCCAGC AACTCGCGCGAGCCTAGCAAGGCAAATGCGAGAGAACGGCCTTACGCTTGGTGGCACAGTTCTCGTCCAC AGTTCGCTAAGCTCGCTCGGCTGGGTCGCGGGAGGGCCGGTCGCAGTGATTCAGGCCCTTCTGGATTGTG TTGGTCCCCAGGGCACGATTGTCATGCCCACGCACTCGGGTGATCTGACTGATCCCGCAGATTGGAGATC GCCGCCCGTGCCTGCCGATTGGGTGCAGATCAGCCTCGAGGCCAGCTAGCTTGAACTTGTTTATTGCAGC TTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCT AGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCGGGTACCGAGCTCGAATTCGTA ATCATGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAA GCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCC CGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGT TTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAG CGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACAT GTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTC CGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAA GATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATA CCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCAATGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCG GTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTAT CCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAA CAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTAC ACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCT CTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAG AAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAA GTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGC ACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACG ATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAG ATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTC CATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTT GTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCC AACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGAT CGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACT GTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTA TGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAA AGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGT TCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAG CAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACT CTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGT ATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAApCoBlast其他昆虫表达载体：pMT/BioEase-DEST pVL1392 pVL1393 pXINSECT-DEST39 pXINSECT-DEST38 pBacPAK9 pBacPAK8 pIB/V5-His-TOPO pIEX/Bac-1 pFastBacHT B pFastBacHT A pFastBac1pMT/V5-His-TOPO pMT/BiP/V5-His A pCoHygro pAc5.1/V5-His C pAc5.1-V5-His A pAc5/V5-HisA pAc5-V5-HisB pAc5-V5-HisC pCoBlast pAc5.1/V5-His B pIZ/V5-His pIB/V5-HispIZT/V5-His pMIB/V5-His C pMIB/V5-His A pMT/BiP/V5-His C pMT/BiP/V5-His B pIEx/Bac-4 pIEx/Bac-3 pIEXBac-c-EGFP-3 pIEXBac-c-EGFP-1 pIEXBac-c-EGFP-4 pAc5.1B-EGFP pBlueBacHis2 A pBlueBacHis2 C pBlueBacHis2 B pFastBacHT C pMT-Bip-V5-HisA pFBDM pUCDM pFastBac Dual pMIB/V5-His BpMT/V5-His C pMT/V5-His B pMT/V5-His A pAcGP67ApAc5.1b pAc5.1a pVL1392-XyIE control vector pFastBac-c-His-TEV pFastBac-N-GST-TEV pFastBacI-Gus pFastBacHT-CAT pBADZ-His6Cre。
昆虫表达系统
➢ 识别受体 ➢ 假病毒颗粒
• 杆状病毒及其基因组模型
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昆虫杆状表达系统简介
• 杆状病毒是已知昆虫病毒中最大的类群 ,发现最早 、研
究最多且实用意义很大的昆虫病毒。20世纪80年代以来由
于杆状病毒表达载体系统（baculovirus expression vector system，BEVS）的建立 ,已被公认为是当今 基因工程四大表达系统之一 。该系统具有许多优点, 如多角体启动子控制下的高效表达 ,完善的转译后 加工修饰 ,较易从无血清培养上清中纯化的蛋白,无 内毒素污染等。 • 杆状病毒载体系统主要分为两大类,一类是用于表达单 个外源基因的载体,另一类是多元表达载体,用于插人 并表达2个或多个外源基因
➢ 荧光显微镜法——表位标记的抗体与
直接抗体进行荧光标记——免疫学 方法
• Western印迹法 ➢ 蛋白样品制备→ SDS-PAGE（按分子
量大小）→电转移→一抗（特异性） →二抗→显色
➢ 敏感度：1-5ng
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杆状病毒-昆虫表达系统技术路线
• BEVS通常由转移载体、亲本病毒和重组介质三部分组成,其技术 路线分以下几步:先将外源片段克隆到载体质粒中, 置于杆状病毒启 动子控制之下, 上下游各有一段与亲本病毒DNA 相匹配的侧翼序 列, 构建成转移载体; 然后把转移载体和野生型病毒共转染入昆虫 细胞,通过同源重组将外源片段插入到病毒基因组,再以特定的筛选 标记和方法获得重组病毒。由于病毒原来的非必需区段被外源片 段取代, 当重组病毒在受体细胞内复制时,外源片段也得到了表达。 最后空斑纯化重组病毒, 扩大培养,分离、 纯化所表达的外源蛋白 。
RNA干涉家蚕细胞Ago蛋白家族基因的表达研究
RNA干涉家蚕细胞Ago蛋白家族基因的表达研究陈敏;李丹丹;乔惠丽;卢楠;文祯中;阚云超【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2012(041)009【摘要】分别构建RNAi(RNA interference,RNAi)载体干扰家蚕细胞BmN中Argonautel(Agol)和Argonaute2 (Ago2)基因的表达.首先利用PFBDM和pBac[A3 - EGFPafm]载体构建Agol和Ag02基因的RNA干涉载体,通过转染家蚕细胞发现,Agol和Ago2基因表达明显下降.并观察细胞形态发现,转染RNAi载体96h后,家蚕BmN细胞逐渐失去正常的梭形状态,体积变大,形态变圆.该研究为进一步研究家蚕中small RNA的产生及作用机制提供了较好的基础.【总页数】5页(P148-151,157)【作者】陈敏;李丹丹;乔惠丽;卢楠;文祯中;阚云超【作者单位】河南大学生命科学学院,河南开封475000;南阳师范学院伏牛山昆虫生物学重点实验室,河南南阳473061;南阳师范学院伏牛山昆虫生物学重点实验室,河南南阳473061;南阳师范学院伏牛山昆虫生物学重点实验室,河南南阳473061;南阳师范学院伏牛山昆虫生物学重点实验室,河南南阳473061;平顶山学院,河南平顶山467000;南阳师范学院伏牛山昆虫生物学重点实验室,河南南阳473061【正文语种】中文【中图分类】S881【相关文献】1.细胞周期蛋白家族基因在家蚕胚胎期的表达分析 [J], 刘丽华;沈卫德;李兵;秦佳梅;刘涛2.家蚕细胞周期蛋白家族基因在5龄幼虫组织中的表达谱分析 [J], 刘丽华;沈卫德;李兵;王文兵3.细胞周期蛋白家族基因在家蚕幼虫蜕皮过程中的表达 [J], 刘丽华;沈卫德;李兵4.细胞周期蛋白家族基因在家蚕5龄幼虫精巢发育过程中的表达分析 [J], 刘丽华;付熙瑶;王嘉阳;刘美琦;单子笑;栾雪红5.siRNA介导的家蚕ABC转运蛋白相关基因的干涉研究 [J], 王根洪;刘春;杨远萍;吴雪峰;夏庆友因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2021年真核细胞常见表达载体
真核细胞常见表达载体欧阳光明（2021.03.07）真核细胞, 表达载体1、pCMVp-NEO-BAN载体特点:该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对，主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成，在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。
更重要的是，由于该真核细胞表达载体中抗neo基因存在，转染细胞后，用G418筛选，可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。
插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。
注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。
2、pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector)特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40 T抗原的真核细胞内进行复制。
Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。
此外，载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。
用途: 该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点，将外源基因扦入这些位点，将合成外源基因和EGFP的融合基因。
借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。
亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子,Acet1-Nhe1)。
3、pEGFT-Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体特点:pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40 T抗原的真核细胞内进行复制。
真核细胞常见表达载体
真核细胞常见表达载体真核细胞，表达载体1、pCMVp-NEO—BAN载体特点：该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对,主要由CMVp启动子、兔β—球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成，在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因.更重要的是,由于该真核细胞表达载体中抗neo 基因存在，转染细胞后，用G418筛选,可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。
插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点.注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。
2、pEGFP，增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector）特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白,在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40 T抗原的真核细胞内进行复制。
Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。
此外, 载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。
用途: 该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点,将外源基因扦入这些位点，将合成外源基因和EGFP的融合基因。
借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。
亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子，Acet1-Nhe1)。
3、pEGFT-Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体特点：pEGFP—Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因，在PCMV 启动子驱动下,在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40 T抗原的真核细胞内进行复制.Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV—TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株.此外, 载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。
pFastBacI-Gus昆虫表达载体说明
pFastBacI-Gus编号 载体名称北京华越洋生物KCVECT127 pFastBacI-‐GuspFastBacI-‐Gus载体基本信息载体名称: pFastBacI-Gus质粒类型: 昆虫细胞表达载体高拷贝/低拷贝: --启动子: --克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 6661bp5' 测序引物及序列: --3' 测序引物及序列: --载体标签: --载体抗性: Ampicillin筛选标记: Gentamicin备注: --稳定性: --组成型: --病毒/非病毒: 杆状病毒pFastBacI-‐Gus载体质粒图谱和多克隆位点信息pFastBacI-‐Gus载体简介pFastBac1-‐Gus is a 6661 bp control vector containing the Arabidopsis thaliana gene for β-‐glucuronidase (Gus) (Kertbundit et al., 1991), and was generated by restriction cloning of t he G us g ene i nto p FastBac1. T he m olecular w eight o fβ-‐glucuronidase i s 68.5 k Da.pFastBacI-‐Gus其他昆虫表达载体：pMT/BioEase-DEST pVL1392 pVL1393 pXINSECT-DEST39 pXINSECT-DEST38 pBacPAK9 pBacPAK8 pIB/V5-His-TOPO pIEX/Bac-1 pFastBacHT B pFastBacHT A pFastBac1pMT/V5-His-TOPO pMT/BiP/V5-His A pCoHygro pAc5.1/V5-His C pAc5.1-V5-His A pAc5/V5-HisA pAc5-V5-HisB pAc5-V5-HisC pCoBlast pAc5.1/V5-His B pIZ/V5-His pIB/V5-HispIZT/V5-His pMIB/V5-His C pMIB/V5-His A pMT/BiP/V5-His C pMT/BiP/V5-His B pIEx/Bac-4 pIEx/Bac-3 pIEXBac-c-EGFP-3 pIEXBac-c-EGFP-1 pIEXBac-c-EGFP-4 pAc5.1B-EGFP pBlueBacHis2 A pBlueBacHis2 C pBlueBacHis2 B pFastBacHT C pMT-Bip-V5-HisA pFBDM pUCDM pFastBac Dual pMIB/V5-His B pMT/V5-His C pMT/V5-His B pMT/V5-His A pAcGP67ApAc5.1b pAc5.1a pVL1392-XyIE control vector pFastBac-c-His-TEV pFastBac-N-GST-TEV pFastBacI-Gus pFastBacHT-CAT pBADZ-His6Cre。
昆虫细胞表达系统
昆虫细胞表达系统昆虫细胞表达系统是四大表达系统（昆虫细胞、细菌、酵母、哺乳动物细胞表达系统）之一。
昆虫细胞表达系统原理是通过转座作用将转移载体中的表达组件定点转座到能在大肠杆菌中增殖的杆状病毒穿梭载体（Bacmid）上，通过抗性和蓝白斑筛选到重组穿梭质粒，提取穿梭质粒DNA转染昆虫细胞后，得到的子代病毒即为重组病毒。
将病毒上清浸染昆虫细胞，获得表达的重组蛋白。
杆状病毒是一类闭合环状双链病毒，病毒粒子呈杆状，以昆虫为主要宿主。
杆状病毒还是一种出芽型分泌性病毒粒子，在感染细胞后能迅速在培养细胞中水平传播而保持细胞在相当长的时间内不裂解，从而最大限度地保持了外源蛋白的稳定，昆虫细胞表达系统又被称为昆虫杆状病毒系统。
昆虫细胞表达系统本身是一个蛋白裂解性系统，在杆状病毒感染昆虫细胞的过程中，杆状病毒可以编码一些蛋白酶如木瓜蛋白酶等导致蛋白的降解。
因此，收集细胞后，在裂解细胞之前要加入蛋白酶抑制剂防止蛋白的降解。
昆虫细胞表达系统属于真核细胞表达系统，但又不同于酵母及哺乳动物细胞表达系统，酵母表达的蛋白易纯化但也易降解，而哺乳动物细胞表达系统表达的蛋白具有生物活性但成本高。
细菌表达系统属于原核表达系统，操作简单、周期短收益大、表达产物稳定，但是表达基因的相对分子量有限，且不能对表达产物进行翻译后加工修饰。
而昆虫细胞表达系统具有很多优点：(1)具有糖基化作用、乙酰化作用、磷酸化作用等一系列蛋白质翻译加工修饰系统；(2)正确的蛋白折叠、二硫键形成，使重组蛋白在结构和功能上更接近天然蛋白，有利于表达产物形成天然的高级结构；(3)具有对重组蛋白进行定位的功能，如将核蛋白转送到细胞核上，膜蛋白则定位在膜上，分泌蛋白则可分泌到细胞外等；(4)昆虫细胞悬浮生长，容易放大培养，有利于大规模表达重组蛋白。
高表达量，最高表达量可达昆虫细胞蛋白总量的50%；(5)可表达非常大的外源性基因（~200kD）而不至于影响本身的增殖；(6)具有在同一个感染昆虫细胞内同时表达多个基因的能力；(7)通用性广，能用于表达来自病毒、细菌、真菌、植物和动物几乎所有的蛋白，并且能表达带有内含子的外源基因；(8)对脊椎动物是安全的，杆状病毒属于昆虫病毒，有高度特异的宿主范围，对脊椎动物和植物均无致病性，而且经重组后的病毒因失去多角体保护而使其在自然界的生存能力很弱，被认为是安全的载体。
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pFBDM编号 载体名称北京华越洋生物KCVECT110 pFBDMpFBDM载体基本信息载体名称: pFBDM质粒类型: 昆虫细胞表达系统载体高拷贝/低拷贝: 高拷贝启动子: Polyhedrin，p10克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 5279bp5' 测序引物及序列: p2Bac-F (for MCS1):ggacctttaattcaacccaacac Polyhedrin-F (for MCS2):AAATGATAACCATCTCGC3' 测序引物及序列: TK-pA-R (for MCS1):TTGTCTCCTTCCGTGTTTCA SV40pA-R (for MCS2):GAAATTTGTGATGCTATTGCGenbank: DJ417502.1载体标签: 无载体抗性: 氨苄青霉素筛选标记: 庆大霉素备注: 可同时表达两种蛋白稳定性: 稳定组成型: 非组成型病毒/非病毒: 杆状病毒pFBDM载体质粒图谱和多克隆位点信息pFBDM载体序列ORIGIN1 TTCTCTGTCA CAGAATGAAA ATTTTTCTGT CATCTCTTCG TTATTAATGT TTGTAATTGA 61 CTGAATATCA ACGCTTATTT GCAGCCTGAA TGGCGAATGG GACGCGCCCT GTAGCGGCGC 121 ATTAAGCGCG GCGGGTGTGG TGGTTACGCG CAGCGTGACC GCTACACTTG CCAGCGCCCT 181 AGCGCCCGCT CCTTTCGCTT TCTTCCCTTC CTTTCTCGCC ACGTTCGCCG GCTTTCCCCG 241 TCAAGCTCTA AATCGGGGGC TCCCTTTAGG GTTCCGATTT AGTGCTTTAC GGCACCTCGA 301 CCCCAAAAAA CTTGATTAGG GTGATGGTTC ACGTAGTGGG CCATCGCCCT GATAGACGGT 361 TTTTCGCCCT TTGACGTTGG AGTCCACGTT CTTTAATAGT GGACTCTTGT TCCAAACTGG 421 AACAACACTC AACCCTATCT CGGTCTATTC TTTTGATTTA TAAGGGATTT TGCCGATTTC 481 GGCCTATTGG TTAAAAAATG AGCTGATTTA ACAAAAATTT AACGCGAATT TTAACAAAAT 541 ATTAACGTTT ACAATTTCAG GTGGCACTTT TCGGGGAAAT GTGCGCGGAA CCCCTATTTG 601 TTTATTTTTC TAAATACATT CAAATATGTA TCCGCTCATG AGACAATAAC CCTGATAAAT 661 GCTTCAATAA TATTGAAAAA GGAAGAGTAT GAGTATTCAA CATTTCCGTG TCGCCCTTAT 721 TCCCTTTTTT GCGGCATTTT GCCTTCCTGT TTTTGCTCAC CCAGAAACGC TGGTGAAAGT 781 AAAAGATGCT GAAGATCAGT TGGGTGCACG AGTGGGTTAC ATCGAACTGG ATCTCAACAG 841 CGGTAAGATC CTTGAGAGTT TTCGCCCCGA AGAACGTTTT CCAATGATGA GCACTTTTAA 901 AGTTCTGCTA TGTGGCGCGG TATTATCCCG TATTGACGCC GGGCAAGAGC AACTCGGTCG 961 CCGCATACAC TATTCTCAGA ATGACTTGGT TGAGTACTCA CCAGTCACAG AAAAGCATCT 1021 TACGGATGGC ATGACAGTAA GAGAATTATG CAGTGCTGCC ATAACCATGA GTGATAACAC 1081 TGCGGCCAAC TTACTTCTGA CAACGATCGG AGGACCGAAG GAGCTAACCG CTTTTTTGCA 1141 CAACATGGGG GATCATGTAA CTCGCCTTGA TCGTTGGGAA CCGGAGCTGA ATGAAGCCAT 1201 ACCAAACGAC GAGCGTGACA CCACGATGCC TGTAGCAATG GCAACAACGT TGCGCAAACT 1261 ATTAACTGGC GAACTACTTA CTCTAGCTTC CCGGCAACAA TTAATAGACT GGATGGAGGC 1321 GGATAAAGTT GCAGGACCAC TTCTGCGCTC GGCCCTTCCG GCTGGCTGGT TTATTGCTGA 1381 TAAATCTGGA GCCGGTGAGC GTGGGTCTCG CGGTATCATT GCAGCACTGG GGCCAGATGG 1441 TAAGCCCTCC CGTATCGTAG TTATCTACAC GACGGGGAGT CAGGCAACTA TGGATGAACG1501 AAATAGACAG ATCGCTGAGA TAGGTGCCTC ACTGATTAAG CATTGGTAAC TGTCAGACCA 1561 AGTTTACTCA TATATACTTT AGATTGATTT AAAACTTCAT TTTTAATTTA AAAGGATCTA 1621 GGTGAAGATC CTTTTTGATA ATCTCATGAC CAAAATCCCT TAACGTGAGT TTTCGTTCCA 1681 CTGAGCGTCA GACCCCGTAG AAAAGATCAA AGGATCTTCT TGAGATCCTT TTTTTCTGCG 1741 CGTAATCTGC TGCTTGCAAA CAAAAAAACC ACCGCTACCA GCGGTGGTTT GTTTGCCGGA 1801 TCAAGAGCTA CCAACTCTTT TTCCGAAGGT AACTGGCTTC AGCAGAGCGC AGATACCAAA 1861 TACTGTCCTT CTAGTGTAGC CGTAGTTAGG CCACCACTTC AAGAACTCTG TAGCACCGCC 1921 TACATACCTC GCTCTGCTAA TCCTGTTACC AGTGGCTGCT GCCAGTGGCG ATAAGTCGTG 1981 TCTTACCGGG TTGGACTCAA GACGATAGTT ACCGGATAAG GCGCAGCGGT CGGGCTGAAC 2041 GGGGGGTTCG TGCACACAGC CCAGCTTGGA GCGAACGACC TACACCGAAC TGAGATACCT 2101 ACAGCGTGAG CATTGAGAAA GCGCCACGCT TCCCGAAGGG AGAAAGGCGG ACAGGTATCC 2161 GGTAAGCGGC AGGGTCGGAA CAGGAGAGCG CACGAGGGAG CTTCCAGGGG GAAACGCCTG 2221 GTATCTTTAT AGTCCTGTCG GGTTTCGCCA CCTCTGACTT GAGCGTCGAT TTTTGTGATG 2281 CTCGTCAGGG GGGCGGAGCC TATGGAAAAA CGCCAGCAAC GCGGCCTTTT TACGGTTCCT 2341 GGCCTTTTGC TGGCCTTTTG CTCACATGTT CTTTCCTGCG TTATCCCCTG ATTCTGTGGA 2401 TAACCGTATT ACCGCCTTTG AGTGAGCTGA TACCGCTCGC CGCAGCCGAA CGACCGAGCG 2461 CAGCGAGTCA GTGAGCGAGG AAGCGGAAGA GCGCCTGATG CGGTATTTTC TCCTTACGCA 2521 TCTGTGCGGT ATTTCACACC GCAGACCAGC CGCGTAACCT GGCAAAATCG GTTACGGTTG 2581 AGTAATAAAT GGATGCCCTG CGTAAGCGGG TGTGGGCGGA CAATAAAGTC TTAAACTGAA 2641 CAAAATAGAT CTAAACTATG ACAATAAAGT CTTAAACTAG ACAGAATAGT TGTAAACTGA 2701 AATCAGTCCA GTTATGCTGT GAAAAAGCAT ACTGGACTTT TGTTATGGCT AAAGCAAACT 2761 CTTCATTTTC TGAAGTGCAA ATTGCCCGTC GTATTAAAGA GGGGCGTGGC CAAGGGCATG 2821 GTAAAGACTA TATTCGCGGC GTTGTGACAA TTTACCGAAC AACTCCGCGG CCGGGAAGCC 2881 GATCTCGGCT TGAACGAATT GTTAGGTGGC GGTACTTGGG TCGATATCAA AGTGCATCAC 2941 TTCTTCCCGT ATGCCCAACT TTGTATAGAG AGCCACTGCG GGATCGTCAC CGTAATCTGC 3001 TTGCACGTAG ATCACATAAG CACCAAGCGC GTTGGCCTCA TGCTTGAGGA GATTGATGAG 3061 CGCGGTGGCA ATGCCCTGCC TCCGGTGCTC GCCGGAGACT GCGAGATCAT AGATATAGAT 3121 CTCACTACGC GGCTGCTCAA ACCTGGGCAG AACGTAAGCC GCGAGAGCGC CAACAACCGC 3181 TTCTTGGTCG AAGGCAGCAA GCGCGATGAA TGTCTTACTA CGGAGCAAGT TCCCGAGGTA 3241 ATCGGAGTCC GGCTGATGTT GGGAGTAGGT GGCTACGTCT CCGAACTCAC GACCGAAAAG 3301 ATCAAGAGCA GCCCGCATGG ATTTGACTTG GTCAGGGCCG AGCCTACATG TGCGAATGAT 3361 GCCCATACTT GAGCCACCTA ACTTTGTTTT AGGGCGACTG CCCTGCTGCG TAACATCGTT 3421 GCTGCTGCGT AACATCGTTG CTGCTCCATA ACATCAAACA TCGACCCACG GCGTAACGCG 3481 CTTGCTGCTT GGATGCCCGA GGCATAGACT GTACAAAAAA ACAGTCATAA CAAGCCATGA 3541 AAACCGCCAC TGCGCCGTTA CCACCGCTGC GTTCGGTCAA GGTTCTGGAC CAGTTGCGTG 3601 AGCGCATACG CTACTTGCAT TACAGTTTAC GAACCGAACA GGCTTATGTC AACTGGGTTC 3661 GTGCCTTCAT CCGTTTCCAC GGTGTGCGTC ACCCGGCAAC CTTGGGCAGC AGCGAAGTCG 3721 AGGCATTTCT GTCCTGGCTG GCGAACGAGC GCAAGGTTTC GGTCTCCACG CATCGTCAGG 3781 CATTGGCGGC CTTGCTGTTC TTCTACGGCA AGGTGCTGTG CACGGATCTG CCCTGGCTTC 3841 AGGAGATCGG TAGACCTCGG CCGTCGCGGC GCTTGCCGGT GGTGCTGACC CCGGATGAAG 3901 TGGTTCGCAT CCTCGGTTTT CTGGAAGGCG AGCATCGTTT GTTCGCCCAG GACTCTAGCT 3961 ATAGTTCTAG TGGTTGGCCT ACAGCTTTGT TTAAACAAAG CTGTACCCGT AGTGGCTATG 4021 GCAGGGCTTG CCGCCCCGAC GTTGGCTGCG AGCCCTGGGC CTTCACCCGA ACTTGGGGGT 4081 TGGGGTGGGG AAAAGGAAGA AACGCGGGCG TATTGGTCCC AATGGGGTCT CGGTGGGGTA4141 TCGACAGAGT GCCAGCCCTG GGACCGAACC CCGCGTTTAT GAACAAACGA CCCAACACCC 4201 GTGCGTTTTA TTCTGTCTTT TTATTGCCGT CATAGCGCGG GTTCCTTCCG GTATTGTCTC 4261 CTTCCGTGTT TCAGTTAGCC TCCCCCATCT CCCGGTACCG CATGCTATGC ATCAGCTGCT 4321 AGCACCATGG CTCGAGATCC CGGGTGATCA AGTCTTCGTC GAGTGATTGT AAATAAAATG 4381 TAATTTACAG TATAGTATTT TAATTAATAT ACAAATGATT TGATAATAAT TCTTATTTAA 4441 CTATAATATA TTGTGTTGGG TTGAATTAAA GGTCCGTATA CTAGTATCGA TTCGCGACCT 4501 ACTCCGGAAT ATTAATAGAT CATGGAGATA ATTAAAATGA TAACCATCTC GCAAATAAAT 4561 AAGTATTTTA CTGTTTTCGT AACAGTTTTG TAATAAAAAA ACCTATAAAT ATTCCGGATT 4621 ATTCATACCG TCCCACCATC GGGCGCGGAT CCCGGTCCGA AGCGCGCGGA ATTCAAAGGC 4681 CTACGTCGAC GAGCTCACTA GTCGCGGCCG CTTTCGAATC TAGAGCCTGC AGTCTCGACA 4741 AGCTTGTCGA GAAGTACTAG AGGATCATAA TCAGCCATAC CACATTTGTA GAGGTTTTAC 4801 TTGCTTTAAA AAACCTCCCA CACCTCCCCC TGAACCTGAA ACATAAAATG AATGCAATTG 4861 TTGTTGTTAA CTTGTTTATT GCAGCTTATA ATGGTTACAA ATAAAGCAAT AGCATCACAA 4921 ATTTCACAAA TAAAGCATTT TTTTCACTGC ATTCTAGTTG TGGTTTGTCC AAACTCATCA 4981 ATGTATCTTA TCATGTCTGG ATCTGATCAC TGCTTGAGCC TAGGAGATCC GAACCAGATA 5041 AGTGAAATCT AGTTCCAAAC TATTTTGTCA TTTTTAATTT TCGTATTAGC TTACGACGCT 5101 ACACCCAGTT CCCATCTATT TTGTCACTCT TCCCTAAATA ATCCTTAAAA ACTCCATTTC 5161 CACCCCTCCC AGTTCCCAAC TATTTTGTCC GCCCACAGCG GGGCATTTTT CTTCCTGTTA 5221 TGTTTTTAAT CAAACATCCT GCCAACTCCA TGTGACAAAC CGTCATCTTC GGCTACTTT//pFBDM其他昆虫表达载体：pMT/BioEase-DEST pVL1392 pVL1393 pXINSECT-DEST39pXINSECT-DEST38 pBacPAK9 pBacPAK8 pIB/V5-His-TOPOpIEX/Bac-1 pFastBacHT B pFastBacHT A pFastBac1pMT/V5-His-TOPO pMT/BiP/V5-His A pCoHygro pAc5.1/V5-His CpAc5.1-V5-His A pAc5/V5-HisA pAc5-V5-HisB pAc5-V5-HisCpCoBlast pAc5.1/V5-His B pIZ/V5-His pIB/V5-HispIZT/V5-His pMIB/V5-His C pMIB/V5-His A pMT/BiP/V5-His CpMT/BiP/V5-His B pIEx/Bac-4 pIEx/Bac-3 pIEXBac-c-EGFP-3pIEXBac-c-EGFP-1 pIEXBac-c-EGFP-4 pAc5.1B-EGFP pBlueBacHis2 ApBlueBacHis2 C pBlueBacHis2 B pFastBacHT C pMT-Bip-V5-HisApFBDM pUCDM pFastBac Dual pMIB/V5-His BpMT/V5-His C pMT/V5-His B pMT/V5-His A pAcGP67ApAc5.1b pAc5.1a pVL1392-XyIE control vector pFastBac-c-His-TEVpFastBac-N-GST-TEV pFastBacI-Gus pFastBacHT-CAT pBADZ-His6Cre。