基因工程总结
基因工程知识点总结
基因工程总结一．概念(1)原理：。
(2)优点：与杂交育种相比，；与诱变育种相比，。
（3）基因工程成功的原因：①成功拼接的原因：②成功表达的原因：二．基本工具1、两种酶：(1)：作用特点：。
(2)：E ·coli DNA 连接酶与T 4 DNA 连接酶的区别：2、一种运载体（1）条件：①；②；③具有特殊的标记基因（作用：）（2）种类：最常用；其他动植物病毒、三、操作程序(1)：方法：①：不知道脱氧核苷酸序列②：已知目的基因两端一小段序列，便于③利用化学方法人工合成：知道全部序列，且基因比较小。
这种方法不需要模板。
(2)——基因工程的核心基因表达载体的组成：(3)生物种类常用方法受体细胞将目的基因插入到Ti 植物动物受精卵将含有目的基因的表＋微生物原核细胞Ca 2处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA 分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA 分子质粒的T-DNA 上→农达载体提纯→取卵转化过程杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞染(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得色体的DNA 上→表达具有新性状的动物(4)①目的基因是否插入到转基因生物的染色体DNA 上：②是否转录：③是否翻译：④个体水平鉴定：抗虫、抗病接种实验易错点说明：1、切割目的基因和运载体的要求：用限制酶。
目的是：。
同种的含义是：同一种或相同两种，即单酶切或双酶切。
选择双酶切的原因是。
2、工具≠工具酶；运载体≠质粒。
3、启动子≠起始密码子，终止子≠终止密码子起始密码子和终止密码子位于mRNA上，分别控制翻译过程的启动和终止。
启动子：。
终止子：一段有特殊结构的DNA短片段，位于基因的尾端，作用是使转录过程停止。
4、基因探针的要求：①单链②有③5、农杆菌转化法中的“2”次导入：第一次：将含有目的基因的T—DNA的质粒导入农杆菌；第二次（非人工操作）：将含有目的基因的T—DNA导入受体细胞并整合到植物细胞的染色体DNA上。
6、转化：。
初中生物基因工程知识点总结
初中生物基因工程知识点总结基因工程是一门研究如何改变生物体遗传物质的科学技术，它广泛应用于医学、农业、工业等领域。
初中阶段的生物学学习中，我们通常会接触到基因工程的基础概念和应用，下面我将对初中生物基因工程的知识点进行总结。
1. DNA 的结构和功能DNA（脱氧核糖核酸）是生物体遗传信息的存储介质，负责遗传物质的传递。
DNA由磷酸、脱氧核糖和四种碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和鸟嘧啶）组成。
它的双链结构呈螺旋状，由两个互补的碱基对相连（A与T，C与G）。
DNA的功能包括复制、转录和翻译，从而实现基因的传递和表达。
2. 基因的定义和作用基因是生物体的遗传单位，它是决定生物特征的基本单位。
基因通过编码蛋白质来实现遗传信息的传递和表达。
一个基因通常对应一个蛋白质，而蛋白质决定了生物体的形态和功能特征。
3. 基因工程的基本原理基因工程通过改变基因的结构和功能，实现对生物体遗传物质的人工操控。
它的基本原理包括：选择目标基因、截取目标基因、将目标基因插入宿主生物体、表达目标基因并获得所需产物。
4. 基因工程的应用（1）农业领域：基因工程可以用于改良农作物的品质和产量，提高作物的抗病虫害能力。
例如，通过转基因技术将具有抗虫特性的基因导入作物中，从而减少对农药的依赖，提高农作物产量和质量。
（2）医学领域：基因工程可以用于生产药物、治疗疾病和基因诊断。
例如，通过转基因技术将含有特定疾病治疗基因的载体导入人体细胞中，修复或替代受损的基因，达到治疗疾病的目的。
（3）工业领域：基因工程可以用于生物制造，生产一些有用的物质。
例如，通过转基因技术将具有特定功能的基因导入微生物中，使其能够大量合成人类需要的蛋白质、酶等。
这种生物制造方式相对传统工业方法更环保和可持续。
5. 转基因技术转基因技术是基因工程的一项重要技术，指将外源基因导入目标生物体中并使其稳定遗传。
转基因技术的步骤包括：截取目标基因、将目标基因插入载体（如质粒）、导入宿主生物体并实现目标基因的稳定遗传。
高中生物选修三基因工程知识点总结
高中生物选修三基因工程知识点总结
高中生物选修三(基因工程)知识点总结如下:
1. 基因工程的基本步骤:
- 分离基因:从目标DNA序列中分离特定的基因。
- 转录:将分离得到的基因转录成RNA。
- 修饰:对转录后的基因进行修饰,使其更具表达效果。
- 克隆:用适当的载体将修饰过的基因导入目标细胞中。
- 表达:使目标细胞中导入的基因表达。
2. 基因工程的主要方法:
- 重组DNA技术:包括文库制备、扩增和筛选。
- 外源DNA片段导入技术:包括限制性内切酶消化、连接、转化、融合等。
- 自组织培养技术:包括离心、培养基选择、细胞培养等。
- 基因编辑技术:包括CRISPR/Cas9、CRISPR-Cas13a等。
3. 基因工程的应用:
- 细胞治疗:通过基因工程手段治疗一些遗传性疾病。
- 农业育种:通过基因工程技术改良作物品质和产量。
- 生物恐怖袭击防御:通过基因工程技术检测和防御生物恐怖袭击。
- 环境污染治理:通过基因工程技术处理污染物。
4. 基因工程的限制:
- 伦理和道德问题:基因工程技术可能会带来未知的伦理和道德
问题。
- 技术成本:基因工程技术相对其他技术更为复杂,成本较高。
- 技术安全:基因工程技术的安全性需要持续进行研究和维护。
5. 基因工程的安全性问题:
- 基因突变:基因工程过程中可能会引发基因突变,导致不良后果。
- 质量控制:基因工程技术的产品需要进行质量控制,以确保其质量和稳定性。
基因工程课程学习总结了解基因编辑与生物工程的前沿发展
基因工程课程学习总结了解基因编辑与生物工程的前沿发展基因工程课程学习总结：了解基因编辑与生物工程的前沿发展在过去的几个月里，我有幸参加了一门名称为《基因工程》的课程。
这门课程不仅为我提供了深入了解基因编辑和生物工程的机会，还让我对未来的前沿发展有了更清晰的认识。
在本文中，我将回顾我在课程中所学到的知识，并分享一些关于基因编辑和生物工程的前沿发展的见解。
首先，我想简要介绍一下基因编辑的概念。
基因编辑是一种通过人为干预改变生物体遗传信息的技术。
它涉及使用CRISPR-Cas9系统或其他类似工具，直接修改生物体的基因组结构。
通过这种方法，我们可以针对特定基因进行修改，包括删除、插入或修改基因序列。
基因编辑的应用潜力巨大，可以用于治疗遗传性疾病、增强农作物产量、改善环境适应性等等。
在课程中，我们学习了基因编辑的原理和技术细节。
我们了解了CRISPR-Cas9系统如何寻找和切割特定的DNA序列，并如何利用细胞修复机制来完成基因组的修改。
这种技术的重要性在于它的高效性和简便性，使得科学家们能够更快、更准确地进行基因编辑。
然而，我们也讨论到了基因编辑技术所面临的一些挑战和伦理问题。
例如，基因编辑的安全性和准确性仍然需要进一步提高，并且在应用于人类基因组时需要遵循伦理和法律规定。
除了基因编辑，我们还学习了生物工程的前沿发展。
生物工程是一门利用生物学原理和工程技术来解决生物问题的学科。
它涵盖了许多领域，包括生物制药、农业和环境保护等。
在课程中，我们了解了一些生物工程的应用案例和研究方向。
一项引人注目的研究方向是合成生物学。
合成生物学的目标是设计和构建新的生物系统，从而实现人工合成生物产物或改善现有生物系统的功能。
通过合成生物学，科学家们可以创造新的药物、生物燃料和可持续发展的材料。
这不仅对人类的生活产生了重大影响，还为可持续发展和环境保护提供了新的解决方案。
另一个令人兴奋的领域是基因表达调控。
基因表达调控是指调控基因在特定条件下的表达水平或时间点的过程。
基因工程知识点总结归纳(更新版)
基因工程绪论1、克隆（clone）：作名词：含有目的基因的重组DNA分子或含有重组分子的无性繁殖。
作动词：基因的分离和重组的过程。
2、基因工程（gene engineering）：体外将目的基因插入病毒、质粒、或其他载体分子中，构成遗传物质的新组合，并使之掺入到原先没有这些基因的宿主细胞内，且能稳定的遗传。
供体、受体和载体是基因工程的三大要素。
3、基因工程诞生的基础三大理论基础：40年代发现了生物的遗传物质是DNA；50年代弄清楚DNA 的双螺旋结构和半保留复制机理；60年代确定遗传信息的遗传方式。
以密码方式每三个核苷酸组成一个密码子代表一个氨基酸。
三大技术基础：限制性内切酶的发现；DNA连接酶的发现；载体的发现3、基因工程的技术路线：切：DNA片段的获得；接：DNA片段与载体的连接；转：外源DNA片段进出受体细胞；选：选择基因；表达：目的基因的表达；基因工程的工具酶1、限制性内切酶（restriction enzymes）：主要是从原核生物中分离纯化出来的，是一类能识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链的核酸内切酶。
2、限制酶的命名：属名（斜体）+种名+株系+序数3、II型限制性内切酶识别特定序列并在特定位点切割4、同裂酶：来源不同，其识别位点与切割位点均相同的限制酶。
5、同尾酶：来源不同，识别的靶序列不同，但产生相同的黏性末端的酶形成的新位点不能被原来的酶识别。
6、限制性内切酶的活性：在适当反应条件下，1小时内完全酶解1ug特定的DNA 底物，所需要的限制性内切酶的量为1个酶活力单位。
7、星号活性：改变反应条件，导致限制酶的专一性和酶活力的改变。
8、DNA连接酶的特点：具有双链特异性，不能连接两条单链DNA分子或闭合单链DNA，连接反应是吸能反应，最适反应温度是4至15度，最常用的是T4连接酶。
9、S1核酸酶：特异性降解单链DNA或RNA。
10、RNAH降解与DNA杂交的RNA，用于cDNA文库建立时除去RNA以进行第二链的合成。
生物基因工程知识点总结
生物基因工程知识点总结生物基因工程是一种通过改变生物体的遗传物质来改变其性状的技术。
它涉及到许多关键的知识点，如下：1. 基因：基因是生物体内控制特定性状的遗传信息单位。
它是DNA分子中的一个特定序列，负责编码产生蛋白质。
2. DNA：脱氧核糖核酸（DNA）是生物体内存储遗传信息的分子。
它由四种碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶）组成的两条螺旋状链结构。
3. 基因表达：基因表达是指基因通过转录和翻译的过程将DNA的遗传信息转化为蛋白质的过程。
4. 转基因：转基因是指将外源基因导入到另一种生物体的基因组中，使其表达新的性状。
转基因技术是生物基因工程的核心。
5. 基因编辑：基因编辑是一种通过直接修改组织或细胞中的基因序列来改变生物体遗传信息的技术。
常用的基因编辑工具包括CRISPR/Cas9、TALENs和ZFNs。
6. 载体：载体是一种用于将外源基因导入到生物体中的工具。
常用的载体包括质粒、病毒和细胞。
7. 克隆：克隆是指通过人工手段复制一个生物个体的基因组。
克隆技术可以用于繁殖优良的动植物品种和疾病模型的制备。
8. 基因检测：基因检测是一种用于检测个体的遗传信息的技术。
它可以用于遗传病的筛查、个体的亲缘关系鉴定和种群遗传学的研究。
9. 合成生物学：合成生物学是一种基于工程原理设计和构建新的生物系统的学科。
它通过组合基因和其他生物部件来设计具有特定功能的新生物体。
10. 生物安全：生物安全是指在进行生物基因工程研究和应用时保护人类和环境的安全。
它包括对实验室条件的控制、对转基因生物体的监管和对风险评估的实施。
以上是生物基因工程的一些主要知识点，它们一起构成了生物基因工程这个学科的基础和核心。
基因工程知识点总结
基因工程知识点总结基因工程是一门现代生物学领域的重要学科，它通过改造生物体的遗传物质，实现对生物体基因的精确操控和改良。
下面将对基因工程的相关知识点进行总结，以帮助读者更好地了解该领域的基本概念和技术应用。
一、基因工程的基本概念和原理基因工程是指通过人为手段修改生物体的基因组，以改变其性状和功能的技术。
其实现的基本原理包括基因定位、基因克隆和基因传递。
1. 基因定位：基因定位是指确定感兴趣的基因在基因组中的位置。
常用的方法有FISH（荧光原位杂交）和PCR（聚合酶链反应）等。
2. 基因克隆：基因克隆是指将感兴趣的基因从一个生物体中复制到另一个生物体中，使其在目标生物体中表达。
常用的方法有限制酶切、连接酶切和DNA合成等。
3. 基因传递：基因传递是指将经过克隆的基因导入到目标生物体中，并使其在目标生物体中稳定遗传。
常用的方法有基因枪、电穿孔和冷冻贮存等。
二、基因工程的应用领域基因工程技术在农业、医学和工业等领域有着广泛的应用，下面将分别介绍其主要应用领域。
1. 农业应用：基因工程技术在农业领域的应用主要包括转基因作物的培育和遗传改良。
通过导入特定基因，转基因作物可以获得抗病虫害、耐逆性或提高产量等特点，从而增加农作物的产量和质量。
2. 医学应用：基因工程技术在医学领域的应用主要包括基因诊断、基因治疗和生物药物的生产。
通过基因诊断，可以准确检测遗传病的基因突变，为疾病的早期预测和治疗提供依据。
基因治疗则通过修复或替代患者体内的异常基因，治疗遗传性疾病。
此外，基因工程技术还被用于生产重组蛋白和抗体等生物药物。
3. 工业应用：基因工程技术在工业领域的应用主要包括酶的生产和环境修复。
通过基因工程技术，可以大量生产具有特定功能的酶，用于工业生产和制药领域。
此外，基因工程技术还可以改造微生物，使其能够降解有机物污染物，用于环境修复和生物能源开发。
三、基因工程的伦理和安全问题尽管基因工程技术具有重要的应用前景，但也带来了一些伦理和安全问题。
基因工程技术的原理与应用例题和知识点总结
基因工程技术的原理与应用例题和知识点总结一、基因工程技术的原理基因工程技术，简单来说，就是在分子水平上对基因进行操作的技术。
其核心原理包括以下几个关键步骤：1、目的基因的获取目的基因是我们想要研究或应用的特定基因片段。
获取目的基因的方法多种多样，常见的有从基因文库中筛选、通过 PCR 技术扩增以及人工化学合成等。
2、基因载体的选择基因载体就像是一辆“运输车”，负责将目的基因运送到受体细胞中。
常用的基因载体有质粒、噬菌体和病毒等。
它们具有能够在宿主细胞中自主复制、稳定存在等特点。
3、基因重组将获取的目的基因与选择好的基因载体进行连接，形成重组 DNA分子。
这个过程需要用到特定的限制性内切酶和 DNA 连接酶，以确保目的基因能够准确无误地插入到载体中。
4、重组 DNA 导入受体细胞将构建好的重组 DNA 分子导入到受体细胞中，使其能够在受体细胞内稳定遗传和表达。
导入的方法包括转化、转导、显微注射等。
5、目的基因的检测与鉴定导入受体细胞后，需要对目的基因是否成功导入、是否表达以及表达水平等进行检测和鉴定。
常用的方法有核酸分子杂交、PCR 检测、蛋白质检测等。
二、基因工程技术的应用例题1、胰岛素的生产糖尿病患者需要定期注射胰岛素来控制血糖。
传统的胰岛素提取方法产量低、成本高。
通过基因工程技术，科学家将人的胰岛素基因导入到大肠杆菌中，让大肠杆菌能够大量合成胰岛素，大大提高了胰岛素的产量，降低了成本，为糖尿病患者带来了福音。
2、转基因抗虫棉棉花在生长过程中常常受到棉铃虫等害虫的侵害。
利用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌中的 Bt 毒蛋白基因导入到棉花细胞中，使棉花能够自身合成毒蛋白，从而具有抗虫的特性，减少了农药的使用，保护环境的同时提高了棉花的产量。
3、基因治疗对于一些由于基因突变导致的遗传性疾病，如血友病、囊性纤维化等，基因治疗为患者带来了新的希望。
通过将正常的基因导入患者的细胞中，以替代或修复突变的基因，从而达到治疗疾病的目的。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
基因工程第一章绪论1、基因工程的含义：按照人们的意愿，进行严密的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，有目的地改造生物种性，使现有的物种在较短时间内趋于完善，创造出更符合人们需求的新的生物类型。
2、基因工程的优点：①打破物种间基因交流的隔离界限；②克服常规育种的周期长，效率低的缺点，定向改造生物性状；③可按照人的意愿去改造物种。
3、基因工程理论依据：①不同基因具有相同的物质基础；②基因是可分割的；③基因是可以转移的；④多肽与基因之间存在对应关系；⑤遗传密码是通用的；⑥基因可以通过复制传递给下一代。
注：基因工程及其应用的图解看看第二章 DNA重组的相关技术及原理1、重组DNA技术的原理重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序2、碱性SDS法提取质粒DNA原理：强碱使所有DNA变性沉淀，而pH为中性时，质粒DNA复性快，形成闭合环状从沉淀物中分离。
3、提取DNA总的原则①保证核酸一级结构的完整性；②其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；③核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；④其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
4、核酸鉴定①浓度鉴定②纯度鉴定③完整性鉴定5、限制性核酸内切酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4-8bp），并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。
6、限制性内切酶的命名①用属名的第一个字母和种名的头两个字母组成3个字母的略语表示寄主菌的物种名。
大肠杆菌（Escherichia coli）Eco流感嗜血菌（Haemophilus influenzae）Hin②用一个右下标的大写字母表示菌株或型。
如Eco k, Eco R（现在都写成平行，如Eco R）。
③如果一种特殊的寄主菌内有几种不同的限制性内切酶，用罗马字母表示。
如Eco RI，Eco RV。
属名种名株名Haemophilus influenzae D 嗜血流感杆菌D株Hin d IIIEco RI—Escherichia coli RIHin dⅢ—Haemophilus influensae d ⅢSac I (II)—Streptomyces achromagenes I (Ⅱ)7、限制性核酸内切酶的作用机制以环状和线形的双链DNA为底物，在适合的反应条件下，识别一定的核苷酸序列，使两条核糖链上特定位置的磷酸二酯键断开，产生具有3’－OH基团和5’－P基团的片段。
8、同裂酶：能识别相同序列但来源不同的两种或多种限制酶完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。
如Hin d Ⅲ和Hsu I。
不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。
如Xma I 和Sma I。
9、同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。
如Bam HI、BglⅡ、Bcl I、XhoⅡ等10、酶活性单位（U)：在最适反应条件下，一个DNA分子上含有一个酶切位点，60 min内切割1 g λDNA所需的酶量称为一个单位。
11、星号（*）活性：如果改变反应条件就会影响酶的识别位点专一性和切割效率，称为星号（*）活性。
12、基因工程的其他酶（1）DNA连接酶 :DNA连接酶能催化双链DNA切口处的5’-磷酸和3’-羟基生成磷酸二酯键。
;（2）DNA聚合酶（ Klenow fragment）性质①5’→3’聚合酶活性。
②3’→5’外切酶活性。
（失去了5’→3’外切酶活性）用途①3’端补平② DNA 的3’末端标记，在3’隐蔽端加上标记的dNTP。
③ cDNA第二链的合成④双脱氧末端终止法测定DNA序列（3）核酸酶S1催化反应类型: ss-DNA; ss-RNA; 双螺旋变性区13、聚合酶链式反应PCR :PCR技术就是在体外中通过酶促反应有选择地大量扩增（包括分离）一段目的基因的技术。
加入4种物质：（1）作为模板的DNA序列；（2）与被分离的目的基因两条链各自5’端序列相互补的DNA引物（20个左右碱基的短DNA单链）；（3）TaqDNA聚合酶；（4）dNTP（dATP, dTTP, dGTP和dCTP）。
14、PCR技术的原理（1）DNA模板变性（2）DNA模板与引物复性（3）DNA链的延伸15、PCR的过程第一步预变性（pre-denature） 90-95 o C下5分钟，模板DNA双链完全变性成单链。
第二步变性（denature）双链完全变性成单链第三步复性（anneal）37-60 o C下1分钟，引物优先与模板复性。
①引物的浓度高②引物的链短。
第四步延伸（extend） 72 o C下1-2分钟，Taq DNA聚合酶在引物的3‘端上加上核苷酸。
第五步变性进入循环重复94 o C下1分钟，新合成的DNA双链又变性成单链模板。
16、PCR扩增特异性DNA片段的主要条件（1）Taq DNA聚合酶（2）引物（primer) （4）模板（template) （5）dNTPs（6）Mg 2+的浓度17、PCR的特点（1）特异性强（2）敏感性高（3）快速（4）简便（5）可以扩增mRNA18、电泳的基本原理DNA在中性或偏碱性的缓冲液中带负电，在电泳过程中处于凝胶靠负极端的DNA通过凝胶分子筛向正极端移动。
19、电泳迁移率：与DNA分子的构型和大小有关与DNA分子中的碱基组成和顺序无关DNA分子的构象（型）：Ⅰ型：超螺旋环状Ⅱ型：带切口环状Ⅲ型：线状相同分子量的DNA: 闭合环状卷曲超螺旋迁移最快；线性分子次之；伸展开环状最慢20、影响连接反应的因素（1）插入片段与载体的浓度比例（10~20倍增加插入片段与载体的接触机会，减少载体自我连接的现象。
）（2）反应温度（一般14~16℃）（3）反应缓冲液第三章基因的克隆载体1、载体：在基因工程操作中，携带目的基因、实现目的基因进入受体细胞, 并在其中得以无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。
2、按功能划分：①克隆载体(cloning vector):使目的片段能在细菌细胞中复制的载体。
②表达载体（expression vector）:使目的基因能在细菌细胞中表达为RNA或蛋白质的载体。
3、基因克隆载体的必备条件：①多克隆位点；②能自我复制,有一个复制起点；③选择性标记；④安全。
4、标记基因的作用：①指示外源DNA分子（载体或重组分子）是否进入宿主细胞；②指示外源DNA分子是否插入载体分子形成了重组子。
这种指示也可以是选择性的，也可以是非选择性的，绝大多数为后者。
5、质粒：独立于染色体以外的能自主复制的双链闭合环状DNA分子。
6、质粒的空间构型：①共价闭合环状DNA（cccDNA) ；②开环DNA（ocDNA）；③线形DNA（lDNA）7、质粒空间构型与电泳速率: scDNA最快、L DNA次之、ocDNA最慢。
8、质粒的不亲和性（不相容性）：任何两种含有相似复制子结构的不同质粒，不能同时存在于一个细胞中，这种现象称为质粒的不亲和性或不相容性，这两种质粒称为不亲和性质粒，组成不亲和性群；而彼此能够共存于一个细胞中称为亲和性质粒，亲和质粒则属于不同的不亲和群。
9、天然质粒的局限性：①分子量大，拷贝数低；②筛选标记不理想；③单一酶切位点少或无。
10、质粒载体的构建策略：①提高质粒载体的拷贝数；②引入多克隆位点MCS；③引入抗性标记基因；④克隆载体DNA分子应尽可能小；⑤在克隆载体中组装“元件”。
10、筛选重组子的示意图——重点11、α互补：蓝白斑选择原理：①X-gal；②β-半乳糖苷酶的显色反应；③lac Z的α互补。
12、穿梭质粒载体：人工构建的、具有两种不同复制起点和选择标记、可以在两种不同的寄主细胞中存活和复制的质粒载体。
13、Ti质粒载体：存在于能引起植物形成冠瘿瘤的土壤农杆菌中，诱导冠瘿瘤形成，又称肿瘤诱导质粒。
14、Ti质粒作为载体的可能性：①能够自发地整合到植物的染色体上；②能转化多种植物；③强启动子——T-DNA的opine合成酶基因上游有一个强启动子，能启动外源基因的表达。
15、天然Ti质粒作载体的缺点：①分子量太大（200kb）；②限制性酶切位点太多。
③被转化的植物细胞成为肿瘤，不能再分化。
④在大肠杆菌中不能复制。
16、Ti质粒的改造：①保留T-DNA的转移功能部分（vir基因，左右边界）。
②减少限制性酶切位点，引入单一插入位点。
③取消T-DNA 的致瘤基因，使被转化的植物细胞不再成为肿瘤，能正常分化。
④冠瘿碱合成对于植物无意义。
应剔除掉。
⑤加入大肠杆菌的ori和选择标记。
⑥加上真核生物的转录信号和结束信号以及添加polyA的信号序列。
17、Ti载体的类型：①共整合载体——需要同源重组才能插入外源基因；②双元载体—既有大肠杆菌复制起点也有农杆菌复制起点，是个穿梭载体。
18、cos位点：λDNA两端各有12bp的粘性末端，粘性末端形成的双链区域称为cos位点。
19、天然λ噬菌体作为载体的局限性：①λ噬菌体的非必需区太长；②非必需区段上常用的单一限制酶切点少；③选择标记基因少；④载体的安全性20、λ噬菌体载体的构建：构建策略：①删除λ噬菌体的非必需区，在这个非必需区内制造限制酶切点，删除λDNA必需区段上常用的限制酶切点；②在非必需区引进选择标记基因。
③建立λDNA重组分子体外包装系统21、cosmid载体（粘粒）：一类由人工构建的含有λ噬菌体DNA的cos序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体，cos site—carrying vectors。
22、酵母人工染色体：①YAC的特点：（1）只能在酵母细胞中扩增。
（2）克隆容量大，为230kb-1700kb。
（3）构建原理，按染色体结构构建。
②YAC的组成结构：（1）着丝粒区（Cen）；（2）端粒（Tel）；（3）复制起点（Ori）；（4）克隆位点；（5）在酵母中的标记基因；（6）在细菌中操作；第四章目的基因的制备1、基因组文库：将某种生物整个基因组DNA切割成大小合适的片段，并将所有这些片段都与适当的载体连接，引入相应的宿主细胞中保存和无性扩增。
理论上讲，这些重组载体上带有了该生物体的全部基因，也称为基因文库。
2、基因组文库构建的一般步骤：①基因组DNA片段的制备；②载体的准备——相应的酶切，脱磷酸化等处理阻止载体自连；③载体与基因组DNA片段的连接——粘性末端直接连接；人工接头法；同聚物加尾；④转化细胞和克隆选择。
3、cDNA文库：利用某种生物的总mRNA合成cDNA，再将这些cDNA与载体连接，转入细菌细胞中进行保存和扩增，称cDNA文库（cDNA library)，也称基因文库（gene library)。