临床常见标本细菌学检验
临床标本的细菌检验
痰标本临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌或仅有少量细菌侵入。
在呼吸道标本细菌学检验中，上呼吸道标本（咽拭子）由于有正常菌群的存在，不易判断出何为与疾病有关的细菌，进行普通培养无特别意义《插入表上呼吸道存在的正常菌群》。
下呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症，临床常取痰液标本进行细菌学检验，以明确感染病原及其药敏结果，有助于疾病治疗、流行病学调查和医院感染的监测。
痰标本须经上呼吸道排出，常受该处正常菌群的污染，因此，判断下呼吸道分泌物中是否有病原菌存在，须对上呼吸道的正常菌群有所了解。
上呼吸道的正常菌群有α、γ链球菌、微球菌、拟杆菌、梭杆菌、厌氧球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟菌、嗜血杆菌、棒状杆菌。
标本的验收遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。
拒收标准：a.肉眼观察痰标本呈水样或唾液样。
b.标本涂片白细胞数＜10/低倍镜和鳞状上皮细胞数＞25/低倍镜，表示该标本已污染正常菌群，建议重送标本。
c.容器错误标本容器必须符合规定，溢漏、无盖者拒收。
分离培养1．痰标本培养前处理（均质化）2．分离培养（1）一般细菌培养应同时划区接种（痰半定量原则）痰半定量方法：用接种坏将痰液在血平板和巧克力平板上作三区划线接种标本，进行培养。
痰半定量培养的临床意义三区划线法：首先用无菌棉签挑取痰液的脓或血性部分（或将接种坏通过火焰灭菌，冷却后挑取标本少许，尽量取有脓或血部分）然后将其涂布在平板第一区，并作数次划线，再在二、三区依次用接种环划线，每划一个区域，应将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一区域。
1）血平板（5%CO2环境）适用于分离肺炎链球菌和其他细菌。
2）巧克力平板（5%CO2环境）适用于分离嗜血杆菌。
3）麦康凯/中国蓝平板（需氧环境）适用于分离革兰阴性杆菌。
（2）分离培养血平板和巧克力平板置5%CO2环境，麦康凯平板/中国兰平板置普通孵箱，35℃孵育。
临床常见标本的细菌学检验
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
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痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
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痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
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尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
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尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
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（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
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粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
--临床常见标本的微生物学检验
尿液标本 细菌学检验Fra bibliotek标本采集
中段尿采集方法 肾盂尿采集法 膀胱穿刺采集法 导尿法
注意事项
1．尿液标本的采取和培养最大的问题是污染 杂菌，故应严格进行无菌操作。
2．标本采取后应立即送检和接种，放置时间 长，杂菌容易在尿液标本中生长繁殖， 影 响诊断。
3．尿液标本中不得加入防腐剂及消毒剂，否 则会影响阳性检出率。
细菌培养
L 型细菌培养
将尿液接种于血琼脂平皿和高渗液体培养基， 置35 ℃培养，由 于L 型细菌生长缓慢，所 以高渗培养应放5 ～7d ，液体中呈颗粒状生 长，可粘附于管壁 或沉于管底，吸出颗粒镜
下观察，同时转种平皿。无阳性发现可报告 无L 型细菌生长， 根据需要还可做结核菌、 沙门菌、厌氧菌培养。
6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。
血 液 骨 髓 标 本 的 细 菌 学 检 验 程 序
血液骨髓 细菌学检验
一般细菌的检验
标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内 孵育，每天取出一次观察有无 细菌生长，应特别注 意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液 变色、指示剂变 色等现象，并记录之。
涂片检查 假丝酵母菌 涂片检查
取尿液离心沉淀物置于玻片上，加盖玻片 后用高倍镜观察，如发现卵圆形芽生孢子 或假菌丝，且革兰染色为阳性，即可做出 初步报告。
临床细菌常规检验方法
临床细菌常规检验方法1.样本收集：通常采用微生物标本采集套装，如采血培养瓶、骨髓培养瓶、尿培养瓶、分泌物培养瓶等。
不同类型的标本要按照不同的采集方法进行采集，以确保样本的纯度和无污染。
2.样本处理：在获得样本后，要进行适当的处理，如血液样本要进行离心分离，分离出红细胞和血浆/血清。
尿液样本要进行离心去除悬浊物等。
3.细菌培养：将已处理的样本分别接种到含有适当培养基的培养皿中，并在适当温度和湿度下培养一段时间。
通常常规培养采用的培养基包括血浆琼脂、麦康凯琼脂等。
培养时间通常为24-48小时，特殊细菌可能需要更长的培养时间。
4.细菌鉴定：对培养出的菌落进行初步的形态学鉴定，如观察菌落形状、大小、颜色等。
然后进行革兰染色，观察细菌的形态特征，如是否革兰阳性或革兰阴性。
根据初步鉴定的结果，可以选择进一步的生化试验或分子生物学检测，如氧化/发酵试验、羟基酸钠试验、目标序列扩增等。
最终确定细菌的种类和特征。
5.药敏试验：对已鉴定出的细菌进行药敏试验，以确定细菌对各类抗生素的敏感性。
药敏试验通常采用纸片扩散法或肉汤稀释法，通过观察菌落的生长抑制区域大小来判断细菌对抗生素的敏感程度。
6.结果分析和报告：根据细菌培养和鉴定的结果以及药敏试验的结果，进行结果分析和判断。
最后将结果整理成报告，提供给临床医生参考，帮助临床医生做出正确的诊断和治疗决策。
总的来说，临床细菌常规检验方法包括了样本收集、样本处理、细菌培养、细菌鉴定、药敏试验等步骤。
这些步骤的顺序和方法都有一定的规范和标准，以确保检验结果的准确性和可靠性。
临床细菌常规检验在临床诊断和治疗中起着重要的作用，可以帮助医生选择合适的抗生素治疗方案，提高治疗效果。
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。
因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。
1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。
病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。
对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。
2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。
若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。
3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。
另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。
4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。
如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。
【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。
细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。
一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。
穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。
2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。
伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。
3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。
第十九章临床常见标本的细菌学检验
♦立即送检、及时接种 ♦室温不超过2小时，4℃不超过8小时 ♦淋病奈瑟菌感染尿液标本不能冷藏
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2.检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
第一节 概述
4.细菌的鉴定 ♦选择细菌检验鉴定方法的原则 ★选择有鉴定价值的试验：两种细菌出现不同的结果 ★选择快速、简易的试验：如触酶、氧化酶 ★综合考虑试验的敏感性和特异性
第一节 概述
5.细菌对抗菌药物敏感性试验 ♦纸片扩散法 ♦肉汤稀释法 ♦自动化仪器法 ♦E-test法等。
第一节 概述
四、细菌学检验报告原则
♦标本周转时间（TAT）：从标本采集起到临床医生收到检验 结果的时间 ♦危急值：指危及到患者生命健康安全的检验结果
检验报告原则 ♦初报告 ♦预报告 ♦最终报告 ♦报告抗菌药物敏感性试验结果
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
一、血液及骨髓标本的细菌学 检验
（一）标本的采集 1.皮肤消毒 ♦严格执行三步法 2.采血部位： ♦肘静脉 ♦肘动脉或股动脉采血 ♦婴幼儿采颈静脉血
3份（1～2小时） 2份
2～3份
2份
6.标本的运送和保存 立即送检，室温保存，切勿冷藏
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2. 检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）普通细菌的培养与鉴定
♦增菌培养：培养阳性指证及疑似菌列表
第二节 临床常见标本的细菌学检验
临床标本的细菌学检验
病种
标本
鼠 疫 痰，腺穿刺液
霍 乱 水样便
炭 疽 痰，渗出物
白 喉 假膜，咽拭子 淋 病 尿道/阴道分泌物 流 脑 脑脊液、瘀血癍 肺结核 痰 梅 毒 病变渗出液
方法
GS，亚甲兰染色 GS，制动试验 GS，亚甲兰染色/ 串珠试验 GS，亚甲兰染色 GS GS 抗酸染色 暗视野
结
果
G-两极浓染，多形态
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• 标本的采集和运送
腰椎或脑室穿刺，将脑脊液分别收集于3 只无菌试管内， 1-2ml/管 细菌学检查
化学和免疫学检查 细胞计数和分类 标本采集后置于无菌容器中立即送检，不 能保存于冰箱中。
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• 实验室检查
脑脊液离心沉淀，取其沉淀物接种于巧克力琼 脂平板、血琼脂平板和厌氧琼脂平板，分别置 需氧和厌氧环境中培养，对疑有真菌和结核分 枝杆菌感染的还应分别接种于相应专用培养基 上。孵育后根据菌落性状、生化反应作细菌学 鉴定。在细菌培养同时，取其沉淀物作涂片、 染色、镜检，以早期诊断感染的病原。
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Step4. 初次培养基上的分离物，可能存在
多种细菌： 区分正常菌群与致病菌 确定优势菌群
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化脓性链球菌菌落特征（β溶血）
铜绿假单胞菌菌落特征（血琼脂平板）
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• 快速
涂片检查
• 是“指南针”
• 对确诊报告提供参考意义
• 不要过分依赖、过分夸大它的作用
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血液、分泌物、排泄物、穿刺液、脑脊液等标本和 液体培养物可直接涂片镜检，有些细菌可做出初步诊断。
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脑膜炎类型
观察物
细菌性的 结核性的 真菌性的 病毒性的
优势白细 胞类型
临床微生物及微生物检验 临床标本检验
• 连续观察七天无菌生长，盲目接种固体 平板分离（血平板、巧克力平板）证实 无菌生长后报告阴性
血液培养瓶中细菌的生长现象
肉汤均匀混浊，发酵葡萄糖产气————— G-杆菌 微混浊有绿色变化————————— 肺炎链球菌
血球层上面出现颗粒状生长，有自下而上的溶血
下呼吸道标本的检查
• 正常下呼吸道细菌情况 • 对下呼吸道的感染采用痰液标本进行细 菌学检查
标本采集
• 晨痰 • 方法：
– 自然咳痰法 – 气管镜下采集 – 气管或环甲膜穿刺
• 需避免上呼吸道正常菌群的污染
涂片检查
合格痰液标本
大量吞噬细胞 未见鳞状上皮细胞
不合格痰液标本
大量鳞状上皮细胞
未见吞噬细胞
• 必须注意菌群与疾病的关系
标本采集
• 鼻咽拭子 • 咽拭子
涂片检查
• 白喉棒状杆菌
培养检查
• • • • • 血平板、巧克力平板、EMB 百日咳鲍特菌：鲍金平板 白喉棒状杆菌：吕氏血清斜面 脑膜炎奈瑟菌：巧克力平板（CO2） 流感嗜血杆菌：巧克力平板（CO2）
上呼吸道标本的常见细菌
• 正常菌群
尿液标本的微生物学检验
• 正常的尿液是无菌的 • 任何怀疑尿路感染或全身感染的患者均 可进行尿液细菌培养 • 尿液是细菌的良好培养基，容易受污染
尿液标本的采集
• 用药前采取中段尿 • 女性：
– 清洗外阴部，留取中段尿5~10ml ，月经期不得采取
• 男性：
– 清洗尿道口，留取中段尿5~10ml
• 儿童：
———溶血性链球菌
混浊并有胶冻状凝固—————— 病原性葡萄球菌