传染性脾肾坏死病毒感染鳜Siniperca chuatsi的组织病理学观察

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传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)VP092R的鉴定及功能研究的开题报告

传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)VP092R的鉴定及功能研究的开题报告题目：传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)VP092R的鉴定及功能研究研究背景与意义：传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)是一种广泛存在于淡水鱼类中、对鱼类健康造成较大危害的病毒。

目前已确定的ISKNV分布范围逐渐扩大，其对豆鲢、草鱼等鱼类的感染率较高，且病毒病的发病率和死亡率较高。

因此，如何有效地控制ISKNV感染，保障鱼类健康成为了当今鱼类养殖业的重要问题。

VP092R是ISKNV的一种核衣壳蛋白，其在ISKNV的复制和感染过程中具有重要作用。

但目前VP092R的鉴定和功能研究仍相对不足，对于深入了解ISKNV的生物学特性和病毒感染过程机理具有重要作用。

因此，本研究旨在对ISKNV VP092R进行鉴定及功能研究，为ISKNV病毒的控制和预防提供理论基础。

研究内容：1. 对ISKNV VP092R进行生物信息学分析，包括理化特性、亚细胞定位等。

2. 实验性研究ISKNV VP092R在鱼类细胞中的表达及分布情况。

3. 研究ISKNV VP092R与ISKNV感染的相关性，并探讨其在ISKNV 感染过程中的作用机理。

预期结果：1. 对ISKNV VP092R的生物学特性和表达模式进行分析。

2. 揭示ISKNV VP092R与ISKNV感染的相关性及作用机理。

3. 为控制ISKNV感染提供实验数据和理论基础。

研究方法：1. 生物信息学分析：通过生物计算软件进行序列特征预测和亚细胞定位预测等。

2. 分子生物学实验：构建VP092R基因表达载体，转染鱼类细胞，利用定量PCR、Western blot等方法分析VP092R表达水平及分布情况。

3. 细胞培养和病毒感染模型建立：利用鱼类细胞线生长与病毒感染模型建立，研究ISKNV VP092R在感染过程中的变化及作用机理。

研究预期成果：完成ISKNV VP092R的鉴定和功能研究，揭示其在ISKNV感染过程中的作用机理，为控制和预防ISKNV感染提供理论和实验依据。

鳜传染性脾肾坏死病毒的纯化和酶切分析

鳜传染性脾肾坏死病毒的纯化和酶切分析邓敏;何建国;翁少萍;曾征;龙綮新【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2001(025)003【摘要】鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)是近年来危害广东地区鳜养殖业的主要病原。

本文用回接感染健康鳜获得病毒原料，分离纯化了大量高纯度的ISKNV病毒粒子，电镜下可见病毒粒子为二十面体，直径平均为150nm。

抽提病毒核酸，对其基因组DNA进行酶切分析，病毒基因组为双链DNA分子，表现脊椎动物虹彩病毒基因组的特点即其胞嘧啶5’端高度甲基化。

以限制性内切酶EcoRI、BamHI、HindⅢ、KpnI和PstI酶切ISKNV基因组DNA，经电泳分离后，分别得到1、8、9、18、22条清晰的酶切片段，并根据酶切片段算得基因组的大小超过108.7kbp。

【总页数】6页(P238-243)【作者】邓敏;何建国;翁少萍;曾征;龙綮新【作者单位】中山大学生命科学学院，广东广州510275;中山大学生物防治国家重点实验室，广东广州510275【正文语种】中文【中图分类】Q814.1;S941.41【相关文献】1.鳜传染性脾肾坏死病毒ICR489基因序列分析 [J], 邓敏;何建国;翁少萍;吕玲;何华虹2.鳜传染性脾肾坏死病毒核糖核酸酶Ⅲ基因结构及序列分析 [J], 翁少萍;邓敏;何建国;吕玲;何华虹;龙綮新3.鳜传染性脾肾坏死病毒 ORF093基因的克隆、表达及其重组蛋白的免疫原性分析 [J], 付小哲;李宁求;彭媛媛;林强;石存斌;黄志斌;吴淑勤4.编码鳜传染性脾肾坏死病毒结构蛋白新基因ORF90.5L的鉴定分析 [J], 王庆;罗永文;刘春;曾伟伟;张超;石存斌;吴淑勤5.鳜传染性脾肾坏死病毒主衣壳蛋白基因结构及序列分析 [J], 邓敏;翁少萍;关浩基;何建国;周松裕;吕玲;何华虹;龙綮新;何友深;杨波;黄伟平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼传染性脾肾坏死病毒

DNA疫苗浸泡免疫预防鳜鱼传染性脾肾坏死病毒周伟东;周勇;刘奕;张立强;邓平;艾桃山;曾令兵;喻运珍;喻婷【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2017(056)014【摘要】In this study,ISKNV MCP gene was cloned into eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1 (+) to construct DNA vaccine,pcMCP,to study the immune effect of DNA vaccine. The results showed that immersion immunity by pcMCP DNA vaccine could stimulate the immune system. After immunization,White blood cell content,leukocyte phagocytosis and SOD were significantly improved,and they reached the maximum at 14th day. The mRNA level of IgM and Mx gene was expressed at 72 h,and reached the maximum at 96 h, and they were upto 3.05 fold and 2.02 fold respectively,compared with control group. Challenge test, immersion immunization could effectively protect the ISKNV infected mandarin fish. at the eleventh day,the total death rate of immersion immunization groupwas only 40﹪, the control groups were mortality rate reached 100﹪. So these results showed that immersion immunity of DNA vaccine reduced death of ISKNV infected Mandarin fish.%以ISKNV MCP基因为目的基因,克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建成DNA疫苗pcMCP,对鳜鱼(Siniperca chuatsi)pcMCP DNA疫苗进行浸泡免疫效果研究.结果表明,pcMCP DNA疫苗能够刺激免疫系统,对非特异性免疫和IgM的表达都具有激活作用.免疫后血液中白细胞含量、白细胞吞噬能力和SOD活力都显著提高,14 d时均达到最大.IgM和Mx基因的mRNA表达研究显示,72 h大量表达,96 h达到最大,分别是对照组的3.05倍和2.02倍.攻毒试验显示,浸泡免疫能够有效保护ISKNV感染的鳜鱼,在第11天,浸泡免疫组的累计死亡率仅为40﹪,而对照组死亡率都达到了100﹪,pcMCP浸泡免疫降低了ISKNV感染的鳜鱼死亡率.【总页数】5页(P2731-2735)【作者】周伟东;周勇;刘奕;张立强;邓平;艾桃山;曾令兵;喻运珍;喻婷【作者单位】武汉市农业科学院水产研究所,武汉 430207;长江水产研究所,武汉430223;武汉市第三十九中,武汉 430060;武汉市农业科学院水产研究所,武汉430207;武汉市农业科学院水产研究所,武汉 430207;武汉市农业科学院水产研究所,武汉 430207;长江水产研究所,武汉 430223;武汉市农业科学院水产研究所,武汉430207;武汉市农业科学院,武汉 430071【正文语种】中文【中图分类】S942.5【相关文献】1.鳜鱼传染性脾肾坏死病毒病防控关键措施 [J], 王红卫2.鳜传染性脾肾坏死病毒病免疫预防试验报告 [J], 颜慧;叶金明;丛宁;丁文岭;冯桃健3.鳜鱼传染性脾肾坏死病毒病防控关键措施 [J], 王红卫;黄桦;朱晓荣;丁雪岳4.鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)的快速PCR检测方法灵敏性的比较 [J], 朱春艳;王家军;薛中仪;刘张淮;张荧荧5.传染性脾肾坏死病毒、鳜鱼蛙病毒和鳜弹状病毒三重PCR检测方法的建立 [J], 梁红茹;马赛亚;付小哲;林强;刘礼辉;牛银杰;黄志斌;林蠡;李宁求因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鳜鱼苗种元疫预防传染性脾肾坏死病生产试验

表１试验池苗种放养情况
发病池塘起初有几尾病鱼，在水中缓慢游动，对外界反应不敏感，捞网较易获取，多数病鱼头、鳃
盖、下颌、胸鳍和腹鳍均有不同程度出血，鳃丝呈白
在试验塘分别取鳜鱼不同的生长阶段垂死病
鱼２～５尾，剖开腹部，采集脾、肾组织，冰浴匀浆，取样依次于离心机６０００ｒ／ｍｉｎ、８０００ｒ／ｍｉｎ离心，取
《水产养殖）２０１７年第２期
ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００４－２０９１．２０１７．０２．０１３
痴耆
％
鳜鱼苗种元疫预防侉黎性牌肾坏
张德顺１，丁文岭，方丽君，马成鑫２
射器逐条注射疫苗，２ｈ后，将注射疫苗的鳜鱼２５００尾放于池塘，３９８０尾注射疫苗的鳜鱼和原塘中留存未注射疫苗的鳜鱼１６２０尾混养于５池塘。两个池塘均用二氧化氯消毒，防止拉网受伤及
针口感染。ｌ－３病害流行情况
色或颜色变淡，当地养殖户称为 “ 白鳃病” 。剖开腹部后，肝颜色较正常鳜鱼淡，呈灰白色或苍白色，有紫黑色出血点，被养殖户称为“ 花肝病” 。脾脏、后肾、前肾肿大，呈暗红色；大部分病鱼空胃，肠道无食。以上症状可作为鳜鱼传染性脾肾坏死病临床诊
１材料与方法
１．１试验池塘苗种及疫苗来源试验池塘选自扬州市江都区鳜鱼养殖重点

笋壳鱼暴发传染性脾肾坏死病毒病的风险评估

１．４检测ＩＳＫＮＶ病原检测是诊断陔病害的礁要手段．早期的病毒检测主要通过组织学、细胞分离病原、电镜观察等随着人们对传染性牌。肾坏死病毒病的重视和分子生物技术的发展，近年来建立了多种ＩＳＫＮＶ的检测方法＝如ＰＣＲ检测方法、随机扩增多态性ＤＮＡ标记检测法、巢式ＰＣＲ检测法、荧光定量ＰＣＲ快速检测厅法、环介导等温扩增技术检测方法、Ｅ１ＩＳＡ检测厅法等
病的鳜鱼中发现Ｉ，传染性脾肾坏死病毒病ｌ９９８年，何建等证实了该病原为ＩＳＫＮＶ
最早天于笋壳鱼ＩＳＫＮＶ的报道是２００９年ｌ０月在顺德一养殖场暴发ｒ陔病
１．３．２临床症状和发病季感染ＩＳＫＮＶ的笋壳鱼，主要表现为从池塘底层游至水面、游泳欠衡、反应迟钝、腹部膨大等；解削可见睥脏和肾脏肿大，有 ¨ｌ血斑点。ＩＳＫＮ＼的致病性很强，存水温２０～３２￣Ｃ时．均可引起仇发病，水温２８～３０时致病性最强．试验研究发现，
１．危害描述
１．１病原ＩＳＫＮＶ属于虹彩病毒科（Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉ，ｌａｅ）．是肿大病毒属（Ｍｅｇａｌａｃｙｌｉｖｉｒｕｓ）的代表种ｌ上ｌ：彩病薄科是一类径为ｌ２０～３００ｎｍ，呈正二十面体对称结构．遗传物质为线双链ＤＮＡ（大约１５０～２８０ｋｂｐ）的病毒虹彩病毒可以感染昆虫、两柄类、鱼类等无脊椎动物和脊椎动物、虹彩病毒粒子一般包括雀膜、衣壳和核心个部分。பைடு நூலகம் 小哲等人通过埘３３株不衍主求源的肿大病毒的外膜蛋门进行同源性比对，发现肿大病毒可以分为３个型，Ｉ型主要感染海水鱼，ｌｌ，主要感染淡水值，ＩＩＩ型主要感染鲽类，ＩＳＫＮｖ则分为Ｉ型和 Ⅱ型２种螭Ｉ六１型１－２易感动物ＩＳＫＮ＼’的宿主范广泛，可以感染伞范『书ｌ内鲈肜目、鲔形日、鲱彤Ｈ、鲍形目、灯笼日、鲻形目和鲽形目等５０多种海水和淡水伍类近年来，存Ｕ本、韩同、新加坡等业洲家．甚至存美同、德同、澳大利亚和加拿大等地的观赏鱼和养殖鱼类中陆续发现了ｌＳＫＮＶｆｌ＇，Ｊ感染案例．．１．３流行病学１．３．１Ｊ，史１９９７年，吴淑勤等次在患

保安湖鳜鱼(Siniperca Chuatsi)卵巢发育的组织学观察

（ｅｏｅｎ）ＩｕｕｔＳｐｅｂｒｎｃｂｒｔｅｖｒｔｅｆｅｅｅａｏｆｒｐｗｉｇＦｏｏｅｒｃｖｒｇ。ｎＡｇｓ、ｅｔｅａｄＯｔｅ，ａｙｉｉａｓｇｇｎｒｔｎａｅａｎｎ。ｒｍＮｖｍ— ｉｍｏｈｏｓｎａｏｄｉｔｓ
（ｏｌｅｏｎｍｌｃｅｃｎｅｈｏｏｙＳａｄｎｇｉｕｔｒｌｎｖｒｉ，ａａ７０８ＣｉａＣｌｇｆＡｉａＳｉｅａｄＴｃｎｌ，ｈｎｏｇＡｒｌａＵｉｅｓｙＴｉ２１１，ｈｎ）ｅｎｇｃｕｔｎ
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鳜鱼疾病的治疗

鳜鱼疾病的治疗一、病毒性出血病该病是一种急性传染病，发病快、死亡率高，又称为“鳜传染性脾肾坏死病”、“鳜鱼虹彩病毒病”等。

自1994年以来流行于我国广东与内陆的鳜鱼集中养殖区，给我国鳜鱼产业养殖造成了严重损失。

【症状及病理变化】患病鱼眼球突出，头部充血，尤其是口腔周围、眼、鳍基充血明显，鳃贫血而呈粉红色或呈花斑状，腹部呈“黄疸”症状。

解剖可见肝脏肿大发黄甚至发白或有许多出血点，肠道充血发红，肠内有黄色流晶样物质、胃内无食、胃壁斑块状充血。

组织病理变化最明显的是脾和肾内细胞肥大，感染细胞肿大形成巨大细胞。

肾脏、脾脏是病毒感染的主要器官。

【流行与危害】病毒性出血病的传播主要以水平传播为主，主要危害10厘米以上鳜鱼。

该病的流行具有以下特点：（1）发病急，病情发展快，死亡率高。

发病早期一口塘每天死亡十几尾，2~3天内迅速增加到70~80尾，1周内可增至每天每口塘几百尾、上千尾，甚至全军覆没，死亡率90％以上。

（2）具明显季节性。

水温20℃以下很少发病，28~30℃是该病最适流行水温。

该病主要发生于6~10月高温季节，l1月中下旬水温降低后发病死亡率大幅度下降。

（3）外部条件的刺激是疾病暴发流行的诱因。

携带病毒的鳜鱼在发病季节对外来刺激极为敏感，该病特别是在季节交替期、气候突变、昼夜温差大、持续阴雨低温天气、水体出现“倒藻”时高发；而病原（如寄生虫、细菌等）感染、水环境突变、水质恶化、用药不当、饵料鱼未经消毒或投放量过大等均可诱发或加剧病情发展，养殖户有“越下药，死亡越多”、“越换水越死亡”等说法。

（4）致病病毒可单独感染也可因在感染病毒后抵抗力下降并发多种寄生虫、细菌的感染，且病情易反复。

⑤最先发病死亡的往往是相对个体较大、肥满度较好的鳜鱼，同一口塘的其它鱼类并无此病的症状。

【诊断方法】现场诊断该病时判断依据以下几点：（1）发病塘水突然变浊，即发生所谓“倒水”或“倒藻”现象；（2）鳃丝粉红或发白或呈花斑状；（3）胃壁呈斑块状充血，肠道充血发红或呈环状充血；（4）肠内容物呈黄色流晶状；（5）发病鱼离群漫游，呈明显的“黑头黄身”现象；（6）发病鱼血液不凝固。

传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)VP005L以及VP092R的功能研究

传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)VP005L以及VP092R的功能研究传染性脾肾坏死病毒(Infectious Spleen and Kidney NecrosisVirus,ISKNV)属于肿大细胞病毒属，是造成养殖鳜鱼爆发性死亡的主要病原，给我国的水产养殖带来巨大的损失。

越来越多的研究表明，线粒体在病毒感染过程中扮演着重要角色，甚至在病毒感染后引起的细胞凋亡中起着重要作用。

本文选取了ISKNV编码的VP005L和VP092R这两个病毒蛋白进行功能研究。

运用激光共聚焦技术、亚细胞定位技术以及线粒体各组分的特异性标志酶作为内参等实验，确定这两个基因定位于FHM细胞的线粒体。

采用JC-1试剂结合流式细胞仪，检测转染pcDNA3.1-V5/His-005后细胞膜电位的改变，与对照pcDNA3.1-V5/His相比，转染pcDNA3.1-V5/His-005细胞的膜电位明显下降，得出VP005L具有促进细胞凋亡的作用。

利用Annexin-V/PI试剂结合流式细胞仪，检测转染pcDNA3.1-V5/His-005后细胞的早期凋亡率，与对照相比，转染pcDNA3.1-V5/His-005后细胞的早期凋亡率明显高于对照组，这也证明VP005L具有促进细胞凋亡的作用。

运用dsRNA技术将感染ISKNV病毒后表达的VP005L基因沉默，结合Annexin-V/PI试剂检测早期凋亡率，实验组dsRNA-005的早期凋亡率低于对照组。

用荧光定量技术检测转染pcDNA3.1-V5/His-005后相关凋亡基因的表达水平，与对照相比，在转染48h时，VP005L对caspase3基因的表达有轻微的上调作用，上调了1.12倍，对Bcl-2基因有下调作用，下调了1.30倍,对Bax基因有上调作用，上调了1.38倍。

这说明VP005L参与的是Bcl-2调控的线粒体途径的凋亡，通过下调抑凋亡基因Bcl-2的表达，上调促凋亡基因Bax的表达来起作用。

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ＳＯｓｅｖｅｒｅ；（２）Ｂｌｏｏｄｖａｓｃｕｌａｒｗａｌｌｏｆｍａｊｏｒｏｒｇａｎｓｗｅｒｅｎｅｃｒｏｓｉｓ：ｎｅｃｒｏｓｉｓｏｆｂｉｇｂｌｏｏｄｖａｓｃｕｌａｗｅｒｅｏｂｓｅｖｅｒｄｉｎｓｐｌｅｅｎ，ｌｉｖｅｒ，ｈｅａｄ
（１．ＧｕａｎｇｚｈｏｕＬｉｙａｎｇＡｑｕａ－ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．Ｌｔｄ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５１５，Ｃｈｉｎａ；
２．ＧｕａｎｇｚｈｏｕＪｉｎｓｈｕｉＡｎｉｍａｌＨｅａｌｔｈＰｒｏｄｕｃｔｓＣｏ．Ｌｔｄ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５１５，Ｃｈｉｎａ；
２．广州金水动物保健品有限公司，广东广州５１０５１５；
３．烟台大学牛命科学学院．ＩＪ１东烟台２６４００５）
摘要：对经分子生物学手段检测出感染了传染性脾肾坏死病毒鳜Ｓｉｎｉｐｅｒｃａｃｈｕａｔｓｉ组织进行病理学观察。结果
ｐｅｃｉａｌｌｙｔｈｅｓｐｌｅｅｎｗｈｉｃｈｗａｓｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇｏｒｈａｄｎｅｃｒｏｔｉｚｅｄｉｎｃｅｌｌｓｂｅｉｎｇｓｐｒｓａｅ．Ｌｙｍｐｈｏｉｄｔｉｓｓｕｅｏｆｈｅａｄ・ｋｉｎｅｄｙａｎｄｋｉｄｎｅｙｗｅｒｅａｌ－
性腺、肝脏等部位呈现不同程度的淤血、出血；（４）在各器官出现数量不一的肿大细胞：以脾脏中最多。关键词：鳜；传染性脾肾坏死病毒；组织病理
中图分类号：￥９４１文献标志码：Ａ
ＨｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＯｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆＭａｎｄａｒｉｎｉｆｓｈ（Ｓｉｎｉｐｅｒｃａｃｈｕａｔｓｉ）ＩｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＩｆｅｎｃｔｉｏｕｓ
３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＹａｎｔａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｔａｉ２６４００５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＨｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｉｎｍａｎｄａｒｉｎｉｆｓｈＳｉｎｉｐｅｒｃａｃｈｕａｔｓｉｉｎｆｅｃｔｅｄｂｙｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｓｐｌｅｅｎａｎｄｋｉｄｎｅｙ
ＳｐｌｅｅｎａｎｄＫｉｄｎｅｙＮｅｃｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ

ＱＩＲｕｉ — ｒｏｎｇ卫，ＬＥＩＹａｎ。，ＣＵＩＬｏｎｇ — ｂｏ，ＴＡＮＧＳｈａｏ — ｌｉｎ。，ＭＡＪｉａ — ｈａｏ
发现：患病鳜（１）造血器官严重坏死：以脾脏最为严重，脾细胞正在坏死或已坏死，细胞稀疏；头。肾和肾的淋巴样
组织坏死次之；（２）主要器官血管壁组织坏死：脾、肝、头肾、肾的大血管均坏死；（３）组织淤血、出血：肠、肠系膜、
传染性脾肾坏死病毒感染鳜Ｓｉｎｉｐｅｒｃａｃｈｕａｔｓｉ的组织病理学观察
戚瑞荣－－，雷燕．一，崔龙波。，唐绍林，－，马家好１，２
（１．广州利洋水产科技股份有限公司，广东广州５１０５１５；
第２８卷第３期
２０１５年６月
水产学杂志
ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＦＩＳＨＥＲＩＥＳ
Ｖｏ１．２８，Ｎｏ．３
Ｊｕｎ．２０１５
文章编号：１００５ — ３８３２（２０１５）０３ — ００３５ — ０４
ｎｅｃｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ（ＩＳＫＮＶ）ｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｍｅａｎｓｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｙ．ｇＩｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔ（１）ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｏ￣ａｎｓｗｅｒｅｓｅｖｅｒｅｎｅｃｒｏｓｉｓ：ｅｓ —