启东18届高考生物专项复习微生物的实验室培养实验-制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌1练习
高中生物高考专题12 微生物的培养和应用(解析版)
2020届高考生物难点及易错题精讲精练专题12 微生物的培养和应用【难点精讲】一、微生物的实验室培养和无菌技术例题：(2018·全国Ⅱ，37)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。
回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具___________(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_____________________________________________________________________________。
(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_______________________。
在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。
(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。
(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是____________________。
【答案】(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽【解析】(1)干热灭菌是指将物品放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃条件下加热1～2 h。
耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等，可采用干热灭菌的方法。
(2)巴氏消毒法是在70～75 ℃条件下煮30 min或在80 ℃条件下煮15 min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养物质损失较少。
(3)接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30 min，紫外线能破坏微生物的DNA结构，以杀死物体表面或空气中的微生物。
在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以强化消毒效果。
人教版高中生物选修一提分教程 专题2 微生物的培养与应用 课题1 第2课时 含答案
第2课时实验操作及实验结果[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。
2.掌握大肠杆菌的纯化方法。
3.了解菌种保藏所用的方法。
知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。
(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□02火焰。
(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻盖上□03皿盖。
(4)待平板冷却凝固后，将平板□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1]下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B 正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。
[答案] A知识拓展(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。
(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
微生物实验复习提纲
实验一培养基的配置（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配置（用于分离培养细菌以及测定其数目、天然培养基，）1、称量牛肉膏可以放在小烧杯、表面皿、称量纸中称量，热水溶解后倒入大烧杯。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速；滤纸不可称量牛肉膏。
2、溶解加水加热搅拌，药品完全溶解（若配置固体培养基，则加入1%~2%的琼脂，再加热融化，此过程需不断搅拌，以防止琼脂糊底或溢出）定容。
若偏酸，滴加1mol/L NaOH3、调pH 待培养基冷却至室温时检测其pH 不停搅拌并随时用pH试纸检测，若偏碱，滴加1mol/L HClpH调节通常放在加琼脂之前；应注意pH不要调过头，以免回调影响各离子浓度。
液体培养基：滤纸4、过滤固体培养基：4层纱布趁热过滤固体培养基：试管高度的1/5，灭菌后摆斜面、三角瓶的1/25、分装半固体培养基：试管高度的1/36、加透气膜7、包扎将三角瓶的棉塞外包双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿透气膜。
8、灭菌上述培养基121.0℃湿热灭菌20min9、摆斜面斜面长度不超过试管总长1/210、无菌检查37℃温箱培养1-2d（二）高氏1号培养基的配制（放线菌、组合培养基）1、称量和溶解可溶性淀粉加冷水调成糊状，再加水加热溶解；微量成分FeSO4*7H2O 现配成高浓度的储备液后加入：100ml+1g=0.01g/ml 再在1000ml+1ml储备液。
2、同上（三）马丁氏培养基（霉菌、半组合培养基）1、称量和溶解土豆去皮切块煮开半小时，各成分溶解好后，将孟加拉红配成1%的水溶液，在1000ml培养液中加3.3ml，加入琼脂加热融化2、同上3、链霉素的加入它受热易分解，故临用前将培养基融化后待温度降至45℃左右才能加入。
可先将其配成1%溶液，在100ml培养基中加0.3ml，使每ml培养集中含其30μg。
注意事项：称药品时牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖；谨慎调pH，避免多次回调影响各离子浓度；分装过程中注意不要使培养基沾在管上，以免引起试剂污染。
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化
，必须原创
牛肉膏蛋白胨（Bacto-Proteose-Peptone，由蛋白质和多种水解物组成）培养基是分
离和纯化微生物的优质培养基，它可为微生物提供养分、气味和增强细胞代谢的稳定性，
有利于微生物的成长和繁殖，因此被广泛应用于细菌的鉴别、分离、纯化研究。
本实验介
绍牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。
1、配制牛肉膏：将牛肉的去油干片以40倍的水为底料，煮沸约30min，冷却至室温
后用离心设备至0.75—1％的浊度；
2、添加蛋白质：分别将卵白袋、硝酸蛋白、胱蛋白分别以大约6:2:2的比例添加到
牛肉膏液中，再将二次离心液收集并稀释成1:200；
3、添加添加剂：用 0.1N 的 NaOH 调盐，加入 0.2 ％的 Na2CO3、1.0 ％的 K2HPO4 和 0.007 ％的 MnCl2，使液体 pH 值为7.2 ± 0.2。
二、微生物的分离与纯化：
1、微生物的分离：将牛肉膏蛋白胨作为培养介质，以碗杯离心法将培养基放在26-28℃的恒温器中培养24-48h；
2、筛选：用滤筛得到培养液粒子，将其留在高性能液相色谱仪（HPLC）上；
3、纯化：用不同浓度的氯化钾，盐酸混合溶液或二乙醇胺溶液去除悬浮粒子，再用
离子交换树脂法去除其他污染物，萃取物可用电泳分离成单体；
4、鉴定：根据抗原或抗体鉴定微生物，将其分类编号。
三、结论：
经过牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化实验，成功地实现了牛肉膏蛋
白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。
通过该实验，我们可以进一步学习、提高分离
微生物的能力，为临床抗感染药物的研究提供有力的支持。
高一生物微生物的实验室培养介绍
高一生物微生物的实验室培养介绍【导语】微生物的实验室培养是高中生物的重要考点，这方面的考点学生掌控了吗?下面是作者给大家带来的有关于微生物的实验室培养介绍，期望能够帮助到大家。
高一生物微生物的实验室培养知识点该知识点包括培养基、无菌技术、实验操作(制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌)等几个要点知识。
1. 培养基：培养基的类型(1)加入培养基中的凝固剂(如琼脂)，一样不能被微生物利用，只起到凝固作用。
(2)挑选培养基一样只生长具有特定目的的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。
2. 无菌技术：消毒与灭菌用酒精消毒时，70%的酒精杀菌成效。
若浓度过高，菌体表面蛋白质凝成一层保护层，则乙醇分子不能渗透其中;若浓度过低，杀菌能力减弱。
获得纯洁培养物的关键是避免杂菌污染，无菌技术可从以下四个方面展开：(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰邻近进行。
(4)实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
3. 实验操作(制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌)：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤是：(1)运算：根据培养基配方比例，运算配制100ml的培养基，各种成分用量。
(2)称量：准确称取各种成分。
(3)溶化：将称好的牛肉膏加少量水溶化后，加入称量好的蛋白胨、氯化钠、琼脂加热溶解，并补加蒸馏水定容至100ml。
(4)灭菌：将配置好培养基转移到锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。
将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。
(5)倒平板：待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯邻近倒平板。
【微生物的实验室培养考点分析】考题多以非挑选题的情势显现，考核微生物的培养条件、代谢特点，实验室微生物培养规范和主要步骤。
2.1 微生物的实验室培养(2)
B.在皿底上标记日期等方便
C.正着放臵容易破碎
D.防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染
解析 平板倒臵主要是防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
是平板划线法和稀释涂布
平板法。下列有关这两种方法的叙述错误的是( B )
1
2
3
4
A.均将大肠杆菌接种在固体培养基的表面
孢子繁殖形成，这种菌落才符合要求。
解析答案
1
2
3
4
4.右表是从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答下面的问题。
(1) 培养基的类型很多，但培养基中一
般都含有水、碳源、 氮源 和无机盐。
上述培养基配方中能充当碳源的成分
试剂
用量
试剂
用量
牛肉膏/g
蛋白胨/g
5
10
琼脂/g —
20 —
是 牛肉膏和蛋白胨 。培养基配制完成
答案
应用示例
2.右图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法操作结果。 下列叙述中，错误的是( 后才能取菌液 )
A.甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却 B.对于浓度较高的菌液，如果甲中的
稀释倍数仅为102，则所得的菌落不
是由单一的细胞或孢子繁殖而成
C.乙中培养皿中所得的菌落都符合要求
D.乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端
实验法二 牛肉膏蛋白胨培养基的制备
实验法二牛肉膏蛋白胨培养基的制备
实验目的：
本实验的目的是制备牛肉膏蛋白胨培养基，以备后续在培养菌种时使用。
实验原理：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种富含氮源和碳源的培养基，可以用来培养多种微生物，包括细菌、真菌和酵母菌等。
其主要成分为牛肉膏、蛋白胨和氧化还原指示剂。
牛肉膏是从牛肉中提取的肉汁，是一种富含植物蛋白、维生素和微量元素的营养液，蛋白胨是酶解的蛋白质，是一种常用的氮源。
氧化还原指示剂可以用来检测微生物的代谢活动，当微生物代谢产生酸性代谢产物时，其颜色将变为黄色。
实验步骤：
1.准备牛肉膏蛋白胨培养基的成分：牛肉膏、蛋白胨和氧化还原指示剂；
2. 将牛肉膏和蛋白胨分别加入到约800ml的去离子水中，加热至融化，然后煮沸5分钟，搅拌至完全溶解；
3. 将氧化还原指示剂加入到煮沸后的液体中，并用酒精灯进行灭菌处理，使溶液冷却至室温；
4. 将培养基装入无菌烧杯中，经过高温高压灭菌处理，即可得到无菌牛肉膏蛋白胨培养基。
注意事项：
1.在加热牛肉膏和蛋白胨的过程中，需不断搅拌，以防止附着在底部的物质烧焦。
2. 培养基的所有成分和制备过程均需无菌操作，以保证培养基的纯度和无菌性。
3. 每次使用前应检查培养基是否有明显异味或异色，如有异常情况则应弃用。
4. 操作过程中要注意安全，避免受到高温、高压、灭菌等因素的伤害。
实验结果：
制备牛肉膏蛋白胨培养基后，应详细记录制备过程中的操作步骤、配方和注意事项，以备后续使用时参考。
制备好的培养基应无明显异味或异色，并保持无菌状态，以保证培养菌种的纯度和生长。
生物复习专项练习：微生物的培养与应用_微生物的实验室培养_实验制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌
实验——制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌课后练习(2)1．下列不属于微生物常用的分离、纯化方法的是（）A．单细胞挑取法B．平板划线法或稀释涂布平板法C．接斜面法D．选择培养基分离法2．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。
实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。
请回答与此实验相关的问题。
(1)培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和________。
除此之外，培养基还必须含有的基本成分是________和________。
(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是________。
(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于________中培养，培养的温度设定在37℃。
要使该实验所得的结果可靠，还应该同时在另一平板上接种________作为对照进行实验。
(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。
一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越________。
3．下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。
请回答：(1)充当碳源的成分是________和________。
培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行__________处理。
(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是____________和______________两种。
在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是______________。
(3)假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？________________________________________________________________________。
4．关于微生物的实验室培养技术，下列表述正确的是（）A．溶化时将称好的牛肉膏从称量纸上直接倒入烧杯B．常见的消毒方法包括灼烧、煮沸、紫外线利喷洒化学试剂等C．配制同体培养基时加入琼脂，其目的是为微生物生长提供碳源D．用移液管稀释菌液时，吹吸三次的目的是使菌液与水充分混匀5．近期网络上流行一种利用制作酸奶来判断牛奶好坏的方法，以下自制酸奶的方法也随之在网络广泛流传：①将牛奶倒入玻璃杯，放在沸水中加热10分钟。
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实验——制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌
1．在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。
利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出( )
A．乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌
B．固氮细菌、大肠杆菌、放线菌
C．固氮细菌、霉菌、放线菌
D．固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌
2．下列关于配制培养基的叙述，正确的是( )
A．制作固体培养基必须加入琼脂
B．加入青霉素可得到放线菌
C．培养自生固氮菌时不需要氮源
D．发酵工程一般用半固体培养基
3．下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（）
A．含碳有机物 B．蛋白胨
C．含碳无机物 D．石油、花生粉饼等天然物质
4．利用稀释涂布平板法纯化的大肠杆菌，经培养后发现培养基上出现了多种菌落，不可能的原因是（）
A．培养基制备过程中被杂菌污染
B．接种过程中，无菌操作不符合要求
C．系列稀释时，无菌操作不符合要求
D．由大肠杆菌的种类不同造成的
5．大肠杆菌能够在哪种培养基上生长繁殖（）
A．无氮培养基
B．分解尿素的细菌的选择培养基
C．纤维素分解菌的选择培养基
D．牛肉膏蛋白胨培养基
6．下表是一种培养基的配方，请回答：
(1)________、
________、________等，琼脂的作用是________。
(2)在培养基定容之后，必须进行的重要步骤是____________________。
(3)该培养基从物理性质看属于________培养基，能培养的细菌从同化作用看其代谢类型是________。
(4)此培养基如要培养霉菌时需将培养基的pH调至________，如要培养细菌时需将培养基的pH调至________。
(5)若用此培养基纯化大肠杆菌，最常用的方法是________、________。
最终，使大肠杆菌在固体培养基上形成单个________，从而获得纯种菌株。
7．平板冷凝后，要将平板倒置，其原因是（）
A．接种时再拿起来方便
B．在皿底上标记日期等方便
C．正者放置容易破碎
D．可以使培养基表面的水分更好地挥发
8．以下关于菌种保藏的叙述，错误的是（）。
A．菌种保藏的目的是保持菌种的纯净
B．固体斜面培养基可用于菌种的临时保藏
C．菌种的长期保存一般采用甘油管藏
D．由于甘油管藏菌种在－20 ℃条件下进行，因此对甘油可不必灭菌
9．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是（）
①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂
⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐
A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦
10．有关平板划线操作的叙述不正确的是（）
A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
B．每次划线结束，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种
C．在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液
D．划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种
参考答案：
1．答案： C
解析：综合分析可知选择培养基依次选择的是：固氮细菌、霉菌和放线菌。
2．答案： C
解析：固体培养基需加入凝固剂，琼脂是常用的凝固剂，但不是唯一的；青霉素可抑制细菌和放线菌的生长；发酵工程一般用液体培养基。
自生固氮菌能够将空气中的氮还原成氨，故培养基配制时不需加氮源。
3．答案： C
解析：
4．答案： D
解析：大肠杆菌培养基中出现了多种菌落，说明污染了杂菌，杂菌可能来自培养基，也可能是因为操作过程中无菌操作不符合要求。
5．答案： D
解析：大肠杆菌在含碳源、氮源、水、无机盐的培养基上才能生长，A中没有氮元素，B、C中的氮元素和碳元素不能被大肠杆菌利用。
6．答案： (1)5 碳源氮源维生素使培养基凝固
(2)调节pH (3)固体异养型(4)酸性中性或微碱性(5)平板划线分离法涂布分离法菌落
解析： (1)此培养基中牛肉膏和蛋白胨含有糖、维生素(属生长因子)和有机氮，再加上NaCl、水。
所以共包括5类营养成分。
琼脂只作为凝固剂，不起营养作用。
(2)培养基中各种成分都溶化并定容后需根据所培养微生物的生长发育的需要调整好pH后再分装。
(3)本培养基含有琼脂，属固体培养基，因培养基中含有有机物，培养的细菌的同化类型为异养型，若培养自养型生物，按照培养基配制时经济节约的原则，不需加有机碳。
(4)如要培养霉菌，培养基的pH需调至酸性，培养细菌需调至中性或微碱性。
(5)微生物接种方法很多，如平板划线分离法、涂布分离法，此外还有平面接种或穿刺接种等，但前两种是最常用的。
最终目的是使聚集在一起的菌种分散到培养基表面，形成肉眼可见的子细胞群体，即菌落。
7．答案： D
解析：平板冷凝后，要将平板倒置，使培养基表面的水分挥发，防止皿盖上的冷凝水掉下污染培养基。
8．答案： D
解析：接种前培养基都需灭菌。
9．答案： C
解析：试题分析：分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中要有尿素、琼脂糖、葡萄糖，尿素给分解尿素的细菌提供氮源，不加硝酸盐。
考点：本题考查分离土壤中分解尿素的细菌的知识。
意在考查能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
10．答案： C
解析：在操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，每次划线之前都要灼烧接种环，是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，在操作结束后仍要灼烧接种环，是为了及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
A、B、D对。
在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于第一区域末端。
C错。
考点：考察知识：：微生物的分离和培养，用固体平面培养基进行细菌的划线培养，要求能理解所学知识的要点，理解实验方法、目的、原理、操作步骤及掌握相关的操作技能的实验能力。