反相离子对色谱法测定环磷腺苷有关物质
高效液相色谱法测定腺苷中的有关物质
高效液相色谱法测定腺苷中的有关物质【摘要】目的建立腺苷原料药中有关物质的高效液相色谱测试方法。
方法采用十八烷基硅烷键合硅胶柱;流动相为硫酸盐缓冲液-叠氮化钠液（1：10000）=60：40；流速为1.5ml/min；紫外检测波长为254nm。
结果腺苷和肌苷峰的分离度R≥9.0，RSD≤2.0%(n=5)；鸟苷、肌苷、尿苷、腺嘌呤杂质的线性关系良好，线性回归系数为0.998~1.000之间，回收率结果为鸟苷99.2%, 尿苷101.4%, 肌苷100.4%。
结论该检测方法操作简便，结果灵敏、准确，可用于腺苷中有关物质的限度测试。
【关键词】腺苷；高效液相色谱法；有关物质目前市场上销售的腺苷原料药主要是以发酵工艺制备得到，原料中存在着肌苷、鸟苷等核苷类杂质。
经查文献未见有腺苷原料的有关物质检测方法报道。
笔者通过实验研究，确定了用HPLC方法检测腺苷有关物质的新方法，能更有效地保证产品质量。
1仪器与试药1.1仪器USA Waters高效液相色谱仪（Waters 2695型泵，Waters 2487型检测器，SM7型自动进样仪器，Empower pro软件数据处理系统）；AE240型分析天平(瑞士梅特勒公司)1.2试药腺苷（浙江诚意药业有限公司，批号：20081001、20081002、20081003）；腺苷BP参照品（Batch/lot n01）；鸟苷参照品（lot A011405101）；肌苷参照品（J0310035）；尿苷参照品（lot A014531601）；腺嘌呤BP参照品（Batch/lot n01）。
2 方法与结果2.1色谱条件C18柱ODS (4. 6mm×250mm ,5μm)；流动相为硫酸盐缓冲液-0.01%叠氮化钠液（60：40，硫酸盐缓冲液配制方法为：精密称取硫酸氢钾约6.8g和硫酸氢四丁基铵约3.4g，同置1000ml容量瓶中，加900ml水溶解，用2M 氢氧化钾溶液调节pH至6.5，再加水至刻度，混匀。
环磷腺苷质量标准
环磷腺苷【英文名】Huanlinxiangan Adenosine Cyclophosphate【分子式】C 10 H 12 N 5 O 6 P·H 2 0【分子量】347.22本品为3' , 5' - 环磷酸腺苷。
按干燥品计算，含 C 10 H 12 N 5 O 6 P 应为97.0% ～103.0% 。
【性状】本品为白色或类白色粉末；无臭，味微咸。
本品在水中微溶，在乙醇或乙醚中几乎不溶。
【鉴别】（ 1 ）取本品约10mg ，加稀硝酸1ml 溶解后，加铜酸铵试液1ml ，加热数分钟后，放冷，析出黄色沉淀。
（ 2 ）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
【检查】溶液的澄清度与颜色取本品0.10g ，加新沸过的冷水50ml 溶解后，溶液应澄清无色。
【酸度】取溶液的澄清度与颜色项下的溶液，依法（中国药典2005 年版二部附录ⅥH）测定，pH 值应为 2.0 ～ 4.0 。
【有关物质】精密量取含量测定项下的供试品溶液1ml ，置100ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液20μl 注入液相色谱仪，照含量测定项下的色谱条件，调节仪器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20 ％。
精密吸取供试品溶液和对照溶液各20μl ，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液色谱图至主成分峰保留时间的 2.5 倍。
供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，各杂质峰的峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积（ 1.0 ％）。
【吡啶】精密称取本品适量，加N,N- 二甲基甲酰胺溶液，振摇，静置，制成每1ml 中含0.04g 的溶液，作为供试品溶液。
另精密称取吡啶适量，加N,N- 二甲基甲酰胺溶液溶解并稀释制成每1ml 中含8μg 的溶液，作为对照品溶液。
精密量取对照品溶液与供试品溶液上清液各1μl ，照气相色谱法及残留溶剂测定法（中国药典2005 年版二部附录ⅤE ，ⅧP），用5 ％- 二苯基-95 ％- 二甲基硅氧烷共聚物为固定相的毛细管柱（30m ×0.53mm ×5.00μm ），进样口温度120℃；监测器温度260℃；分流进样，分流比2:1 程序升温；初始温度50℃，持 5分钟，以每分钟8 ℃升至150 ℃，测定。
高效液相测定注射用环磷腺苷葡胺中环磷腺苷含量
高效液相测定注射用环磷腺苷葡胺中环磷腺苷含量作者：刘云娜李岩来源：《科学与财富》2017年第06期摘要：目的：建立环磷腺苷葡胺葡萄糖注射液中环磷腺苷含量的HPLC检测方法。
方法：采用Agilent 1200高效液相色谱仪，Agilent ZORBAX SB-C18柱（150x4.6mm，5μm），流动相为乙腈：pH2.5磷酸缓冲液（95：5），流速为1 ml/min，检测波长为259 nm，柱温为30℃进行测定。
结果：环磷腺苷浓度在0.01082～0.2104 mg/ml范围内时，浓度与峰面积线性关系良好，方程相关系数r=0.9999，平均回收率99.7 %，RSD=1.22%。
结论：用该方法检测注射用环磷腺苷葡胺中环磷腺苷含量准确，简便，高效。
关键词：HPLC；环磷腺苷葡胺注射液；环磷腺苷环磷腺苷葡胺注射液非洋地黄类强心剂，具有正性肌力作用，能增强心肌收缩力，改善心肌泵血功能，有扩张血管作用，可降低心肌耗氧量；改善心肌细胞代谢，保护缺血、缺氧的心肌；能够改善窦房屋结P细胞功能等作用[1]。
环磷腺苷葡胺由环磷腺苷和葡甲胺两种成分组成[2]。
环磷腺苷葡胺注射液的含量测定在现行质量标准中为纸色谱法[3]，但由于纸色谱法耗时长，操作过程复杂，人为因素过多，精确度差，灵敏性低。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）有“三高、一广、一快”的特点：高压、高效、高灵敏度；应用范围广；分析速度快、载液流速快；本文采用高效液相的方法对注射用环磷腺苷葡胺中环磷腺苷的含量进行测定。
1.仪器与试剂1.1仪器电子天平（BSA224S赛多利斯）；高效液相色谱仪（1200美国安捷伦公司）；ZORBAX SB-C18 柱（150 x 4.6 mm，5 μm 美国安捷伦公司）；紫外分光光度计TU—1901（北京普析通用仪器有限责任公司生产）；pH计（PHS-3C上海雷磁仪器厂）。
反相高效液相色谱法测定药物“金水宝”中腺苷及腺嘌呤含量
峰中。 就腺嘌呤与杂质峰分离度而言， 磷酸二氢钾溶 液以 ．１ ｏ／ ｍｌ Ｌ为佳。甲醇含量低于 １％时， ５ 腺苷
不易洗脱 ， 甲醇含量 高于 ３％时 ， 而 ０ 柱前压 升高 ， 可
能有无机盐析出。因此， 以选 ．１ ｏ／ Ｋ ２Ｏ ｍ ｌ ＨＰ ４ Ｌ （Ｈ＝５７ 含１％甲醇体系为佳， ｐ ． ５ 经多次进样后柱 前压无变化。 （） ２样品用 ．１ 醋酸提取可增大腺嘌呤的溶 ０ 解度。 冬虫夏草磨碎后改用００％醋酸含３％乙醇 ．１ ０ 加热回流１ｍｎ ５ ｉ。虫草鸡精营养液用三氯乙酸除蛋
Ｓ ｕ Ｂａ ＂ ｈ ｉ ｏ
ｍ ａ公 司）磷酸 二氢 钾等均 为 Ａ Ｒ 级试 剂。“ ， 金水 宝” 样品 由江西 国药厂生产。 ２２ 色谱条件 ． μＢ ｎａａ Ｃ８３９ ｍ ． ３０ ｍ 美 国 － ｏｄｐｋ ．ｍ ｉ １ ．ｄ ０ｍ Ｗａ ｒ 公 司产 ； 动相为 ８ ０ ｍ ｌ Ｋ ２Ｏ ｔ ｓ ｅ 流 ５ ．１ ｏ／ Ｈ Ｐ ４ Ｌ Nhomakorabea６９ ７
３陈 佩红， 都恒华， 何执静等． 色谱 １ ３ １ ） ９ ９ ；（ ： ９１２９
Ｔ ｅ ｔｒ ｎ ｔ ｎ Ａ ｅ ｏｉｅ ｄ ｅ ｉｅ ｔｅ ｕ ｈ Ｄ ｅｍｉａｉ ｏ ｄ ｎ ｓ ａ Ａ ｎｎ ｉ ｈ Ｄ ｇ ｅ ｏ ｆ ｎ ｎ ｄ ｎ ｒ
＂ｉ Ｓｕ Ｂ ｏ ｂ Ｒ ｖｒｅ－ｈｓ Ｈｇ Ｐｒｏｍａｃ ｎ ｉ ＂ ｙ ｅｓｄＰ ａｅ ｈ ｆｒ ｎｅ ｈ ａ ｅ ｉ ｅ
准品， 考察其回收率， 并重复测定考察其精密度。测 试结果如表 １ 。 ３２ 最小检出量 ． 按两倍于噪音推算出腺苷及腺嘌呤最小检出量 分别为１７ｎ 和 １５ｎ 。 ．８ｇ ．８ｇ
环磷腺苷质量标准
环磷腺苷【英文名】Huanlinxiangan Adenosine Cyclophosphate【分子式】C 10 H 12 N 5 O 6 P·H 2 0【分子量】347.22本品为3' , 5' - 环磷酸腺苷。
按干燥品计算，含 C 10 H 12 N 5 O 6 P 应为97.0% ～103.0% 。
【性状】本品为白色或类白色粉末；无臭，味微咸。
本品在水中微溶，在乙醇或乙醚中几乎不溶。
【鉴别】（ 1 ）取本品约10mg ，加稀硝酸1ml 溶解后，加铜酸铵试液1ml ，加热数分钟后，放冷，析出黄色沉淀。
（ 2 ）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
【检查】溶液的澄清度与颜色取本品0.10g ，加新沸过的冷水50ml 溶解后，溶液应澄清无色。
【酸度】取溶液的澄清度与颜色项下的溶液，依法（中国药典2005 年版二部附录ⅥH）测定，pH 值应为 2.0 ～ 4.0 。
【有关物质】精密量取含量测定项下的供试品溶液1ml ，置100ml 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取对照溶液20μl 注入液相色谱仪，照含量测定项下的色谱条件，调节仪器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20 ％。
精密吸取供试品溶液和对照溶液各20μl ，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液色谱图至主成分峰保留时间的 2.5 倍。
供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，各杂质峰的峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积（ 1.0 ％）。
【吡啶】精密称取本品适量，加N,N- 二甲基甲酰胺溶液，振摇，静置，制成每1ml 中含0.04g 的溶液，作为供试品溶液。
另精密称取吡啶适量，加N,N- 二甲基甲酰胺溶液溶解并稀释制成每1ml 中含8μg 的溶液，作为对照品溶液。
精密量取对照品溶液与供试品溶液上清液各1μl ，照气相色谱法及残留溶剂测定法（中国药典2005 年版二部附录ⅤE ，ⅧP），用5 ％- 二苯基-95 ％- 二甲基硅氧烷共聚物为固定相的毛细管柱（30m ×0.53mm ×5.00μm ），进样口温度120℃；监测器温度260℃；分流进样，分流比2:1 程序升温；初始温度50℃，持 5分钟，以每分钟8 ℃升至150 ℃，测定。
反相离子对高效液相色谱法测定动物血浆中的恩诺沙星及其代谢物
Χ
Αχ
ρ
Χ
Αχ
ρ
∀
回收率实验
分别采集给药后 的黄牛血样 各分成
份 加入一定量的
和
混 匀 ∀按 实 验 方
法处理样品并测定∀
和
的加标回收率
分别为 和 ∀
重现性实验
采集给药后 的黄牛血样 按实验方法处理
样品并测定 重复 次∀
和
测定浓度的
变异系数分别为 和 ∀
样品分析
对 头健康雅安黄牛按 Ù 肌注
山东新华
制药厂提供∀
实验方法
采集雅安市本地健康黄牛给药前的空白血浆∀
按 Ù 的剂量肌注给药后 定时采颈静脉血约
备用∀取 血浆 加内标
Λ 加
的磷酸缓冲液混匀∀加入 二氯甲烷 立
刻涡旋混合振荡
以
Ù 速率离心
∀收集上清液 然后于 ε 水浴中用氮气吹干
残渣 用 流 动 相 溶 解∀以
参考文献
国外医药抗生素分册
周革荣 樊惠芝 潘景浩药物分析杂志 ∗
色
谱
卷
∗
谢 君 李英伦 张福华分析试验室
∗
∆ ετερ ινατιον οφ Ε νροφλοξαχιν ανδ Ιτχσ Μ αιν Μ εταβολιτε ιν Ανι αλ Πλασ α βψ Ρ εϖερσεδ -Πηασε Ιον-Παιρ Η ιγ η Περφορ ανχε Λιθυιδ Χηρο ατογ ρα ηψ
前 需 对 样 品 进 行 预 处 理 和 富 集 ∀去 除 蛋 白 质 的 方 法
很多 有甲醇 乙腈 高氯酸 三氯乙酸沉淀法等 这
些方法均稀释了血药浓度 而且甲醇 乙腈沉淀蛋白
二丁酰环磷腺苷钙有关物质分析和鉴定
二丁酰环磷腺苷钙有关物质分析和鉴定摘要目的：建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）分析二丁酰环磷腺苷钙的有关物质，并对其中的杂质进行鉴定。
方法：采用反相梯度色谱系统对二丁酰环磷腺苷钙中的有关杂质进行分离，对其中的主要杂质采用四级杆飞行时间质谱（Q-TOF）进行多级质谱分析，鉴定结构。
并采用红外光谱、核磁进一步确证。
结果：在该条件下，二丁酰环磷腺苷钙主峰与有关物质分离良好，其中的主要有关物质鉴定为2′-O-单丁酰环磷酰苷钙。
结论：本研究为二丁酰环磷腺苷钙有关物质研究提供了新的分析方法，可用于二丁酰环磷腺苷钙的质量控制。
关键词二丁酰环磷腺苷钙有关物质HPLC Q-TOF中图分类号：R917 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2018）09-0073-04Analysis and identification of the related impurities in the calcium dibutyryladenosine cyclophosphateDING Jinguo*，JIA Cunyu，HUANG Zhenhui（SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co.，Ltd.，Shanghai 200240，China）ABSTRACT Objective：To establish an HPLC method for theanalysis and identification of related impurities in calcium dibutyryladenosine cyclophosphate. Methods：The related impurities were isolated by reversed-phase high-performance chromatography，in which the major impurities were identified by Q-TOF and verified by IR and NMR. Results：The related impurities were well separated and the major impurity was identified as 2′-O-butyryladenosine cyclophosphate. Conclusion：The established method for the analysis of the related impurities can be used for the quality control of calcium dibutyryladenosine cyclophosphate.KEy WORDS calcium dibutyryladenosine cyclophosphate；related impurities；HPLC；Q-TOF环磷腺苷具有体内激素的传导功能，对许多生理过程起着重要调节作用，如心肌细胞内环磷腺苷的升高会引起正性肌力效应，也作为药物用于心血管疾病治疗[1]。
离子对反相高效液相色谱法测定阿仑膦酸钠含量及其有关物质
离子对反相高效液相色谱法测定阿仑膦酸钠含量及其有关物质蒋 晔# 谢 赞 张嫡群（河北医科大学药学院分析化学教研室，石家庄050017）摘 要 以挥发性的正戊胺作为离子对试剂，采用离子对反相高效液相色谱法，配以蒸发光散射检测器（ELSD ）检测，建立了用于阿仑膦酸钠含量测定及相关物质检查的分析方法。
以Iintersil C 8柱为固定相，流动相为50mmol /L 正戊胺水溶液（用乙酸调节pH 至7.0）-甲醇（98:2），流速为1.0mL /min ，柱温为室温。
方法的线性范围为200～1000mg /L ；回归方程为lg A =2.5884lg C -0.243，r =0.9990；方法的平均回收率为100.4%；RSD 为0.65%。
在该色谱条件下，阿仑膦酸钠与其有关物质（包括残留的合成原料亚磷酸及氧化分解产物磷酸盐）的分离良好，且样品测定不受辅料干扰。
样品测定结果满意。
本法不需特殊的样品处理过程，快速，特异性好，适用于阿仑膦酸钠的常规检测及有关物质检查，为该药的质量控制提供了可靠的分析手段。
关键词 阿仑膦酸钠，离子对色谱，蒸发光散射检测器2005-08-09收稿；2005-11-20接受本文系河北省自然科学基金资助项目（No.200400562）1 引 言阿仑膦酸钠（Alendronate ）为第三代双膦酸类药物，临床上用于治疗骨质疏松、变形性骨炎、恶性肿瘤所致高钙血症及肿瘤骨转移性骨痛等疾病［1］。
阿仑膦酸钠分子结构中含有两个膦酸基团，极性强，易电离，不能在反相色谱柱上保留；由于其结构中无生色团，因此不能直接用常规的紫外检测器和荧光检测器测定。
目前该药物的分析方法有酸碱电位滴定法［2］、钼黄［3］或钼蓝［4］比色法、离子交换色谱法［5～7］、毛细管电泳法［8］及柱前［9～11］或柱后［12］衍生的RP-HPLC 法。
但这些方法均不能同时检测阿仑膦酸钠合成过程中残余的原料亚磷酸和分解产物磷酸盐等有关物质，这些有关物质的存在影响了临床用药的安全有效性，因此应予以控制，但由于其同样无可检测的生色团且极性较强，它们的保留及检测问题难以解决。
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Ｋ ２ Ｏ （ｏ ｔ ｎｎ ０ ｍ ｌ ＬＴ Ａ，Ｈ ４ ３ 一ｃｔ ｉ ｌ（５ １ ） ｓｍ ｂｌ ｐ ａｅａ ｄｄｔｃ ｄ ａ ２ ９ ｎ Ｈ Ｐ ４ ｃｎａ ｉｇ０．ｌ ｏ Ｂ ｐ ，）ａｅｏ ｔ ｅ ８ ： ５ ａ ｏ ｉ ｈｓ ｎ ｅｅｔ ｔ ５ ｍ． ｉ ／ ｎｒ ｉ ｅ ｅ
２． 测 定 法 ３
称 取 ｃ ＭＰ适 量 ， 流 动 相 制 成 每 １ｍ 含 ０ １ Ａ 加 ｌ ． ｍ ｇ的 溶 液 作 为供 试 品 溶 液 ； 密 量 取 供 试 品溶 液 适 精 量 ， 流 动 相 稀 释 制 成 每 １ｒ 含 １０ 加 ｎ ｌ 、 ｇ的溶 液 作 为 对 照 液 。 取 对 照 液 ２ ｌ 入 液 相 色 谱 仪 ， 节 仪 器 ０肚 注 调
色谱 仪 ， 录 供 试 液 色 谱 图 至 主 成 分 峰 保 留 时 间 的 记
时 间 ／ ｉ ａ ｒｎ
图 ３ ｃ ＭＰ 腺苷 ，＇ ＭＰ在 含辛烷 磺 酸钠 流 动 相 中 的 Ａ ， ５－ Ａ ＨＬ Ｐ Ｃ色谱 图
１ Ａ ；２ Ａ ．５． ＭＰ ．ｃ ＭＰ； 腺 苷 ３．
２５ 。按不加校正 因子 的 自身对 照 法计算 杂质含 ．倍
３３ ５
试验 ， 果表明在此 色谱 条件 下 均能 与降 解产 物 良 结
好分离 。
３ ３ ０ ２ ５ ２ ０
碱性 不 同， 实验条件下解离情况 不同 ， 子化合物 在 离
与 中性 分 子 同 时 存 在 ， 考 虑 使 用 反 相 离 子 对 色 谱 故
法。
在 上 述 流 动 相 中加 入 ２ｍ ｏ／ ｍ ｌＬ的 辛 烷 磺 酸 钠 ，
（ ｉｎｓ ｎｔｕｅ ｏ ｒｇＣｎｒｌ ａｊ ｇ ２００ ， ｈｎ ） ＪａｇｕＩｓｔｄ ｆｒ ｕ ｏｔ ，Ｎ ｎｎ １０ ８ Ｃ ｉａ ｉ Ｄ ｏ ｉ
Ａｂ ｔａ ｔ Ｐ ｒ ｏ ｅ Ｔ ｓａ ｌ ｈ ａ Ｌ ｔ ｏ ｏ ｅｅ ｍｉ ａ ｉｎ ｏ ＡＭＰ Ｓ ｒ ｌｔ ｄ ｓ ｂ ｔ ｎ ｅ ． ｅ ｈ－ ｓ ｒ ｃ ： ｕ ｐ ｓ ｏ ｅ ｔ ｂ ｉ ｎ ＨＰ Ｃ ｍｅ ｈ ｄ ｆ ｒｄ ｔ ｒ ｎ ｔ ｆｃ ｓ ｏ ｅ ａｅ ｕ ｓ ｃ ｓ Ｍ ｔ ａ
量。
以 ５ ｍ ｌＬ磷 酸 二 氢 钾 溶 液 （ １ ｏ Ｌ ０ｍ ｏ ／ 含 ０ｍｍ ｌ ／ 四 丁 基 溴 化 铵 ，ｐ ． ）乙 腈 （５：５ 为 流 动 相 ｌ ， Ｈ４ ３一 ８ １）
腺 苷 （ 阳 离 子 形 式 存 在 ） 先 出峰 ，＇ ＭＰ 以阴 离 以 最 ５－ Ａ （
维普资讯
３２ ５
中国 生化药 物 杂志 Ｃ ｉ ｓ ｏｒａ ｏ ｉ ｈ ｍｉ ｌ ｈ ｒ ａｅｔｓ２０ ｈｎ ｅＪｕｎｌ ｆ ｏ ｅ ｉ ａ ｌｃｕｉ ０４年第 ２ 第 ６期 ｅ Ｂｃ ｃ Ｐ ｎ ａ ｃ ５卷
反 相 离子 对 色谱 法 测定 环磷 腺 苷有 关 物质
碱性 的腺 苷在偏酸 性 条件下 以阳离 子性形 式存 在 ，
与辛 烷 磺 酸 钠 形 成 离 子 对 ， 留 时 间 明 显 延 长 ， 保 而
ｃ ＭＰ和 ５－ ＭＰ 以 阴离 子形 式 存 在 ） 能 形 成 离 子 Ａ ＇ Ａ （ 不
Hale Waihona Puke Ｕ ｌ Ｕ ｇ １ ５１ ０ ５ ０
ｈ ｏ ａ ｅ ｗ ｓ １ ０ ｍｌ ｍｉ Ｔ ｅ ｆ ｗ ｒ ｔ ａ ． ／ ｎ．Ｒ ｓ ｌ Ａｄ ｎ ｓｎ ｌ ｅｕｔ ｓ ｅ ｏ ｉ ，ＡＭＰ，ｃ ＡＭＰ ａ ｄ ｕ ｋ ｏ ｎ ｓ ｂ ｔｎ ｅ ｗ ｒ ｌ ｓ ｐ ｒｔ ｄ． ｎ ｎ ｎ ｗ ｕ ｓａ ｃ ｅ ｅ ｗｅｌ ｅ ａ ａｅ Ｓ ｐ ｒ ｔ ｎ ｆ ｃｏ ｓｗｅ ｅ９． ｅ ａａ ｉ ａ ｔ ｒ ｒ ２．１ ． ｎ ４． ｅ ｐ ｃｉｅ ｙ ｏ ５ ａ ｄ １ ３ ｒｓ ｅ ｔ ｌ ．Ｔ ｅ ｄ ｔｃ ｉｎ ｌ ｔ ｆＡ ｅ ｏ ｉ ｎ １ ｖ ｈ ｅ ｅ ｔ ｉ ｓｏ ｄ ｎ ｓ ａ ｄ ＡＭＰ ｗ ｒ ｏ ｈ ｏ ｍｉ ｎ ｅ ｅ ｂ ｔ
供试液 的色谱 图见 图 ２ 。５批 供试 品 的有关 物
质测 定 结 果 分 别 为 ： １％ 、 ０． ８ ０．１％ 、 ．１ ％ 、 ７ ０ ７
流速 为 １０ １ ｉ。结 果 腺 苷 、 腺 苷 酸 、 ． ／ ５一 环磷 腺 苷和 降 解产 物之 间 的分 离度 分别 为 ９ ２ Ｉ ． 、４ ３ 腺 苷 与 ５ ． 、 １５ １ ． ， 腺 苷酸 的检 测 限均 为 ０ １ ． 定量 限均 为 ０． ｎ ｏ结论 此法 分 离度好 、 ３ ｇ 灵敏 度 高 ， 作 简便 ， 操 可有 效 分 离、 测 起 始原 检
ｃ ＭＰ（ 号 ： ２ ９ １ ０ ０ ０ 、 ２ ０ １ ０ ０ ０ 、 Ａ 批 ０ ０ ０ 、 ２ ９ ２ ０ １０ 、 ３ ９ １
ｍｌ ｏ Ｌ磷酸二氢 钾 溶 液 （ ０ ０ ｏ Ｌ四丁基 溴 化 ／ 含 ．１ｍ ｌ ／
铵 ，Ｈ 为 ４．）乙 腈 （ ５ １ ） 流 动 相 ； 测 波 长 为 ｐ ３一 ８ ：５ 为 检 ２ ９ｎ 流速 为 １０ｍ／ ｉ； 样 量 ２ ｌ ５ ｍ； ． ｌｍｎ 进 ０肚。
２ ２ 专 属 性 试 验 ．
００ ０ ）腺 苷 （ 析 纯 ）５－ 苷 酸 （ ＇ ＭＰ ， 通 ３９ ２ 、 分 、＇ 腺 ５－ Ａ ）南 宏 慈 药 业 有 限 公 司 ； 腈 为 色 谱 纯 ； 它 试 剂 均 为 分 乙 其
析纯。
１０ １０高 效 液 相 色 谱 仪 ， ｇｌ ｔ 司 ；Ｕ ２５紫 Ａ ｉｎ 公 ｅ Ｖ６
收稿 １期 ： ０ ４ ５ １ ； 回 １期 ： ０４０ —ｌ ３ ２０ — —２ 修 ３ ０ ２ ０—８０
作 者简介 ： 薛敏 华（９６）女 ， 苏苏 州人 ， １７一 ， 江 药师 ， 主要 从事 药物
分析 。
维普资讯
中国生 化药 物杂 志 Ｃ ｉｅｅＪｕｎｌ ｆ ｉ ｈｍｉ ｌ ｈｒ ｃｕｉ ０４年第 ２ ｈｎｓ ｒａ ｏ Ｂｏ ｅ ｃ ａ ｅ ｔｓ２０ ｏ ｃ ａ Ｐ ｍａ ｃ ５卷 第 ６期
对 。但 ５－ Ｍ ＇ Ｐ和 ｃ Ｍ 保 留时 间过短 ， Ａ Ａ Ｐ 易受 溶剂 峰
干扰 （ 图 ３ 。 见 ）
２０ ０ １ ｏ ８ １０ ６ １ ０ ４
时 间 ／ ｉ ａ ｒｎ
图 １ ｃ ＭＰ与腺苷 、＇ ＭＰ的分离 度试 验 Ａ ５－ Ａ
１ ．腺 苷 ；２ ５－ ＭＰ ３．ｃ ＭＰ； ．未 知 杂 质 ＇Ａ ； Ａ ４
ｏ ｓ Ａｎ ｏ ｔ ｌＨＰ Ｃ ｍｅｈ ｄ ｗ ｓｓｔｕ ｄ ｐｉ Ｌ ｔｏ ａ ｅ ｐ．Ｔ ｅ ｓｍｐｅ ｅｅ ｓｐ ｒｔｄ ｏ ｌ ｃ ｌｍｎ ｕ ｉｇ ０． ５ ｍｏ／ ｍａ ｈ ａ ｌｓｗ ｒ ｅ ａａｅ ｎ ａ Ｃ ８ ｏｕ ｓｎ ０ ｌ Ｌ
环 磷 腺 苷 （ Ａ ） 以 ５－ 苷 酸 为 原 料 ， 无 ｃ ＭＰ 是 ＇ 腺 在
外 可见分光光度计 ， 津公 司。 岛 色 谱 柱 ： ．Ｌｎ ｌ（ ）（５ ｍ ｘ４． １ ｕａ Ｃ８ ２ ２ ０ ｍ ６
５肚 ； ．Ｓ ｉ － ａｋ Ｃ Ｃ Ｏ Ｓ（ ５ ｍ ｘ ６ ０ ｍｍ， ｍ） ２ ｈｍ Ｐ ｃ Ｌ — Ｄ １０ ｍ ． ５ ｍ）３． ｒｍａｉ Ｃ８ ２ ０ ｍ ×４． ｍ， ｍ） ４． ； Ｋ ｏ ｓ １（ ５ ｍ ｌ ６ｍ ５ ；
ｓ ｎ ｉ ｖ 、Ｉ ｗ ｓ ｓ ｐ ｒ ｒ ｔ ｐ ｐ ｒ ｃ ｒ ｍａｏ ｒ ｐ ｙ． ｅ ｓ ｉ ｅ ｔ ａ ｕ ｅ ｏ ａ ｅ ｈ ｏ ｔｇ ａ ｈ ｔ ｉ ｏ Ｋｅ ｒ ｓ ｃ ｙ ｗｏ ｄ ： ＡＭＰ；Ｉ Ｃ；ｒｌ ｔｄ ｓ ｂ ｔ ｎ ｅ Ｐ ｅａ ｅ ｕ ｓ ｃ ｓ ａ
薛敏 华 ， 庆元 ， 何 石蓓 佳
（ 苏 省 药 品检 验 所 ，江 苏 南 京 ２００ ） 江 １０ ８
摘 要 ： 目的 建 立反相 离子 对 色谱 法检 测环 磷 腺 苷 的 有 关 物质 。方 法 用十 八 烷 基硅 烷 键 合 硅胶 为 填 充 剂 ；
以 ０，５ｍ ｌＬ磷 酸 二 氢 钾 溶 液 （ ０ ０ ｏ／ ０ ０／ 含 ．１ｍ ｌＬ四 丁 基 溴化 铵 ， Ｈ ４ ３ 一 腈 （５ １ ） 流 动 相 ； 测 波 长 为 ２ ９ｎ ｐ ．） 乙 ８ ：５ 为 检 ５ ｍ；
取 ｃ ＭＰ、 苷 、＇ ＭＰ混 合 溶 液 （ ｃ ＭＰ０．７ Ａ 腺 ５－ Ａ 含 Ａ １ ｍ ／ ｌ腺 苷 ００ ｇｍ 、＇ ＭＰ０．２ｍ ／ ） 行 试 ｇｍ 、 、２ｍ ／ ｌ５－ ０ ｇ ｍ１进 Ａ 验 。腺 苷 、＇ ＭＰ、Ａ ５－ Ａ ｃ ＭＰ和 未 知 杂 质 之 间 的 分 离 度 分 别 为 ９． １ ． 、４．（ 图 １ 。 ２、１５ １ ３ 见 ） 另 外 ， 供 试 品 进 行 了酸 、 、 化 、 、 破 坏 对 碱 氧 光 热
０． ｇ．ａ ｄｔｅ ｄ ｔｒ ｉａｉｎ ｌ ｔ ｗｅｅｂ ｔ ３ ｎ Ｃｏ ｃｕ ｉｎ Ｔ ｉ ｍｅｈ ｄｗａ ｏ ｖ ｎｅ ｔ ｅｉｂｅａ ｄ １ｎ ｎ ｅｅ ｎ ｔ ｉ ｓ ｒ ｏｈ０， ｇ． ｎ ｌｓｏ ｈｓ ｔｏ ｓｃ ｎ ｅ ｉｎ ，ｒｌ ｌ ｎ ｈ ｍ ｏ ｍｉ ａ
水 条 件 下 通 过 内酯 化 反 应 而 制 得 。 在 反 应 液 中 ， 若 吡 啶脱 水 不 完 全 ， 可 能 产 生 腺 苷 ， 外 还 可 能 存 在 有 此 降 解 产 物 。现 行 的 检 测 方 法 为 纸 色 谱 法 ＿ ， 作 繁 １操 ｊ 琐 且 时 间长 、 敏 度 低 。本 文 采 用 反 相 离 子 对 色 谱 灵 法 有 效 分 离并 检 出 生 产 中 引 入 及 降 解 产 生 的 杂 质 ，
料 带入 的杂 质 和降 解 产物 ， 于环磷 腺 苷 中的有 关 物质控 制 ， 于纸 色谱 法。 用 优 关键 词 ：环磷 腺苷 ；反相 离子 对 色谱 法 ；有 关物 质 中图分 类号 ： ９ ２ ９７ Ｒ ７ ；Ｒ ２ 文献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ：０５ １７ （０４ ０ —３ ２０ １０ —６ ８ ２０ ）６０ ５ —２