HPLC法测定柴胡地上部分的黄酮苷元_赵晓辉
HPLC同时测定柴胡中黄酮和皂苷成分含量方法的改进
随着 近些年 对 柴 胡 药效 物 质 基 础 的深 入 研 究 发 现 ，不 仅柴 胡 中皂 苷 类 成 分 有 生 理 活 性 ，柴 胡 中黄 酮和多 糖成 分也有 重要 的临床 意义 。近年来 研 究 者逐步 关注 柴胡 中黄 酮和 多糖类 成分 的质量 控 制 Ｊ 。
同时测 定 柴 胡 中 皂 苷 和 黄 酮 成 分 含 量 有 现 实 意 义 ，
２ ５～３ ０ ｍ ｉ ｎ （ ５ ７ ： ４ ３ ） ；流 速为 １ ． ０ ｍ Ｌ ・ ｍｉ ｎ ～；检测 波
２ ０ １ ３年 ９月
第１ ５卷
第９ 期
中国现代中药
Ｍ ｏ ｄ ｅ ｍ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
ＨＰ Ｌ Ｃ 同时 测 定 柴 胡 中 黄酮 和 皂 苷 成分 含 量 方 法 的 改 进
赵 森 铭
（ 洛 阳市食 品药品检验所 ，河南 洛 阳 ４ ７ １ ０ ２ ３ ）
柴 胡 样 品 １（ 洛 阳 同 华 堂 大 药 房 ，批 号 ： １ ２ ０ ７ ０ ９ ） ；样 品 ２ （ 洛 阳 百 家 好 一 生 大 药 房 ，批 号 ：
１ ２ ０ １ ０ ２ ） ；样 品 ３（ 洛 阳 开 心 人 大 药 房 ，批 号 ： １ ２ ０ ３ ０ ５ ） ；样 品 ４ （ 洛 阳市 食 品药 品 检 验 所 标 本 １ ） ；
３ ５℃ ；检测波长为 ２ １ ０ ａ ｍ。结果 ：２个黄酮成分 （ 芦 丁、槲皮素 ）和 ２个皂苷成 分 （ 柴 胡皂苷 ａ 、柴胡皂苷 ｄ ）分别
在０ ． ３ ６— ９ ． ０ ９ Ｉ ｘ ｇ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ７ ） 、０ ． ４ ７—１ １ ． ７ ０ Ｉ ｘ ｇ （ ｒ ＝０ ． ９ ９ ９ ５ ） 、１ ． １ ５—２ ８ ． ６ ６ ｇ （ ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ８ ）和 ０ ． ６ ６～１ ６ ． ４ ６ ｇ
RP-HPLC法测定柴胡中四种黄酮类成分的含量
色 谱法 【 ］ “ 、分光 光度 法ｆ、 吸收紫 外光 度法 ， ｌ 等 ２ 】 等 但 一般 都是 分析 一种 或两 种黄 酮类成 分 ，同时分 析 芦 丁 、曲克芦 丁 、黄芩 苷 、槲 皮 素 四种成 分还 未 见 报 道 ． 文 采用 反 相 高效 液 相色 谱法 ，同时分 离 和 本 测定 了柴 胡 中芦 丁 、曲克芦 丁 、黄芩 苷 和槲皮 素 四 种 黄酮 类 成分 的含 量 ． 作 方法 简 单 易行 ， 果 准 操 结 确 可 靠 ，为柴 胡 中黄酮类 成分 的含 量测 定和质 量监 控 提供 了科 学依 据 ．
的有效 成分 为 柴胡 皂苷 、甾醇 、挥发 油 ｆ 胡 醇 、丁 柴 香 酚等） 脂肪 油 酸 、 麻 油酸 、 榈 酸 、硬脂 酸 、 亚 棕 等 ） 糖 等 ， 外 ， 含 有生 物 碱 、 酮 类 、山萘 和多 此 还 黄 苷 、葡 萄糖 、氨 基 酸 等 ． 中黄 酮 类 化合 物 对 人 体 其 肿瘤 、衰 老 、心血 管 等疾 病 的治疗 和 预 防有 重要 意 义圆 ．如 芦 丁具有 抗氧 化 、抗基 因突变 ，和降低 毛细 血管异 常通透 ｆ及 膪 陛的作用网 生 ，临床上用 于治疗 过 敏性 紫癜及 各种 因毛 细血 管脆 性增 加而 引起 的 出血 性疾病 ， 也用 于治疗 高 血 压 和老 年气 管 炎 等 曲 克 ． 芦 丁是 芦 丁在碱性 条 件下 与环 氧 乙烷 进行 醚化 反应
化 、 癌 、抗 糖 尿病并 发 症等 多种 生 物活 性及 药 理 抗
海天平仪器厂） ０ ５ ｍ微孔过滤器 ； ； ． ４ 高速万能粉
碎机 （ 市永 光 明医疗 仪器 厂） 北京 ．
芦 丁对 照 品ｆ 国药 品生 物制 品检 定 所 ， 号 ： 中 批 １ ０ ８ — ０ ３ ６ ；曲克 芦 丁对 照品 ｆ 国药 品生 物 制 ００ ０ ２０ ０） 中 品检 定所 ， 号 ：１ ０ １ — ０ ５ ３ ；黄 芩 苷 对 照 品 批 ０４ ６ ２０ ０）
HPLC法同时测定柴胡与春柴胡中皂苷类及黄酮类成分的含量_百汇总
HPLC 法同时测定柴胡与春柴胡中皂苷类及黄酮类成分的含量*韦英杰 1, 王茉 2, 宁青 1, 詹雯 1, 施静逸 1, 贾晓斌1**(1. 江苏省中医药研究院中药新型给药系统重点实验室 , 国家中医药管理局中药口服释药系统重点研究室 , 南京 210028; 2. 吉林市食品药品检验所 , 吉林 132001摘要目的 :建立 HPLC 法同时测定柴胡和春柴胡中 2个皂苷类活性成分 (柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 、 4个黄酮类活性成分 (芦丁、槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量。
方法 :采用 A g il ent Zo rbax C 18(4 6mm 250mm, 5 m 色谱柱 , 以 0 1%磷酸水 -乙腈为流动相 , 梯度洗脱 , 流速 1mL m i n -1, 检测波长 203n m (测定皂苷类成分和 360n m (测定黄酮类成分 , 柱温 35 。
结果 :6个活性成分的峰面积与浓度的线性关系良好 (r 0 9994, 线性范围宽 ; 精密度试验的 R S D 为 0 67%~1 9%; 加样回收率为 95 1%~104 3%。
10批市售柴胡和春柴胡的黄酮类和皂苷类成分含量具显著差异 :春柴胡中 4个黄酮类成分平均含量约为柴胡中的 7 5~72倍 ; 春柴胡中柴胡皂苷 a 的平均含量为柴胡的 1/10, 而柴胡皂苷 d 的平均含量约为柴胡的 3倍 ; 柴胡与春柴胡中 6个成分含量的相关系数为 0 10~0 62。
结论 :本方法具良好的精密度、重复性和可靠性 , 可同时测定柴胡和春柴胡中皂苷类和黄酮类成分的含量并有效表征其差别。
关键词 :高效液相色谱法 ; 柴胡 ; 春柴胡 ; 皂苷 ; 黄酮中图分类号 :R 917文献标识码 :A文章编号 :0254-1793(2011 05-0879-05HPLC si m ultaneous deter m i nation of saponi ns andflavonoi ds of Bupleuri Radi x and BupleuriH erba*WEIY i ng-jie 1, WANG M o 2, N I N G Q i ng 1, Z HAN W en 1, S H I Ji ng-yi 1, JI A X i ao-b i n1**(1. K ey L aboratory o fN e w D rug De livery System o f Chi nese M eter i a M ed i ca , Jiangsu P rov i ncial A cade my o f Chinese M ed ici ne ,N an ji ng 210028, Ch i na ; 2. Jili n Institute for Food and D rug Contro, l Jilin 132001, Chi naAbstract Objective :To estab lish an H PLC m ethod for the si m u ltaneous de ter m i n ation of 2saponins(sa i k osapo n i n a , sa i k osapon i n d and 4flavono ids(r u ti n , querceti n , kae m p feri d e and iso r ha m neti n of Bupleuri R ad i x and Bup leuriH erba . M e t hods :These si x co m pounds w ere ana lyzed si m ultaneously w ith an A g il e nt Zorbax C 18(4 6mm 250mm, 5 m colum n by grad ient e l u ti o n usi n g 0 1%(v /v phosphoric acid-ace ton itrile as t h e m obilephase at the fl o w rate o f 1mL m in -1; The detecti o n w avelength w as set at 203nm for saponins and 360nm fo r flavonoids , and the co l u m n w as m a i n ta i n ed at 35 . R esults :A ll the com pounds sho w ed good linearity (r 0 9994 i n a relatively w i d e concen tra ti o n range . RSD s of t h e precision testw ere 0 67%-1 9%, and the recov eries w ere 95 1%-104 3%.The overa ll reproduci b ility of t h e m ethod w as acceptable . There w as sign ificant difference on con tent of saponins and fl a vono ids bet w een BupleuriR ad i x and Bup l e uriHerba :content o f flavono i d s i n Bupleur iH erba w as about 7 5-72ti m es of that i n Bup leuriRadix ; w hile conten t of sa i k osapon i n a in Bup leuri Rad i x w as about 10ti m es of that i n Bupleur iH er ba , content of sa i k osapon i n d in Bup leuriH erba w as about 3ti m es o f that in Bup leuriR ad i x ; Co rre lation of content bet w een Bup leuriH er ba and Bupleuri Radix w as 0 10-0 62. C onclusion :The validated H PLC -DAD m ethod has the advantages o f precisi o n , reproduci b ility and re li a b ility , a llo w ing si m ultaneous deter m inati o n and co m parison of sapon i n s and flavono i d s bet w een Bup leuriRad i x and Bup leuriH erba . K ey w ords :H PLC ; Bup l e ur iRad i x ; BupleuriH erba ; saponins ; flavono i d s879药物分析杂志 Ch i n J Phar m Ana l 2011, 31(5 *江苏省中医药领军人才专项(2006; 国家自然科学基金面上项目 (30973978 (; -ma i :l j x @m柴胡为伞形科植物柴胡 Bup leurum chinense DC . 或狭叶柴胡 Bup leurum scorzoneri f oliu m W ill d . 的干燥根 ; 具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气之功 ; 用于治疗感冒发烧、寒热往来、胸胁胀痛等症 [1]。
HPLC法同时测定柴胡—黄芩药对水煎液中皂苷和黄酮类的含量
（ 河南省洛 阳市食 品药品检 验所 ， 河南 洛 阳 ４ ７ １ ０ ２ ３ ）
摘要 ： 目的 结果
建立高效液相色谱 测定 柴胡一黄芩 药对 水煎液 中皂苷 和黄 酮类含 量 的方 法 。方 法 采用 ＭＥ Ｒ Ｃ Ｋ Ｐ Ｕ Ｒ Ｏ Ｓ Ｐ Ｈ Ｅ Ｒ
ｃ 。 ８ 柱（ ２ ５ ０ ｍｍ ｘ ４ ． ６ ｍｍ， ５ ｍ） ； 流动相 ： 甲醇＿ ＿ ０ ． ０ ５ ％磷酸 ， 梯度 洗脱 ； 流速 ： １ ． ０ ｍＬ・ ｍ ｉ ｎ 一； 柱温 ： ３ ５ ￣ Ｃ； 检测波长 为 ２ １ ０ ａ ｍ。 皂苷成分 （ 柴胡皂苷 ａ ） 、 ３ 个 黄酮类成分 （ 黄芩苷 、 黄芩素 、 汉黄芩素 ） 达到 了完全 分离 ， ４个 成分 的峰面积 与进 样量线性 关 系良好 。柴胡皂苷 ａ ｘ 黄芩苷 、 黄芩素 、 汉黄芩素线性范 围分 别为 ０ ． ２ １ ９ ６—１ ７ ． ５ ６ ８ 、 ０ ． ２ １ ４ ７ ５—１ ７ ． １ ８ Ｉ ｘ ｇ 、 ０ ． ０ ９ ３ １～ ７ ． ４ ４ ８
ｃ ｈ ｉ ｅ ｖ ｅ ｄ ａ ｃ ｏ ｍｐ ｌ ｅ ｔ ｅ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ， Ｐ ｅ ａ ｋ ａ ｒ ｅ ａ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ４ ｃ ｏ ｍｐ ｏ ｎ ｅ ｎ ｔ ｓ ｈ ａ ｄ ａ ｇ ｏ ｏ ｄ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｈ ｉ ｐ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｅ ａ ｍｏ ｕ ｎ ｔ ｏ ｆ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ． Ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｓ ａ ｉ ｋ ｏ ｓ ａ ｐ ｏ ｎ ｉ ｎ ａ ， Ｂａ ｉ ｃ ａ ｌ ｉ ｎ， Ｂ ａ ｉ ｃ ａ ｌ ｅ ｉ ｎ， ａ ｎ ｄ Ｗｏ ｇ ｏ ｎ ｉ ｎ ｗ ｅ ｒ ｅ ０． ２ １ ９ ６ —１ ７ ． ５ ６ ８ ｇ， ０ ． ２ １ ４ ７ ５—１ ７ ． １ ８ ｔ ｘ ｇ ， ０ ． ０ ９ ３ １—７ ． ４ ４ ８ ｔ ｘ ｇ ， ０ ． １ ０ ７ ６—
HPLC法测定柴胡大青叶糖浆中黄芩苷的含量
图１ 黄 芩苷 对照 品 的Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ色谱 图
１ ． １ 仪器 ： 岛津Ｌ Ｃ 一 ２ ０ Ａ Ｔ 高效液相色谱仪 ， Ｎ 一 ２ ０ ０ ０ 色谱工作站
（ 浙 江 大学 智 能 信 息 工 程研 究 所 ） 。色 谱 柱 ： Ｋ ｒ ｏ ｍ ａ ｓ ｉ ｌ Ｃ 。 （ ５ ｍ， ４ ． ６ Ｘ ２ ５ ０ ａ ｒ ｍ ） 。 电子分 析天 平 （ 上 海精 密科 学仪 器有 限公 司 ） 。
１ ． ２ 试 药 ：柴 胡 大 青 叶 糖 浆 （ １ ０ ０ ｍＬ ／ 瓶， 批准文号 ： 鲁 药 制 字 Ｚ ０ ７ ０ ８ ０ １ ３ ２ ， 潍 坊 市 中 医 院制 剂 中心 提 供 ） ４ 批次 ， 批 号 分别 为 ： ２ ０ １ ４ ２ ４ ０ １ 、 ２ ０ １ ４ ２ ４ ０ ２ 、 ２ ０ １ ４ ２ ４ ０ ３ 、 ２ ０ １ ４ ２ ４ ０ ４ ； 柴胡 、 黄芩 、 连翘 、 栀 子、 淡 豆豉 、 白薇 、 滑石 等 中药 购 于 山东 海王 银 河 医药 有 限公 司 ； 对 照 品 黄芩 苷 ， 中 国食 品 药 品检 定 研 究 院提 供 ， 编号 ： １ １ ０ ７ １ ５ — ２ ０ １ １ １ ７ 。试剂 ： 甲醇 为色 谱纯 ， 水 为纯化 水 ， 乙醇 为分 析纯 。
中图分类 号 ： Ｒ ２ ８ ４ 文 献标识 码 ： Ｂ 文章 编号 ： １ ０ ０ ６ — ０ ９ ７ ９ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ７ — ０ １ ２ ４ ． ０ ２
柴 胡大 青 叶糖浆 为 ２ ０ １ ４ 年 山东 省食 品 药 品监督 管 理局 医疗 机 构制 剂标 准提 高品 种 ， 现 行质 量标 准为 山东 省食 品药 品监 督管 理 局 医疗 机 构制 剂 标 准鲁 药 制Ｚ Ｂ Ｚ ０ ６ ９ ８ 。该 制 剂 在我 院应 用数
HPLC同时测定小柴胡颗粒中四种成分的含量
HPLC 同时测定小柴胡颗粒中四种成分的含量李春红，梅志强1，何兵，田吉（泸州医学院：药物与功能性食品研究中心；1医学分子生物学实验室，四川泸州646000）摘要目的：为了建立同时测定小柴胡颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素四种有效成分含量的HPLC 分析。
方法：色谱柱：Dikma Diamonsil C 18柱（250mm×4.6mm ，5μm ）；流动相：乙腈–0.05％磷酸溶液，梯度洗脱；波长：278nm 。
结果：黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的线性范围分别为0.418～4.18μg （r ＝0.9999），0.2～2μg （r ＝0.9999），0.233～2.33μg （r ＝0.9999），0.215～2.15μg （r ＝0.9998）。
小柴胡颗粒中4种成分的平均回收率分别为98.10％（RSD ＝0.59％），98.85％（RSD ＝1.33％），98.95％（RSD ＝1.36％），99.09％（RSD ＝1.23％）。
结论：该方法快速、简便、准确、具有良好的重复性和回收率，可作为小柴胡颗粒中这4种成分的含量测定方法。
关键词HPLC ；小柴胡颗粒；黄芩苷；汉黄芩苷；黄芩素；汉黄芩素中图分类号R917文献标识码A文章编号1000-2669（2012）4-0399-03Simultaneous determination of 4components in Xiaochaihu granules by HPLCLi Chunhong ，et alResearch Center for Drug and Functional Food ，Luzhou Medical CollegeAbstract Objective:To establish a HPLC method for the simultaneous determination of Baicalin,Wogonoside,Baicalein and Wogonin in Xiaochaihu granules ．Methods :The separation was carried out on a Dikma DiamonsilC 18column （250mm×4.6mm ，5μm ）．The mobile phase was methanol-0.1%phosphoric acid,by gradient elution,and detected with wavelength of 278nm ．Results:Baicalin,Wogonoside,Baicalein and Wogonin had good linearity in the ranges of 0.418～4.18μg （r ＝0.9999），0.2～2μg （r ＝0.9999），0.233～2.33μg （r ＝0.9999），and 0.215～2.15μg （r ＝0.9998）．The average recoveries were 98.10％（RSD ＝0.59％），98.85％（RSD ＝1.33％），98.95％（RSD ＝1.36％），and 99.09％（RSD ＝1.23％）.Conclusion:This method is simple ，rapid ，accurate and with goodrepea-tability and recovery ，it can be used as a quantitative analysis method for Xiaochaihu granules.Key words HPLC ；Xiaochaihu granules ；Baicalin ；Wogonoside ；Baicalein ；Wogonin 作者简介：李春红（1982-），女，助理研究员，硕士小柴胡颗粒是由柴胡、黄芩、白芍、半夏(姜制)、党参、生姜、甘草、大枣等中药制成的中药颗粒剂，为《中国药典》2010年版（一部）收载品种，具有解表散热、疏肝和胃之功效，用于外感病，邪犯少阳证，症见寒热往来、胸胁苦满、食欲不振、心烦喜呕、口苦咽干[1]。
HPLC法同时测定柴胡中皂苷a和皂苷d含量
1.1 仪 器
LC-20A型高效液相色谱仪(配备Prominence SIL-20AHT自动进样器，LC-20AD二元泵，CTO-20A柱温箱，SPD-20A紫外检测器，LC solution色谱工作站，日本岛津公司)；KQ-250DE型数控声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；CPA225D型电子天平(德国赛多利斯仪器有限公司)；微型高速万能式样粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)；电热恒温干燥箱(上海跃进医疗器械厂)；超级恒温水浴(金坛市华峰仪器有限公司)。
分别考察了甲醇-0.1%磷酸水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸水和乙腈-水4种流动相体系。结果表明，采用乙腈-水溶液流动相体系能够获得较好的分离效果，与文献中采用常规HPLC相比分析时间明显缩短，且药材中其他色谱峰不干扰样品的测定。
本研究建立HPLC法同时测定柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量，并应用该方法测定了6批柴胡中2种活性成分的含量。通过测定6批柴胡药材，计算柴胡皂苷a平均含量为0.31%，柴胡皂苷d平均含量为0.29%，柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的总量为0.60%，符合2015年版《中华人民共和国药典》中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的总量不低于0.30%的规定。本研究建立的分析方法简单、快速、含量高，可用于柴胡药材的质量控制。
HPLC法测定小柴胡颗粒中黄芩苷的含量2
HPLC法测定小柴胡颗粒中黄芩苷的含量【摘要】目的：建立小柴胡颗粒中黄芩苷的的含量测定方法。
方法：采用Phenomenex Synergi C18 (4.6×250 mm，4 μm) 为色谱柱，以甲醇－0.1％磷酸溶液(47：53)为流动相，280 nm为检测波长，柱温为30 ℃。
结果：黄芩苷浓度在0.00308-0.308mg·mL-1范围内线性关系良好（r =0.999946），平均回收率为99.3%，RSD=2.1 %。
结论：该方法简便、准确，分离度好，可用于小柴胡颗粒的质量评价。
【关键词】小柴胡颗粒；黄芩苷；HPLC【Abstract】Objective：TO establish an HPLC method for determination of Baicalain in Xiaochaihu kernel. Method：A Phenomenex C18(4.6×250 mm，4 μm) column was used with a mobile phase of methanol-0.1% phosphoric acid （47：53）,and flow rate of 1.0 mL·min-1 ；The detection wavelength was set at 280 nm and the column temperature was set at 30 ℃.Result: The calibration curves were linear in the range of 0.012~0.60 m g·mL-1 for Baicalain（r =0.999946），The average recovery of Baicalain was 99.3%, RSD=2.1%.Conclusion:It is proved that the method with HPLC is reliable,simple,well separated and precise,that can be used as principles of quantitative analysis. [ Key words ] Xiaochaihu kernel；Baicalain；HPLC前言小柴胡颗粒是《伤寒论》中经典方小柴胡汤的现代制剂，主要成分为柴胡、黄芩、甘草、党参等七味药材，具有解表散热、疏肝和胃等功效，用于寒热往来、胸胁苦满、心烦喜吐、口苦咽干，其临床运用非常广泛。
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HPLC法测定柴胡地上部分的黄酮苷元赵晓辉1,2,蒋福全1,2,周剑波1,2,文怀秀1,2,邵 斌贝1,陶燕铎1(1.中国科学院西北高原生物研究所,西宁810008;2.中国科学院研究生院,北京100049)摘 要:运用HPLC法测定青海不同产地4种柴胡地上部分的黄酮,为柴胡药材的综合有效利用提供依据。
采用C18色谱柱以V(甲醇)∶V(0.1%H3P O4)=1∶1为流动相,流速1mL min,检测波长360nm。
青海产柴胡地上部分均含丰富的黄酮,其中以秦岭柴胡黄酮质量分数最高,槲皮素质量分数达到2.27%,总黄酮质量分数大于6.50%。
本方法简便,对黄酮的定量准确,改变以往柴胡只使用地下部分而弃去地上部分的局面,提高柴胡药材的有效利用率。
关键词:HPLC;黄酮;柴胡中图分类号:O657.7 文献标识码:A 文章编号:1000-0720(2007)01-046-04 柴胡是伞形科(Umbelliferae)柴胡属(Bupleu-rum)植物。
根入药,其性微寒,味苦,辛,具有和解表里、疏肝、升阳之功效。
用于感冒发热,寒热往来,胸胁胀痛月经不调等症。
但传统的中药材中只利用柴胡根作为有效药用部位。
柴胡根中的有效成分柴胡皂甙成分也成为研究者关注的焦点[1,2],柴胡地上部分往往被弃用。
利用HPLC法测定青海产柴胡地上部的黄酮含量,表明青海产柴胡黄酮含量丰富,其中秦岭柴胡(Bupleurum longgicaule)槲皮素质量分数达到2.27%,总黄酮质量分数>6.50%。
黄酮类化合物具有消炎、强心、降压、扩张冠状动脉、降低胆固醇、利尿、止咳祛痰、保肝等作用[3～5]。
实验中采用萃取法粗提得到柴胡地上部分中总黄酮,再用高效液相色谱法测定了其3种黄酮苷元。
该方法在原有药典方法的基础上增加了萃取纯化,总黄酮水解彻底,色谱图谱峰单一纯净基本无其它杂峰,对黄酮苷元及总黄酮定量准确。
为柴胡的有效利用及在新的药用领域的运用提供理论依据。
1 实验部分1.1 仪器与试剂L10-P高效液相泵,JS-3050色谱工作站(大连江申);Waters2487检测器;PH-230柱温箱; METTLER分析天平。
甲醇为色谱纯,自制重蒸水,氯仿,25%HCl均为分析纯。
黄酮对照品(槲皮素、山奈酚、异鼠李素):纯度大于99%,购自中国药品生物制品检定所。
柴胡样品由本所潘锦堂研究员鉴定分别为伞形科柴胡属紫花鸭跖柴胡(B upleurum c om melynoideum),小叶黑柴胡(Bupleu-r um smithii)秦岭柴胡(B upleurum longgicaule),簇生柴胡(Bupleurum condensatum)。
1.2 色谱条件Thermo C18反相色谱柱(ODS,250mm×4.6 mm i.d.)),柱温:30℃;UV检测波长:360nm;灵敏度:1.5AUFS;流动相:V(甲醇)∶V(0.1%H3PO4)=1∶1。
2 结果与讨论2.1 线性关系分别准确称取槲皮素16mg、山奈酚10mg、异鼠李素12mg置100mL容量瓶中,用甲醇定容,摇匀按2.1项色谱条件进行HPLC分析,结果见图1。
分别进样2、4、6、8、10和12μL。
分别进样6次各10μL以峰面积Y对进样量进行回归处理,得线性回归方程:Y=1360674ρ-62069,r=第26卷第1期2007年1月 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory Vol.26.No.12007-1收稿日期:2006-03-22;修订日期:2006-06-18基金项目:中国科学院知识创新工程(CXLY-2002-9)项目资助作者简介:赵晓辉(1979-),男,硕士研究生DOI:10.13595/ ki.issn1000-0720.2007.00110.9993,槲皮素在0.032～0.192mg mL 范围内成良好的线性关系;Y =1450442ρ-67867,r =0.9991,山奈酚在0.02～0.12mg mL 范围内成良好的线性关系;Y =819325ρ-32134,r =0.9999,异鼠李素0.024～0.144mg mL 范围内成良好的线性关系。
图1 黄酮混标图谱Fig .1 C hro matograms of three flavones 1Quercetin 、2Kaempferol 、3Isorhamnetin1-峰槲皮素;2-山奈酚;3-异鼠李素2.2 重复性实验准确称取1号样品粉末5份各1g ,按照2.5的方法制备样品溶液,按1.2色谱条件分别进样10μL ,结果中以槲皮素、山奈酚、异鼠李素的峰面积得的RSD 分别为3.1%、2.1%、2.3%。
2.3 精密度将黄酮混合对照品溶液按上述色谱方法,连续进样5次,每次10μL ,槲皮素、山奈酚、异鼠李素的峰面积RSD 分别为2.1%、1.1%、1.5%。
2.4 加标回收率准确称取样品粗粉0.5g 共5份,分别加入标准品混合液各1mL (分别含槲皮素、山奈酚、异鼠李素0.16、0.10、0.12mg ),按照2.5节方法制备样品溶液,在上述色谱条件下分别进样10μL ,槲皮素、山奈酚、异鼠李素的平均加标回收率分别为98.1%(RSD 3.1%)、95.6%(R SD 2.1%)、98.8%(R SD 3.3%)。
2.5 样品测定取已干燥的柴胡地上部分,粉碎过孔径为0.833mm 筛。
准确称取该粉末5g ,用10倍量体积分数75%的乙醇浸泡过夜,加热回流,过滤,残渣再反复提取两次,合并滤液。
用V (乙酸乙酯)∶V (正丁醇)=1∶1萃取至无色,萃取液减压浓缩得黄酮粗提物,粗提物加V (甲醇)∶V (25%HCl )=4∶1混合液25mL ,回流30min 酸解,放冷,转移至100mL 容量瓶中加甲醇至刻度,摇匀[6],临用前稀释5倍过0.45μm 的微孔滤膜作为样品溶液。
取样品溶液及对照品溶液各进样10μL 。
各样品分析图谱结果见图2(a ～f ),分析结果见表1。
总黄酮计算按照2000年药典:w (总黄酮)=w (槲皮素)+w (山奈酚)+w (异鼠李素)×2.51。
表1 样品测定结果Tab .1 Determination results of samples样品编号样品名采集地时间槲皮素w %山奈酚w %异鼠李素w %总黄酮w %1簇生柴胡兴海2005.60.0400.00780.561.522秦岭柴胡Ⅰ平安2005.61.880.0120.375.763秦岭柴胡Ⅱ大通2005.62.270.0210.336.584小叶黑柴胡大通2005.61.820.0120.475.775紫花鸭跖Ⅰ大通2005.60.970.00630.162.596紫花鸭跖Ⅱ循化2005.61.010.0310.213.15图2 柴胡地上部分样品图谱Fig.2 Chromatograms of the samples from the aerial parts of um belliferae1、2、3号峰分别是槲皮素、山奈酚、和异鼠李素(a)紫花鸭跖Ⅰ;(b)紫花鸭跖Ⅱ;(c)小叶黑柴胡;(d)簇生柴胡;(e)秦岭柴胡Ⅰ;(f)秦岭柴胡Ⅱ3 结论由于黄酮甙相对分子质量较大,组成复杂,直接测定比较困难,本实验采用萃取法得到了总黄酮粗品,然后将粗品水解为苷元再进行HPLC分析,该方法干扰较少,操作简便、易行,重现性和线性关系良好,回收率较高,是测定黄酮类物质的比较好的方法。
由于较高浓度的H3PO4如处理不当在色谱柱中易结晶成盐造成柱堵塞降低柱效,因此对药典中流动相中磷酸比例作了调整。
筛选出较好的分离条件如下:色谱柱C18柱(250mm×4.6mm i.d.,10μm);流动相为V(甲醇)∶V(0.1%磷酸水溶液)=1∶1体系,流速1.0 mL min;紫外检测器检测波长360nm。
试验得到较满意的分离效果,结果准确可靠。
试验发现,青海产4种柴胡7个产地地上部分黄酮量都很丰富,总黄酮最高含量超过6.50%。
而且本文所研究的柴胡地上部分都有非常大的生物量,其中紫花鸭跖柴胡、秦岭柴胡地上部分大约是地下部分的8～10倍。
而柴胡作为药用植物一般只将根作为有效药用部位,而将地上部弃去,造成了柴胡地上部分药材的大量浪费。
由于黄酮类化合物的特殊药用价值,本研究结果为柴胡的综合利用开发提供了有利依据。
对于目前柴胡的开发现状也将有一个大的改进。
参考文献[1] 林东昊,茅仁刚,王智华等.药物分析杂志,2004,24(5):479[2] 尚明远,袁本香,王英华等.西北药学杂志,1998,13(4):153[3] 黄 雄,李 萍等.中国药学杂志,[4] 吴惠勤,程 青,张桂英等.分析测试学报,2001,20(6):53[5] Lee S J,Son K H,Chan g H W et al.Phytother Res,1998,12(6):445[6] 中华人民共和国药典(一部),2000:257Quantitative analysis of flavones from aerial parts of umbelliferae in qinghai by HPLCZHA O Xiao-hui1,2,JIA NG Fu-quan1,2,ZHO U J ian-bo1,2,W EN Huai-xiu1,2,SH A O Yun1and TA O Yan-duo＊1 (1.Northwest Institute of Plateau Biology,C AS,Xining810008;2.Graduate University of Chinese Aademy of Sci-ences,Beijing100049),Fenxi Shiyanshi,2007,26(1):46～49A bstract:The contents of flavones from the aerial parts of4kinds different locations of Bupleurum in Qinghai by HPLC were deter mined.Flavones were separated on a C18column(250mm×4.6mm)with methanol∶0.1%H3PO4 (1∶1)as the mobile phase,and flow rate was1.0mL min.Flavones were detected at UV360nm.There are abun-dant flavones in the aerial parts of Umbelliferae from Qinghai.The content of quercetin is2.27%and the contents of flavones are more than6.50%.The method is convenient and very precise for determining the contents of flavones. The results of the study provided effective evidence for better use of umbelliferae and change the present situation that only under ground parts ar e used and the earial parts are discarded.The abundant flavones of the aerial parts of umbel-liferae can increase efficient use of this herb.Keywords:HPLC;Flavone;Umbelliferae。