黄曲霉毒素M1检测
黄曲霉毒素M1最近算是成大明星了，准备写个黄曲霉毒素M1分析方法总结，和大家一起探讨（持续更新）！
1、结构及理化性质
不管三七二十一，还是先上个图：
先开个头，吃个饭回来写……
为什么说黄曲霉毒素M1，都出现在与动物相关的产品中？
黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1在动物组织内的代谢产物，并能够进入乳汁（牛奶？），因此大家看到的检测黄曲霉毒素M1都是检的“动物组织：如肝肾、乳腺”以及乳及其制品等”。
再来一个黄曲霉毒素B1代谢途径图，黄曲霉毒素B1在体内羟化形成黄曲霉毒素M1（左上，相机不好，照的效果不太好，大家见谅，有空补一个好点的图）。
新图如下：
2、黄曲霉毒素M1的相关限量标准
食品中的限量标准以GB 2761—2011为准：规定如下：
注：上述限量的检测方法：婴幼儿配方食品按GB 5009.24 规定的方法测定，乳及乳制品按GB 5413.37（GB 541337-2010 食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定）规定的方法测定。
3、分析方法
黄曲霉毒素M1的分析方法主要包括：薄层色谱法；酶联免疫吸附法，免疫亲和柱净化荧光光度法，液相色谱法，液质联用法等。
3.1 薄层色谱法：
GB 5009.24-2010 食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定（用于替代“GB/T 5009.24-2003 食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定”）为薄层色谱法：
适用范围：牛乳及其制品、奶油及新鲜猪组织（肝、肾、血及瘦肉）等食品中黄曲霉毒素M1 与B1 的测定。
原理：样品经提取、浓缩、薄层分离后，黄曲霉毒素M1 与B1 在紫外光（波长365nm）下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。
3.2 酶联免疫吸附法ELISA
适用范围：ELISA适用于乳，乳粉和乳酪中黄曲霉毒素M1含量的测定。
原理：黄曲霉毒素M1偶联物包被在酶标板的小孔中，将含有黄曲霉毒素M1的样品或标准液和抗M1的抗体加入到小孔中，此事固相包被的黄曲霉毒素M1和样品、标准品中游离的黄曲霉毒素M1竞争性地与抗体进行反应。
反应完全之后，用稀释过的清洗液洗小孔，将未反应的物质冲掉。
再在小孔中加入过氧化物酶，温育后再次清洗，加入底物溶液，温育后产生蓝色，加入停止液，终止颜色反应，颜色变为黄色，用酶标仪在450nm处测定颜色的强度，黄曲霉毒素M1的浓度与颜色强度成反比关系。
3.3 免疫亲和柱净化高效液相色谱法
适用范围：乳，乳粉，低脂乳，脱脂乳，低脂乳粉，脱脂乳；乳粉中的黄曲霉毒素M1的最低检测限大约是0.1μg/kg，乳中的最低检测限大约是0.01μg/kg。
原理：亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，含有黄曲霉毒素M1的样品通过免疫亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1（抗原）结合，形成抗原抗体复合体。
用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。
HPLC-FLD测定。
3.4 C18，硅胶柱净化高效液相色谱法
AOAC International1986年首次通过了乳液中的AFM1及AFM2采用高效液相色谱法作为公认定检测方法。
原理：乳中的黄曲霉毒素M1，M2经过C18小柱提取，用乙醚淋洗至硅胶柱，用二氯甲烷-乙醇溶液淋洗，黄曲霉毒素M1以及三氟乙酸（TFA）衍生。
用具有FLD的HPLC检测并与标品（三氟乙酸衍生）进行比较定量。
乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定—双流向酶联免疫法
乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定—双流向酶联免疫法20 原理利用酶联免疫竞争原理，样品中残留的黄曲霉毒素M1与定量特异性酶标抗体反应，多余的游离酶标抗体则与酶标板内的包被抗原结合，通过流淌洗涤，加入酶显色底物显色后，与标准点比较定性。
21 试剂和材料除非另有规定，本办法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。
21.1 双流向酶联免疫试剂盒，2℃～7℃保存。
21.1.1 黄曲霉毒素M1系列标准溶液。
21.1.2 酶联免疫试剂颗粒(含特异性酶标抗体)。
21.1.2.1 抗黄曲霉毒素M1抗体。
警告：不应破损，否则立刻销毁。
21.1.2.2 酶结合物。
21.1.3 酶显色底物。
22 仪器和设备 22.1 样品试管，带有密封盖，内置酶联免疫试剂颗粒(21.1.2)。
22.2 移液器(管)，450 uL±50 uL。
22.3 酶联免疫检测加热器，40℃±5℃。
22.4 双流向酶联免疫检测读数仪。
23 分析步骤 23.1 加热器(22.3)预热到45℃±5℃,并起码保持15 min。
23.2 液体试样或乳粉试样恢复后振摇混匀，移取450uL至样品试管(22.1)中，充分振摇，使其中的酶联免疫试剂颗粒(21.1.2)彻低溶解。
23.3 将样品试管(22.1)和酶联免疫检测试剂盒(21.1)同时置于预热过的加热器内保温，保温时光5 min～6 min。
使试样中的黄曲霉毒素M1和酶联免疫试剂颗粒中的酶标志黄曲霉毒素M1抗体结合。
23.4 将样品试管内的所有内容物倒入试剂盒(21.1)的样品池中，样品将流经“结果显示窗口”向绿色的激活环流去。
23.5 当激活环的绿色开头消逝变为白色时，立刻用力按下激活环按键。
23.6 试剂盒(21.1)继续放置在加热器(22.3)中保温保持4min,使显色反应完成。
23.7 将试剂盒从加热器中取岀水平放置，立刻举行检测结果判读，结果判读应在lmin 内完成。
黄曲霉 M1
酶联免疫法定量检测黄曲霉毒素M1摘要Helica aflatoxin M1 assay kit（编号：961AFLM01M）竞争酶联免疫分析法定量检测牛奶、奶粉、奶酪和加工食品中的黄曲霉毒素M1。
试剂盒中包含有酶联免疫试验所需的所有试剂，包括标准溶液。
试剂盒足够进行96次检测（包括标准）。
定量检测需要微孔板酶标仪。
样品处理：鲜奶………………………………………….……不需要处理奶粉………………………………………….……还原成液态奶奶酪、加工食品…………………………………甲醇水溶液提取试验时间：样品制备（以10个样品为例）鲜奶………………………………………………….…不需要处理奶粉………………………………………….…….……约10分钟奶酪、加工食品…………………………………………约30分钟检测时间……………………………………………………约3小时（与样品数量无关）检测限：5ppt回收率：80 - 100%1. 用途Helica Aflatoxin M1 assay kit是竞争酶联免疫分析法定量检测牛奶、奶粉、奶酪和加工食品中的黄曲霉毒素M1。
2. 概要黄曲霉毒素是主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。
黄曲霉毒素是一种强烈的致癌物，而且是曲霉菌等菌类的高毒代物，而黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的代谢物，当奶牛被饲养被污染的饲料后，黄曲霉毒素B1通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1，进而污染牛奶。
黄曲霉毒素M1结构稳定，在牛奶加工过程中甚至是巴氏消毒都无法将其去除，直至最后被人体摄入。
大多数政府机构都对人体和动物可摄入的黄曲霉毒素量有严格的法规限制。
很多国家已经对牛奶和乳制品中的黄曲霉毒素M1含量有了限量标准。
在欧盟，牛奶和奶粉中的黄曲霉毒素M1含量被限制在0.05 mg/L 或50ppt。
Helica Aflatoxin M1 assay kit检测试剂盒则能够提供快速而准确的分析。
食品中黄曲霉毒素M族的测定 标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M族的测定1 范围本标准规定了食品中黄曲霉毒素M1和M2（以下简称AFT M1和AFT M2）的测定方法。
本标准第一法为液相色谱-质谱联用法，适用于乳、乳制品和特殊膳食用食品中AFT M1和AFT M2的测定。
本标准第二法为免疫亲和层析净化高效液相色谱法，适用于乳、乳制品和特殊膳食用食品中AFT M1和AFT M2的测定。
本标准第三法为试纸条法，适用于生鲜乳中AFT M1的测定。
第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法2 原理试样中的AFT M1和AFT M2用水和乙腈的混合溶液提取，上清液的浓缩液用磷酸盐缓冲液稀释后，经免疫亲和柱净化，去除脂肪、蛋白质、色素及碳水化合物等干扰物质。
净化液经液相色谱分离，串联质谱检测，同位素内标法定量。
3 试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
3.1.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.1.3 醋酸铵（CH3COONH4）。
3.1.4 氯化钠（NaCl）。
3.1.5 磷酸氢二钠（Na2HPO4）。
3.1.6 磷酸二氢钾（KH2PO4）。
3.1.7 氯化钾（KCl）。
3.1.8 浓盐酸（HCl）。
3.1.9 氮气（N2）：纯度≥ 99.9 %。
3.1.10 石油醚（C2H2n+2）：沸程为30-60℃3.2 试剂配制3.2.1 5 mmol/L醋酸铵水溶液：称取0.39 g醋酸铵，溶于1000 mL水中。
3.2.2 乙腈-水溶液（25+75）：取250 mL乙腈加入750 mL水。
3.2.3 乙腈-甲醇溶液（50+50）：取500 mL乙腈加入500 mL甲醇。
3.2.4 磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBS）：称取8.00 g氯化钠，1.20 g磷酸氢二钠（或2.92 g十二水磷酸氢二钠），0.20 g磷酸二氢钾，0.20 g氯化钾，用900 mL水溶解，用盐酸调节pH值至7.4，再加水至1000 mL。
《基于荧光适配体传感器快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法及应用研究》范文
《基于荧光适配体传感器快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法及应用研究》篇一一、引言食品安全问题一直备受社会关注。
其中，黄曲霉毒素M1作为液态奶中的主要污染物之一，具有强烈的致癌性，对人体健康造成极大威胁。
因此，开发一种快速、准确、高效的黄曲霉毒素M1检测方法，对于保障食品质量和安全具有重要意义。
本文提出了一种基于荧光适配体传感器的快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法，并对其应用进行了深入研究。
二、方法概述该方法利用荧光适配体传感器技术，通过特异性识别黄曲霉毒素M1，实现快速、灵敏的检测。
具体步骤包括：样品前处理、荧光适配体传感器制备、荧光检测及数据分析。
（一）样品前处理液态奶样品经过适当稀释后，采用固相萃取法进行净化，以去除样品中的杂质和干扰物质，提高检测的准确性和可靠性。
（二）荧光适配体传感器制备荧光适配体传感器采用生物工程方法制备，包括DNA或RNA适配体的合成、荧光基团的标记及传感器的组装等步骤。
制备好的传感器具有高特异性、高灵敏度和良好的稳定性。
（三）荧光检测及数据分析将处理后的样品与荧光适配体传感器混合，通过荧光检测仪器进行荧光强度检测。
根据荧光强度的变化，结合标准曲线，可快速计算出样品中黄曲霉毒素M1的含量。
三、实验结果（一）方法性能评价通过对比国家标准方法，本文所提方法在检测液态奶中黄曲霉毒素M1时，具有更高的灵敏度和更低的检测限。
此外，该方法操作简便、快速，适合大规模样品的检测。
（二）实际样品检测为验证本文所提方法的实际应用效果，我们对市售液态奶进行了检测。
结果显示，部分样品中黄曲霉毒素M1含量超标，为食品安全监管提供了有力支持。
四、应用研究（一）食品安全监管本文所提方法可广泛应用于液态奶及其他乳制品中黄曲霉毒素M1的快速检测，有助于食品安全监管部门及时发现和处理问题产品，保障消费者权益。
（二）食品安全风险评估通过大量样品的检测和分析，可对食品中黄曲霉毒素M1的污染状况进行评估，为制定科学的食品安全风险评估提供依据。
黄曲霉毒素M1检测卡说明书(完整版)
黄曲霉毒素M1检测卡【简介】黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。
黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。
牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。
GB 2761-2001中规定：乳及乳制品中黄曲霉毒素M1的最大允许限量为1μg/kg，即1ppb。
本检测卡适用于液态奶和奶粉的检测，检测限为1μg/kg【精密度】同时使用本产品和黄曲霉毒素 M1 ELISA 检测试剂盒对 300 份样品包括 161 份阴性样本和 139 份阳性样本进行检测，检测结果表明，本产品与黄曲霉毒素 M1 ELISA 检测试剂盒的结果符合率为 98％。
【样品处理】奶粉1、取2g奶粉到锥形瓶中，再加入50℃左右去离子水到10ml（还原牛奶）。
2、震荡3min，使充分溶解。
3、2ml样品，用冷冻离心机（4000RPM ，10℃）离心10min去除脂肪（如没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）。
4、后用移液器彻底去除上层奶油。
5、下层脱脂牛奶与纯净水1:6稀释用于检测。
奶样（1）取1 mL新鲜的牛奶（含脂牛奶）样本置于2ml离心管中，降温至10℃以下4000 r/min离心10分钟后，弃去上层脂肪（约四分之三），剩余四分之一奶样与纯净水1:6（1份奶样+5份纯净水）互溶，互溶后刻度刚好为总体积1ml。
用力震荡1min，使充分溶解后为备用待检液；（2）脱脂牛奶待检液配法，脱脂牛奶与纯净水1:6（1份脱脂牛奶+5份纯净水）互溶，用力震荡1min，使充分溶解后为脱脂牛奶备用待检液；【检测步骤及结果判断】检测前请仔细阅读使用说明书，检测应在室温下进行。
检测步骤为：（1）将铝箔袋沿切口部位撕开，取出检测卡放于平整的台面上，并做好标记；（2）用吸管吸取待检样品溶液，垂直加入2~3滴于加样孔中（注：样本中不要带入气泡），反应3~5min 判断结果。
黄曲霉M1酶联免疫法检测方法
黄曲霉毒素M1酶联免疫测试1．概述REA GEN ™黄曲霉毒素M1酶联免疫反应测试盒可用于检测乳酪，牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1的残留。
黄曲霉毒素M1是黄曲霉素素B1羟基化的产物。
黄曲霉毒素已被确认是最常见的致癌物。
该试剂盒特点包括：样品无需前处理提取，可直接用于检测。
应用于牛奶检测时有高灵敏度（0.005ng/g或ppb）低检测限（0.005ng/g或ppb）。
高重现性。
2．试剂盒原理REA GEN ™黄曲霉毒素M1酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，相关的抗体已经包被于微孔板上。
药物分析时，样品加入微孔孵育，洗板后加入酶标记物，若样品残留有黄曲霉M1就会竞争包被抗体，抑制HRP酶标与包被抗体结合，加入TMB后显色反应，颜色显色强度与样品中靶毒素的含量成反比。
3.试剂盒组成部分和储存内容物规格保存条件黄曲霉毒素M1包被板(Aflatoxin M1 Plate) 96孔板（12×8 孔）2-8℃黄曲霉毒素M1标准品(Standards)：0ng/ml阴性质控(Negative control)0.005ng/mL0.015ng/mL0.03 ng/mL0.09ng/mL0.27ng/mL回收用10ng/ml(Spiking，可选) 1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8ml2-8℃HRP-酶标记物(HRP-Conjugate) 12mL2-8℃20×浓缩洗液(Wash Solution) 28mL终止液(Stop Buffer) 14mLTMB底物(TMB Substrate) 12mL10x PBS缓冲液（可选）25mL10x 牛奶提取液（可选）5mL本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。
如果一个月内不使用试剂盒，黄霉素毒素M1标准品和HRP-酶标应置于-20℃或者冷冻保藏。
4.样品检测下限检测物质检测下限（ng/g）牛奶0.005奶粉0.005（按1:10稀释成液体奶）乳酪0.05酸奶0.015.交叉反应数据药物交叉反应率（%）黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1) 100黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1) 46黄曲霉毒素B2(Aflatoxin B2) 35黄曲霉毒素M2(Aflatoxin M2) 29黄曲霉毒素G1(Aflatoxin G1) 27黄曲霉毒素G2(Aflatoxin G2) 66．未提供的设备或材料1)酶标仪(450nm)2)微量加样器(10、20、100和1000μL各一支)3)多道枪：50-300μL4)黄曲霉M1清洗试剂（可选）7.注意事项实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。
黄曲霉毒素M_1及其常见检测方法
污 染 的饲 料 ，经 过 羟 基化 作 用 而产 生 的 。黄 曲霉毒 素 Ｍ 的理 化性 验 耗 时较 短 、测 定 结果 较 为准 确 的 优点 ，经常 作 为半 定 量实 验 使
阐述 。
１ 黄 曲霉毒素 Ｍ ，的理化性质
黄 曲霉 毒 素 Ｍ。 的分 子式 为 Ｃ Ｈ。 ： Ｏ ， ，分 子量 为 ３ ２ ８ ，是 一类 毒 性 非常 强 的 二 氢 呋 喃香 豆 素衍 生 物 ，熔 点 ２ ９ ９ ℃ ，形 状 为长 方 形 片状 、无 色结 晶 ，３ ６ ５ ｎ ｍ 紫 外 光 下照 射 呈蓝 紫 色荧 光 。黄 曲霉 毒 素 Ｍ． 可 以溶 于 多种 有 机 极 性 溶剂 ，如 氯 仿 、乙腈 、 甲醇 。黄 曲霉 毒素 Ｍ 具 有较 为稳 定 的 化 学结 构 ，对 光 、热 、酸 都较 为 稳 定 ，不 易 分 子结 构 的变化 ，因此 牛奶 常 见 的消 煮 方式 都 不 易使 之 消除。
（ ２）猪 乙型 脑 炎 主要 发 生 在夏 季蚊 虫 叮 咬 的季 节 ，猪 是 乙 长 期 齐心 协 力 ，加 强联 防 ，群 防群 治 ，搞好 畜 间检 疫 ，淘 汰病 畜 型 脑 炎病 毒 的重要 储 存 宿 主 和扩 增 宿 主 ，通 过蚊 一 猪一 人 循 环使 禽 、消 灭传 染源 ，这 样 才能 取得更 好 的 防治效果 。 乙脑 病 毒扩 散 。 因此 做 好 饲养 场 环 境卫 生 ，搞 好 易 感 动物 免 疫接 参 考 文 献
３ 牛奶 中黄 曲霉毒素 Ｍ ，的限制标准
欧 盟牛 奶 中黄 曲霉 毒 素 Ｍ． 的含 量 ４０ ． ０ ５ ｍ ｇ ／ Ｌ或 ５ ０ ｐ ｐ ｔ 。我 国 牛奶 中 黄 曲霉毒 素 Ｍ． 的 国家规 定为 ４０ ． ５ ｋ ｇ 。 由此 可见 ，我 国 牛奶 中普 遍 含有 黄 曲霉 毒素 Ｍ 的数 值 较大 ，这 需要 我们 兽 医工 作 者进 一步 研究 适 当 的方 法降 低我 国牛 奶 中黄 曲霉 毒素 Ｍ 的含量 。 ５ 小结 综 上 所 述 ，伴 随着 人 们对 食 品安 全 的认 识 逐渐 提 高 ，人 们 以 ４ 黄曲霉毒 素 Ｍ ，的检测方法 黄 曲霉 毒素 Ｍ． 的检 测方 法 有很 多种 ，有 薄 层色 谱法 、高效 液 广 泛 了解 牛奶 中黄 曲霉毒 素 Ｍ， 的危 害 。牛奶 一 旦含 有黄 曲霉毒 素 相 色谱 法 、酶联 免疫 法 、荧 光光 度法 等 。 Ｍ． ，会 严 重影 响 百姓 的身体 健 康 。因 此 ，检测 牛 奶 中黄 曲霉 毒 素 ４ ． １ 酶 联 免 疫 法 Ｍ， 非 常重 要 ，在 常见 的几 种方 法 中 ，初 筛 可 以使用 酶联 免 疫法 ， 酶联 免疫 法 测定 黄 曲霉 毒素 Ｍ 的基 础是 抗 原抗 体反 应 。首 先 需 要 精确 定 量 的可 以 使用 高效 液 相 色谱 法 、液 相 色谱 质谱 串联 法 微孑 Ｌ 板 包被 具 有 特异 性 的 单克 隆抗 体 。加 入 黄 曲霉 毒 素标 准 、样 等 。 同时 ，在 牛奶 安全 生产 中黄 曲霉毒 素Ｍ． 所 带来 的危 害 、消 除 品溶 液 ，加 入 酶 标记 物 ，加入 显 色 剂 ，加 入 反 应停 止 液后 使 颜 色 黄 曲霉 毒素 Ｍ， 的方法 、精 确检 测其 的方 法都 应 引起 我们 兽 医工 作 由蓝转 变 为 黄色 。在 ４ ５ ０ ｎ ｍ 处 读取 数 据 。酶 联免 疫 法是 检测 黄 曲 者 严密 的 关注 。
黄曲霉毒素M1快速检测卡(胶体金法)说明书
黄曲霉毒素M1快速检测卡(胶体金法)说明书【产品名称】产品名称：黄曲霉毒素M1快速检测卡(胶体金法)英文名称：Aflatoxin M1 Rapid Test Card (Colloidal Gold)【产品简介】黄曲霉毒素是一类丝状真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）产生的具有很强致癌性的有毒代谢产物，黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物, 主要存在于乳及乳制品中。
本产品用于快速检测纯牛奶和婴幼儿配方奶粉中的黄曲霉毒素M1残留，整个检测过程只需要20分钟左右，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构的快速筛查。
【包装规格】5次/盒。
【产品组成】黄曲霉毒素M1快速检测卡（5条）；1mL刻度吸管（5支）；奶粉取样勺（1支）；提取瓶（内含黄曲霉毒素M1提取液4mL，5瓶）。
【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。
【检出限】本产品检测方法对纯牛奶黄曲霉毒素M1的检出限为0.5μg/kg，对婴幼儿配方奶粉（以粉末计）黄曲霉毒素M1的检出限为0.5μg/kg。
根据《食品真菌毒素限量GB2761-2011》规定，液态乳黄曲霉毒素M1检出限量为0.5μg/kg，婴幼儿配方乳粉（以粉末计）黄曲霉毒素M1检出限量为0.5μg/kg。
【使用方法】1、纯牛奶检测：用吸管吸取2mL纯牛奶（吸管刻度线处为1mL，连续吸取两次），加入提取瓶中，盖紧瓶盖后振荡混匀；奶粉检测：用取样勺量取1平勺奶粉（约0.4g），加入提取瓶中，盖紧瓶盖后振荡混匀。
2、将提取瓶放在热水（60-70℃）中水浴5分钟，取出待检。
3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用吸管从提取瓶中吸取样品，垂直滴加3滴（约100μL）于检测卡加样孔（S孔）中。
4、室温环境计时10分钟，根据示意图判定结果。
【结果判定】阴性（-）：T线显色比C线深或一样深，均表示样品中黄曲霉毒素M1浓度低于检出限。
阳性（+）：T线显色比C线明显变浅或T线不显色，表示样品中黄曲霉毒素M1浓度等于或高于检出限。
黄曲霉毒素M1操作规程
黄曲霉毒素M1操作规程一、样品的前处理将适量的液态奶于12000r/min下离心10min,取下层奶样直接检测即可。
二、溶液的配制1、标品稀释液：用去离子水将AFM1浓缩标品稀释液按1：3体积比进行稀释，即1份AFM1浓缩标品稀释液加3份去离子水。
用于提取样本的稀释，标品稀释液在4℃环境可保存一个月。
2、洗涤工作液：用去离子水将浓缩洗涤液（10×）按1:9体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（10×）加9份去离子水。
用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月3、6个不同浓度的标准液：取6个1.5ml离心管，标为1到6号，分别加入995μl,400μl, 400μl,400μl, 400μl, 400μl标品稀释液,按照下表配制标准品。
如取5μl高浓度黄曲霉毒素M1标准品（810ppb）加入1号管，与995μl标品稀释液混匀，制备成4.05ppb黄曲霉毒素M1标准液。
取200μl配好的4.05ppb黄曲霉毒素M1标准液，加入2号管，与400μl标品稀释液混匀，制备成1.35ppb黄曲霉毒素M1标准液。
取200μl配好的1.35ppb黄曲霉毒素M1标准液，加入3号管，与400μl标品稀释液混匀，制备成0.45ppb黄曲霉毒素M1标准液。
依次稀释，制备成1.35ppb、0.45ppb、0.15ppb、0.05ppb、0ppb的标准液，（见下表）。
标准品现配现用。
配制好的标准液请在一周内用完（4℃存放）。
三、检测步骤1.、测前须知：（1）、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20~25℃）。
（2）、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
（3）、黄曲霉毒素M1可致癌，应戴手套操作。
2、操作步骤：（1）、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20~25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均需摇匀。
（2）、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2~8℃。
酶标仪检测黄曲霉毒素M1
检测原理黄曲霉毒素M1检测试剂盒应用直接竞争酶联免疫吸附原理。
（1）样品提取液或黄曲霉M1标准品100ul与酶联偶合物200ul，混合后取100ul，（2）加入到抗体包被的微孔中等待1小时，（3）洗板去除未参加抗原-抗体反应的黄曲霉毒素M1,（4）将底物100ul加入到微孔中，等待20分钟，颜色变为蓝色，颜色的深浅与黄曲霉毒素M1的含量成反比，（5）加入终止液100ul，颜色变为黄色，检测步骤1.取生奶或调味乳30ml，在4度静止30分钟，10000转离心5分钟，在脂肪下取0.4ml加0.1ml100%甲醇，混合，（如奶粉取10克，加100ml蒸馏水溶解，混合，按照生奶来做），2.取出绿色的稀释孔和无色的有抗体包被的稀释孔各放入一个板架上，3.吸取200ul酶联偶合物加入到绿色的稀释孔，再吸取100ul标样（0、25、50、100、200、500ppt），和100ul样品，混匀3次，4.然后从300ul混合物中吸取100ul加入到无色的有抗体包被的稀释孔中，静止1小时，5.将孔中的液体倒掉，用稀释后的冲洗缓冲液冲洗每个孔，将微孔倒置于纸巾上把水吸干，6.加入100ul底物，放置20分钟，颜色变为蓝色，7.加入100ul终止液，颜色变为黄色，8.上机检测，（酶标仪滤镜450nm，示差滤镜630nm）9.稀释倍数f：牛奶1，奶粉10.8，奶酪8，10.定量限：生奶0.018ug/kg，脱脂奶粉0.252 ug/kg，全脂奶粉0.257 ug/kg，奶酪0.128ug/kg，酸奶0.270ug/kg11. 生奶或调味乳≤0.5ug/kg，合格，12. 计算公式：X= c*f/1000注：1.酶联偶合物25ml ：sensitive conjugate底物15ml ：substrate终止液15ml ：stop solution样品稀释缓冲液15ml ：assay diluent冲洗缓冲液（20X）25ml ：wash solution concentrate2.试剂盒在使用前恢复到室温（18~30度），使用完毕后，放入2~8度冰箱冷藏，3.标样中含有毒素，致癌性，使用时戴好橡胶手套、安全眼镜、工作服等防护装备，4. 在读数前，微孔中应没有气泡，否则影响分析结果，5. 1 ppm = 103 ppb = 106 pptug/ml ng/ml pg/mlmg/kg ug/kg ng/kg6. 5%冲洗缓冲液：将25ml冲洗缓冲液（20X）加入475ml蒸馏水，混匀，检测原理黄曲霉毒素B1检测试剂盒应用直接竞争酶联免疫吸附原理。