核酸碱基薄层层析双波色谱扫描分析
薄层扫描法知识分享
薄层扫描法薄层扫描法一、定义薄层扫描法(TLCS)又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC）系指用一定的波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量的分析方法。
回顾薄层色谱法（TLC)1、薄层板的制备（硅胶板,Al2O3板，聚酰胺薄膜等）2、点样（选择合适的展开剂，在薄板底1cm处画基线，点样）3、展开（浸入展开剂，展开到距薄板顶端1~2cm)4、检视(在紫外光灯下观察斑点）了解一下薄层扫描仪薄层扫描仪的组成及主要功能薄层色谱扫描仪有多个厂家生产，型号不同，仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能是基本相同的。
每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。
（1）分光器及测量范围大多数薄层扫描仪的分光器为光栅，少数为棱镜，极个别的用滤光片，其测量范围光栅为200-800nm，棱镜为200-2500nm。
（2）光源及检测器光源室具有可见光源钨灯，波长范围为400-800，紫外光源氘灯波长范围为200-400nm，荧光光源为氙灯或汞灯。
操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜的位置；检测器一般为光电倍增管。
表7-5-2 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪二、TLCS基本原理与方法薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。
1. 薄层吸收扫描法的基本原理薄层吸收扫描法是用可见光或紫外线的单色光照射展开后的薄层色谱板，测定薄层色谱斑点(简称斑点)的吸光度(A)随展开压离(L)的变化，而获得A—L 成A—Rf曲线，即薄层色谱扫描图(简称扫描图)。
曲线上的色谱峰峰面积可用于定量分析。
由于薄层板存在着明显的散射现象，而使斑点中物质的浓度与吸光度的关系不服从Beer定律，所以需田Kubelka—Munk(古柏尔卡—曼克)理论来描述。
该方程式是薄层扫描法的定量分析基础。
定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回归法等。
薄层色谱鉴别介绍
薄层色谱鉴别介绍薄层色谱（TLC）是一种常用的分离技术，可用于鉴别化合物的混合物。
它是一种简单易用、经济实惠、快速高效的分析方法，常用于药物分析、天然产物分析、农药残留分析等领域。
下面我将对TLC的原理、操作步骤和应用进行介绍。
一、TLC的原理TLC的原理基于色谱分离原理，利用物质在不同固定相上的亲疏性差异，通过毛细作用和扩散作用，使化合物被分离。
TLC的分析基质是通过固定相涂覆在玻璃、铝或塑料基质上，样品通过毛细作用在固定相上上升，而不同成分在固定相上停留的时间也不同，从而实现分离。
TLC工作原理示意图如下：[示意图]二、TLC的操作步骤1.准备试剂和设备：准备TLC板、玻璃容器、色谱溶剂和样品溶液。
2.准备试样：将待测试物溶解在合适的溶剂中，得到试样溶液。
3.均匀涂布试样：将试样溶液均匀地涂布在TLC板上的出发线上。
4.选择合适的溶剂系统：根据待测试物的性质和分离要求，选择合适的色谱溶剂系统，如正己烷/乙醇（9:1）。
5. 开始分析：将TLC板放入玻璃容器中，添加色谱溶剂至约2cm高度，但不能触及TLC板。
盖上容器盖，让试剂与固定相接触，溶液会开始上升。
6. 结束分析：当溶剂上升到离TLC板顶端1-2cm时，将TLC板取出，迅速标记出相应的上升高度。
然后将TLC板晾干并进行显色。
最后使用UV灯或显色剂对TLC板进行观察和分析。
7.数据分析：根据显色结果，通过测量上升的高度和各样品的Rf值（Rf值=色谱前移距/色谱跑液的前行距离），得到鉴别结果。
三、TLC的应用1.鉴别混合物的成分：通过TLC的分离作用，可以鉴别混合物中的各个成分，可以用于检测药物中的杂质和控制药物的质量。
2.分析天然产品：可以用于从天然草药、植物中提取的混合物中分离和鉴定活性物质。
3.农药残留分析：TLC可以用于农产品中农药残留的快速筛查和定量分析，具有操作简单、快速、灵敏等优点。
4.食品和环境监测：可用于鉴别食品和环境样品中的各种组分，如食品中的添加剂和环境中的有机物。
色谱分析薄层色谱法
色谱分析薄层色谱法薄层色谱是一种微量、迅速和容易的色谱办法。
它可用于分别混合物，鉴定和精制化合物，是近代有机分析化学中用于定性和定量的一种重要手段。
它兼有柱色谱和纸色谱的优点，它绽开时光短，分别效率高（可达到300一4000块理论塔板数），需要样品少（数微克）。
假如把吸附层加厚，试样点成一条线时，又可用作制备色谱，用以精制样品。
薄层色谱特殊适用于挥发性小的化合物，以及那些在高温下易发生变幻、不宜用气相色谱分析的化合物。
薄层色谱的原理和柱色谱类同，属于固--液吸附色谱。
样品在涂于玻璃板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之间举行分别。
常用的吸附剂是和。
各种化合物的吸附能力各不相同，在绽开剂上移时，它们举行不同程度的解吸，从而达到分别的目的。
假如采纳和为支撑剂，则其原理为分配。
薄层色谱的操作办法（如点样、绽开、显色等）都和纸色谱基本相同。
显色剂除能用法纸色谱的显色剂外，还可采纳腐蚀性的显色剂，如浓、浓等。
斑点位置亦以比移值表示。
(1)吸附剂薄层色谱的吸附剂最常用的是和，其颗粒大小普通为260目以上。
颗粒太大，绽开时溶剂移动速度快，分别效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效果也不抱负。
国产硅胶有：(含有煅石膏作黏合剂）、(不含煅石膏，用法时需加入少量、等作黏合剂）和硅胶F254（含有荧光物质），后者用法之后可在紫外光下观看，有机化合物在亮的荧光板上呈暗色斑点。
硅胶常用于湿法铺层。
(2)铺层试验室常用20cmx5cm、20cmx10cm,20cmx20cm的玻璃板来铺层。
玻璃板要预先洗净擦干。
铺层分湿法和干法两种。
湿法铺层：先将吸附剂调成糊状，例如，称取硅胶G20一50g，放入研钵中，加入水40一50ml，调成糊状。
此糊大约可涂5cmx20cm的板20块左右，涂层厚0.25mm。
注重，糊易凝聚，所以必需现用现配，不宜久放。
为了得到厚度匀称的涂层，可以用涂布器铺层。
将洗净的玻璃板在涂布器中间摆好，夹紧，在涂布槽中倒入糊状物，将涂布器自左至右快速推动，糊状物就匀称涂于玻璃板上（图2.34)。
_薄层色谱总结分析
薄层色谱方法总结1.方法原理(1)流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。
(2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极- （诱导）- 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。
2.溶剂使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇- 冰乙酸- 水= 4：1：1，V/V/V），或者绝对量（如18ml 甲苯+ 2 ml 甲醇）。
其总量应足以使TLC/HPTLC 板的浸入深度约为5mm。
展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。
一、溶剂选择规则：1、考虑分离成分的极性、溶解度、吸附度。
2、先加入极性较小的溶剂，若不容再加入少量极性大的溶剂3、一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶。
4、混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂。
5、展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。
6、一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。
二、展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；②待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；③不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
三、溶剂极性参数表环已烷:-0.2、石油醚（Ⅰ类，30~60℃）、石油醚（Ⅱ类，60~90℃）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.21、一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；2、中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；3、强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
薄层色谱法
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薄层色谱法
（thin layer chromatography; TLC) （一）概述 1.背景
1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一 种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。 因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高， 结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。 70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后 发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪 器化，并实现了计算机化。
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展开时的注意事项
产生原因：展开槽未被展开剂饱和。尤其是 使用混合溶剂时，极性较弱和沸点较低的溶 剂，在薄层边缘容易挥发，使边缘部分的展 开剂中极性溶剂的比例增大，Rf相对增大。 同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf 值比边缘的Rf值小，即边缘效应。
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展开时的注意事项
消除办法：若在展开前先将展开槽与薄层
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六味地黄丸中牡丹皮的薄层图谱
1.丹皮酚； 2～5.六味地黄丸
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薄层色谱法（TLC)应用实例
二、醋酸可的松中其他甾体的检查
取本品，加氯仿-甲醇(9︰1) 制成每1ml 中含10mg的溶 液，作为供试品溶液；精密量取适量醋酸可的松，加氯仿甲醇(9︰1) 稀释成每1ml 中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。 照薄层色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl， 分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水 (385︰60︰15︰2) 为展开剂，展开后，晾干，在105 ℃干燥 10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品 溶液如显杂质斑点，不得多于3 个，其颜色与对照溶液的主 斑点比较，不得更深。
⑵点样
将试样用最少量展开剂溶解，用毛细 管蘸取试样溶液，在薄层板上点样。在样 点上轻轻画出一条平行于玻璃板底边的细 线。薄层色谱板载样量有限，勿使点样量 过多。
薄层色谱(TLC)
薄层色谱薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。
是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法。
它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。
因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。
此外，在进行化学反应时，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。
一、基本原理色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或和其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。
薄层色谱是一种微量、快速和简便的色谱方法。
由于各种化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程度的解析，根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）。
化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因此Rf值较小。
在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据Rf值鉴别化合物，薄层色谱可适用小量样品（几到几十微克甚至0.01μg）的分离：也可用于多达500mg样品的分离，是近代有机化学中用于定性，定量的一种重要手段。
特别适用于那些挥发性小的化合物，以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。
二、实验基本流程铺板点样展开显色计算Rf值铺板取7.5x2.5cm左右的载玻片5片，洗净晾干。
在50mL烧杯中，放置3g硅胶G，逐渐加入0.5﹪羧甲基纤维素钠水溶液(CMC)8mL，调成均匀的糊状，涂于上述洁净的载玻片上，用手将带浆的玻片在水平的桌面上做上下轻微的颠动，制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好的硅胶G的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置0.5h后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h 后取出，稍冷后置于干燥器中备用。
薄层层析色谱(点板)
02
薄层层析色谱的基本原理
层析柱的工作原理
层析柱是薄层层析色谱的核心部件， 其工作原理基于不同物质在固定相和 流动相之间的分配系数差异。当流动 相携带待分离物质流经固定相时，由 于分配系数不同，各组分在两相之间 发生吸附、脱附、再吸附、再脱附的 过程，从而使不同物质得到分离。
VS
薄层层析色谱的固定相通常是硅胶、 氧化铝、纤维素等颗粒状物质，而流 动相则根据待分离物质的性质选择适 当的溶剂。
展开
将薄层层析板放入展开剂中，进行展开分离。
显色
根据待分离的样品和标准品的性质，选择合 适的显色剂进行显色。
பைடு நூலகம்
实验结果分析
分离效果评估
观察薄层层析板的分离效果，评估分离效果的好 坏。
定性分析
通过比较待分离的样品和标准品的显色结果，进 行定性分析。
定量分析
通过测量待分离的样品和标准品的峰面积或峰高， 进行定量分析。
技术创新和改进
新型固定相材料
研究和发展新型的固定相材料， 以提高层析的分离效果和选择性。
高效展开技术
探索和开发高效、快速的展开技术， 以缩短分析时间和提高分离效率。
自动化和智能化
推动薄层层析色谱的自动化和智能 化发展，实现自动点样、自动展开、 自动检测等功能，提高分析的准确 性和可靠性。
应用领域的拓展
04
薄层层析色谱的应用实例
在药物分析中的应用
药物成分分离
薄层层析色谱可用于分离和纯化 药物中的有效成分，提高药物的 纯度和药效。
药物质量控制
通过薄层层析色谱技术，可以检 测药物中杂质和降解产物的含量， 确保药物质量和安全。
药物代谢研究
薄层层析色谱可以用于研究药物 的代谢过程，了解药物在体内的 转化和排泄情况。
薄层色谱法
流动相的选择：
一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷 <己烷<苯<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇
根据被分离物的极性，先用单一溶剂展开，若Rf值太小，则加入
一定量极性强的溶剂，如乙醇、丙酮等；如果Rf值太大，则加入适量 极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)，以降低极性。可加入一定比例 的酸或碱,使斑点集中。
薄层色谱法
薄层色谱法（ THIN LAYER CHROMATOGRAPHY ，TLC）
薄层色谱法,又称薄层层析（《中国药典》2015年
版四部通则0502薄层色谱法），系将供试品溶液 点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使 供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准 物质按同法所得色谱图对比，亦可用薄层色谱扫 描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。
薄层色谱扫描仪
二、基本原理
薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸 附剂吸附能力不同，使在流动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过 程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成 分的互相分离的目的。 薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析 (吸附剂）、薄层分配层析（纤维素）、薄层离子交换层析（离子交 换剂）、薄层凝胶层析（分子筛凝胶）等。一般实验中应用较多的是 以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。
微升毛细管
半自动点样器材
全自动点样器
③展开容器
薄层色谱展开方式按几何类型份为 ： 线型、环型和向心型。
（a，b）线型 （c）环型 （d）向心型
环型与向心型展开为特殊情况需求，需要借助特殊展开仪器进行展开； 线型根据展开方向的不同可分为上行展开、下行展开、双向展开，水平展开， 实验室一般使用的为线型上行展开与水平展开。 上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开式必须能 密闭。水平展开用专用的水平展开槽。
@薄层色谱法(TLC)讲稿(xin).
2.2点样器
毛细管 微量注射器 半自动及全自动点样器
2.3展开容器
专用平底或双槽展开缸、盖能密 闭
特殊水平展开缸
2.4显色设备
喷雾显色：玻璃喷雾瓶或专用喷
雾器，用压缩气体可使试剂呈均 匀细雾状喷出
浸渍显色
蒸气熏蒸显色
2.5色谱检视装置
可见紫外三用仪 装置可见紫外光源及相应滤光片
的暗箱 拍摄图像的设备
研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空
气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆 下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀 浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板 涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层 薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么 明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影 响不是很大，影响最大的是展开剂的配 制和展开系统的饱和。
3.操作方法
3.1薄层板制备
自制方法：硅胶：1份固定相加3份 水---研磨混合---涂布---晾干---活化--备用；纤维素：与水1：5或6；聚酰
胺：与水1：4，或与甲醇1：3
薄层板活化：硅胶、氧化铝、硅澡 土：110℃、30分钟；纤维素：105 ℃ 、30分钟；聚酰胺：60－80℃、 30分钟
用涂布器制板的要点：玻璃板要清
洁；调浆要均匀；涂布后的薄层板应低 温缓慢干燥。
自制薄板要求：表面均匀、平整、光
滑，无麻点、无气泡、无破损、无污染。
薄层厚薄对Rf值影响：硅胶G板当
厚低于150μm时， Rf值随薄层的减低而 增大，可变性大；板厚250 μm ， Rf改变 不显著。
薄层层析操作要点铺板用的匀浆不宜 过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动 或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后， 板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶 G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素 钠水溶液=1:2。
薄层色谱法的5个步骤
薄层色谱法的5个步骤薄层色谱法是一种常用的色谱分析方法，它可以将样品中的各个组分分离出来，并且可以用于定性定量分析。
下面是薄层色谱法的五个步骤：1.分离薄层色谱法的第一步是分离。
这一步是通过将样品溶液点样在薄层板上，然后将其放入色谱缸中，加入流动相，使流动相在薄层板上行走，将样品中的各个组分分离出来。
分离的效果取决于流动相的性质、点样量、流动相的流速和薄层板的性质等因素。
2.涂层在薄层色谱法中，涂层是非常重要的一步。
涂层可以防止样品中的各个组分在分离过程中扩散，同时也可以提高分离的效果。
常用的涂层材料有硅胶、纤维素和聚酰胺等。
涂层的厚度和均匀度都会影响分离的效果。
3.喷洒喷洒是指在分离之后，将固定相喷洒在薄层板上，使固定相与薄层板结合。
这样可以提高分离效果，并且可以使薄层板更加稳定。
常用的固定相有硅胶、纤维素和聚酰胺等。
4.显色在薄层色谱法中，显色是非常重要的一步。
通过显色可以清楚地观察到样品中的各个组分的分离情况。
常用的显色方法有物理显色和化学显色两种。
物理显色是基于不同物质对光的反射和吸收能力的不同来实现的；化学显色则是基于物质之间的化学反应来实现的。
5.识别在薄层色谱法中，识别是非常重要的一步。
通过识别可以确定样品中的各个组分。
常用的识别方法有观察颜色、测量Rf值和比较标准品等方法。
观察颜色可以初步判断组分的性质；测量Rf值可以确定组分的移动距离；比较标准品可以确定组分的具体种类。
以上就是薄层色谱法的五个步骤：分离、涂层、喷洒、显色和识别。
在实际操作中，可以根据不同的需求和目的进行相应的调整和优化。
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析用纤维素 （ｌｌｅ ｌｒ ３０ Ｖ ５）德 ｃｌ ｐｖ Ｍ ０Ｕ ２４， ｅｕｓ ｕｅ Ｎ ｏ
将各板中种类和 国产。 狡甲基纤维素钠为上海化学试剂厂产。 性扫描。 用量高法计积分值， 含量均相同的碱基之积分值加和平均，求各碱 其他试剂为Ａ ， Ｒ 水为重蒸水。 Ｍ 作出以 ２仪器 ． 日本 岛律 Ｃ －１ Ｓ９０双波长 色 基积分值和 ｎ 之间关系的回归方程， 积分值（ 任意单位） Ｙ ｎ 为Ｘ的回归直线， 为 ， Ｍ 谱扫描仪。 （）样品测定：加 ２ Ｄ Ａ样品和 ２ １ ２ ｍ Ｎ ｇ ｍ ８ Ｇ ７玻璃制的 ２ １ ｍ 安瓶中，按 （）制板： 取 １． １ ６ ８硅 胶 Ｈ， ｇ ２ １ ＭＮ ８ 多甲酸于 Ｇ １ ． ８ ３Ｏ Ｖ 纤维素， ． ０Ｕ ２４ ５ ０ 外挟甲 ５ 基纤维素钠（ 离 Ａ ｒ Ｂｎｉ ｔ 法水解，依标准碱基溶液配法 ａ ｎ ｄ ｈ， ｏ ｅ ｃ４ ．１ ２ ｏ １ 心去除悬浮物） ０ ｌ于匀浆器中匀浆 ５ ９ｍ ， 分钟， 溶成 ０ ｍ 样品液。取不同量的样品液与 ３ 标准碱基混合液点于同板的不同点上，层析和 速度以浆液不溅出为度， 抽气， 均匀涂布在 ６块 ２ Ｘ ｃ ０ Ｏｍ或 ４ ２Ｘ ｃ ｌ 块 ０ ５ １ ｍ的平整清洁的玻板
会 讯
遗传工程在工业上的应用讨论会简讯
或酵母中表达。人前胰岛素的研究在细菌中得到高效
表达 ， 前胰 岛素 蛋白的产量 已占菌 株总 蛋 白 的 ４％， ０ 达 到了可以投人生产的水平。 此外 口蹄疫病毒、 人绒 毛膜促性腺激 素抗生育疫 苗、 抗菌素、 氨基酸、 传染性 腹泻病疫 苗、 尿激酶等的基 因工程也 已获得阶段成果。
时间 １５小时。 层析后风千或吹干，于 ２ ４ｍ ． ５ｎ
（ 中国科学院成都生物研究所）
紫外灯上定位，画出各碱基斑点的位置，计算
材料和方法
（ 一）主要试剂及仪器
１试剂 ． 碱基 Ａ， Ｃ Ｔ 和 Ｕ，均为 Ｇ （）标准曲线绘制：准确称取并按上法配 １
上。
（ 二）分析方法 １薄层层析分离 ．
即为标准曲线。
（）薄层分离：称取 ２ Ｘ１３ （ｎ 二 ２ ５ ０ Ｍ Ｍ ｎ １
Ｊａ ｅｇ ｕ ａ ： ｎｌｓ ｏ Ｎｕｌｃ ｃ Ｂ ｓ ｉ Ｃ ｎ ｙ ｅ ｌ Ａ ａ ｉ ｆ ｃｅ Ａ ｉ ａｅ ｈ ｔ ． ｙ ｓ ｉ ｄ ｓ 饰 Ｔ ｉ Ｌ ｙｒ ｈｏ ａ ｇａ ｈ ａ ｄ ａ Ｗａｅ ｈｎ ｅ Ｃ ｒｍ ｔ ｒｐ ｙ Ｄｕｌ ｖ－ ａ ｏ ｎ ｌｎｔ Ｃ ｒｍ ｔ ｒｍ ａ ｅｇｈ ｏ ａ ｇａ Ｓ ｎ ｈ ｏ ｃ
结果和讨论
Ｃ －）碱甚菠层层析结果 如 表 １和 图
定量分析， 灵敏度也高， 可测小于ｌｇ ， 的碱基。 ｕ
由于有明显的线性关系，所以在此范围内如果 样品和标品积分值接近， 可由样品 ｎ 二 样品 Ｍ
积分值 （ 意单位） 任
Ｕ
表 １ 碱基薄层层析 Ｒ 值 ，
碱基 Ｒ ｔ
Ａ ０． ４ ５
Ｇ ｃ Ｔ
Ｃ 回归方程
４
Ａ回归方程
ｙ＝ ． ０ １２ Ａ ３ ９＋ ．２ ５ ９Ｘ
图 ２ 各碱 基标 准曲线
积分值Ｘ１／ ５标品积分值， 直接算出样品碱基含 量， 省去作标准曲线， 使工作更为简便。 ２分析结果 ． 如表 ２ 示。由表 ２ 数据可 看出，Ｇ＋Ｃ （ ）克分子外最大标准误差在１ ６ ０ ． ６ 以下， 相对误差土１ ８ ． ％以下， ２ 各碱基的最大标 准误差在 １ ０ ０ 以下，相对误差 ４ ２ ． ５ ． 务以下， ４ 符合一般光学分析法的误差范围。 另外， 将本 实验测得的小牛胸腺Ｄ Ａ Ｇ＋Ｃ 克分子％， Ｎ（ ） ４． 多，与文献［ ４０ ２ ［ ３ １ 报道的不同作者的常法分析
３
扫描测定后，选取积分值与标品积分值相差不 大的样品量作为测定点样量。 取 ３ 块薄层板， 每板点标品 ３ 共 ３ 样品按预测量点样， 砂， 点， 亦为 ３ 照前层析和扫描， 点， 分别求出各板中标 品和样品相应碱基积分值的平均值，在相应碱 基标准曲线上找出标品积分值和 １ｎ 所在的 ５ Ｍ 点，从该点推出标准曲线的平行线，即校正曲 线，其上由样品积分值对应的Ｘ值就是样品的 ｎ Ｍ数。 如果样品和标品积分值接近，也可由 样品 ｒ ｉ ｍ二样品积分值 Ｘ１／ ５标品积分值， 直接
混合物， 各斑点很明晰， 效果稳定， 重现性很好， 既可用于 Ｄ Ａ及 Ｒ Ａ 碱基分离， Ｎ Ｎ 又可用于 此两种核酸混合物的各碱基测定。在薄层板的 算出来。 将测得的 Ａ， Ｃ Ｔ之 ｎ 数，即 ＡＭ 两端可各作一次分析， Ｇ，， Ｍ ｎＮ 省时省原料。 （ 二）定量分析 Ｇｍ ｎ、 ｎ ｎＮ ＴＭ代人下式： ＣＭ １标准曲线如 图２ ． 示。回归方 程的 ‘ 检 （ Ｇ＋Ｃ 克分子多 ） 验：查 ｔ 表，ｄ ＝ｎ ２ ３ ｔｏ～５ ４， ｆ 一 ～ ， ｏ ． ｉ ． １而 ８ ～一 －ＧＭ ２一 一 ｘ ０ ｎ土卫－ ｍ一 － １ ０ Ａ Ｍ＋ Ｇ Ｍ＋ ＣＭ ｎ ｎ ｎ ｎ＋Ｔ Ｍ 现在Ａ的 ， ３ ３ Ｇ为 １． ， 为 １． ， ～３． ， ４ ７６ Ｃ ７９ ９ ３ 就得到分析结果。把 ３ 块薄层板测得的上述数 Ｔ为 ９ ６ 均＞１０ 故 Ｐ＜ ０ １ ．， ２ ０１ ． ， ． ，差异极为显 ０ 值平均， 便是该 Ｄ Ａ 的碱基组成。 Ｎ 著。这表明 ５ ５Ｍ范围内线性关系好， －２ｎ 宜作
遗传
Ｈ Ｒ ＤＴ Ｓ ｅｉ ） （） ３ Ｅ Ｅ ＩＡ （ ｉ ｇ ６ ＂ Ｂｊ ｎ ４ －５ ８ １ ４ ９
核 碱 层 析 波 谱 描 析 酸 基薄 层 双 色 扫 分
贾成 禹
核酸组成成分及衍生物的分析除常用的电 泳、纸层析和薄层层析洗脱比色法外，近年来 又出现了双波长色谱扫描法和高压 液相层析 法［１ ２ 。但已报道的双波长色谱扫描法测定的 ， ５ 碱基种类不多，在 测定 Ｄ Ａ ＋ Ｎ （ Ｇ Ｃ ）克分 子外方面， 尚未见报道。 我们在实验中摸索出 分离核酸碱基效果好的硅胶薄层析，并考查了 双波长色谱扫描分析法的准确度。
窦永泽
１－ Ａ， Ｃ Ｔ， ０９ Ｍ） Ｇ， Ｕ， ， 盛于不同容器中， 再分 别称取同样量的上述各碱基混合于一个容器， 各加 Ｉ １ １Ｎ ａＨ 液助溶， ｍ 水， 滴 ２ Ｎ Ｏ ｌ 后加 １ 滴浓 ＨＣ，用 ０１ Ｈ Ｉ稀释到 ５ １ 将上 ｌ ．Ｎ Ｃ ｍ。 述硅胶薄层板于 １５ ００ Ｃ活化半小时，按常法把 单个及混合的碱基溶液分别点在不同的点 上， 用饱和正丁醇上行展开至前沿 １ｃ 处取 出， ２ ｍ
法比较， 本法简便、 快速、 灵敏、 可靠。 参 考 文 献
结果为４． －４． 并相比， １０ ４ ０ ６ ８ 也说明本法结果
可靠。
衰 ２ 小牛脚腺 Ｄ Ａ 玻 Ｎ 签分析橄据
相对误差〔 ＿ ４ Ｕ ‘ ７ ３ 卜 ４ ， １７ ％ ， ，｝ “ ・｝ ．｝ ． 土 、 ！ 。士 ！ “土 ４ 士 ２ 土 ‘
层析纯， 含量 ＞９多；Ａ Ｕ德国产， ８ ， Ｃ为 Ｂ Ｈ Ｄ 产， ， Ｇ Ｔ分别为上海东海制药厂和恒信化工厂 产。小牛胸腺 Ｄ Ａ为上海牛奶公司产。薄层 Ｎ 层析用硅胶 Ｈ， 为青岛海洋化工厂产。薄层层
成各种碱基浓度为 ５ 冈 的 Ａ Ｇ Ｃ Ｔ标 ｎ Ｍ／ ， ， ，
准碱基混合液， 取活化的 ３ ２ Ｘ ｃ 硅胶 块 ０ １ｍ ０ 板， 每板点 ５ 分别为 １ ２ ３４ ５ 按前层 点， ， ， ， ， 冈， 析， Ｃ－ １ 用 Ｓ９０双波长色谱扫描仪测定。测定
本报告摸索出的核酸碱基硅胶薄层层析双 波长色谱扫描分析， 只需 １ 小时的单 向层离 ． ５ 就可把 Ａ Ｇ Ｃ Ｔ Ｕ彻底分开， ， ， ， ， 扫描测定半 小时即可完成， 可测低至 ５ 即 Ｉ ｎ Ｍ（ ｆ ｕ ｇ以下） 的 碱基，经统计处理完全符合一般光学分析法的 准确度（ 相对误差士５ ； 多） 溶剂系统简单， 主要 用国产硅胶， 故价廉。所以， 在核酸碱基分析方 面，与现在常用的纸层析和薄层层析洗脱比色
对于纤维素酶、 血浆蛋白、 胸腺素、 家畜和鱼类育种也
提 出了许 多引人注 目的课 题。 会上 ，就如 何在我 国迅速发 展基因工程间题组织 了专题座谈并提 出了建 议： （ ） １ 进一步加强遗 传工程 的学术交流活动 ， 织人员迅速的报道国外情报信息。 组 （） ２扎扎实实抓好全国 ３ 个生物工程中心的建设 ， 提出 建议， 准研究方向。（） 好遗 传工程研究人材的培 看 ３抓 养。（） 好科研 、 ４抓 教育、 产三结合。 （） 生 ５希望改善国 内工具酶 、 同位素的供应， 从长远来看应建立 自己的工
０． ４０
０３ ．０
０ ７４ ．
０６ ．４
Ｙ二 。 ４＋ ． １ ‘ 一 ． ０ １ ４Ｘ ８ ３
Ｔ 回 归方 程
Ｙ二 １ ２＋ ． ７ ： 一 ． １ ６ ２ ５ ２ Ｘ
回归方程
宁 二 ． ０ ２４ Ｘ 。 ， ８＋ ． ４ ８ ４
散点
图 １ 薄层析谱 １ ．小牛胸腺 ＤＮ 水解物 ： ． 十 Ｇ＋ ｃ十 Ｔ ； Ａ ２（ Ａ ） ３ Ｃ ＋ Ｇ＋ ｃ＋ Ｔ＋ Ｕ ， ． Ａ ） 在 ２ ４ｍ 紫外灯下显影时，由于该仪器形状限 ５ｎ 制， 无法用一般照相机拍摄， 此照片系在 ２４ｍ 紫 ５ｎ 外分析灯显影时用铅笔勾画出各斑点后 ， 自 然 光 在 照下拍摄结果。
中国遗传学会最近在杭 州召开了遗传工程在工业 上的应用讨论 会。 会议主持人 李载平教授在发言 中指 出， 因工程 与核子物理等学科相比是小学 科， 基 花钱不 多， 收效极大。 他说， 但 当前 世界上开展的遗传工程研 究仅仅是个开始，我们 需要做 的而又 能够做的工作很 多， 一定要开 阔视野。 例如用基因工程制 造探针技 术， 必将形成一个新的产业。它 可以用特异性 Ｄ Ａ 片段 Ｎ 的分子杂 交法进行各种 目的基因的检测 ，其灵敏度将 比 现在常 用的免疫沉淀法高出 １００ ，０ 倍。这种探针可 用于 检测遗传病、 食品检验检查沙门 氏菌 污染， 甚至制 造探针 柱预防血液受乙型肝炎病毒或其它化学有害物 质的污染。 其它诸 如建立分泌型载体 系统 ， 建立合适 的发酵和产物提取工艺 、 降低成本 、 增加收益等等 ， 将 有大 量工 作可做。 在会 议上的学术交流表明，近几年来我国遗传工 程 的研究 工作在某些项 目上已取得可喜成果。例如乙 型肝 炎病毒、 干扰 素等不 仅得到克隆， 而且 已经在细菌