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基因工程期末考试试题.docx
基因工程试卷B名词解释（每个2分，共20分）1、转化：2、质粒转移性：3、DNA文库：4、RACE:5、选择标记基因:6、降落PCR7、载体：8、感受态细胞：9CaMV35s:10、ORF:二、选择题（每题1分，共15分）2(）限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是A修复自身的遗传缺陷C强化自身的核酸代谢）生物工程的下游技术是基因工程及分离工程促进自身的基因重组提局自身的防御能力蛋白质工程及发酵工程D分离工程及蛋白质工程1(3）基因工程操作常用的酶是:（1内切酶II连接酶III末端转移酶IV聚合酶A.I + IIB. I + III + IVC. II + III + IVD. I +11 + IV + III4 ()限制性内切核酸酶的星活性是指：A在非常规条件下，识别和切割序列也不发生变化的活性。
B活性大大提高C切割速度大大加快D识别序列与原来的完全不同5()下列五个DNA片段中含有回文结构的是A.GAAACTGCTTTGACB. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAGD. GAAACTGCAGTTTC6 ()关于cDNA的不正确的提法是：A同mRNA互补的单链RNAB同mRNA互补的含有内含子的DNAC以mRNA为模板合成的双链RNAD以上都不正确7()下列有关连接反应的叙述，错误的是A,连接反应的最佳温度为37 °CB,连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%C,连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于ImMD,连接酶通常应过量2-5倍8( )T4 -DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是A. 2' -OH 和5' —PB. 2' -OH 和3'-PC. 3'-OH 和5' —PD. 5'-OH 和3' -P9()载体的功能是A.外源基因进入受体的搭载工具B.不能为外源基因提供整合能力C.不能提供复制能力D.不能为外源基因提供表达能力10()黏性末端连接法，不仅操作方便，而且A产生新切点B易于回收外源片段C载体不易环化D影响外源基因的表达11()下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大？A质粒B黏粒C酵母人工染色体(YAC)D X噬菌体12()考斯质粒(cosmid)是一种A.容量最大一种载体B,由X-DNA的cos区与一质粒重组而成的载体C.是一种单链DNA环状载体D,不能在受体细胞内复制，但可以表达13()某一重组DNA 的载体部分有两个BamHI酶切位点。
基因工程期末试题及答案
基因工程期末试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 基因工程是指利用现代生物技术手段对DNA进行操作和控制的一种技术。
2. 基因工程的主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
3. DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
4. 在基因工程中，限制性内切酶用于切割DNA分子，产生特定片段。
5. 基因工程可以产生转基因生物，通过对生物基因进行改造，使其具有特定的特性。
6. CRISPR/Cas9是一种常用的基因编辑工具，可以精确地修改基因组中的特定片段。
7. 基因工程在医学领域可以用于基因治疗，通过修复或替换异常基因，治疗遗传性疾病。
8. 在农业领域，基因工程可以用于改良作物，提高产量和抗病虫害能力。
9. PCR是一种常用的基因扩增技术，可以通过复制DNA片段来放大特定基因。
10. DNA梯度离心是基因工程中常用的分离DNA片段的方法。
二、问答题（每题10分，共30分）1. 请简要介绍基因工程的基本原理和主要方法。
基因工程的基本原理是通过对DNA进行操作和控制来改变生物的遗传性状。
其主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
基因克隆是通过将特定DNA片段放入载体中，然后转化到宿主细胞中，使重组DNA在宿主细胞中大量复制。
PCR是一种基因扩增技术，通过在DNA复制过程中加入特定引物，使特定基因片段在体外大量扩增。
DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
2. 什么是转基因生物？请举例说明。
转基因生物是指经过基因工程改造，将外源基因导入到目标生物体中，使其具有新的遗传性状的生物。
例如，将耐旱基因导入水稻，使其具有抗旱能力；将Bt毒素基因导入棉花，使其具有抗虫能力。
3. 基因工程在医学领域有哪些应用？举例说明。
基因工程在医学领域可以用于基因治疗、疫苗研发等。
例如，利用基因工程技术可以修复或替换患者体内异常基因，治疗遗传性疾病。
另外，基因工程也可以用于疫苗研发，通过基因工程技术将病原体的基因导入宿主细胞，产生病原体的抗原蛋白，从而刺激免疫系统产生抗体，用于预防传染病。
基因工程期末考试试题及答案
基因工程期末考试试题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然淘汰答案：B2. 下列哪项不是基因工程常用的工具酶？A. 限制性内切酶B. DNA连接酶C. 反转录酶D. 聚合酶链反应酶答案：C3. 基因枪技术主要用于：A. 植物基因转化B. 动物基因转化C. 微生物基因转化D. 病毒基因转化答案：A二、填空题1. 基因工程中，常用的载体有________、________和________。
答案：质粒、病毒、人工染色体2. 基因工程中，________是基因表达的调控元件。
答案：启动子三、简答题1. 请简述基因工程的基本步骤。
答案：基因工程的基本步骤包括：目标基因的获取、目标基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有重组DNA的宿主细胞、目的基因的表达和检测。
2. 基因工程在医学领域的应用有哪些？答案：基因工程在医学领域的应用包括：生产重组蛋白质药物、基因治疗、疾病诊断、疫苗开发等。
四、论述题1. 论述基因工程对农业生产的影响。
答案：基因工程对农业生产的影响主要体现在以下几个方面：提高作物的抗病虫能力、增强作物的抗逆性、改善作物的营养价值、提高作物的产量和质量、促进农业可持续发展。
2. 基因工程在环境保护中的应用。
答案：基因工程在环境保护中的应用主要包括：开发生物修复技术，用于污染土壤和水体的净化；利用基因工程改造微生物，用于处理工业废水和废气；通过基因工程改良植物，用于重金属污染土壤的修复等。
五、案例分析题1. 某公司利用基因工程技术成功开发了一种抗虫棉，该抗虫棉能够减少农药的使用，降低农业生产成本。
请分析该技术可能带来的社会、经济和环境效益。
答案：该技术可能带来的社会效益包括提高农民的生活质量，减少因农药使用带来的健康风险。
经济效益包括降低农药成本，提高作物产量，增加农民收入。
环境效益包括减少农药对环境的污染，保护生态平衡，促进农业的可持续发展。
武生院基因工程期末试题
2013-2014年度第二学期基因工程期末考试卷型：A考试时间：90分钟满分：100分一、名词解释（3X 5）限制性内切酶（或其它工具酶）：能在特异位点上催化双联DNA分子断裂，产生相应的限制性DNA片段荧光定量PCR所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法（半定量PCR是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过mRNA反转录成cDNA再进行PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA勺相对数量）星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端转基因技术（或转基因动植物等）就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。
二、填空（1 X 15）1. Cosmid实际上是由cos位点和质粒构成的杂合载体,也可以说是带有cos序列的质粒。
2. 超螺旋质粒DNA开环质粒DNA线状质粒DNA在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒＞线状质粒＞开环质粒。
3. 质粒DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。
4. 基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。
5. 设计引物是一般要求C+G的比例在40%-60%,长度在17-30bp 。
6. BAC载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。
三、选择题（2X 15,实卷应是1X 35）1. 基因工程创始人（D）A A. KornbergB W. GilbertC P. BergD S. Cohen2. 迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C）A. 既可以作用于双链DNA，又可以作用于单链DNAB. 只能作用于单链DNAC. 只能作用于双链DNAD. 只能作用于RNA3. 氨苄青霉素的工作原理为（A ）A. 可以抑制细胞壁肽聚糖的合成B.可以抑制核糖体的转位C. 可以与核糖体50S亚基结合并抑制蛋白质合成D. 可以与核糖体30S亚基结合并抑制蛋白质合成4. 反转录酶是一种（C ）A. 依赖DNA的DNA聚合酶B. 依赖DNA的RNA聚合酶C.依赖RNA的DNA聚合酶D. 依赖RNA的RNA聚合酶5.11类限制性内切核酸酶（A ）A. 仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供B. 限制性识别非甲基化的核苷酸序列C. 有外切核酸酶和甲基化酶活性D. 仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供6. 下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是II类酶的识别序列（C）A. GAATCGB.AACCTTC. GATATCD.ACGGCA7. （多选）在基因工程中，可用碱性磷酸酶（AB ）。
基因工程期末考试题及答案
基因工程期末考试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 基因工程中常用的工具酶是：A. 纤维素酶B. 限制性内切酶C. 淀粉酶D. 过氧化氢酶答案：B2. 下列哪项不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的获取B. 基因的表达C. 基因的克隆D. 基因的测序答案：D3. 基因枪法是一种：A. 植物转基因方法B. 动物转基因方法C. 微生物转基因方法D. 所有生物的转基因方法答案：A4. 重组DNA技术中，通常使用哪种质粒作为载体？A. 质粒DNAB. 线粒体DNAC. 核糖体RNAD. 染色体DNA答案：A5. 基因工程中，目的基因的表达通常需要：A. 启动子B. 终止子C. 增强子D. 所有选项答案：D二、填空题（每空2分，共20分）1. 基因工程是指按照人们的意愿，将不同来源的基因在体外构建杂合DNA分子，然后导入到活细胞和生物体内，以改变生物的遗传特性并取得新品种或新产品。
2. 基因工程中常用的宿主细胞有大肠杆菌、酵母菌和________。
答案：哺乳动物细胞3. 基因工程中，________是连接目的基因和载体DNA的关键酶。
答案：DNA连接酶4. 目的基因的表达需要________和________的协同作用。
答案：启动子；终止子5. 基因工程产品在医学领域的应用包括生产________、________和基因治疗等。
答案：重组蛋白；单克隆抗体三、简答题（每题10分，共30分）1. 请简述基因工程在农业中的应用。
答案：基因工程在农业中的应用主要包括提高作物的抗病性、抗虫性、抗旱性和提高作物的产量和品质。
例如，通过基因工程培育的抗虫棉可以减少农药的使用，提高棉花的产量和质量。
2. 基因工程在医学领域有哪些应用？答案：基因工程在医学领域的应用包括生产重组蛋白药物、单克隆抗体、基因治疗和疫苗开发等。
例如，利用基因工程技术生产的胰岛素可以治疗糖尿病，单克隆抗体用于治疗癌症和自身免疫性疾病。
3. 请解释什么是转基因生物，并简述其潜在的风险。
基因工程专题测试题.docx
扬州大学附属中学东部分校2015 寒假高二生物选修《基因工程》专题测试题班级学号姓名一、选择题1．有关蛋白质合成的叙述，不正确的是A．终止密码子不编码氨基酸B．每种 tRNA 只运转一种氨基酸C． tRNA 的反密码子携带了氨基酸序列的遗传信息D．核糖体可在mRNA上移动2．酶 A、 B、 C 是大肠杆菌的三种酶，每种酶只能催化下列反应链中的一个步骤，其中任意一种酶的缺失均能导致该菌因缺少化合物丁而不能在基本培养基上生长。
现有三种营养缺陷型突变体，在添加不同化合物的基本培养基上的生长情况如下表：由上可知：酶A、 B、 C 在该反应链中的作用顺序依次是A．酶 A、酶 B、酶 C B．酶C．酶 B、酶 C、酶 A D．酶A、酶C、酶C、酶B、酶BA3．利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。
下列各项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是A．棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因B．大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNAC．山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列D．酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白4．已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有 3 个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性 DNA分子在 3 个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、 c、 d 四种不同长度的 DNA 片段。
现在多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有 1 个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的 DNA片段种类数是线性 DNA分子的酶切示意A． 3B． 4C．9D． 125．现有一长度为 1000 碱基对（ bp）的 DNA分子，用限制性核酸内切酶EcoRI 酶切后得到的DNA分子仍是 1000bp，用 KpnI 单独酶切得到 400bp 和 600bp 两种长度的 DNA分子，用 EcoRI 、KpnI 同时酶切后得到 200bp 和 600bp 两种长度的 DNA分子。
基因工程概论期末考试
一、名词解释(20’)引物、克隆、探针、转化率、重组率、基因工程、分子克隆技术、限制性核酸内切酶1、基因工程基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。
上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。
2、基因表达是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子3、限制性核酸内切酶能特异性识别双链DNA某段特殊序列，并切割DNA双链的酶，主要存在于原核细菌中，主要作用是保护自身DNA不受限制，及破坏外源DNA使之迅速降解4、重组率：重组率= 含有外源DNA的重组分子数/ 载体分子总数在常规实验条件下，重组率一般为25-75%；重组率是衡量连接反应效率的重要指标，较高的重组率可以大大简化DNA重组的后续操作5、探针一小段单链DNA或RNA片段，用于检测与其互补的核酸序列，双链DNA加热变性成为单链，随后用放射性同位素(P-32常用)、荧光燃料或酶标记成为探针1 U DNA连接酶的酶活性在最佳反应条件下15 ℃反应1h，完全连接 1 mg l-DNA（Hind III片段）所需的酶量二、选择题1、重组乙肝疫苗是由重组酵母或重组CHO工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原，经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。
前者为重组酵母乙型肝炎疫苗，后者为重组CHO乙型肝炎疫苗2、基因工程用于药物筛选模型的战略3、控制质粒拷贝数的意义是使外源蛋白在细胞内更稳定4、酵母作为受体，比大肠杆菌的优势在于大肠：原核酵母：真核，具有多种细胞器，在用于生产需加工分泌的蛋白质时比大肠杆菌有优势5、分子杂交的化学本质是形成氢键6、PCR定点突变DNA的方法是碱基的添加、删除、点突变7、双链DNA切开后，两链末端基团是5'-磷酸基和3'-羟基的末端『五菱三枪』8、限制性核酸内切酶缓冲液中，DTT的功能是还原，抗氧化。
基因工程考核试题标准答案及评分细则.doc
《基因工程技术》题库第一章概论一、名词解释题基因，基因工程技术，内含子，外显子%1.简答题1.基因具有什么功能？2.基因工程技术的主要操作内容是什么？3.用图示筒要说明基因工程技术的技术路线。
4 .简述基因工程技术的巨大意义有我国在该领域取得的成就?5.生物制药专业的学生为什么要学习基因工程技术？第二章DNA重组一、名词解释题遗传密码，变性，复性，复制子，翻译与转录，基因突变与突变基因，表达二、简答题1.DNA的组成单位是什么？组成元素有哪些？组成成分是什么？2.基因突变的生物学效应是什么？3.D NA的复制与转录有何异同点？如何利用基因突变为制药服务？4 .简述生物物种的遗传稳定性和进化原理与DNA的性质与功能的关系第三章植物基因工程技术一、名词解释题转基因植物，植物细胞反应器，抗逆性，叶盘法二、简答题1.从用途出发，转基因植物FI前可以分为儿类？2.图示植物遗传转化基本过程3.简述农杆菌介导法生产转基因植物的注意事项。
4.植物基因工程技术研究应用在医药上的优势是什么？5.什么是抗虫转基因植物？第四章动物基因工程技术一、名词解释题动物乳腺生物反应器，转基因动物，显微注射法，胚胎干细胞1.简述转基因动物技术路线2.显微注射法制备转基因动物的主要过程及注意事项是什么？3.简述动物基因工程技术与医药领域的应用。
一、名词解释题细胞因子，基风工程技术抗体，基风工程技术疫苗，基因治疗二、简答题1.举例说明细胞因子的种类、功能及其临床应用2.简述基因工程技术抗体种类及结构特点3.举例说明基因工程技术激素类药物及其临床应用4.简述基因诊断和治疗的原理第六章基因工程技术工具酶一、名词解释题限制性内切酶，平末端与粘性末端，酶活性单位，回文序列二、简答题1.限制性内切酶的特点与使用注意事项有哪些？2.影响限制性内切酶反应的因素有哪些？3.简述限制性内切核酸酣在基|大I工程技术中的作用。
4.举例说明不同类型DNA片段是如何连接的。
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2013-2014 年度第二学期基因工程期末考试
卷型： A 考试时间： 90 分钟满分：100分
一、名词解释（ 3×5）
限制性内切酶 ( 或其它工具酶 ) ：能在特异位点上催化双联 DNA分子断裂，产生相应的限制性 DNA片段
荧光定量 PCR: 所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用
荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法（半定量 PCR: 是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过 mRNA反转录成cDNA，再进行 PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量）星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段
同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端
转基因技术（或转基因动植物等）：就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的
生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。
二、填空（ 1×15）
1.Cosmid 实际上是由 cos 位点和质粒构成的杂合载体，也可以说是带有 cos 序列的质粒。
2.超螺旋质粒 DNA、开环质粒 DNA、线状质粒 DNA 在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒>线状质粒 >开环质粒。
3.质粒 DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。
4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。
5.设计引物是一般要求 C+G的比例在 40%-60%，长度在 17-30bp 。
6.BAC 载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。
三、选择题（ 2× 15，实卷应是1×35）
1.基因工程创始人（ D）
A A. Kornberg
B W. Gilbert
C P. Berg
D S. Cohen
2. 迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（
A.既可以作用于双链DNA ，又可以作用于单链
B. 只能作用于单链DNA
C）DNA
C.只能作用于双链 DNA
D.只能作用于 RNA
3.氨苄青霉素的工作原理为（ A ）
A. 可以抑制细胞壁肽聚糖的合成
B. 可以抑制核糖体的转位
C. 可以与核糖体 50S 亚基结合并抑制蛋白质合成
D. 可以与核糖体 30S 亚基结合并抑制蛋白质合成
4.反转录酶是一种（ C）
A. 依赖C. 依赖DNA的RNA
的DNA聚合酶
DNA聚合酶
B.
D.
依赖
依赖
DNA的 RNA聚合酶
RNA的 RNA聚合酶
5.II类限制性内切核酸酶( A )
A．仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供B．限制性识别非甲基化的核苷酸序列
C．有外切核酸酶和甲基化酶活性
D．仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供
6.下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是II 类酶的识别序列 (C)
A.GAATCG
B.AACCTT
C.GATATC
D.ACGGCA
7、（多选）在基因工程中，可用碱性磷酸酶 ( AB ) 。
A．止 DNA 的自身环化B．同多核苷酸激酶一起进行
DNA 的 5’端标记C．制备突出的 3’端
D．上述说法都正确
8.K1enow 酶与 DNA 聚合酶相比，前者丧失了( C ) 的活性。
A．5’→ 3’合成酶 B ．3’→ 5’外切酶
C．5’→ 3’外切酶D．转移酶
9.自然界中存在的植物植物基因工程载体是（ D）
A.YAC
B.根癌农杆菌
C. Puc18
D.Ti质粒
10．质粒具备下列特征，因此适合作为克隆载体，除了(B) 。
A．赋予宿主细胞某种可检测的特性
B．甲基化防止宿主的限制性内切核酸酶对其降解
C．独立复制的能力
D．可复制自身 DNA 以及插入的外源DNA
11．用碱法分离质粒DNA时，染色体 DNA之所以可以被除去，是因为(C) 。
A．染色体 DNA断成了碎片
B．染色体 DNA分子质量大，而不能释放
C．染色体变性后来不及复性
D．染色体未同蛋白质分开而沉淀
12.DNA提取过程中，异戊醇的作用是(D) 。
A．使蛋白质脱水 B ．使 DNA脱水
C．帮助 DNA进入水相 D．减少气泡，促进分相
13.PCR反应的必备条件是 (B) 。
A. 至少有 100 个起始 DNA分子 B ．拟扩增的目的 DNA片段的部分序列信
息 C. 扩增需要 cDNA模板 D. 至少 100kb 长度的模板
14.你打算扩增下面所示的两段序列之间的 DNA，
5’-GACCTGTGGAAGC----------------------CATACGGGATTG-3 ’ 3 ’
-CTGGACACCTTCG-----------------------GTATGCCCTAAC-5’ 最适合的引物序列是（ B）。
A．引物 1，5’-CTGGACACCTTCG引物 2，5’-GTATGCCCTAAC
B．引物 1，5’-GACCTGTGGAAGC引物 2，5’-CAATCCCGTATG
C．引物 1，5’-CGAAGGTGTCCAG引物 2，5’-GTTAGGGCATAC
D．引物 1，5’-GCTTCCACAGGTC引物 2，5’-CATACGGGATTG
15、Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段，而Northern印迹则是( C )。
A．用RNA 探针检测DNA 片段C．用 DNA 探针检测 RNA 片段D B ．用
．用
RNA 探针检测 RNA 片
段DNA探针检测蛋白质片段
四、简答题（ 5 题× 6）
1、基因工程的操作步骤是什么？制备目的基因方法有哪些？（或CTAB、SDS原理？）答： 1. 获取目的基因 2. 从大肠杆菌中分离质粒 3. 酶切目的基因与质粒4.DNA连接酶连接目的基因与质粒 5. 导入受体细胞表达 6. 筛选与鉴定
获取目的基因方法：（ 1）以氨基酸序列为基础的功能克隆法（2）以核苷酸序列为基础的同源序列克隆法（3）基因组 DNA文库（ 4）cDNA文库（ 5）图位克隆法（6）转座子标签法（ 7） T-DNA插入法（ 8） mRNA差异显示法（ 9）化学合成法（10）直接分离法（ 11） PCR分离法
2、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？
答：将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。
载体应具备：
①在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA 片段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于筛选；
④其它：有一定的拷贝数，便于制备。
⑤遗传稳定3、影响限制性内切酶的活性因素？
答：① DNA的纯度② DNA甲基化程度③ DNA的分子结构④限制性核酸内切酶
的缓冲液⑤酶切消化反应的时间和温度⑥反应体积和甘油浓度
4、简述 cDNA文库的构建过程。
答：⑴细胞总 RNA的提取和 mRNA的分离
⑵第一链合成：由 mRNA到 cDNA的过程为反转录，由反转录酶催化。
⑶第二
链合成：①自身引物合成法②置换合成法③引导合成法④引物—衔接头合成法
⑷双链 cDNA里连接到质粒或噬菌体载体并导入大肠杆菌中繁殖
5、常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么？（备选）
答：限制性内切核酸酶 ,DNA聚合酶和 Klenow 大片段 ,DNA连接酶 ,
碱性磷酸酶 , 末端脱氧核苷酸转移酶 .
限制性内切核酸酶：能够识别特异的 DNA碱基序列， DNA 碱基序列往往呈回文对称结构；
DNA 聚合酶 a位于细胞核内，也许是复合物，有催化细胞增生的作用；Klenow 大片段：它也可以通过基因工程得到，分子量为76kDa 。
DNA连接酶：负责双链 DNA中相邻 3`-OH 与 5`- 磷酸基团之间的磷酸二酯键的形成。
碱性磷酸酯酶：从DNA或 RNA的三磷酸核苷酸上除去
移酶的作用是将脱氧核糖核苷酸通过磷酸二酯键加到
5` 磷酸根残基。
末端转DNA分子的 3`-OH 末端。
6、重组分子筛选方法有哪些？并简述蓝白斑筛选原理。
（或基因工程在工农商的应用）
答：重组体的筛选方法： 1 遗传表型筛选法 2 结构特征筛选法 3 核酸分子杂交筛
选法 4 免疫化学筛选法。
（ Lac Z
-蓝白斑筛选原理：- 半乳糖苷酶基因），其上有外源 DNA的插入位点。
受体菌基因组中
IPTG 诱导表达。
载体和受- 半乳糖苷酶。
互补而产生的lacZ+细
菌在诱导剂 IPTG（异丙基 - β-D- 硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal （5- 溴-4- 氯 -3- 吲哚 - β-D- 半乳糖苷）存在时产生蓝色沉淀物，使菌落显蓝色。
如果外源 DNA插入到质粒的多克隆位点后，无法实现互补，使得带有重组质粒
的细菌形成白色菌落。
五、综合论述（ 15 分）
现有 pBR322质粒载体，你想将小鼠（真核）中的一个序列已知、编码单体酶蛋
白的基因在大肠杆菌（原核）中表达，怎样进行？你又如何确保最终能得到产物?请设计实验详细说明。