蔬菜水果中还原型Vc的测定(分光光度法)
紫外可见分光光度法测定果蔬中的维生素C
第 ３２ 卷第 １ 期 ２００９ 年 ０１ 月
ｔ／ｍｉｎ 图 1 ＶＣ 在偏磷酸和醋酸中的稳定性
2. 2 最大吸收峰的选择 准确吸取 ２．０ ｍＬ 的 ＶＣ 标准溶液于 ５０ ｍＬ 容量
瓶中用蒸馏水定容，然后以蒸馏水作空白，在 １９０～ ４００ ｎｍ 的波长范围内多次进行光谱的连续扫描，确 定 ＶＣ 最大吸收峰在 ２４６．０ ｎｍ。 2. 3 维生素 C破坏剂的选择
Ｖｏｌ．３２ Ｎｏ．１ Ｊａｎ ． ２００９
紫外可见分光光度法测定果蔬中的维生素 Ｃ
张立科 1，田水泉 1，谢太平 1，张洪浩 1，范顺利 2
（１．河南许昌学院化学化工学院，河南 许昌 ４６１０００；２．河南师范大学化学与环境科学学院，河南省环境污染控制重点实 验室，河南 新乡 ４５３００７）
[ 摘 要] 在 ０～４５０ μｇ／ｍＬ 线性范围内，以 Ｃｕ２＋ 作催化剂，以溶解氧将还原型维生素 Ｃ（ＶＣ）氧化为 ２４６．０ ｎｍ 处无吸收的氧
完全破坏，测出的仅是 Ｃｕ２＋ 的吸光度值。本文提出了
反应中 Ｃｕ２＋ 不作氧化剂而作为催化剂来催化溶液中
的溶解氧去氧化还原型 ＶＣ，使之在 ２４６２）。Ｃｕ２＋ 的量不影响
ＶＣ 在 ２４６．０ ｎｍ 处的吸光度，Ｃｕ２＋ 本身本底吸收小。确
定 Ｃｕ２＋ 用量为 ３０ μｇ。
ＺＨＡＮＧ Ｌｉ－ｋｅ１，ＴＩＡＮ Ｓｈｕｉ－ｑｕａｎ１，ＸＩＥ Ｔａｉ－ｐｉｎｇ１，ＺＨＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｈａｏ１，ＦＡＮ Ｓｈｕｎ－ｌｉ２
分光光度法测定水果蔬菜及药物中vc
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分光光度法测定水果蔬菜及药物中vc
•2. 标准曲线的绘制
• 加入准确吸取的40μg/L抗坏血酸标准溶液1.00、2.00、 3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 mL分别置于系列洁净50 mL 容量瓶中，依次加入100 μg/L Fe3+ 标准溶液2.0 mL，摇匀； 再加入5.0 mL 0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；加 入5.0 mL HAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再加入2.0 mL 1 % （W/V） 氟化钠溶液，用水稀释至50 mL，摇匀。以相应试 剂空白作参比，在最大测定波长λmax处测定吸光度As, 用 Excel电子表格绘制标准曲线，并计算回归方程。
演讲完毕，谢谢听讲!
再见，see you again
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2020/11/10
分光光度法测定水果蔬菜及药物中vc
•2、标准曲线的绘制与待测样品测定
标准溶液
水果 Vc药片
吸取溶液
/mL
1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00
V1
V2
Vc的含量 /μg.mL-1
吸光度A
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•附:光度计的使用说明
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分光光度法测定水果蔬菜及药物中vc
分光光度法测定水果蔬菜及药物中vc
•六、数据记录和结果处理 •1、吸收曲线的绘制
•分光光度计型号：
比色皿厚度： 年 月 日
λ/nm 420 430 440 450 460 470 480 490
A λ/nm 500 510 520 530 540 550 560
分光光度法测定果蔬中Vc的含量
Ｄｉｖｉｄｅ ａｌｌ Ｌｕｍｉｎｏｓｉｔｙ Ｌａｗ ａｎｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ Ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｖｉｔａｍｉｎ Ｃ ｉｎ ｔｈｅ Ｆｒｕｉｔｓ ａｎｄ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ
ＣＡＯ Ｓｈｕ—ｊｉｅ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｎａｎｙａｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｙａｎｇ ４７３０６１，Ｃｈｉｎａ）
作者： 作者单位： 刊名：
英文刊名： 年，卷(期)： 被引用次数：
曹书杰， CAO Shu-jie 南阳师范学院,化学系,河南,南阳,473061
河南教育学院学报（自然科学版） JOURNAL OF HENAN INSTITUTE OF EDUCATION(NATURAL SCIENCE) 2005，14(3) 1次
Ｏ．１８ Ｏ．１６ Ｏ．１４ Ｏ．１２ ０．１０ 《Ｏ．０８ Ｏ．０６ ０．０４ ０．０２
ｐｈｅｎｈｎｌ图２显色源自用■对吸光度的影响ｐＨ图３酸度对吸光度的影响
图４反应时问对吸光度的影响
Ｖｃ／（１ ０。‘ｍｏｌ／１） 图５标准曲线 ２．３．６果蔬中ｖｃ的测定 取去皮橙子、苹果、梨、白萝卜各５０９，在榨汁机中分别榨 汁，将其定容至２５０ｍｌ容量瓶中，再各取２ｍｌ于５０ｍｌ容量瓶 中，加４ ｍｌＦｅ（Ⅲ）标准液，６ｍｌｐｈｅｌｌ，用Ｉｍｏｌ／ＬＨＡｃ定容，于暗 处放置２０分钟后，以空白试剂作参比，分别测其吸光度． 每种样品各测三次，求平均值．最后得样品中含Ｖｃ的量为： 橙子：０．１４１ ６０９／ｌＯＯｇ，苹果：０．０１１ ５８９／ｌＯＯｇ，梨：０．０１２ １ｉｓ／ｌＯＯｇ，白萝卜：Ｏ．０２５ ６５９／ｌＯＯｇ ２．４干扰物质 果蔬中含有的铁是以有机物形式存在，不与ｐｈｅｎ直接 络合．故不影响测定结果．
紫外分光光度法测定水果或蔬菜中的维生素C含量
2. 标准曲线的
绘制
1
2
3
4
5
6
7
8
标准抗坏血酸溶液加入体
积/mL
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1.0
9.9 9.8 9.7 9.6 9.5 9.4 9.2 9.0
总体积/mL
抗坏血酸溶液浓度 /(μg·mL-1）
10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0
3．消光值的测定：以蒸馏水为空白，在243 nm处 测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含 量（μg）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准 曲线。
（二）样品的测定
1．样品的提取：将果蔬样品洗净、擦 干、切碎、混匀。称取5.00 g于研体中， 加入2～5 mL 1% HCl，匀浆，转移到25 mL 容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明， 则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过 离心（10000 g, 10 min）来消除。
样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准
曲线，即可计算样品中维生素标准曲线的制作 1．抗坏血酸标准溶液的配制：用分析 天平准确称取抗坏血酸10 mg，加2 mL 10%盐酸，加蒸馏水定容至100 mL，混匀。 此抗坏血酸溶液的浓度为100 μg·mL-1。
93.4 计算
μ×V总
紫外分光光度法测定猕猴桃中Vc含量
紫外分光光度法测定Vc含量
1. 实验原理
1.紫外吸收光谱是基于物质的生色团和助色团的特性对紫外光谱的吸收，可用于物质的鉴定和结构分析。
2.维C在紫外光区（200-400nm）显示特征的吸收谱带，最大光吸收（λmax）为245nm。
因此可以用标准曲线法在245nm测样品吸光度，测得维C含量。
2 实验试剂
(I)1％的HAc溶液
(2)100ug/ml的Vc标准贮备液：准确称取0.010g的Vc，用1％的HAc定容至100mL。
(3)Vc标准使用液：吸取贮备液5．00mL，用1％HAc稀释至250mL(现用现配)。
(4)比色皿清洗剂
3 实验步骤
6.2 Vc的提取
称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～1.0 g 加酸研磨，多次过滤至50ml容量瓶中定容。
吸取10ml待测液溶液于试管。
6.2 标准曲线的绘制
分别吸取0.00、1.00、2.00、4.00、8.00、10.00ml维生素C标准溶液于10ml 比色管中用酸定容，用水稀释成一系列浓度分别为0.0、10、20、40、80、100μg/mL 维生素C标准溶液，分别测出其吸光度。
然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制出标准曲线。
该曲线是经过原点的一条直线，可求出该曲线的斜率。
6.3 Vc的测定
波长245nm处测定。
分光光度法快速测定蔬菜水果中VC 的含量
分光光度法快速测定蔬菜水果中VC 的含量实验原理VC 广泛存在于新鲜水果中, 它具有保持肌肤润滑、防止衰老、抗坏血酸等作用,是人体必需的主要维生素之一[1,2]。
VC 在水果中主要以还原型(ASA) 存在。
VC 又名抗坏血酸,能溶于水、乙醇和甲醇,而不溶于其他有机溶剂,具有酸味和还原性,有4 种异构体,即L- 抗坏血酸、D- 抗坏血酸、L- 异抗坏血酸、D- 异抗坏血酸。
天然抗坏血酸主要以L- 抗坏血酸为主,其效力最高。
抗坏血酸在合适的条件下,可氧化成脱氢抗坏血酸, 脱氢后的L- 脱氢抗坏血酸在生物体内可还原为L- 抗坏血酸,且这种变化是可逆的,故仍有生物活性。
脱氢抗坏血酸可进一步被氧化,生成二酮古洛糖酸,而这一过程是不可逆的。
在许多水果和蔬菜中,VC 主要以还原型抗坏血酸存在。
VC 的固体较稳定,水溶液最容易受氧化,所以测定VC 的准确性很大程度上取决于分析技术。
蔬菜中VC 含量的测定一般采用2, 6- 二氯靛酚滴定法、碘量法、2, 4- 二硝基苯肼法和萤光分光光度法等[3]，这些方法都有所用试剂不稳、操作程序复杂、费时等缺点，为此，笔者首先通过吸收光谱曲线法确定VC 的水溶液的最大吸收波长为267 nm,进而通过工作曲线法快速测定蔬菜水果中VC 的含量，本方法与常规方法比较, 具有准确、快速、稳定、试剂易得等优点。
实验器材：756 型紫外－可见分光光度计；榨汁机；50 mL 容量瓶；1 000 mL 容量瓶；10 mL吸量管；常见水果（西红柿，黄瓜，苹果）。
VC 标准溶液（25.00μg/mL）：称取0.250 0 gVC，溶于蒸馏水中，定量转移至100 mL 容量瓶中，稀释至标线，摇匀。
用吸量管吸取10.00 mL 定量转移入1 000 mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻线，摇匀，因为VC 水溶液最容易受氧化，要求现配现用。
实验步骤：1 标准系列溶液的配制分别吸取上述溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL 于6 个洁净且干燥的50 mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至标线，摇匀。
蔬菜水果中维c含量的测定
蔬菜水果中维c含量的测定摘要：利用维生素Ｃ对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，用紫外分光光度法测定５种常见果蔬中维生素Ｃ的含量。
最大吸收波长为２４３．４ｎｍ，标准曲线方程为Ａ＝０．０５２８ｃ－０．０５６８，相关系数为Ｒ２＝０．９９９６。
５种果蔬中维生素Ｃ含量［ｍｇ·（１００ｇ）－１］分别为：黄瓜２０．５、苹果１４．９、西红柿１８．４。
关键词：紫外分光光度法；维生素Ｃ；果蔬维生素Ｃ又称抗坏血酸，是一种水溶性维生素。
能预防牙龈出血及萎缩、提高人体免疫力，对坏血病、动脉硬化、贫血等有一定疗效。
实验１．１材料、试剂与仪器:青椒、橙子、黄瓜、苹果、西红柿，市售抗坏血酸、ＨＣｌ、ＮａＯＨ均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。
ＵＶ１１０２型紫外可见分光光度计，ＴＢ－２１４型电子天平１．２方法１．２．１标准溶液的配制准确称取０．０５０ｇ抗坏血酸，加１０ｍＬ１０％ＨＣｌ溶解，用蒸馏水定容至５００ｍＬ，混匀，即得１００μｇ·ｍＬ－１维生素Ｃ标准溶液。
１．２．２吸收曲线的绘制移取１０ｍＬ维生素Ｃ标准溶液于５０ｍＬ比色管中，稀释至刻度，混匀。
用１ｃｍ石英比色皿，以蒸馏水为参比，在２００～３００ｎｍ波长范围内用紫外可见分光光度计自动扫描。
绘制吸光度与波长关系曲线，以最大吸收波长作为测定波长。
１．２．３标准曲线的绘制分别准确移取１００μｇ·ｍＬ－１维生素Ｃ标准溶液０．５ｍＬ、１．０ｍＬ、１．５ｍＬ、２．０ｍＬ、２．５ｍＬ、３．０ｍＬ、４．０ｍＬ、５．０ｍＬ于５０ｍＬ容量瓶中，定容至刻度。
以水为参比，在最大吸收波长处测定吸光度，以维生素Ｃ浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
１．２．４果蔬样品的处理将青椒、西红柿、黄瓜洗净晾干，橙子和苹果取肉，分别称取１０．００ｇ于研钵中，各加入１％ＨＣｌ１０ｍＬ，匀浆，转移到５０ｍＬ容量瓶中，稀释至刻度，混匀。
移至离心管中离心１０ｍｉｎ，取上清液即为待测果蔬提取液。
分光光度法测定水果中Vc的含量(精)
综合性、设计性实验报告(本科学生姓名：杨道林王丽萍杨文英张崇斌学号：2011021157201102114320110211442011021160专业：化学班级：2011级实验课程名称：分光光度法测定水果中Vc的含量指导教师及职称：郭老师高级实验师开课学期：2012 至 2013 学年下学期上课时间：2013 年 6 月 9 日一、实验设计方案实验序号及名称：分光光度法测定水果中Vc的含量实验时间：2013.6.18-2013.6.19小组合作：是〇否〇小组号： 4号成员：杨道林、杨丽萍、杨文英、张崇斌一、实验目的：1.了解柠檬、荔枝中Vc的含量2. 学习如何选择吸光度分析的实验条件3.巩固分光光度法的应用二、实验设备及仪器组成：1、实验试剂：a、Vc溶液（称取0.1gVc）配成500ml的储备液，移取25.00ml(储备液稀释至250ml b、铁标准溶液（100ug/ml）(准确称取0.04317gNH4Fe(SO42.12H2O,置于烧杯中，加入10ml,6mol/L的盐酸和适量蒸馏水，转至500ml 容量瓶中，稀释至刻度 c、邻二氮菲：1.5g/L.d、HAc溶液.e、NaOH溶液，0.1mol/L仪器：分光光度计、50ml比色管、500ml,250ml容量瓶、吸量管、移液管三、理论依据及实验原理：Vc分子中有烯二醇基能还原三价铁为二价铁，二价铁与phen 生成橙红色络合物反应如下:2Fe3++C6H8O6=2Fe2++C6H6O6+2H+二价铁与phen生成的橙红色络合物，此物在510nm处有最大吸收，其颜色的深浅在一定范围内与Vc含量成正比。
查阅资料知酸度控制在PH4.3至6.2 ，反应时间控制在15min 为宜。
4、实验内容、步骤(用流程图表示及注意事项：1.吸收曲线的绘制：两支比色管，①0.00mlvc标液②2.00ml标液分别加入2.00ml phen和4mlFe3+标液，1mol/LHAc定容暗处放置15min 440-560nm间每隔10nm测一次②号的吸光度A2. 显色剂容量的确定：7支50ml比色管分别加入4mlFe3+标液、2mlVc液和0.3ml、0.5ml、0.8ml、1.0ml、1.5ml、2ml、4ml、6 ml 1.5g/Lphen液，1mol/LHAc定容，暗处放15min，测吸光度。
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在蔬菜水果中含量丰富，易溶于水，酸性，以还原型抗坏血酸、脱氢型抗坏血酸、二酮古乐糖酸三种形式存在于食品中。
测食品中总Vc含量的方法：荧光法和2，4二硝基苯肼法。
测食品中还原型Vc的方法：分光光度法。
新鲜食品中Vc主要以还原型的形式存在，因此，本实验学习食品中还原型Vc的测定。
分装，1瓶/组
4.2 g/L固蓝盐B溶液（显色剂）：准确称取0.2g固蓝盐B，加蒸馏水溶液于100 ml棕色容量瓶中，稀释至刻度（室温下贮存可稳定3d以上）。
分装，1瓶/组
5.抗坏血酸标准储备液（0.1 g/L）：精密称取纯Vc粉末0.2000g，加20 mL2mol/L乙酸溶液溶解后移入100 mL棕色容量瓶中并定容，摇匀。冷藏保存（＜10℃下冷藏保存稳定2d）。
3试样的侧定
精密吸取按1.0 mL样液(约相当于抗坏血酸200µg以下)于10mL比色管中，以下按标准曲线测定方法依次加入其它试剂。加水稀释至刻度，混匀。室温(20℃-25℃)下放置20 min后，移入1 cm比色皿内，以零号管调节零点，于波长420 nm处测定吸光度A。从标准曲线上查出样液中抗坏血酸含量。
2个/组
四、试剂（所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂。）
1.乙酸溶液(2mol/L)：吸取11.6mL冰乙酸，加蒸馏水定容至100mL
分装，1瓶/组
2.乙酸溶液(0.5mol/L):吸取2.9mL冰乙酸，加蒸馏水定容至100mL
分装，1瓶/组
3. EDTA二钠盐溶液（0.25mol/L）：称取9.3g二钠水合EDTA二钠盐于蒸馏水中，加热溶液，放冷后定容至100mL。作用：是螯合剂，与金属离子螯合，避免有色的金属离子对实验的显色产生干扰。
若干，提前20min打开预热
2.10ml具塞玻璃比色管
10个/组
3.标签纸，记号笔
若干
4.组织捣碎机
2个
5.菜刀、菜板、一次性手套
6.棕色容量瓶100ml，胶头滴管
1个/组
7.移液管0.5ml，2ml
移液管1 ml，5 ml，吸小球
2个/组
1个/组
8.漏斗、滤纸
1个/组
9.托盘天平，
1个/组
10.烧杯100ml
一、实验目的
1.理解食物中维生素C的分布规律以及维生素C的理化特性。
2.掌握分光光度法测定食品中还原型Vc的原理、操作步骤、注意事项
二、实验原理
在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼-2-羟基丁酰内酯衍生物。在最大吸收波长420 urn处测定吸光度，与标准系列比较定量。
三、仪器
1.722分光光度计
六、数据记录
管号
0
1
2
3
4
5
6
7
8
样液
A420
七、数据处理
C
X= ——————— × 100
v1
m × —— × 1000
V2
式中：
X —试样中抗坏血酸的含量，mg/100g；
V1—测定时所取溶液体积，mL；
V2—试样处理液总体积，mL；
M —试样质量，g；
C—试样测定液中抗坏血酸的含量，µg；
不要切得太碎，以减少Vc的流失和还原型Vc的氧化。
分装，1瓶/组
6.抗坏血酸标准使用溶液(0.1 g/L):精密吸取5. 0 mL抗坏血酸标准储备溶液(2..0g/L)于1 00 mL棕色容量瓶中，加5 mL乙酸溶液(2 mol/L)，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于100μg抗坏血酸。临用时配制。
分装，1瓶/组
7.异戊醇：除生食物匀浆时产生的气泡
结果保留, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.5,2.0mL抗坏血酸标准使用液(相当于抗坏血酸0, 10.0, 20.0 ,40.0, 60.0, 80.0 ,100.0 ,150.0, 200.0µg)，分别置于10 mL比色管中。各加0.3 mLEDTA二钠溶液(0.25mol/L),0.5 mL乙酸溶液(0.5mol/L),1.25mL固蓝盐B溶液(2g/L)，加水稀释至刻度，混匀。室温(20℃-25℃)下放置20 min后，移入1cm比色皿内，以零号管调节零点，于波长420 nm处测定吸光度A，绘制标准曲线。
2-3滴/次
8.蒸馏水
1瓶/组
五、实验步骤
1.蔬菜、水果:
样品采来后，整棵菜（不掰开）洗净吹干，均匀取样，稍切碎。称取可食部分50.0 g于捣碎机内，加同倍量的乙酸溶液(2 mol/L)捣成匀浆。用烧杯称取10.0 g匀浆(含0.2 g/kg以下抗坏血酸)于100mL棕色容量瓶内，加5mL乙酸溶液(2mol/L)，用水稀释至刻度，混匀。滤纸过滤，滤液备用。不易过滤的试样可用离心机离心后，上清液测定。