仪器分析8

a 根据不同浓度梯度的标准品谱图绘制一条横坐 标为样品含量纵坐标为色谱峰峰面积的标准曲线
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b 调用待测样品的分析图谱进行积分计算，得出 待测样品中喹乙醇的精确含量。
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实验步骤
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6 关机操作
用超纯水冲洗色谱柱，10min左右，再用50%甲 醇：50%水冲洗色谱柱20min左右，先关电脑，再 关主机，最后将废液倒掉，上机小瓶从机子上拿 出，将流动相的滤头保存在纯甲醇溶液当中。
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实验步骤
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仪器型号：安杰伦 HP—1100 高效液相色谱仪 4.1 4.1仪器型号：安杰伦 仪器型号：安杰伦HP 1100高效液相色谱仪
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实验步骤
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其他仪器与试剂 超声波清洗器 离心机 喹乙醇标准对照品(中国兽药监察所, 纯度99. 6 %) 处理样品的甲醇为分析纯 流动相用甲醇为色谱纯(进口)
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实 验 原理
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1 高效液相色谱仪的原理、分类和测定范围
: 色谱法 色谱法: 利用混合物中不同组分有着不同的物理性质，如吸附，溶 解，亲和，阻滞等作用不同，实现混合物分离及分析。 原理： 混合物进入流动相及固定相两相共存的系统内，由于不同 组分分子固有的特性不同，他们随流动相移动时，在两相间 有不同的分配。各组分在固定相中移动一定距离的时间是它 定性分析的标志。
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实 验 原理
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色谱分类： 按流动相的状态： 气相色谱（GC）:以气体为流动相; 液相色谱（LC）:以液体为流动相.
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按样品组分在两相间的分离机理分： 吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法 及超临界色谱法。
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按固定相的形式分：柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法。
仪器分析实验
高效液相色谱法测定饲料中 喹乙醇的含量
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主要内容
1 �2 �3 �4 �5 �6
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实验目的 实验原理 实验意义 实验步骤 讨论 注意事项
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实 验 目 的
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掌握高效液相色谱前处理方法即喹乙醇的提取方法 熟练掌握根据保留值用已知物对照定性的分析方法。 了解高效液相色谱仪的原理、分类和测定范围 掌握高效液相色谱的组成部分及各部分的作用 熟练掌握高效液相色谱仪的操作流程，基本具备独立操作 的能力
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混合标准品的配置 4.3. 4.3.混合标准品的配置 准确称取(精确至0.0001 g) 喹乙醇标准品, 用15%甲醇-水溶液分别配成100.0μg /m L 标准储备液, 使用时, 用稀释成不同浓度 的混合标准使用液。 20、10、8、4 μg /m L 的标准品。
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实验步骤
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日本兽药MRL 要求: 牛肉、猪、鸡肉鱼、虾类抗生素, 呋喃 唑酮(猪肉)、喹乙醇(牛、猪肉) 均不得检出。
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实 验 意 义
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我国目前正加紧实施饲料安全工程,加大对违规使用饲料药物 添加剂行为的打击力度。开展饲料及饲料添加剂中喹乙醇含 量检测工作非常重要。目前, 国内外有关喹乙醇的测定方法 主要有: 紫外光谱法, 薄层色谱法, 生物方法, 电化学方法等。 这些方法多用于单纯喹乙醇药粉的测定, 对于饲料中的喹乙 醇, 由于基体复杂, 干扰很大, 不易测定。采用高效液相色谱 法测定可以克服其他方法的缺点，准确定量。
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4.4 采用外标法上机测定 色谱柱: Agillent C18(3. 9 mm×150 mm, 4.5μ m) ;
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流动相: 甲醇- 水(体积比15∶85) ; 流速:1. 0 mL/ min ; 检测波长: 380 nm;（或者270nm） 进样量：20μl 柱温: 室温。
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实 验 原理
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3 定性分析
色谱条件一定时（固定相和操作条件等），物质具 有各自确定的保留值，可据此和标准品相比较进行 定性分析，因为，不同的物质可能会有相近的保留 时间，此时，应结合其他方法进行定性分析。
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实 验 原理
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4 定量分析：分离组分的质量（ mi ）或浓度（ ci ）与检测 定量分析：分离组分的质量（mi mi） 或浓度（ci ci） 器的响应信号（色谱峰面积或峰高）成正比：
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3.实验期间，要注意纪律，以免影响他人，做完实验后整 理好实验物品方可离开实验室。
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That’s all
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营养素, 并在体内参与新陈代谢和同化作用,提高抗 病能力 , 为较好的禽畜生长促进剂 , 相对其他兽药 , 添加成本较低,大部分饲料厂,特别是中小饲料厂多 用其作为畜禽配合饲料的药物添加剂。
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实 验 意 义
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由于喹乙醇是一种基因 毒剂、生殖腺诱变剂具有中 等明显的蓄积毒性、致突变、致畸和致癌性,饲料中 添加量过大或混合不均匀、饲喂时间过长等均能引 起鸡、鸭等禽畜中毒。因此, 饲料中喹乙醇的添加量 必须严格控制在允许量以内。
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实验步骤
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上机操作步骤 4.5 4.5上机操作步骤
� 1 将主机各模块接通电源，仪器开始自检
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2 打开电脑并连接色谱工作站 3 编辑或调用色谱分析方法、打开紫外灯预热30min 4 条件满足之后，先测定不同浓度梯度的标准品，再测定 待测样品
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实验步骤
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5 数据处理
mi = fi ⋅ Ai m
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mi = fi ⋅ hi 或 或 m
Ai，hi为该组分的色谱峰面积及峰高； fi为定量校正因 子，代表单位峰面积表示的质量，因为色谱仪的检测器对 相同质量的不同物质即使在相同条件下也有不同的灵敏 度，因而不能直接用色谱峰面积表示各组分的百分含量。 但是如果以定量校正因子来校正峰面积就能使它真实反映 试样各组分的含量。
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实 验 原理
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归一化法、内标标准曲线法、外标标准 定量分析方法： 定量分析方法：归一化法、内标标准曲线法、外标标准 。 曲线法、标准加入法 曲线法、标准加入法。
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归一化法只适用于试样中 全部组分都能出峰 的情况，内 归一化法只适用于试样中全部组分都能出峰 全部组分都能出峰的情况，内 标法较精确但内标物质很难选择，且价格昂贵，标准加 入法需向样品中加入标准品，外标法简单快速，结果较 可靠，综合考虑本实验采用外标法。
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4.饲料中喹乙醇的含量如何？是否检出？提出你对结果的看 法。�5.如何来自定本方法的可行性？25
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注意事项
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1.在称量样品时要防止样品掉到天平里，并确定天平处于 平衡状态，保证称量的准确性。
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2.在使用离心机时，离心管必须经过天平平衡，管内物质 密度要相当，对角线的两离心管不能一管放样品，一管放 水。如不经过平衡就开动离心机，会导致转头失去平衡而 转出离心机，造成人员伤亡。
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实 验 原理
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2 高效液相色谱的组成部分及各部分的作用
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实 验 原理
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贮液瓶：提供液相色谱分离 的流动相 高压泵：将流动相打到色谱 柱 进样器：将样品通过六通阀 进入到色谱柱 分离柱：根据组分在两相中 的不同的作用方式将组分分 离 检测器：检测分离出的组 分，并给出信号 记录仪：记录并处理数据
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实 验 意 义
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喹乙醇(olaquindox) 学名N- 羟乙基- 3- 甲基- 2- 喹啉酰胺1 ,4- 二氧化物, 其结构式见图1。
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图1: 喹乙醇的结构式 Fig. 1 Structure of olaquindox
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实 验 意 义
� 喹乙醇添加于饲料中 , 可使禽畜增加采食量 , 节约
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实 验 意 义
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我国农业部于1997年颁布的<允许作物饲料药物添加剂的兽 药品种及使用规定>中,已删除了喹乙醇作为鸡饲料添加剂的 内容;
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农业部于2003年发布的第235号文件中允许喹乙醇作为猪饲 料添加剂,但规定了最高残留量,肌肉和肝脏的残留量分别为 4mg/kg 50mg/kg。
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数据讨论要求
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本实验对学生数据讨论处理的要求： 1.在高效液相色谱仪的操作过程中应注意哪些问题？ 2.在样品处理过程中，那些步骤处理不当会带来误差？ 在本实验中，对你感兴趣或特别关注的某个会带来误差的 3. 3.在本实验中，对你感兴趣或特别关注的某个会带来误差的 步骤进行分析讨论。
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实 验 原理
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测定范围:HPLC几乎在所有学科领域都有广泛 应用，可以用于绝大多数物质成分的分离分 析，大约占有机物的80%左右。 它和气相色谱都是应用最广泛的仪器分析技术。 例如：环境中有机氯农药残留量分析、稠环芳 烃的分析、抗生素的分析、维生素的分析等等。
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实验步骤
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样品预处理 4.2 4.2样品预处理
100mL 容量瓶 100mL容量瓶
饲料 1.0-5.0g
甲醇 -水 60m L15% L15%甲醇 甲醇超声波振荡 15 min 振荡 振荡15 过 滤离心 μm滤膜 0.45 0.45μ 过滤上机