颅内消瘀汤对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内皮AMPK_eNOS信号的影响

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活血化瘀对血管内皮功能的影响

活血化瘀对血管内皮功能的影响王秀丽;周亚兴;李海燕【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2010(010)010【总页数】2页(P956-957)【作者】王秀丽;周亚兴;李海燕【作者单位】云南省怒江州食品药品检验所,怒江,673100;云南省怒江州食品药品检验所,怒江,673100;云南省怒江州食品药品检验所,怒江,673100【正文语种】中文【中图分类】R932目前人们己经开始认识到血管内皮细胞(VECs)不仅是血液和血管平滑肌的屏障，而且是高度活跃的代谢库，参与凝血及抗血栓形成，调节血管张力，影响血管通透性。

多学者发现血瘀症与血管内皮损伤有着密切联系，并利用活血化瘀药调节血管内皮细胞的内环境及其分泌功能，从而逆转内皮功能，己成为一个新的研究方向。

1 活血化瘀中药的临床应用及现代药理作用常用的活血化瘀药物有三七、生蒲黄炭、茜草、花蕊石、血余炭、水蛭、土鳖虫、三棱、莪术、姜黄、桃仁、大黄、牛膝、穿山甲、王不留行、当归、刘寄奴、延胡索、川芎、赤芍、丹参、红花、乳香、没药、泽兰、全蝎、地龙、蜈蚣、鸡血藤等。

临床上活血化瘀中药应用广泛，其中有的能够活血止血，有的能够破血散瘀，作用强弱不一，具体应用须根据辨证施治。

这在张锡纯《医学衷中参西录》中得到明显体现，他运用扶正化瘀治虚劳、益气活血治痿症、补气通络治痹症、解毒化瘀治痈肿、化瘀消痰治瘰疬、活血通络治癥积、行气活血治郁症等，现在在心脑血管疾病、肿瘤、妇科疾病、风湿病、呼吸系统疾病、代谢性疾病等治疗上都有更进一步的延伸。

活血化瘀中药能够疏筋通络破癥散结、抗炎消肿、止痛生新等，现代药理研究证实，该类药物可扩张血管口径，增加血流量，改善微循环和血液流变学，降低微血管内血细胞的聚集，消除水肿和渗出，促进炎症的消退及增生病变的软化和吸收，改善机体免疫功能等，同时能够影响多种细胞成分从而改善局部结缔组织的炎症和纤维化。

更为深入的研究表明，该类药物可以促进能量代谢、清除自由基、降低膜通透性、减轻钙超载、减轻白细胞的损伤作用、抗凋亡、影响信号转导、影响热休克蛋白、影响 VEGF及其他多种细胞因子。

升解通瘀汤对大鼠心脏缺血再灌注损伤的心肌保护作用

陕西中医 2008 年第 29 卷第 6 期
苦豆子总碱能有效提高一氧化氮合成酶活性, 从而为研究运动对一氧化氮和一氧化氮合成酶及细胞凋亡作用机制, 改善血管功能, 保护各系统、脏器, 预防和治疗某些心血管疾病提供了一个新的思路。
3 . 4 肿瘤坏死因子 Α 由活化的单核巨噬细胞产生, 具有
1 材料与方法 1 . 1 实验药物: 升解通瘀汤由黄芪、桔梗、升麻、柴胡、知
1. 2. 2 主要仪器: 12 导生理仪, 美国 B I O PA C 公司生产, 型号 IPS100C; 生理仪图象分析软件, No toco rd Syste m ; 小动物呼吸机, 美国 KEN T 公司生产, 型号 C T 06759; 723 A 可见光分光光度计, 上海精密科学仪器有限公司公司生产, 型号
升解通瘀汤对大鼠心脏缺血再灌注损伤的心肌保护作用
余云昶史载祥3 姜良铎北京中医药大学东直门医院 ( 100700) 摘要目的: 观察升解通瘀汤对缺血再灌注 ( I�R ) 损伤的心肌保护作用。方法: 采用大鼠心脏 I�R 损伤模型。将 35 只 SD 大鼠随机分为 5 组: 假手术组 7 只、模型组 10 只、中药组 ( 升解通瘀汤组 ) 6 只、西药组 ( 倍他乐克组 ) 6 只和中西药联合用药组 ( 升解通瘀汤 + 倍他乐克组) 6 只。用生理仪持续描记心律失常发生率; 于再灌注 120m in 用心肌染色测定缺血面积比和梗死面积比; 用生化法测定血清肌酸激酶 ( CK ) 、丙二醛 (M DA ) 和超氧化物岐化酶 (SOD )。结果: 预防性口服升解通瘀汤可以降低心肌梗死面积 [ ( 28. 29± 9. 85 ) % 比 ( 54. 36± 12. 13) % , P < 0. 01 ], 降低升高的 C K 活性 [ (91. 28 ± 10. 52) U �m l 比 (122. 17 ± 22. 48) U � m l, P < 0. 05 ] 和M DA 含量 [ ( 4. 18± 1. 32) nm ol�m l 比 ( 5. 54±0. 86 ) nm o l�m l, P < 0. 05 ]。联合使用升解通瘀汤及倍他乐克可以降低心肌缺血期恶性心律失常的发生率。结论: 升解通瘀汤对大鼠心脏 I�R 损伤具有心肌保护作用。主题词活血祛瘀剂 �药理学心肌再灌注损伤�中医药疗法大鼠升陷汤 @ 升解通瘀汤

通冠胶囊对大鼠颈动脉内皮损伤后血管VEGF eNOS表达和血清NO浓度的影响_王磊

通冠胶囊根据 / 活血化瘀0理论和邓铁涛 / 心脾相关0学说拟方而成, 临床用于冠心病介入术后患者取得良好的临床疗效。前期研究发现 [3- 4] , 该药具有保护内皮, 抑制动脉球囊损伤后内膜增生、细胞外基质合成和血管中层平滑肌细胞的增殖的作用, 本实验拟从 VEG F- eNO S- NO 分子传导通路角度, 探讨通冠胶囊对大鼠颈动脉损伤内皮保护作用的分子机制。 1 材料与方法 11 1 材料 VEGF、eNO S免疫检测试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司 (一抗 ) 、上海西唐科技有限公司 ( 二抗 ) ; NO 试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司; CHA - 213W 型显微镜为日本 OLYMPU S 公司产品; JD 801数码医学显微图像分析系统 (江苏省捷达科技发展有限公司 ) ; 分光光度仪 GEBESY S 20。 11 2 药物通冠胶囊 ( 黄芪、丹参等, 01 5g /粒, 广东省中医院制剂室提供 ) , 舒降之片 ( 辛伐他汀, 40m g /片, 由默沙东制药有限公司提供 )。 11 3 试验动物雄性 SD 大鼠 24 只, SPF 级, 体重 180~ 220g, 由南方医科大学实验动物中心提供, 许可证编号: SCXK ( 粤 ) 2003- 0001。 11 4 模型制作 10% 水合氯醛溶液腹腔麻醉大鼠, 仰卧位固定, 常规消毒大鼠颈前皮肤, 取颈部正中切口, 分离左颈总动脉和颈外、颈内动脉分叉处, 在左颈总动脉近心端临时阻断血流, 从颈外动脉处将 11 5F Forgaty 导管插入至颈总动脉约 11 5cm, 肝素盐水充盈球囊, 缓慢回抽球囊至动脉分叉处, 反复 3次剥脱内膜。回撤导管, 结扎颈外动脉近段, 去除血管夹, 恢复血流, 查看颈总动脉和颈内动脉搏动良好, 缝合伤口, 腹腔注射青霉素预防感染。

胆瘀方药液对大鼠主动脉内皮细胞脂质泡沫化的抑制作用及其机制

胆瘀方药液对大鼠主动脉内皮细胞脂质泡沫化的抑制作用及其机制宋晓龙，潘仁友，涂冬云，顾月星，宋峻，伍德明，倪其猛南京中医药大学附属盐城中医院盐城市中医院心内科，江苏盐城224001摘要：目的　探讨胆瘀方药液对氧化低密度脂蛋白（Ox -LDL ）诱导大鼠主动脉内皮细胞（RAECs ）脂质泡沫化的抑制作用及其可能的机制。

方法　将RAECs 随机分为对照组、模型组、胆瘀方低剂量组、胆瘀方中剂量组、胆瘀方高剂量组及阿托伐他汀组，除对照组外，其余五组均灌胃给予200 µg /mL 的Ox -LDL 作用72 h ，胆瘀方低、中、高剂量组及阿托伐他汀组分别灌胃给予50、100、200 µg /L 胆瘀方药液及阿托伐他汀300 µg /L 。

各组分组处理后24、48、72 h ，采用CCK -8法检测细胞增殖能力；取分组处理72 h 的各组细胞，油红O 染色观察细胞脂质泡沫化情况，ELISA 法检测细胞肿瘤坏死因子α（TNF -α）、白细胞介素6（IL -6）蛋白及细胞上清液丙二醛（MDA ）、超氧化物歧化酶（SOD ）表达，二羟甲基荧光素氧化荧光反应检测细胞活性氧（ROS ）含量，实时荧光定量PCR 法检测细胞蛋白质酪氨酸激酶2（JAK2）、信号转导与转录激活因子3（STAT3）mRNA 相对表达量，Westen blotting 法检测细胞JAK2、p -JAK2、STAT3、p -STAT3蛋白相对表达量，并计算p -JAK2/JAK2、p -STAT3/STAT3。

结果　与对照组作用相同时间点比较，模型组OD 值均降低（P 均<0.05）；与模型组作用相同时间点比较，胆瘀方高剂量组及阿托伐他汀组OD 值均升高，胆瘀方中剂量组作用48、72 h 的OD 值均升高（P 均<0.05）。

对照组细胞无脂质泡沫化情况，模型组细胞脂质泡沫化明显；与模型组比较，阿托伐他汀组及胆瘀方高、中、低剂量组细胞脂质泡沫化均得到改善，胆瘀方高剂量组和阿托伐他汀组细胞脂质泡沫化缓解最明显，几乎趋近于对照组。

颅内消瘀汤对急性颅脑损伤后血液流变学影响

选择 2006 年 9 月～2008 年 9 月期间住院的颅脑损伤患者 60 例，所有均为受伤后 12 小时之内入院，根据格拉斯哥昏迷计分法（GCS）统计：5～8 分 25 例，9～12 分 42 例，13～15 分 13 例。经 CT 检查证实为脑挫裂伤、硬膜外血肿、硬膜下血肿或脑实质内血肿，但无合并其他脏器复合伤，既往无心脑血管疾病、糖尿病、血液病等影响血液流变学的疾病。按住院病例奇偶数分为 2 组。治疗组 30 例，男 20 例，女 10 例；平均年龄 47.50±7.25 岁；行开颅手术 12 例。对照组 30 例，男 18 例，女 12 例；平均年龄 48.21±6.95 岁；行开颅手术 11 例。两组患者年龄、性别、GCS 评分等经统计学处理，差异均无显著性（P＞0.05），具有可比性。正常组 20 例为同期健康
12
内蒙古中医药
两次服用，连续治疗 1 个月。 1.4 疗效标准：参考 1995 年全国第四届脑血管病会议“脑卒中患者临床神经功能缺损程度评分标准及临床疗效评定标准”进行[4]。即：临床症状基本消失，患肢肌力及肌张力提高进步 2 级以上，血流动力学检查提示明显好转，生活可自理，神经功能缺损程度评分减少 91～100%，病残程度为 0 级为基本痊愈；临床症状及体征好转，患肢肌力及肌张力提高 2 级，血流动力学检查提示改善，基本生活可自理，神经功能缺损程度评分减少 46～90%，病残程度 1～3 级为显效；临床症状及体征基本好转，患肢肌力及肌张力提高 1 级，血流动力学检查提示有所改善，基本生活勉强可自理，神经功能缺损程度评分减少 18～45%为有效；临床症状未见好转，患肢肌力及肌张力未见改善，血流动力学检查提示无改变，生活无法自理，神经功能缺损程度评分减少 17%以下，甚至增加或死亡为无效。总有效率=（基本痊愈+显效+有效）/总病例数×100%。 1.5 统计学分析：采用 SPSS18.0 统计软件进行统计，计数资料采用 Х2 检验，计量资料采用 t 检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。 2 结果

活血化瘀方药对Poresky 大鼠模型内皮细胞的影响

活血化瘀方药对Poresky 大鼠模型内皮细胞的影响（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】：［目的］观察活血化瘀方药对Poresky多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠模型内皮细胞功能及形态的影响。

［方法］依照Poretsky法建立PCOS大鼠模型，随机分为中药组、模型组，并设立正常组作对照。

测定各组血清FSH、LH、T、INS及血浆ET、PAI1的水平，电镜观察内皮细胞形态及超微结构变化。

［结果］模型组内皮细胞间的连接失去正常形态，基底膜不连续，细胞膜损伤、不完整；胞质内空泡明显增多，线粒体膨胀，嵴溶解、断裂、消失；细胞核聚集，异染色质增多。

中药组主动脉内皮细胞间连接较紧密，线粒体无明显肿胀，嵴清晰，吞饮泡和溶酶体增多，胞质偶见空泡。

模型组血浆PAI1、ET比正常组增高，差异有显著性（分别为P0.01，P0.05），中药组与模型组比较，ET、PAI1降低（P0.05）；与正常组比较PAI1水平无显著差异，ET增高（P0.05）。

［结论］PCOS大鼠模型存在内皮细胞形态、超微结构改变，血浆ET、PAI1升高，提示PCOS存在血瘀的微观病理基础。

活血化瘀中药能够从形态学上修复PCOS大鼠损伤的内皮细胞，调整内皮细胞功能。

【关键词】多囊卵巢综合征；动物模型；活血化瘀；内皮细胞Abstract：［Objective］To observe the effect of Chinese herbs for activating blood stasis on the shape and function of the endothelial cells in rat aorta.［Method］Rat models of PCOS have been established according to Poresky, randomized into animal model and Chinese medicine group(TCM group)，normal rats were control group. Measure the serum level of FSH, LH, T, INS and plasma ET PAI1, and observe the endothelial cell morph.［Results］ In the model group,the endothelia cells of the aorta were contracted, with discontinuous basement membrane, inflated chondriosome, the middle layer smooth muscles tending to move inside and out of the normal shape of intraendothelial junction. In the TCM group, the endothelial cells appeared flat, arranging along the long axis of the blood vessels, normal endothelial cell integrity with scanty cytoplasm and the microscopic appearance shows highly developed golgiosome rough endoplasmic reticulum and smooth endoplasmic reticulum.The model group had a more increased serum level of PAI I and ET than those of the control group, and showed the significant difference (P0.01，P0.05). The TCM group had a significantly lower serum level of PAI I and ET than those of the model group(P0.05). There were no significant differences betweenthe normal group and the TCM group on serum level of PAI I (P0.05). The TCM group had more decreased level of ET than those of the normal group(P0.05). ［Conclusion］ The morphologic changes of the endothelial cells and increase of ET and PAI I were found in the PCOS model rat，indicating blood stasis was one pathogenesis of PCOS.Chinese herbs for activating blood stasis could morphologically repair damaged endothelial cells, regulate their functions.Key words: PCOS；animal model；activating blood stasis；endothelial cell根据临床实践多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）患者即使无血瘀证的外在征象，临床上在辨证施治的同时，适当佐以活血化瘀之法，有助于提高疗效，从而提高排卵率。

逐淤化痰汤对脑出血大鼠细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

２ａ蛋白表达水平均明显高于假手术组（００）、ＢｘＰ＜，１；与出血组相比，逐淤化痰汤组细胞凋亡数与Ｂｘ蛋白表达水平均下ａ降（００Ｐ＜．５或Ｐ＜．１，而Ｂｌ２蛋白表达水平显著增高（００）ｃ一Ｐ＜００．５或Ｐ＜．１。结论逐淤化痰汤可抑制出血后神００）
ＬｎＵＨｏｇ，ＷＡＧＧｉｉＮｕｍｎ
（．ＤｐｒｅｔｆｅｒｌｙｔｅＦｒｆｌｔｏｐｔ，ＬａｎｎｄａＵｉｒｔ；１ｅａｔｎｏＮｕｏｇ，ｈｉｔｆｉｅＨｓｉｌｉｉＭｅｉｌｎｅｉｍｏｓＡｉａｄａｏｇｃｖｓｙ２ｅａｍｎｏＣｉｓｄｉｅｔｅＦｒｆｌｔｄＨｓｉｌｉｎｎｄａＵｉｒｔ，Ｊｎｈｕ１１０ｈａ．ＤｐｒｅｔｆｈｎｅＭｅｉｎ，ｈｉｔｆｉｅｏｐｔ，ＬａｉＭｅｉｌｎｖｓｙｉｚｏ２００Ｃｉ）ｔｅｃｓＡｉａａｏｇｃｅｉｎ
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颅内消瘀汤对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内皮PI3KAkt信号的影响

·药理·颅内消瘀汤对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内皮ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号的影响陈　实１，刘盛泽１，余文珍２，张永亮１（１厦门大学附属福州第二医院神经外科，福建福州３５０００７；２福建中医药大学中西医结合学院，福建福州３５０１２２）摘要：目的　观察颅内消瘀汤对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内皮中β ｃａｔｅｎｉｎ、ＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ表达的影响，探讨其可能的作用机制。

方法　３２只ＳＤ大鼠随机分为假手术组、模型组、颅内消瘀汤中剂量（临床等效量）组和颅内消瘀汤高剂量（临床２倍量）组，除假手术组大鼠仅切开皮肤，其余大鼠均行颈总动脉球囊损伤术以成模。

成模３日后腹腔灌胃给药，模型组及假手术组给予等体积生理盐水，连续给药１４ｄ后取损伤侧颈总动脉，应用荧光定量ＰＣＲ法捡测ＰＩ３Ｋ、ＡｋｔｍＲＮＡ基因水平，用ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ及β ｃａｔｅｎｉｎ蛋白表达水平。

结果　ＱＰＣＲ及ｗｅｓｔｅｒｎ结果显示模型组服用颅内颅内消瘀汤治疗后ＰＩ３Ｋ、ＡｋｔｍＲＮＡ及蛋白水平上调，尤其是高剂量组较模型组差异显著（Ｐ＜００１），β ｃａｔｅｎｉｎ蛋白表达水平也上升（Ｐ＜００１）。

结论　颅内消瘀汤可提高β ｃａｔｅｎｉｎ蛋白表达水平，并上调ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号表达，保护大鼠颈动脉球囊损伤血管内皮的作用。

关键词：颅内消瘀汤；血管内皮；球囊损伤；ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ；βｃａｔｅｎｉｎ中图分类号：Ｒ９６５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６３７６５（２０２０）０７００１６０３作者简介：陈　实，男，副主任医师，Ｅｍａｉｌ：ｃｓ００７５２８＠１６３．ｃｏｍ。

基金项目：福建省卫生计生科研人才培养项目（２０１８－ＣＸＢ－１７）ＥｆｆｅｃｔｏｆＤｅｃｏｃｔｉｏｎｆｏｒＲｅｍｏｖｉｎｇＩｎｔｒａｃｒａｎｉａｌＢｌｏｏｄＳｔａｓｉｓｏｎＶａｓｃｕｌａｒＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＰＩ３Ｋ／ＡｋｔＳｉｇｎａｌｉｎＢａｌｌｏｏｎＩｎｊｕｒｙＭｏｄｅｌｏｆＣｏｍｍｏｎＣａｒｏｔｉｄＡｒｔｅｒｙｉｎＲａｔｓＣＨＥＮＳｈｉ１，ＬＩＵＳｈｅｎｇｚｅ１，ＹＵＷｅｎｚｈｅｎ２，ＺＨＡＮＧＹｏｎｇｌｉａｎｇ１（１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，ＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＸｉａｍｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００７，Ｃｈｉｎａ；２ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＦｕｊｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴＣＭ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０１２２，Ｃｈｉｎａ）ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＤｅｃｏｃｔｉｏｎｆｏｒｒｅｍｏｖｉｎｇｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌｂｌｏｏｄｓｔａｓｉｓｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｅｔａｃａｔｅｎｉｎ，ＰＩ３ＫａｎｄＡｋｔｉｎｒａｔｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｂａｌｌｏｏｎｉｎｊｕｒｙｏｆｃａｒｏｔｉｄａｒｔｅｒｙ，ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｉｔｓｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍＭＥＴＨＯＤＳ　３２ＳＤｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｍｅｄｉｕｍｄｏｓｅｇｒｏｕｐ（ｃｌｉｎｉｃａｌｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｖｏｌｕｍｅ）ａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅ（２ｔｉｍｅｓｖｏｌｕｍｅ）ｇｒｏｕｐｏｆＤｅｃｏｃｔｉｏｎｆｏｒｒｅｍｏｖｉｎｇｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌｂｌｏｏｄｓｔａｓｉｓＥｘｃｅｐｔｆｏｒｔｈｅｒａｔｓｉｎｔｈｅｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｏｔｈｅｒｒａｔｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｂａｌｌｏｏｎｉｎｊｕｒｙｏｆｔｈｅｃｏｍｍｏｎｃａｒｏｔｉｄａｒｔｅｒｙＡｆｔｅｒ３ｄａｙｓｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｏｒａｌｌｙ，ｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｗｅｒｅｇｉｖｅｎｅｑｕａｌｖｏｌｕｍｅｏｆｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｌｉｎｅ，ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙｆｏｒ１４ｄＴｈｅｎａｌｌｔｈｅｒａｔｓｗｅｒｅｋｉｌｌｅｄ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＩ３Ｋ，ＡｋｔａｎｄｂｅｔａｃａｔｅｎｉｎｉｎｉｎｊｕｒｅｄｖａｓｃｕｌａｒｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙＱＰＣＲａｎｄｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇＲＥＳＵＬＴＳ　ＱＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＰＩ３Ｋ，ＡｋｔｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｓｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＤｅｃｏｃｔｉｏｎｆｏｒｒｅｍｏｖｉｎｇｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌｂｌｏｏｄｓｔａｓｉｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｔｈｅｈｉｇｈｄｏｓｅｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００１），ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｔｈｅｂｅｔａｃａｔｅｎｉｎｐｒｏｔｅｉｎａｌｓｏｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜００１）ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　ＤｅｃｏｃｔｉｏｎｆｏｒｒｅｍｏｖｉｎｇｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌｂｌｏｏｄｓｔａｓｉｓｃａｎｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｔｈｅｂｅｔａｃａｔｅｎｉｎｐｒｏｔｅｉｎａｎｄＰＩ３Ｋ／Ａｋｔｓｉｇｎａｌ，ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｐｒｏｔｅｃｔｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌａｆｔｅｒｂａｌｌｏｏｎｉｎｊｕｒｅｄｃａｒｏｔｉｄａｒｔｅｒｙｉｎｒａｔｓＫＥＹＷＯＲＤＳ：ＤｅｃｏｃｔｉｏｎｆｏｒＲｅｍｏｖｉｎｇＩｎｔｒａｃｒａｎｉａｌＢｌｏｏｄＳｔａｓｉｓ；ＶａｓｃｕｌａｒＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ；ＢａｌｌｏｏｎＩｎｊｕｒｙ；ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ；Ｂｅｔａｃａｔｅｎｉｎ颈动脉狭窄是导致缺血性脑血管疾病的重要原因，粥样硬化以及血管内皮损伤引起血管内皮细胞的异常增殖是颈动脉狭窄的病理基础，改善血管内皮功能及结构是预防颈动脉·６１·海峡药学　２０２０年　第３２卷第７期狭窄的有效手段〔１〕。

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中国现代应用药学 2016囊导管)、模型组、颅内消瘀汤低剂量组[临床等效量， 2 g·(100 g)1·d1] 和高剂量组 ( 临床 2 倍量)，每组 8 只。术后第 4 天开始灌胃给药，模型组与假手术组给予等体积生理盐水。连续给药 14 d 后再次麻醉大鼠，取术侧颈总动脉段，生理盐水洗净，取术侧颈总动脉段(每组各取 3 只)放入 10% 中性甲醛中固定，余下颈动脉段取出后迅速置于液氮中再转存70 ℃备用。 1.5 血管内膜病理形态学观察常规石蜡包埋切片后，行苏木精-伊红(HE)染色，在光学显微镜下观察血管内皮损伤程度、管壁厚度、内膜增生等情况。 1.6 免疫组织化学法采用过氧化物酶标记的链酶卵白素(SP)法，并严格按照 SP 染色试剂盒的操作步骤进行 NOS3(即 eNOS)免疫组化染色。 eNOS 一抗稀释比例 1∶100，内皮组织染成棕黄色为阳性，定位于胞浆，采用 Imagepro-plus 分析系统，在高倍光镜下每张切片随机采取 5 个不重叠视野，测定颈动脉 eNOs 免疫反应阳性产物平均光密度值。 1.7 Western blot 法检测组织总 AMPK、eNOS 蛋将组织加入蛋白裂解液冰浴条件下匀浆，并按 BCA 法进行蛋白定量。配 SDS-PAGE 胶，后将蛋白样品用此凝胶电泳进行分离，再转移到 PVDF 膜上，用含 5% 脱脂奶粉封闭液室温轻摇漂洗 PVDF 膜 1 h，将膜放入大小适宜的自封袋中，分别加入 1∶(500~1 000)稀释一抗 37 ℃ 1 h，取出 PVDF 膜，用 T-TBS 液洗 3 次，每次 10 min，后加入 1∶1 000 稀释的辣根过氧化物酶标记的二抗。室温 2 h，取出 PVDF 膜，用 T-TBS 液洗 3 次，每次 10 min，用 ECL 化学发光显色，曝光显影。以 β-actin 蛋白为内参照，计算各组总 AMPK、 eNOS 的相对表达量。 1.8 统计学处理采用 SPSS 11.0 统计软件处理，各项指标均采用 x s 表示，组间比较采用单因素方差分析 (One Way ANOVA)，P<0.05 为有统计学意义。 2 2.1 结果大鼠一般情况观察假手术组大鼠未见明显异常改变。模型组大鼠术后前 3 d 大鼠精神较差，后稍有好转，但毛发欠光泽，体质量增长缓慢，未见感染死亡现象。
Effect of Lunei Xiaoyu Decoction on Vascular Endothelial AMPK/eNOS Signal in Balloon Injury Model of Common Carotid Artery in Rats XIAO Ying1a, CHEN Shi1b*, YU Wenzhen2, LIU Shengze1b, ZHANG Yongliang1b(1.Second Hospital Affiliated to
32 只 SD 大鼠随机分为假手术组、模型组、颅内消瘀汤低剂量(临床等效量)组和颅内消瘀汤高剂量(临床 2 倍量)
组，除假手术组大鼠仅切开皮肤，其余大鼠均行颈总动脉球囊损伤术以成模。成模第 4 天灌胃给药，模型组及假手术组给予等体积生理盐水，连续给药 14 d 后取损伤侧颈总动脉，行 HE 染色观测血管内皮损伤及内膜增生情况，用免疫组化染色检测 eNOS 表达水平，并用 Western blot 检测总 AMPK、eNOS 蛋白水平。结果颈总动脉球囊损伤模型组大鼠血管内膜增生明显、管壁变厚，颅内消瘀汤低、高剂量组大鼠经治疗后损伤血管增生较模型组轻、管壁较薄；eNOS 免疫组化染色：模型组阳性细胞较少，经颅内消瘀汤干预后，低、高剂量 2 组均有不同程度的表达，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)；Western blot 检测结果显示模型组总 AMPK、eNOS 蛋白表达下降，经颅内消瘀汤干预后，均有不同程度增加，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05 或 P<0.01)。结论大鼠颈动脉球囊损伤血管内皮的作用。关键词：颅内消瘀汤；血管内皮；球囊损伤；AMPK；eNOS 中图分类号：R285.5 文献标志码：A DOI: 10.13748/ki.issn1007-7693.2016.02.008 文章编号：1007-7693(2016)02-0166-04 颅内消瘀汤可通过上调 AMPK/eNOS 信号表达，保护
E-mail: 740106978@
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通信作者：陈实，男，硕士，副主任医师
Chin J Mod Appl Pharm, 2016 February, Vol.33 No.2
中国现代应用药学 2016 年 2 月第 33 卷第 2 期
理可能与 AMPK/eNOS 相关。本实验以高脂饲料喂养加颈动脉球囊损伤大鼠为模型，观察活血化瘀中药方对损伤血管内皮及 AMPK、 eNOS 蛋白的表达，以探讨其保护血管内皮的作用机制。 1 材料与方法 1.1 动物清洁级 SD 大鼠 32 只， ♂，体质量(200±20)g，购自上海斯莱克实验动物有限公司，生产许可证： SCXK(沪)2007-0005。 1.2 药物与试剂、仪器颅内消瘀汤组成：桃仁 12 g、红花 9 g、当归 9 g、生地黄 9 g、牛膝 9 g、川芎 6 g 等，购自福建中医药大学国医堂医院中药房。药物浸泡 30 min，水煎 3 次，每次 30 min，合并 3 次煎液， 4 层纱布过滤，水浴浓缩成含生药量 2 g·mL1，分装冻存备用。胆固醇(上海惠兴生化试剂有限公司产品，批号：20111108)；胆酸钠(北京奥博星生物技术有限责任公司，批号： 20110508) 。一抗 NOS3(C-20) ZS-6540 兔抗(北京中杉金桥生物技术有限公司，批号：G1312)。总 AMPK 抗体(CST)； BCA 蛋白试剂盒(上海碧云天生物科技有限公司，批号：P0012A)。手术显微镜(美国 World Precision Instruments)。 1.3 大鼠颈动脉球囊损伤模型制备 ( 参照 David Tulis 等[5]方法进行改良) 大鼠予以高脂饲料 (自制，配方如下： 25%猪油、2%胆固醇、0.1%胆酸钠、72.9%基础饲料)喂养 1 个月后，禁食 12 h，用戊巴比妥钠 50 mg·kg1 (配成 2%溶液)腹腔注射麻醉，后固定于蛙板上，剪毛，碘伏消毒颈部皮肤，取左斜切位，即从下颌角到胸骨上窝(中点)切开皮肤，逐层分离皮下组织，找到胸锁乳突肌，从其前缘用玻璃分针钝性分开其与颈前肌群之间的间隙(头稍往右偏)，必要时可剪断部分肌束，移到手术显微镜下操作，用玻璃分针分离血管直至颈总动脉分叉，在颈外动脉(其靠近气管侧)远心端下留线结扎，颈总动脉近心端及颈内动脉用动脉夹夹住，将球囊导管从颈外动脉近心端插入至颈总动脉起始部。注入约 0.1 mL 生理盐水使球囊充盈，缓慢来回推拉球囊导管 3 次以剥脱颈动脉内皮，然后退出导管，结扎左颈外动脉，缝合切口。术后在水瓶中加入苄星青霉素以通过饮水预防感染，并单笼喂养。 1.4 分组及治疗将大鼠随机分为假手术组(颈部皮肤切开但不
高血压、冠心病和动脉粥样硬化等心血管疾病是当今危害人类健康的第一杀手，内皮舒张功能障碍与这些心血管疾病关系十分紧密，逆转内皮功能障碍是维持心血管健康的必要手段。 AMPK 是细胞的能量变化感受器， AMPK/eNOS 信号途径可以调节血管内皮的增生。 NO 是一种最重要的内
基金项目：福州市科技计划项目 (2012-S-155-1) 作者简介：肖颖，男，副主任医师 Tel: (0591)88039152 Tel: (0591)88039277 E-mail: CS007528@
颅内消瘀汤对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内皮 AMPK/eNOS 信号的影响

肖颖 1a，陈实 1b*，余文珍 2，刘盛泽 1b，张永亮 1b(1.厦门大学附属福州第二医院，a.病理科；b.神经外科，福州
中医药大学中西医结合学院，福州 350122)
350007；2.福建
摘要：目的方法
观察颅内消瘀汤对大鼠颈动脉球囊损伤后血管内皮及 AMPK、eNOS 表达的影响，探讨其可能的作用机制。
Xiamen University, a.Department of Pathology; b.Department of Neurosurgery, Fuzhou 350007, China; 2.College of Integrated Traditional and Western Medicine, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To observe the effect of Lunei Xiaoyu Decoction on vascular endothelial AMPK, eNOS expression in ballon injury model of common carotid artery in rats, and to explore its possible mechanism. METHODS Thirty two SD rats were randomly divided into sham operation group, model group, low dose of Lunei Xiaoyu Decoction(dose in clinical equivalent) group and high dose of Lunei Xiaoyu Decoction(2 times the amount of clinical) group, except the sham operation group rats only skin incision, the other rats underwent carotid artery balloon injury surgery. On the 4th day after modeling, the rats were administrated orally for 14 d, model group and sham operation group were given equal volume of physiological saline. Then all the rats were killed, HE staining observation of vascular endothelial injury and intimal hyperplasia, immunohistochemistry staining was used to detect the expression level of eNOS, and Western-blot was used to detect the expression level of AMPK and eNOS. RESULTS The endometrial hyperplasia and thickness were obvious after carotid artery balloon injury in rats; and after Lunei Xiaoyu Decoction treatment, the rats’ endometrial hyperplasia and thickness were improved. The expression of AMPKand eNOS was significantly higher in Lunei Xiaoyu Decoction groups compared with the model group(P<0.05 or P<0.01). CONCLUSION Lunei Xiaoyu Decoction can upregulate the expression of AMPK/eNOS signal, in order to protecting vascular endothelial after balloon injured carotid artery in rats. KEY WORDS: Lunei Xiaoyu Decoction; vascular endothelial; balloon injury; AMPK; eNOS