成年大鼠4种脊髓全横断方法的比较

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大鼠完全脊髓横断损伤膀胱功能障碍模型的建立及评价

住提起来时就开始排尿，可能是压力性尿失禁现象。５通过膀胱内压评估大鼠膀胱活动状况．２分别对健康大鼠和ＳＩ鼠进行膀胱灌注实Ｃ大验，记录膀胱压力曲线图，比较健康大鼠和ＳＩ鼠Ｃ大膀胱压力反射活动状况。先用１％水合氯醛（５— ０３０４０ｇｇ对大鼠进行全身麻醉，０ｍ／）ｋ在下腹部中间剪开
次，周后降低到每天１。由于大鼠术后疼痛，１次在按压腹部过程中会激烈挣扎，操作方便和安全角从
度考虑，在按压腹部排尿前采用１％水合氯醛故０（５－４０／ｇ对大鼠进行麻醉，３０－０ｍｇｋ）这样不仅防止了大鼠挣扎过程中对操作者造成伤害，同时麻醉状况下膀胱的尿道括约肌松弛更利于按压腹部排尿。开始按摩时用力要轻，防挤爆膀胱，以等排出尿后可适
ＲｅｕｔＭｏｔｆｔｅｏｌａｉｎｏｌｅｒｌｖｄｗｔｏｔｓｒｅｙｃｒ．Ｔｅｗｅｇｔｏｒｅｎｒａｅｎｔｌｓｌ：ｓｏｈｃｍｐｉｔｓｃｕｄｂｅｉｅｉｈｐｓ— ｕｇｒａｅｈｉｈｆｕｎｉｃｅｓｄｉｉａ — ｃｏｅｉｉｌｎｒａｈｄｔｅｋｔ－ｅｏｔｓｉａ — ｒｎｅｔｎｆｌｗｅｂｒｄａｌｄｃｉｉｇｄｒｃｎｉｕｕｎｙａｄｅｃｅｏａｐａａ１ｗｅｋｐｓ— ｐｎｌｔａｓｃｉｏｌｄｙｇａｕｌ０ｏｙｅｌｎ．Ｕｎｅｏｔｏｓｉ — ｎｎｆｓｏｆｓｌｅｎｏｈｂａｄｒｗｉｃｎｔｎａｅｈｂａｄｒｆｉｔｃｒｔｎｔｔｄｅｏｉｖｉｉｇｏｔａ－ｕｉｎｏａｉｉｔｔｅｌｄｅｔｎｈｏｓａｔｒｔ，ｔｅｌｄｅｏｎａｔａｓｉａｅｐｒｄｃｏｄｎｃｎｒｃｉｉｉｔｎ．Ｉｏｔａｔｈｌｄｅｆｓｉａ — ｒｎｅｔｎｒｔｈｗｄｕｉｈｂｔｄｎｎｖｉｉｇｃｎｒｃｉｎｗｔｉｃｅｓｎｉｓｎｃｎｒｓ，ｅｂａｄｒｏｐｎｌｔａｓｃｉａｓｏｅｎｎｉｉｏ — ｏｄｎｏｔａｔｓｉｏｔｏｓｅｏｈｎｒａｉｇ

大鼠脊髓横断后不同时期膀胱顺应性和形态学变化要点

（３ｍｌ／ｋｇ）腹腔注射麻醉后，俯卧位固定于手术台上，
１．一般情况：脊髓横断组大鼠术后均出现运动和排尿功能障碍。至行尿动力学检查时，Ｂ组死亡７只；Ｄ组死亡６只，另有１只尿路感染伴发膀胱结石，亦不计人统计；Ａ组和Ｃ组全部存活。所有死亡大鼠均发生于脊髓横断术后２周内，大鼠死亡原因包括：泌尿系感染、膀胱破裂及其他部位感染等。２．大鼠体重与膀胱重量：脊髓横断组大鼠体重在６周［（２１８．４±５．５）ｇ］和１２周［（２４３．５４－８．５）ｇ］时间点上均较对照组轻［（２３４．９４－４．７）ｇ和（２５４．０
表１术后各组不同时期尿流动力学变化（孟±ｓ）
力学检查。给予大鼠１０％水合氯醛溶液（３ｍｌ／ｋｇ）腹腔注射麻醉后暴露膀胱，于膀胱顶处穿刺１孔，置人５Ｆｒ双腔测压管，３－０线荷包缝合并固定测压管，检查确保不漏尿，抽去膀胱内尿液，将双腔测压管分别与压力换能器及微量灌注泵相连，标定零点，用微量灌注泵将温生理盐水以１２ｍｌ／ｈ的速度行膀胱灌注，当大鼠有排尿反射或漏尿时停止灌注，保留膀胱压力与容量曲线。膀胱顺应性＝ＡＶ／△Ｐ，ＡＶ为从开始到漏尿发生时的灌人量，△Ｐ为膀胱发生漏尿时与灌人开始时膀胱压的差值。４．苏木素．伊红（ＨＥ）染色、Ｖｅｒｈｏｅｆｆ－ＶａｎＧｉｅｓｏｎ染色及荧光染色：自膀胱颈剪下大鼠膀胱，剔除膀胱壁周围结缔组织，制作石蜡标本并切片，每张切片标本厚
Ｖｅｒｈｏｅｆｆ－Ｖａｎ
Ｇｉｅｓｏｎ染色，分别观察膀胱壁平滑肌、胶原纤维及弹性纤维比例的变化。结果与对照
组比较，脊髓横断组大鼠出现运动和排尿功能障碍，Ｂ组膀胱顺应性较对照组升高，Ｄ组顺应性较对照组降低，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），脊髓横断组肌纤维走行紊乱与胶原纤维比例增加均随损伤时间延长逐渐加重；Ｄ组与Ｂ组比较，膀胱顺应性降低［（０．０４６±０．０２３）ｍｌ／ｃｍＨ２０比（０．１４６± ０．１０７）ｍｌ／ｃｍＨ：０（１

常用实验动物各种处死方法

常用实验动物各种处死方法（一）大鼠和小鼠１脊椎脱臼法：右手抓住尾巴将动物放在鼠笼盖或粗糙的表面上向后拉，用左手拇指和食指用力向下按住鼠头，使颈椎脱臼（脊髓与脑髓拉断），动物立即死亡。

２断头法：此法适用于鼠类小动物。

用剪刀在颈部将鼠头剪断，并使颈部对准容器，以免血液四溅。

由于脑脊髓离断且大量出血，动物立即死亡。

３击打法：此法适用于大鼠、家兔等。

抓住动物尾部，提起，用力摔击头部，或用木捶用力捶其后脑部，动物痉挛后即处死。

４急性失血法：常剪断动物的股动脉，放血致死。

如果正在做手术性或解剖性实验，可剪断颈动脉，腹主动脉或剪破心脏放血。

可采用摘眼球法，右手取一眼科弯镊，在鼠右或左侧眼球根部将眼球摘去，并将鼠倒置；头向下，大量失血而致死。

５化学药物致死法：在一密闭容器内，预先放有浸有全身麻醉作用的乙醚或氯仿的棉花，将动物投入容器内，使动物吸入麻醉药而致死。

也可皮下注射士的宁（马钱子碱），注射量为小鼠０.７６～２.０ｍｇ／ｋｇ，大鼠为３.０～３.５ｍｇ／ｋｇ。

（二）狗、猫、兔、豚鼠１空气栓塞法此法适用于较大动物的处死。

向动物静脉内注射注入一定量的空气使之发生空气栓塞，形成严重的血液循环障碍而死。

兔、猫用此法处死需注入20～40ml空气，犬致死的空气剂量为80～150ml。

一般注如入后动物能很快死亡。

本法的优点是处死方法简单、迅速。

缺点是由于动物死于急性循环衰竭，各脏器淤血十分明显。

２急性失血法先使动物麻醉、暴露股三角区或腹腔，再切断股动脉或腹主动脉，迅速放血。

放血时可用湿纱布擦，或用少量自来水冲洗切口，以保持其畅通，动物在３～５分钟内即可死亡。

采用此法动物十分安静，对脏器无损害，但器官贫血比较明显。

小鼠等小动物可采用颈总动脉大量失血而致死的方法。

犬等大型动物要先麻醉后放血，要使放血的切口保持通畅，一般在股三角区横切约lOcm的切口，切断股动、静脉，便大量失血而死。

３破坏延脑法对家兔可用木捶用力捶其后脑部，损坏延脑，动物痉挛后死亡。

符合伦理的大鼠处死方法

符合伦理的大鼠处死方法引言在大鼠的实验研究中，由于某些原因，我们常常需要对大鼠进行处死。

然而，在科学研究中，伦理问题一直备受关注。

本文将介绍一些符合伦理的大鼠处死方法，以确保对实验动物的尊重和避免不必要的痛苦。

1.麻醉和无痛处死方法为了尽可能减少大鼠的痛苦，我们可以首先使用麻醉剂将其处于无痛状态，然后再进行处死。

常见的麻醉和无痛处死方法包括：1.1.麻醉剂注射通过静脉或腹腔注射麻醉剂，如异氟醚或类似的麻醉剂，可以迅速使大鼠处于麻醉状态。

确保给予适量的麻醉剂，以充分麻醉大鼠并避免意识恢复。

1.2.快速颈部脱臼这是一种常用的无痛处死方法。

将大鼠的颈部抓紧，迅速向上用力扭转，使颈椎脱臼。

这一方法能够快速有效地使大鼠处于死亡状态，同时使大鼠避免痛苦。

1.3.高浓度二氧化碳（C O2）处死将大鼠置于密闭的容器中，逐渐充入高浓度的二氧化碳（C O2）。

CO2会引起缺氧和窒息，将大鼠迅速处死，避免痛苦。

2.合理的处死流程除了选择符合伦理的处死方法外，合理的处死流程也是非常重要的。

下面是一些建议的处死流程：2.1.事前准备在处死大鼠之前，必须做好充分的准备工作。

例如，清洁处死设备，准备好所需的处死工具和药物。

2.2.安全操作在进行处死操作时，一定要确保操作场所的安全。

避免操作过程中产生的意外事故，确保自身和他人的安全。

2.3.专业操作处死大鼠应由经验丰富的操作人员进行，以确保操作的准确性和高效性。

操作人员应具备相应的专业技能和知识。

2.4.注意观察在处死过程中，要时刻观察大鼠的反应变化。

确保它们在处死过程中没有出现异常反应，以免造成额外的痛苦。

结论为了确保伦理原则的尊重和科学研究的可靠性，在大鼠实验中，选择符合伦理的处死方法至关重要。

麻醉和无痛处死方法可以减少大鼠的痛苦，合理的处死流程则确保操作的安全和准确性。

通过遵循这些指导原则，我们可以更好地进行实验研究，同时保护实验动物的福利和利益。

新生大鼠脊髓横断模型的建立及评价

[1,2]
针器、刀柄、手术刀片等,实验室超纯水机(Ultra pure UF 090736)、座式自控电热压力锅( Z D X —3 5 B ) 、八通道电记录分析系统 (Powerlab 8/30)、磁力恒温搅拌器、可吸收性明胶海绵、 75%医用酒精、碘酊、水合氯醛(批号:20080416)等。
。研究脊髓损伤最
1.2 手术方法
取出生5～14天的SD大鼠123只,用3%水合氯醛按300mg/kg腹腔注射麻醉后俯卧位固定于自制的手术台上,作以胸椎棘突最高点位中心(约T10)上下3cm的切口,切开皮肤后用撑开器撑开皮肤显露术野。沿棘突从头端向尾端切口背部筋膜后紧贴棘突分离椎旁肌肉,在远端用手术刀片尖端轻柔地挑开椎板然后用显微剪向近端剪开椎板显露脊髓。在第十胸椎处(相当于脊髓T8)用显微剪连同硬脊膜一起剪断并剪除1～2mm,脊髓横断时后肢及尾巴会出现抽搐几下就停止。用明胶海绵颗粒止血,止血彻底后用眼科剪在颈背部剪下少许脂肪组织用于覆盖显露的脊髓,用6-0线依次缝合切口。
脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)是一种严重的创伤,SCI 造成的肢体瘫痪及其它功能障碍给患者本人。患者家属及社会都带来巨大的痛苦和负担。据估计,每年仅发达国家新增SCI患者32000 例(Raineteauand Schwab,2001),全球范围内发病率保守的估计也应超过1.04～8.3/10万,其中大多数是青壮年伤模型繁多,但尚无统一的分型[3,4]。
理论研究
放在同侧腘窝的胫总神经上另一电极在距离刺激电极约1cm处的皮肤内;地线安放在尾巴的皮下(如图1所示),模型BBB评分和状态评分由与本实验无关的但熟悉评分标准的人员打分。
生物技术世界

大鼠完全性脊髓横断及坐骨神经损伤后运动终板变化

大鼠完全性脊髓横断及坐骨神经损伤后运动终板变化作者：段强彭卫华1 樊继军席学礼陈磊【摘要】目的研究完全性脊髓横断及坐骨神经损伤后损伤平面以下乙酰胆碱酯酶(AChE)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide ，CGRP)在骨骼肌运动终板中的变化。

方法选取57只雌性大鼠，30只制作成完全性脊髓损伤及修复模型，24只制作成坐骨神经损伤模型，通过AchE组化染色、镀银染色和CGRP免疫组织化学法观察脊髓损伤和坐骨神经损伤后AChE、CGRP在运动终板分别1 w、1、3、6、12个月的改变。

结果脊髓损伤后1 w、1个月AChE组织化学显示与正常运动终板相比无明显变化(P>0.05)。

至3、6、12个月与正常相比有统计学差异(P<0.05);但12个月与6个月相比无统计学差异。

脊髓损伤后3个月时，CGRP免疫染色阳性部分与正常组相比有明显统计学差异(P<0.01)。

至6、12个月CGRP免疫阳性染色部位与正常相比有统计学意义(P<0.05)。

而坐骨神经损伤后AChE 含量下降，终板退变，CGRP含量明显降低甚至消失，镀银染色未发现改变。

结论脊髓损伤后功能相关蛋白含量下降，终板发生退变，退变程度明显较周围神经损伤后轻，这对于改善损伤脊髓功能后恢复运动功能提供了可能。

【关键词】运动终板;乙酰胆碱酯酶;降钙素基因相关肽;脊髓损伤;坐骨神经运动终板是运动神经元末梢与肌纤维连接的特化结构，损伤后其运动功能的恢复要依赖于运动终板结构的保存、再生、重建及其正常生理功能的恢复。

运动终板的病理变化和功能与选择的治疗方法、治疗效果的评价存在着密切的关系。

目前对于神经系统损伤后尤其是脊髓损伤后损伤平面以下联系效应器(骨骼肌)的神经乃至运动终板发生怎样的变化及变化程度文献报道亦有差异〔1，2〕，本研究采用组织化学、免疫组化等方法研究脊髓及坐骨神经损伤后乙酰胆碱酯酶(AChE)、降钙素基因相关肽(CGRP)在骨骼肌运动终板中的变化，探讨脊髓损伤后损伤平面以下骨骼肌的功能情况，为改善损伤后脊髓功能的研究奠定基础。

实验动物处死和取血

实验动物处死(鼠，兔类)标准操作规程(SOP)目的：遵循安乐死的原则，在不影响动物实验结果的前提下，使实验动物短时间无痛苦地死亡。

主体内容：一、颈椎脱臼（断颈）处死法此法是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓致死，为大、小鼠最常用的处死方法。

操作时实验人员用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离，实验动物立即死亡。

二、断头处死法此法适用于鼠类等较小的实验动物。

操作时，实验人员用左手按住实验动物的背部，拇指夹住实验动物右腋窝，食指和中指夹住左前肢，右手用剪刀在鼠颈部垂直将鼠头剪断，使实验动物因脑脊髓断离且大量出血死亡。

三、击打头盖骨处死法主要用于豚鼠和兔的处死。

操作时抓住实验动物尾部并提起，用木锤等硬物猛烈打击实验动物头部，使大脑中枢遭到破坏，实验动物痉挛并死亡。

四、放血处死法此法适用于各种实验动物。

具体做法是将实验动物的股动脉、颈动脉、腹主动脉剪断或剪破、刺穿实验动物的心脏放血，导致急性大出血、休克、死亡。

如兔等大动物应在轻度麻醉状态下，在股三角做横切口，将股动脉、股静脉全部暴露并切断，让血液流出。

操作时用自来水不断冲洗切口及血液，既可保持血液畅流无阻，又可保持操作台清洁，使实验动物急性大出血死亡。

五、空气栓塞处死法处死兔类常用此法。

向实验动物静脉内注入一定量的空气，形成肺动脉或冠状动脉空气栓塞，或导致心腔内充满气泡，心脏收缩时气泡变小，心脏舒张时气泡变大，从而影响回心血液量和心输出量，引起循环障碍、休克、死亡。

一般空气栓塞处死法注入的空气量兔为20~50ml。

六、过量麻醉处死法此法多用于处死豚鼠和家兔。

快速过量注射非挥发性麻醉药（投药量为深麻醉时的30倍），或让动物吸入过量的乙醚，使实验动物中枢神经经过过度抑制，导致死亡。

七、毒气处死法让实验动物吸入大量CO2等气体而中毒死亡。

实验动物的取血标准操作规程(SOP)目的：规范实验动物(家兔、狗，豚鼠，)取血的方法和途径,主体内容：（一）家兔1．耳缘静脉取血法选好耳缘静脉，拔去被毛，用二甲苯或酒精涂擦局部，小血管夹夹紧耳根部，使血管充血扩张。

脊髓全横断模型大鼠损伤区白细胞介素17的表达

脊髓全横断模型大鼠损伤区白细胞介素17的表达马超1，徐震2，王卓强2，邓诗源11徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室，江苏省麻醉与镇痛应用技术重点实验室，江苏省徐州市221000；2解放军第309医院麻醉科，北京市100091Interleukin-17 expression in the injured site of a rat model of complete spinal cord transectionMa Chao1, Xu Zhen2, Wang Zhuo-qiang2, Deng Shi-yuan11Key Laboratory of Anesthesiology, Xuzhou Medical College, Jiangsu Key Laboratory of Anesthesia and Analgesia Applied Technology, Xuzhou 221000, Jiangsu Province, China; 2Department of Anesthesiology, the 309 Hospital of Chinese PLA, Beijing 100091, China摘要背景：现阶段，针对已知的炎性递质的干预措施对于减轻脊髓继发损伤的效果局限。

白细胞介素17是重要的促炎性细胞因子，在中枢神经系统疾病发病机制中的作用正逐渐受到关注。

目的：观察急性脊髓损伤模型大鼠白细胞介素17 mRNA和蛋白表达的变化规律。

方法：健康雄性SD大鼠随机分为2组：模型组制作大鼠脊髓完全横断模型，假手术组仅剪开硬脊膜而不伤及脊髓实质。

开放后测定肢运动功能评分观察急性脊髓损伤对大鼠运动功能的影响，苏木精-伊红染色观察脊髓损伤后不同时间点组织病理学改变，实时荧光定量PCR、Western blot分别检测各组大鼠脊髓损伤后不同时间点白细胞介素17 mRNA和蛋白水平表达变化。

结果与结论：开放后肢运动功能评分结果：假手术组大鼠BBB评分均为20-21分，脊髓损伤1，2 d大鼠BBB评分均为0分，损伤后7 d BBB评分为0-3分(P < 0.05)。

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成年大鼠4种脊髓全横断方法的比较
作者：王春婷，游思维，刘惠玲，陈秉耀，焦西英，孟晓梅，吴宗亮，鞠躬
【关键词】脊髓切断术
关键词: 脊髓切断术;神经纤维;空洞;轴突再生;大鼠
摘要:目的比较成年大鼠4种脊髓全横断方法对后肢运动功能及脊髓组织学的影响. 方法 32只成年SD大鼠分为A，B，C和D4组，每组8只，分别以4种不同方法全横切T9脊髓.A组以尖刀片自左向右横行一次性切断脊髓;B组将尖刀片自脊髓背部中线处垂直插入并分别向两侧缓慢细心切断脊髓;C组将一丝线穿过脊髓腹侧硬膜外腔，以长刃显微剪一次性完全横断脊髓，并将丝线由断端间隙中拉出;D组以尖刀片自脊髓背侧至腹侧分层快速划断脊髓，再抬起脊髓两断端以验证横断的完全性.术后1h肉眼观察脊髓形态变化，8wk时评估截瘫后肢自发性运动功能恢复后，处死动物，取脊髓损伤节段，行连续矢状冰冻切片，小鼠抗神经丝抗体免疫组化染色，光镜下观察有无神经纤维的残留或再生，以及空洞及瘢痕的形成. 结果 A，B两组术后脊髓肿胀、外翻，8wk时分别有50%，38%的动物出现程度不等的功能恢复，镜下可见成束残留纤维和大量空洞.C，D两组术后脊髓外观良好，8wk时无功能恢复和残留纤维，但有少量神经丝免疫反应再生纤维.与D组相比，C组断端间隙较大且空洞较多. 结论经作者创新的D组方法，横断完全、损伤较小，为简便易行、效果可靠的脊髓全横断手术
方法.
Keywords:cordotomy;nerve fibers;cavities;axonal regen-eration;rat
Abstract:AIM To compare the effects of four spinal cord transecting methods on spontaneous motor recovery in para-plegic hindlimbs and histological changes within the spinal cord in adult rats.METHODS Thirty-two adult male SD rats were divided into Groups A，B，C and D（n=8for each group，which received one of the four methods of spinal cord transection at T9）.In Group A，the spinal cord was tran-sected with a sharp blade along the inner wall of the vertebral channel.The blade in Group B，however，was vertically in-serted through the cord at midline and guided to slowly and carefully cut the bilateral halves of the cord separately.In Group C，the cord was cut with a pair of long-edge microscis-sors，and the completeness of the transection was verified by guiding a surgical suture through the ventral extradural space before and pulling the suture out through the gap between the2stumps of the transected cord.The cord of Group D an-imals was dissected with a sharp blade in quick gashes，and complete transection was checked by uplifting one
of the stumps.The appearance of the exposed spinal cord was ob-served with naked eyes1h after the surgery，and the locomo-tor recovery of the hindlimbs was evaluated with the BBB rat-ing scale at8wk after surgery before sacrificing all animals.The damaged spinal cord segments were sectioned sagittally，prepared for anti-neurofilement immunostaining，and ob-served under a light microscope for any possible remaining and regenerating nerve fibers as well as the formation of cavi-tation and scars.RESULTS Spinal cord edema and ectropi-on could be encountered1h after the surgery，and50%and38%animals showed different degrees of locomotor recovery and corresponding remaining nerve fibers with many scars and cavities8wk following the surgery in Groups A and B.As for Groups C and D animals，a better appearance of the cord without much edema and ectropion was observed at1h and no locomotor recovery could be revealed at8wk.A few neurofilament-positive regenerating，but not remaining，fibers were observed within the lesion site.Group C animals had a wider gap between the two stumps of the transected spinal cord and more cavities in the injured spinal segments than those animals in Group D.CONCLUSION The authors’innovated transecting method in Group D is easy and reliable because of its properties of the completeness of tran-section and。