X-连锁凋亡抑制蛋白与肿瘤关系的研究进展

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X连锁的凋亡抑制蛋白研究进展

研究也取得了很大进展。【关键词】Ｘ连锁凋亡抑制蛋白；亡；ＢＲ结构域；ＸＦ凋ＩＡ１中国分类号：Ｑ１７文献标识码：Ａ文章编号：１３ —６６２０）６５８４０４１Ｘ（０７０ —００ —０
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Ｘ连锁的凋亡抑制蛋白研究进展
韩岱（综述）５霞／／李燕／审校）（
（头大学医学院中心实验室，东汕头５５３）汕广１０１
【摘要】ｌＰｉｉｉｒｏｐｐｏｉＡ（ｈｔｆａｏｔｓ）是内源性凋亡抑制蛋白家族，其中效力最强的是ｘ连锁凋亡抑制蛋白（ｈｏｏｏｅｌｋｄｎｂｏｓＸｃｒｍｓｍｉｅｎｉｉｉｒｏａｏｔｉｐｔｎＩＰ。ｎｂｔｆｐｐｓｒｅ，ＸＡ）它主要通过ＢＲ结构域和ＲＮｈｏｏｓｏｉＩＩＧ锌指结构域抑制ｃｓａｅ活性、ａｐｓ调节核因子Ｎ２Ｂ并参与信号的转Ｆ￣导过程。ＸＰ受到不均一核糖核酸蛋白ｃ和ｃ等的正向调节和ＸＦＡｌ１２Ａ１和Ｓａ／ＩＢＯ等的负向调节。近年来ＸＡｍｃＤＬＡＩＰ在临床方面的
（ａｐｓ）抑制物，也是分子结构研究得最清楚的ｌＰ家族成开辟新路径。ｃｓａｅＡｓ员。ＸＡＩＰ的生物功能的多样性、独特的翻译和翻译后调控及对现在从病毒、酵母、果蝇、线虫和哺乳类动物细胞中共发现了ｃｓａｅ的抑制使ＸＡ成为一个很有前景的神经退行性疾病和１ａｐｓＩＰ６种ｌＰ蛋白，其中６个是人类ｌＰ家族成员：ＸＡ、ｅＰＡＡｓＩＰ－１Ａｌ癌症等治疗的分子靶位。本文就ＸＡＩＰ的基因定位、分子结构、生（ｅｌａＰ）ｃＡ２ｅＨａＰ）ＮＰｎｕｎｌｐｐｏｉｃｌｌｌ１、－Ｐ（ｅｕｌ２、ｌ（ｅｒａｕｒＡＩｌＡｒＡｏａｏｔｓｓ物学功能、表达调节及在疾病治疗中的应用等研究进展作一综ｉｉｉｒｒｅｎ、Ｓｒｉｎ生存蛋白）ＢＵＥＢＲｅｅｔｈｏｐｔｎｂｔｙｏｉ）ｕｖｉ（ｖ、ＲＣ（Ｉｒａｐ

凋亡抑制蛋白家族的研究进展

ｕｉｕｔｉａｅａｔｉ【】ｅｌ２０１２５：４～５２．ｂｑｉｎｌｓｃｉｔＪ．ｌ，００，０（）５９５ｉｇｖｙＣ
［］ＲｏＤｅｅａｘＱＬ，ａａｈｓｉｅｌｈ — 一ａｄｃＩ一３ｙＮ，ｖｒｕＴｋｓａｈｔａ。ｅｃＩ１ｎ — Ｒ，ＴＡＰＡＰ２ｐｏｅｎｒｉｃｉｈｂｔｒｆｓｅｉｃｃｓａｅ［］ＭＢ，ｒｔｉｓａｅｄｒｔｎｉｉｓｏｐｃｆａｐｓｓＪ．ｅｏｉＥＯＪ
目前在人类已发现８种ＩｓｃＡＰ、Ｉ一２ＮＡＩＡＰ：Ｉ一１ｃＡＰ、Ｐ、
３２免疫治疗．
ＸＩＰＩＰ２Ｓｒｉｉ、ｒｃ及ＬｖｎＡＡ、Ｌ－、ｕｖｖｎＢｕｅｉｉ。ｌＰ是与肿瘤发生发展密切相关的分子，Ａ为靶点的基因治疗倍受关注。以ＩＰ
１ｌＰ的结构特征ＡｓｌＰ蛋白主要有３Ａｓ个结构域：）末端杆状病毒ＩＰ（Ｎ１Ａ重复子ＢＲＩ（ａｕｏｉａｉｈｂｔｒｏｐｐｏｉｒｐａ）人类Ｉｓｂｃｌｖｒｌｎｉｉｆａｏｔｓｅｅｔ。ｏｓｓＡＰ一般包含
存在其他抗凋亡途径。２１Ｃｓａ蛋白酶激活抑制抗凋亡途径．ａｐｓｅ直接或间接抑ＳＣｓａｅｒｃｓａｅ主要抑ＳＣｓａｅ关键Ｊｔａｐｓ或Ｐｏａｐｓ：ｑａｐｓ的成员，些ｌＰ可直接抑制Ｃｓａｅ３７９３在死亡受体途径某Ａａｐｓ－、和【。］

X连锁凋亡抑制蛋白对肺癌细胞生长和细胞周期的影响

收稿日期223作者简介高　岩(2),女,主治医师,硕士,从事肺癌的诊治研究。

第25卷　第3期2007年6月石河子大学学报(自然科学版)Journal of Shihezi University (Natural S cience )V ol.25　N o.3Jun.2007文章编号:100727383(2007)0320335204X 连锁凋亡抑制蛋白对肺癌细胞生长和细胞周期的影响高　岩1,苏　远2,白　明2,金　阳2,朱莉萍3(1石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子832008;2华中科技大学同济医学院附属协和医院,湖北武汉430022;3华中科技大学同济医学院病理生理学系中心试验室,湖北武汉430022)摘要:为了研究靶向X 连锁凋亡抑制蛋白的发夹状RNA 对肺癌细胞中抗肿瘤作用,构建XIAP 基因的shRN A 表达载体,并设计阴性对照(psiRN A 2C on)质粒,分别转染A549细胞;实时定量PCR 和免疫印记法分别检测XIAP 的mR 2NA 和蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐试验(MT T )检测A549细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期分布。

实验结果表明:转染psiRN A 2XIAP 组细胞XI AP mRN A 和蛋白水平均低于正常对照组,生长慢于正常组(t =16.82和t =12.13,均P <0.01),G 2/M 期细胞所占比例增高(t =3.78,P <0.05),并出现亚G 1峰。

而阴性对照质粒ps iRN A 2Con 未能下调XI AP 的表达水平,对A549细胞增殖和细胞周期亦无明显影响。

结论:针对XI AP 的R NA 干扰质粒特异性地抑制了其RN A 和蛋白水平,使肺癌细胞A 549生长减慢,诱导凋亡,并使其发生G 2/M 期阻滞,有望发展为新的抗肿瘤药物。

关键词:RN A ;XIAP ;肺肿瘤;凋亡;细胞周期中图分类号:R73519 文献标识码:A X 连锁凋亡抑制蛋白(X 2linked inhibitor 2of 2apop 2tosi s protein ,X IAP)N 端含有有3个杆状病毒I AP 重复序列区(baculoviral inhibitor of apoptosis repeat ,BIR ),不仅可以凭借BIR 功能域直接抑制胱天蛋白酶23、27、29的活性阻止细胞凋亡[1,2],还可以通过C 端环指结构域(ri ng finger domain )发挥泛素连接酶功能,介导胱天蛋白酶23经蛋白酶体26S 水解[3]。

卵巢癌对化疗药物耐药机制的研究进展

・300・沈阳医学院学报Journal of Shenyang Medical College第23卷第3期2021年5月•综述•卵巢癌对化疗药物耐药机制的研究进展王永，杨军文*（皖南医学院弋矶山医院妇产科，安徽芜湖241001）［摘要］卵巢癌作为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，因其早期症状多不明显，出现相应症状时多已是疾病的晚期，使得卵巢癌治疗难度大、死亡率高。

一经确诊，多行手术治疗，术后再进行数个疗程的紫杉醇联合铂类（TP）方案化疗，以增加患者的生存率。

但化疗耐药的出现却制约了这种联合治疗的效果，甚至导致治疗的失败。

因此，对化疗耐药产生的相关机制探索，并给予对症处理，这对逆转化疗耐药性、增强治疗效果具有不可估量的意义。

本文将就卵巢癌化疗耐药相关基因及调控因子作用机制的研究及进展进行综述，为进一步研究提供新思路。

［关键词］卵巢癌；化疗耐药；基因；调控因子［中图分类号］R737.31［文献标识码］A［文章编号］1008-2344（2021）03-0300-04doi:10.16753/ki.1008-2344.2021.03.029Research progress of the mechanisms of ovarian cancer resistance to chemotherapyWANG Yong，YANG Junwen*(Department of Obstetrics and Gynecology，Yijishan Hospital，Wannan Medical College，Wuhu241001，China)[Abstract]Ovarian cancer is one of the three major malignant tumors of the female reproductive system,because its early symptoms are often not obvious，and when the corresponding symptoms appear，it is mostly in the late stage of the disease.Therefore，the treatment of ovarian cancer is difficult and the mortality rate is high.Surgery is often the initial treatment of ovarian cancer，followed by several courses of paclitaxel combined with platinum(TP)chemotherapy，which greatly increases the survival rate of patients. However，the emergence of chemotherapy resistance limits the effectiveness of this combination therapy，and even leads to the failure of the treatment.Therefore，exploring the relevant mechanisms of chemotherapy resistance and giving symptomatic treatment is of great significance for the reversing the chemotherapy resistance and enhancing the therapeutic effect.This article reviews the research progress of the mechanisms of ovarian cancer resistance to chemotherapy，in order to provide new ideas for further research.[Key words]ovarian cancer；chemotherapy resistance；gene；regulatory factor卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，致死率一直位于女性所患疾病的前列。

XIAP、Smac的研究进展

的第二个线粒体激活因子（ｔｈｅｓｅｃｏｎｄｍｉｔｏｃｈｏｄｒｉａ — ｄｅｒｉｖｅｄａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｃａｓｐａｓｅ，Ｓｍａｃ）是一种内源性线粒体
促凋亡蛋白，通过特异性结合并抑制ＩＡＰｓ对下游效应Ｃａｓｐａｓｅ的抑制，从而促进细胞凋亡。二者在肿瘤
颅底神经与临床体及研究工作，Ｅ — ｍａｉｌ：ｐａｎｙａｗｅｎ６６６＠ｓｏｈｕ．ｃｏｎ
【摘要】凋亡逃避在肿瘤的形成中起到重要作用，凋亡抑制蛋白Ｘ连锁凋亡抑制蛋白（Ｘ — ｌｉｎｋｅｄ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｐｒｏｔｅｉｎ，ＸＩＡＰ）是凋亡抑制蛋白（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｐｒｏｔｅｉｎ，ｌＡＰ）家族中的一员。ＸＩＡＰ是惟一能够同时抑制起始阶段和效应阶段的凋亡抑制蛋白，能够阻止细胞凋亡；半胱氨酸蛋白酶
调控者。在人类，目前发现的成员包括ＸＩＡＰ、
ＮＡＩＰ、ｃＩＡＰ１、ｃｌＡＰ２、ＩＬＰ２、Ａｐｏｌｌｏｎ、Ｌｉｖｉｎ和Ｓｕｒｖｉｖｉｎ
８种Ｊ。ＩＡＰｓ通过抑制Ｃａｓｐａｓｅ的活性而抑制细胞
文章编号：１６７４— ４１３６（２０１４）０１ — ００５１— ０３

胃癌患者XIAP、XIAP mRNA表达与新辅助化疗疗效的关系

系。方法选择行新辅助化疗的胃癌患者３，０例根据其临床疗效及胃组织病理检查分为有效组１、４例无效组１６例，并设ｌ胃炎患者的正常胃组织作对照。采用Ｒ —ＣＷｅｔｎｂｔ术检测各组胃组织中的ＸＡＮ０例ＴＰＲ、ｓｒ—ｌ技ｅｏＩＰｍＲＡ、
ＸＡｒｔｎｍｙｈｖｐｒｎｆｃｅａｊｖｎｈｍｔｅａｙｏｓｉｃｎｅａｅｔ．ＩＰｐｏｉａａｅｉｏａｔｆｔｉｎｏｄｕａｔｅｏｈｒｐｇｔｃａｃｒｔｎｓｅｍｔｅｅｓｎｃｆａｒｐｉ
组（Ｐ＜００）．１。结论
关键词：胃肿瘤；化学治疗；色体连锁的凋亡抑制蛋白Ｘ染
中图分类号：７５２Ｒ３．
ＲｌｉｎｈｐｂｔｅｎＸＩＰａｄｎｏｄｕａｔｈｍｏｈｒｐｆａｔｃｃｎｅｅａｏｓｉｅｗｅＡｎｅａｊｖｎｃｅｔｅａｙｏｓｒａｃｒｔｇｉ
山东医药２１年第５卷第４０１１５期
胃癌患者ＸＡ、ＩＰｍＮＩＰＸＡＲＡ表达与新辅助化疗疗效的关系
杨巍，建军，张白维君
（宁省肿瘤医院，阳１０４）辽沈１０２
摘要：目的
探讨胃癌患者Ｘ染色体连锁的凋亡抑制蛋白（ＩＰ、ＩＰｍＲＡ表达与新辅助化疗疗效的关ＸＡ）ＸＡＮ
ａｄＸ１ｏｔｉｎｎｒｌｃｎｒｌｇｏｐｗｅｅｓｇｉｉａｌｏｒｔａｈｏｅｉｆｅｔｖｈｍｏｈｅａｙｇｏｐａｄｉｅｅｃｉｅｎＡＰｐｒｅｎｉｏｍａｏｔｏｕｒｉｎｆｃｎｔｌｗｅｈｎｔｓｎｅｆｃｉｅｃｅｔｒｐｒｔｅｅｓｔｎｃｉｉｏｍｒｓｈｉｒｃｉＲ－Ｃ）ａｄＷｅｔｎｂｏｉｇｅｏｔｌｏｐｉｌｄｎ０ｐｔｎｓｏｇｎｉ．Ｒｖｒａｓｒｔｎｐｌｅａｅｃａｅｔｎ（ＴＰＲｎｓｒｌｔｒｅｒｐｏｙｎａｏｅｔｎｗｅ

NOD样受体介导的信号转导通路及其与肿瘤关系的研究进展

223欢迎关注本刊公众号·综　述·《中国癌症杂志》2019年第29卷第3期 CHINA ONCOLOGY 2019 Vol.29 No.3基金项目：国家自然科学基金（81770137）。

通信作者：陆维祺 E-mail:***********************.cn 先天性免疫应答是机体抗感染免疫的第一道防线，相对于适应性免疫应答来说具有出现早、应答发生速度快等特点。

其主要识别病原体相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）和损伤相关的分子模式（damage-associated molecular patterns，D A M P s ）。

其通过模式识别受体（p a t t e r n recognition receptors，PRR）［1］来非特异地识别各种致病物质，PRR主要有以下两类受体：一类是位于细胞膜表面或内体膜上的Toll样受体（Toll-like receptor，TLR），另一类是位于细胞质内的核苷酸结合寡聚化结构域（nucleotide- binding oligomerization domain，NOD）样受体及视黄酸诱导基因（retinoic acid inducible gene，RIG ）样受体。

TLR在抗感染与抗肿瘤方面的作用已经被广泛研究，近年来关于同属于PRR的NOD样受体的研究主要集中于其介导的信号通路及其在抗微生物感染中的作用，而关于其与肿瘤关系的研究却很少。

NOD样受体可以分为NLRA、NLRB、NLRC、NLRP和NLRX 5个亚家族，其中NLRC和NLRP亚家族是NOD样受体主要的两种类型，而NOD1和NOD2是NLRC亚家族中的主要代表，也是NOD样受体中研究最多的2个成员［2］，本文对NOD1和NOD2受体的分子组成、介导的信号转导通路及其与肿瘤关系的最新NOD样受体介导的信号转导通路及其与肿瘤关系的研究进展林巧卫1，张　思2，陆维祺11.复旦大学附属中山医院普外科，上海 200032；2.复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系，上海 200032［摘要］核苷酸结合寡聚化结构域（nucleotide-binding oligomerization domain ，NOD ）样受体是一类位于细胞质的模式识别受体，在先天性免疫应答中起着十分重要的作用。

DADS抑制XIAP介导的人胃癌HGC27细胞增殖、迁移和侵袭

刘芳,李志敏,曹振华,等.DADS 抑制XIAP 介导的人胃癌HGC27细胞增殖㊁迁移和侵袭[J].中南医学科学杂志,2022,50(3):323-326.[收稿日期]㊀2021-09-22[修回日期]㊀2022-03-03[基金项目]㊀国家自然科学基金(81973532);湖南省自然科学基金(2020JJ4522,2020JJ4529);湖南省高校创新平台开放基金(17K081)[作者简介]㊀刘芳,博士,讲师,研究方向为肿瘤发生与防治的分子机制,E-mail 为lf5527@㊂通信作者苏波,博士,副教授,研究方向为抗肿瘤药物作用机制,E-mail 为subosu123@㊂DOI :10.15972/ki.43-1509/r.2022.03.003㊃基础医学㊃DADS 抑制XIAP 介导的人胃癌HGC27细胞增殖、迁移和侵袭刘芳1,李志敏1,曹振华1,何慧2,苏琦1,苏波3(南华大学衡阳医学院1.肿瘤研究所,2.基础医学院应用解剖与生殖医学研究所,3.药学院药物药理研究所,湖南省衡阳市421001)[关键词]㊀二烯丙基二硫;㊀X 连锁凋亡抑制蛋白;㊀增殖;㊀迁移;㊀侵袭;㊀HGC27细胞[摘㊀要]㊀目的㊀研究二烯丙基二硫(DADS )对X 连锁凋亡抑制蛋白(XIAP )过表达胃癌HGC27细胞增殖㊁迁移和侵袭能力的影响㊂方法㊀建立XIAP 过表达HGC27细胞株;实验设置为Vector 组㊁Vector +DADS 组㊁XIAP 组和XIAP +DADS 组;DADS 处理细胞后,Western blotting 检测各组XIAP ;MTT 和平板克隆实验分析各组细胞的增殖能力;Transwell 实验检测各组细胞的迁移㊁侵袭能力㊂结果㊀XIAP 过表达细胞增殖率和克隆形成率增高,迁移和侵袭的细胞数增加;DADS 处理XIAP 过表达细胞后,XIAP 表达降低的同时,细胞增殖率和克隆形成率下降,迁移和侵袭的细胞数减少㊂结论㊀过表达XIAP 促进HGC27细胞增殖和迁移侵袭;DADS 下调XIAP ,抑制HGC27细胞增殖㊁迁移和侵袭㊂[中图分类号]㊀R735.2[文献标识码]㊀ADADS inhibits XIAP-mediated proliferation ,migration and invasion of human gastric cancer HGC 27cellsLIU Fang 1,LI Zhimin 1,CAO Zhenhua 1,HE Hui 2,SU Qi 1,SU Bo 3(1.Institute of Cancer ,2.Institute of Applied Anatomy and Reproductive Medicine ,School of Basic Medicine ,3.Institute of Pharmacy and Pharmacology ,School of Pharmacy ,Hengyang Medical School ,University of South China ,Hengyang ,Hu-nan 421001,China )[KEY WORDS ]㊀diallyl disulfide;㊀X-linked inhibitor of apoptosis protein;㊀proliferation;㊀migration;㊀invasion;㊀HGC27cell[ABSTRACT ]㊀㊀Aim ㊀To investigate the effects of diallyl disulfide (DADS)on the proliferation,migration and inva-sion ability of X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP)overexpressed gastric cancer cells.㊀㊀Methods ㊀XIAP overexpression HGC27cell line was established.㊀The experiment was set as vector group,vector +DADS group,XIAPgroup,XIAP +DADS group.㊀After the cells were treated with DADS,Western blotting was used to detect XIAP,MTT and plate cloning assay were used to analyze the proliferation ability of cells,and Transwell assay was used to detect the migra-tion and invasion ability of cells.㊀㊀Results ㊀The proliferation rate and clone formation rate increased in XIAP overex-pressing cells,meanwhile the number of migrating and invading cells increased.㊀After XIAP overexpressing cells were treated with DADS,XIAP expression decreased,cell proliferation rate and clone formation rate decreased,and the number of migrating and invasive cells decreased.㊀㊀Conclusion ㊀Overexpression of XIAP promoted the proliferation,migration andinvasion of HGC27cells,and DADS downregulated XIAP and inhibited HGC27cell proliferation,migration and invasion.㊀㊀胃癌是中国第二大常见癌症,是所有癌症类型中的第三大死因[1]㊂大蒜素的抗癌作用高于其他化疗药物,毒性和不良反应相对较小,二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是由大蒜素分解的活性产物之一[2]㊂DADS 具有抗胃癌细胞增殖㊁迁移和侵袭的作用[3]㊂X 连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of ap-optosis protein,XIAP )通过作用凋亡蛋白Caspases抑制凋亡㊁促进肿瘤细胞增殖,并且参与信号通路调节㊁促进肿瘤转移[4]㊂DADS 抑制胃癌细胞XIAP 表博看网 . All Rights Reserved.达[5],本文在此基础上研究DADS 是否通过下调XIAP 抑制XIAP 过表达胃癌细胞增殖㊁迁移和侵袭㊂1㊀材料和方法1.1㊀主要试剂新生小牛血清(杭州四季青生物工程公司);嘌呤霉素(Invitrogen 公司);DADS (Sigma 公司);CCK-8细胞增殖检测试剂盒(Dojindo 公司);BCA 蛋白定量试剂盒(Promega 公司);抗XIAP ㊁β-actin 抗体(Abcam 公司);ECL 发光试剂盒(Santa Cruz 公司);Matrigel 基质胶(BD 公司)㊂1.2㊀细胞培养和XIAP 过表达细胞株构建人胃癌HGC27细胞(中山大学肿瘤防治中心馈赠)置于5%CO 2㊁饱和湿度的37ħ培养箱,用含10%小牛血清的RPMI 1640培养基培养㊂GV358慢病毒空载体(Vector )和XIAP 过表达载体(XIAP )购自上海吉凯基因公司㊂胃癌细胞接种于24孔板,将XIAP-GV358慢病毒转染HGC27细胞,48h 后倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein ,GFP )表达情况;用嘌呤霉素(0.3mg /L )筛选稳定转染的细胞株;以未转染(Control组)和Vector 组为对照,Western blotting 鉴定XIAP表达㊂过表达实验分为Vector 组㊁Vector +DADS 组㊁XIAP 组㊁XIAP +DADS 组㊂Vector 组㊁XIAP 组未用DADS 处理,Vector +DADS 组㊁XIAP +DADS 组DADS(30mg /L )处理24h ㊂1.3㊀Western blotting用RIPA 溶液4ħ裂解细胞,提取蛋白,BCA 法检测蛋白水平,各组取等量样本凝胶电泳,转移至PVDF 膜,置于脱脂牛奶封闭1h ,4ħ孵育一抗过夜,TBST 洗膜3次,二抗孵育1h ,TBST 洗膜3次,加ECL 发光液,X 片曝光㊁显影㊁定影㊂扫描灰度值,以β-actin 作为内对照计算相对蛋白表达水平㊂1.4㊀MTT 检测96孔板中接种各组细胞,每组设置6个重复孔,用DADS (30mg /L )处理细胞24㊁48㊁72h 后,每孔加入10μL CCK-8溶液后置于培养箱2h ,酶联免疫检测仪中测定OD 450值㊂细胞增殖率(%)=[(实验组OD 值-空白组OD 值)/(对照组OD 值-空白组OD 值)]ˑ100%㊂1.5㊀平板克隆形成实验6孔板中接种各组细胞,每孔200个细胞,每组设置3个重复孔,处理细胞后放置培养箱培养14天,PBS 洗3次,4%多聚甲醛固定30min ,PBS 洗3次,自然风干后用结晶紫染色㊂克隆形成率(%)=(克隆数/接种细胞数)ˑ100%㊂1.6㊀迁移和侵袭实验在Transwell 上层小室接种各组细胞,将1640培养基(含10%胎牛血清)加入下室,DADS (30mg /L )处理细胞24h 后,拭去小室上层膜表面的细胞,用4%多聚甲醛溶液固定小室下表面的细胞,结晶紫溶液(0.1%)染色㊂倒置显微镜下随机选择4个高倍视野,计数迁移的细胞数量,计算平均值㊂进行侵袭实验前,将Matrigel 基质胶铺在小室上层膜表面,之后的实验步骤与上述迁移实验相同㊂1.7㊀统计学分析采用SPSS 17.0统计软件㊂数据用均数ʃ标准差表示,两组间比较采用t 检验,多组间比较采用单因素方差分析,P <0.05为差异有统计学意义㊂2㊀结㊀果2.1㊀XIAP 过表达胃癌HGC27细胞株的建立及鉴定HGC27细胞转染慢病毒48h 后,光学显微镜下观察到细胞状态良好,荧光显微镜下观察到GFP 荧光信号强,提示XIAP-GV358慢病毒载体转染细胞效率较高(图1A);继续用嘌呤霉素筛选细胞株2周,Western blotting 鉴定Control 组㊁Vector 组㊁XIAP 组的XIAP 蛋白表达情况,结果显示XIAP 组蛋白水平明显高于Control 和Vector 组(P <0.05;图1B),成功建立XIAP 稳定过表达HGC27细胞株㊂图1㊀慢病毒转染HGC27细胞及Western blotting 检测XIAP 表达A 为光学显微镜下(左)和荧光显微镜下(右)观察慢病毒转染的HGC27细胞;B 为Western blotting 检测XIAP 表达㊂a 为P <0.05,与Control 组和Vector 组比较㊂博看网 . All Rights Reserved.2.2㊀DADS 对胃癌HGC27细胞XIAP 表达的影响Vector +DADS 组XIAP 蛋白水平低于Vector 组(P <0.05;图2);XIAP +DADS 组XIAP 蛋白水平高于Vector +DADS 组,但低于XIAP 组(P <0.05)㊂图2㊀DADS 对胃癌HGC27细胞XIAP 表达的影响1为Vector 组;2为Vector +DADS 组;3为XIAP 组;4为XIAP +DADS 组㊂a 为P <0.05,与Vector 组比较;b 为P <0.05,与Vector +DADS 组和XIAP 组比较㊂2.3㊀DADS 对XIAP 过表达胃癌HGC27细胞增殖及克隆的影响Vector +DADS 组细胞增殖率呈时间依赖性下降(P <0.05;表1);与Vector 组比较,Vector +DADS 组增殖率㊁克隆形成率降低,而XIAP 组增殖率㊁克隆形成率升高;XIAP +DADS 组细胞增殖率㊁克隆形成率高于Vector +DADS 组,低于XIAP 组(P <0.05;表1和图3)㊂2.4㊀DADS 对XIAP 过表达胃癌HGC27细胞迁移及侵袭的影响与Vector 组比较,细胞迁移㊁侵袭数量Vector +DADS 组明显减少,XIAP 组增加(P <0.05);XIAP +DADS 组细胞迁移㊁侵袭数量高于Vector +DADS 组,低于XIAP 组(P <0.05;表2和图4)㊂表1㊀DADS 对XIAP 过表达HGC27细胞增殖的影响单位:%分组24h 48h 72h Vector 组100100100Vector +DADS 组60.6ʃ2.9a46.0ʃ4.5a38.0ʃ2.4aXIAP 组125.3ʃ2.1a 126.8ʃ3.5a 127.9ʃ4.2a XIAP +DADS 组96.5ʃ1.8b66.6ʃ3.2b61.1ʃ1.9b㊀㊀注:a 为P <0.05,与Vector 组比较;b 为P <0.05,与Vector +DADS 组和XIAP 组比较㊂图3㊀DADS 对XIAP 过表达HGC27细胞克隆形成的影响1为Vector 组;2为Vector +DADS 组;3为XIAP 组;4为XIAP +DADS 组㊂a 为P <0.05,与Vector 组比较;b 为P <0.05,与Vector +DADS 组和XIAP 组比较㊂表2㊀DADS 对XIAP 过表达HGC27细胞迁移和侵袭的影响单位:个分组迁移侵袭Vector 组125ʃ1272ʃ13Vector +DADS 组76ʃ15a36ʃ13a XIAP 组182ʃ19a 115ʃ14a XIAP +DADS 组122ʃ22b76ʃ16b㊀㊀注:a 为P <0.05,与Vector 组比较;b 为P <0.05,与Vector +DADS 组和XIAP 组比较㊂图4㊀DADS 对XIAP 过表达HGC27细胞迁移及侵袭的影响(结晶紫染色,40ˑ)博看网 . All Rights Reserved.3㊀讨㊀论胃癌的早期诊断和治疗可提高患者生存率[6],但因复发和转移,患者预后差[7]㊂研究干预胃癌发生的药物对于胃癌防治具有重要意义㊂XIAP表达与胃癌生长㊁侵袭和转移具有相关性,癌组织XIAP表达较高的患者预后较差,说明XIAP与胃癌临床进展密切相关[8]㊂本实验结果显示,XIAP过表达增强胃癌HGC27细胞增殖和迁移侵袭能力,证实XIAP表达增高可促进胃癌细胞恶性表型㊂Li等[8]报道,siRNA下调XIAP表达可抑制HGC27细胞增殖㊁诱导凋亡㊂Sun等[9]发现XIAP是MicroRNA-509-3p作用靶点,后者抑制胃癌HGC27和MKN45细胞迁移和侵袭能力㊂上述研究表明,下调XIAP是抗胃癌增殖和转移潜能的有效策略㊂DADS可干预多条信号通路㊁发挥肿瘤防治作用,它通过下调癌基因㊁上调抑癌基因诱导细胞周期阻滞,抑制增殖[10]㊂DADS诱导G2/M期阻滞可抑制胃癌干细胞增殖[11]㊂本实验室通过差异蛋白质谱分析发现,DADS影响LIMK1㊁RORα㊁XIAP等多个基因表达[5],证实DADS下调LIMK1㊁上调RORα可诱导G2/M期阻滞㊁抑制胃癌细胞增殖[3]㊂本实验在证实过表达XIAP促细胞增殖的基础上,进一步明确DADS通过下调过表达细胞XIAP表达㊁抑制胃癌HGC27细胞增殖㊂文献报道,XIAP抑制剂可干预JAK/STAT㊁PI3K/Akt㊁p53㊁p38等信号通路,发挥抗胃癌生长的作用[12];大麻酚下调XIAP 表达可抑制胃癌细胞增殖㊁诱导凋亡[13]㊂XIAP参与多条信号通路的调节,DADS可能通过抑制XIAP 表达影响其介导的促胃癌细胞增殖的信号通路㊂转化生长因子-β(transforming growth factor, TGF-β)可通过非Smad依赖性信号通路诱导肿瘤细胞由上皮细胞向间质细胞转化(EMT),使肿瘤细胞获得转移能力[14]㊂XIAP介导TGF-β诱导食管癌细胞EMT,增强其迁移侵袭能力[15]㊂本实验结果证实,XIAP过表达可增强HGC27细胞迁移侵袭能力,而DADS下调过表达细胞XIAP的表达㊁降低细胞迁移和侵袭能力㊂前期研究证实,DADS通过抑制EMT降低胃癌细胞迁移侵袭能力[3];DADS下调TGF-β可抑制EMT相关信号通路分子Rac1和β-catenin表达[16]㊂DADS可能通过下调XIAP抑制TGF-β诱导胃癌细胞EMT,从而使XIAP介导的细胞迁移侵袭能力降低㊂[参考文献][1]CAO M,LI H,SUN D,et al.Cancer burden of major cancers in China:a need for sustainable actions[J].Cancer Commun(Lond), 2020,40(5):205-210.[2]SARVIZADEH M,HASANPOUR O,GHALE-NOIE G Z,et al. Allicin and digestive system cancers:from chemical structure to its therapeutic opportunities[J].Front Oncol,2021,11:650256.[3]SU B,SU J,ZENG Y,et al.Diallyl disulfide suppresses epithelial-mesenchymal transition,invasion and proliferation by downregulation of LIMK1in gastric cancer[J].Oncotarget,2016,7(9):10498-10512.[4]TU H,COSTA M.XIAP s profile in human cancer[J].Biomole-cules,2020,10(11):1493.[5]SU B,SU J,HE H,et al.Identification of potential targets for dial-lyl disulfide in human gastric cancer MGC-803cells using proteomics approaches[J].Oncol Rep,2015,33(5):2484-2494.[6]SONG Z Y,WU Y Y,YANG J B,et al.Progress in the treatment of ad-vanced gastric cancer[J].Tumor Biol,2017,39(7):1010428317714626.[7]SITARZ R,SKIERUCHA M,MIELKO J A,et al.Gastric cancer: epidemiology,prevention,classification,and treatment[J].Cancer Manag Res,2018,10:239-248.[8]LI Y,GAO W,MA Y,et al.Dual targeting of survivin and X-linked inhibitor of apoptosis protein suppresses the growth and pro-motes the apoptosis of gastric cancer HGC-27cells[J].Oncol Lett, 2018,16(3):3489-3498.[9]SUN J,LI J,ZHANG W,et al.MicroRNA-509-3p inhibits cancer cell proliferation and migration via upregulation of XIAP in gastric cancer cells[J].Oncol Res,2017,25(3):455-461. [10]ALMATROODI S A,ALSAHLI M A,ALMATROUDI A,et al.Garlic and its active compounds:a potential candidate in the pre-vention of cancer by modulating various cell signalling pathways [J].Anticancer Agents Med Chem,2019,19(11):1314-1324.[11]吴静,段海瑞,谢鸣,等.二烯丙基二硫对CD44+人胃癌AGS细胞生长的影响[J].中南医学科学杂志,2021(3):285-289.[12]KO J H,LEE S G,YANG W M,et al.The application of embelinfor cancer prevention and therapy[J].Molecules,2018,23(3):621.[13]JEONG S,JO M J,YUN H K,et al.Cannabidiol promotes apop-tosis via regulation of XIAP/Smac in gastric cancer[J].Cell Death Dis,2019,10(11):846.[14]SABBADINI F,BERTOLINI M,DE MATTEIS S,et al.The mul-tifaceted role of TGF-βin gastrointestinal tumors[J].Cancers (Basel),2021,13(16):3960.[15]JIN Y,LU X,WANG M,et al.X-linked inhibitor of apoptosisprotein accelerates migration by inducing epithelial-mesenchymal transition through TGF-βsignaling pathway in esophageal cancer cells[J].Cell Biosci,2019,9:76.[16]SU B,SU J,ZENG Y,et al.Diallyl disulfide inhibits TGF-β1-in-duced upregulation of Rac1andβ-catenin in epithelial-mesenchymal transition and tumor growth of gastric cancer[J].Oncol Rep,2018, 39(6):2797-2806.(此文编辑㊀蒋湘莲)博看网 . 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的一个重要因素。Ｈｆｎｏｍａｎ等用肺癌组织标本行Ｒ－ＣＴＰＲ
和免疫印迹研究ＸＩＰ表达．认为ＸＩＰ是促进肿瘤发生的ＡＡ重要因子。菅志远等［为，腺癌组织ＸＡＰ的表达水平以９１认胰Ｉ
及阳性率均明显高于癌旁胰腺组织，与肿瘤病理Ｐ的Ｃ端，有泛素连接酶Ｅ活性，一具，也
是ＩＰ家族分子抗凋亡的重要结构。ＡＡＸＩＰ在成年人、幼儿婴体内除外周血淋巴细胞以外的所有组织中广泛表达。
２ＸＡＰ的生物学功能ｌ
能够对抗各种凋亡诱导因素，抗细胞凋亡。ｘ一锁凋亡抑抵连
制蛋白（ｌｋｄｉｈｂｔｒｏｐｐｏｉｐｏｅＸＡＰ是ＩＰＸ—ｉｅｎｉｉｆａｏｔｓｓｒｔｉＩ）ｎｏｎ，Ａ
家族中最有效的ｃｓａｅ抑制物，近年来发现ＸＡＰ在肿瘤ａｐｓＩ
ＸＩＰ的生物学功能主要表现为对细胞凋亡过程的抑Ａ制．细胞凋亡最典型的特征是细胞内一类特异的蛋白水解酶ｃｓａｅ的激活．ＡａｐｓＸＩＰ是ＩＰ家族中最有效的ｃｓａｅ抑制Ａａｐｓ物，其Ｎ端的３个ＢＲ结构域可以结合并抑制ｃｓａｅ３一Ｉａｐｓ一、ｃｓａｅ７和ｃｓａｅ９ＸＩＰ对不同ｃｓａｅ抑制机制各不ａｐｓ一ａｐｓ一，Ａａｐｓ相同，Ｉ构域可抑制ｅｓａｅ３的成熟，也可结合并抑ＢＲ结ａｐｓ一
３ＸＩＡＰ在肿瘤中的表达及其对化疗、放疗的影响
ＸＡＩＰ基因定位于Ｘ２－５ｃＮｑ４２，ＤＡ全长２５０ｂ，４７４ｐ含９个
氨基酸．子量为５Ｄ，要由３个杆状病毒ｌＰ重复序分７ｋ主Ａ
免疫组化方法研究发现，ＩＰｍＲＸＡＮＡ及其蛋白在肝癌组织及肝癌细胞系中表达水平明显升高，认为这可能是肝细胞恶变
锌指结构域（Ｉｎｆｇｒｏａｎ组成。ＩＲＮＧＺｎｅｍｉ）ｉｄＢＲ结构域是ＩＡＰ家族分子抑制ｃｓａｅ活性、发挥凋亡抑制作用不可缺少的ａｐｓ结构．其位于ＸＡＩＰ的Ｎ端，由６－０个氨基酸组成。ＩＧ一每个０７ＲＮ
列区（ａｕｏｉｌｎｉｉｒｆｐｐｏｉｒｐａ，Ｉ和一个ＲＮｂｃｌｖｒｈｂｔｏａｏｔｓｅｔＢＲ）ａｉｏｓｅＩＧ
Ｔｍ等同６ａｍ对０个人类癌细胞系的研究表明ＸＡＩＰ在多数癌细胞系中表达，瘤细胞系中高水平的ＸＡ肿ＩＰ蛋白与一些抗癌药物的药物敏感性相关。陶璐薇等［７１应用Ｒ — ＣＴＰＲ和
１信号转导通路的激活激活的ＪＫ使ＭＡＫ（ｔｇｎａ．）ＮＰｍｉｅ — ｅｏ
ｔａｄｐｏｅｎｋｎｓｓ磷酸化级联反应而激活Ｎ — Ｂ．者ｉｔｒｔｉａｅ）ｖｅｉＦＫ后转移到细胞核内启动基Ｌ转录而发挥生物学效应翻ｉＮ大Ｊ。ｓＡＲ抑制ＴＢ１的表达可阻断ＴＫｌ和Ｎ — Ｂ的磷酸化，说明ＡＡＦＫ
２９４第卷１０年月６第００期
・究进展・研
Ｘ连锁凋亡抑制蛋白与肿瘤关系的研究进展一
夏春波（综述）蒋常文（，审校）（桂林医学院人体解剖学教研室，西桂林广５１０）４０４
【词】连锁凋亡抑制蛋白；瘤；究进展关键Ｘ一肿研
中高表达．与肿瘤的分化程度及预后有关，已成为肿瘤基因治疗的新靶点和研究热点＿】文就ＸＩＰ与肿瘤关系的研１。本．２Ａ
究进展作一综述。
１ＸＡＰ的分子结构ｌ
Ｔ１在ＸＩＰ信号转导中的重要作用。ＡＢＡ
【中图分类号】７Ｒ３
［文献标识码】Ａ
【文章编号】１７ — ２０２０）４ａ一０ — ２６３７１（０９０（）０５０
与ＴＦ１和骨形成蛋白（ｏｅｏｐｏｅｉｐｏｉ，Ｍ）Ｇ一３ｂｎｒｇｎｒｅＢＰ信ｍｈｃｔｎ号转导。最近的研究表明，ＩＰ的ＲＮＸＡＩＧ锌指结构和ＢＲ分Ｉ别与ＢＩＭＰ型受体及下游信号ＴＢ１ＴＡ（ＡＫ１ｂｎｉｇｐｏｅ）一ｉｄｎｒｔｉ反ｎ
应。次激活Ｔ１ＴＫ１导致Ｊ依ＡＢ、Ａ、ＮＫ（－ａｔｒｎｌｉａｅｅｊｎＮ—ｅｍｉａｎｓｋ
凋亡抑制蛋白（ｈｂｔｒｆｐｐｏｉｐｏｉＩＰ）一类ｉｉｉｏｔｓｒｔｎ，ｎｏｏａｓｅＡ是
在结构上具有同源性的细胞内源性凋亡抑制蛋白家族，们它