核酸凝胶染色剂-GelRed
DNA琼脂糖凝胶电泳-染料分析
核酸凝胶电泳染料的选择1.EB溴化乙锭（EB）由于其价格便宜、使用方便已成为最常用的核酸染料，被广泛应用于观察、检测琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶中的DNA或RNA。
然而EB是一种强诱变剂，具有中等毒性，对皮肤、眼睛、口腔和上呼吸道系统有刺激性作用，对人体有潜在危害性。
且废弃的EB染液易污染环境。
EB本身在紫外下不发光，与单链、双链或三链DNA结合后发出明亮的荧光，EB-DNA结合物会导致染料的光漂白和DNA单链断裂，且具有潜在的诱变作用。
EB的使用方法简单，可在制胶时将其加入进行前染，也可在电泳结束后进行后染。
前染有利于节约时间，但是易出现条带变形拖尾等问题，后染较费时，但效果较好。
2.GeneFinderGeneFinder TM是新型的核酸染料，可以代替EB作为各种核酸电泳的染色剂。
与强致癌性的EB不同，GeneFinder TM属于花青类染料，毒性较低，GeneFinder TM与dsDNA结合发出荧光，其检测核酸的灵敏度比EB染色法高。
GeneFinder TM染料最大吸收峰为470nm，与该染料结合的核酸在紫外线下呈现绿色荧光，另外，该染料同样能引起有机体突变，在使用时候一样要采取适当的保护措施。
3.GoldViewGoldView TM也是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldView TM与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
GoldView对于大片段DNA的染色效果较好，但对于500 bp以下的片段效果并不理想，而且它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般约5-10min条带就会消失。
所以应尽快拍照、观察。
另外，GoldView 灵敏度差，本底色严重，不适用于切胶回收。
且其毒性较大，尤其在紫外灯下，其诱导突变能力极高。
4.SybrGreenISybrGreenI也是一种常用的核酸染料，它与双链DNA(dsDNA)结合后，荧光大大增强，检测的灵敏度也高于EB。
GelRed基本问答
A:GelRed/GelGreen是超敏感的染料。有些用户反馈可以检测含量＜0.1ng的DNA。然而，染色的灵敏度取决于仪器的性能和曝光设置等。
Q:GelRed / GelGreen的结合机制是什么？
A:GelRed/GelGreen作用原理通过静电及电荷相互作用的结合。
针对预制胶电泳拖带、不清上样量。
2.建议把GelREed再稀释一倍后使用，但过低会影响结果的灵敏性。
3.用1XTBE缓冲液代替TAE，因为含硼酸盐的试剂导电性能更好。
GelRed＆GelGreen常见问题：
Q:污染或微笑的DNA条带或错误的DNA迁移条带?
Q:可以提前制作GelRed / GelGreen凝胶，储存供以后使用吗？
A:可以，GelRed和GelGreen染料是稳定的。在保证琼脂糖凝胶的完整性不会被破坏的前提下，你可以将预制的GelRed / GelGreen凝胶储存供以后使用。我们建议在4℃避光贮存凝胶。
Q：GelRed / GelGreen在熔化的琼脂糖中稳定么？可以将GelRed / GelGreen储存在熔化的琼脂糖胶中，到用的时候在制备凝胶吗？
Q:为什么有GelRed和GelGreen两种溶剂（二甲基亚砜DMSO和水）？在DMSO和水中的染料是否存在差异？
A:水溶解的产品相对于储存在DMSO中，是一个全新的改良。由于DMSO会被皮肤吸收，我们建议染料溶于水，以避免处理二甲基亚砜存在的潜在危害。鉴于有些用户不希望改变实验方案，我们将继续提供储存在DMSO的染料。经过内部测试，两种溶剂方案的效果相似。
Q:GelRed / GelGreen的使用量？
A:10,000×储备液用于1X预制凝胶使用量1:10000（例如，5 uL用于50ml凝胶），或1:3333比例用于电泳后染色（15uL用于50 mL溶液）。
EB替代品及其优缺点
1.GeneFinder核酸染料GeneFinder是新型核酸染料，具有安全、灵敏等突出优点，可以代替溴化乙锭(EB)作为各种核酸电泳的染色剂。
与强致癌性的EB不同，GeneFinder毒性很低，使用安全，可有效保护实验操作者和环境。
GeneFinder与dsDNA结合荧光信号可增强800—1000倍，其检测核酸的灵敏度比EB染色法平均高10倍左右，与SYBRGreenI染料的灵敏度相当。
另外，该染料同样能引起有机体突变，在使用时候一样要采取适当的保护措施。
1.1.GeneFinder的特点：1. 安全性：GeneFinder核酸染料致突变性远低于EB数倍甚至数十倍2. 灵敏度：检测核酸的灵敏度平均高于EB染色法10倍左右3. 操作简单：本染料有多种使用方法，操作简单4. 适用范围：适用于多种核酸电泳分析，可以对DNA、RNA、及寡核苷酸等进行染色5. 兼容性：对常用酶（如Taq酶、逆转录酶、内切酶、连接酶等）没有抑制作用2.Goldview核酸染料GoldenView是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldenView与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
在100ml琼脂糖胶溶液中加入5-10µlGoldenView即可。
在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，也可用于染RNA。
无致突变性；而溴化乙锭EB是一种强致癌剂，选用GoldenView代替EB比较明智和安全。
目前尚未发现Geneview有致癌性，但是在使用中发现它有一定的刺激性，在使用过程中应戴上手套。
Goldview对于大片段DNA的染色效果还行，但是对于500bp以下的片段效果不是很好，还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般5-10min条带就会消失。
所以应该抓紧时间拍照后再观察。
另外Goldview不适用于胶回收。
灵敏度差，本底色严重，不利于回收，不稳定。
核酸染料文档
核酸染料简介核酸染料是一种用于染色核酸（DNA和RNA）的化合物，常用于分子生物学实验中的核酸检测、分离和可视化。
核酸染料通常具有高亲和力，能够与核酸分子特异性地结合，并在染色后发出荧光信号，以便观察和测量核酸的存在和定量。
核酸染料在分子生物学领域中具有广泛的应用。
它们可以在凝胶电泳实验中用于可视化和分离DNA，也可用于定量PCR、蛋白质-核酸相互作用研究、细胞核酸染色和细胞核型分析等实验中。
常见的核酸染料1. 基于暗电荷色团的核酸染料基于暗电荷色团的核酸染料是最常见的核酸染料之一。
它们的分子结构中含有芳香环和氮碱基，能够与DNA或RNA 的磷酸二酯链发生静电吸引力作用。
常见的基于暗电荷色团的核酸染料有乙溴铵溴化物（EB）、溴化乙啶（EtBr）等。
这类染料通常呈现橙色到红色的荧光，可以与DNA或RNA 的碱基配对形成稳定的络合物。
它们在紫外-可见光谱中显示出特定的吸收峰，并能够发出强烈的荧光信号，使核酸在凝胶电泳实验中可视化。
然而，这些染料具有一定的毒性，对人体和环境有潜在危害。
2. 基于亮电荷色团的核酸染料基于亮电荷色团的核酸染料是近年来发展起来的一类新型核酸染料。
它们的分子结构中含有多个亮电荷基团，能够与DNA或RNA的排斥性电荷相互作用，实现与核酸的高亲和力结合。
常见的基于亮电荷色团的核酸染料有SYBR Green、SYBR Safe等。
这类染料通常呈现绿色的荧光，能够与DNA或RNA形成稳定的复合物，并显示出荧光增强效应。
相比基于暗电荷色团的染料，这些染料毒性较低，对人体和环境的危害较小。
它们在核酸检测、定量PCR等实验中得到了广泛应用。
3. 其他类型的核酸染料除了基于暗电荷色团和亮电荷色团的核酸染料，还存在其他类型的核酸染料。
例如，环形染料是一类由多环芳香烃环组成的染料，可用于核酸检测和荧光原位杂交实验。
还有一些特殊的核酸染料，如GelRed、GelGreen等，它们能够与DNA 或RNA的双链结合，在凝胶中呈现高亮度的荧光。
GelRed Nucleic Acid Gel Stain,10000X in water
品名：GelRed Nucleic Acid Gel Stain,10000X in water商品型号：410031. 使用预制GelRed 胶为DNA染色1.1 按照自己的标准规范准备琼脂糖凝胶溶液1.2 加入GelRed TM10,000X储备试剂至琼脂糖溶液，比例1:10,000（如5微升的GelRed TM10,000X储备试剂加入到50ml的胶溶液中）。
由于GelRed TM通常是热稳定的，10,000X储备试剂可以在胶溶液依旧是热的的时候加入（不需要等到胶溶液冷却下来再加）。
通过旋转、搅拌或者倒转确保染料和胶溶液充分混匀。
（注意：仔细检查10,000X 药水瓶。
如果染料发生沉淀，加热或者声波处理药水瓶。
）或者，可以提前混合GelRed TM 储备剂、琼脂糖粉末和你常用的buffer，微波或其他常用于制备琼脂糖胶的方式加热。
GelRed TM和一般的电泳缓冲液都是兼容的。
1.3 铸胶并允许它固化。
任何残余的胶溶液可以储存并稍后重新加热，以用于其他的铸胶。
因为GelRed TM具有水解稳定性，GelRed TM预制的胶可以大量准备和存放，以备稍候使用。
为了避免发霉，我们建议预制胶储备在冰箱中。
1.4 按你的标准规范加样并跑胶。
1.5 用标准透射法（302或312nm）观察染色胶，并用偏光薄膜667胶卷和EB过滤器照胶。
因为荧光在红色波长区域，SYBR○R或者GelStar过滤器也可以用于照胶，同样可以获得好结果。
（如果你始终看到条带的拖尾和/或条带分离度不佳，按照下述方法跑后染色胶，以确认问题是由于染料引起还是和染料无关的因素引起。
如果后染色胶正常，问题不是由染料引起的，尝试一下方法：降低核酸量、降低跑胶电压、降低胶中琼脂糖的量、增大胶的长度、增加胶的厚度、增强胶的固化时间以确保成形良好、提高加样技术或者按照你的方法选择后染色胶。
）*预制GelRed 胶不适用于丙烯酰胺胶。
可将后染色胶法用于丙烯酰胺胶。
Ts-GelRed核酸凝胶染料cdr
目录号：
TSJ0 0 2
产品说明：
T S -GelRed 核酸凝胶染料（以下简称TS-GelRed ）是一种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的核酸凝胶电泳荧光染 色试剂。艾姆斯氏试验结果也表明 TS-GelRed 在凝胶染色浓度下完全无诱变性，它不易挥发升华，人体不会吸入， 它可替代溴化乙锭（EB ）成为一种安全无毒的核酸染料。由于 TS-GelRed 和EB有相同的光谱特性，无需改变滤光片 及观察装置（普通紫外凝胶透射仪）。
常见问题与解决方案：
1 .如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。 2.如 果 染 色 后 问 题 依 旧 存 在 ， 则 说 明 问 题 与 染 料 无 关 ， 请 尝 试 ： 降 低 琼 脂 糖 浓 度 、 选 用 更 长 的 凝 胶 、 延 长 凝 胶 时 间 以保证边缘清晰、改进上样技巧或选择泡染法染色。
使用方法：
1．胶染法（用法同EB）
（1）制胶时加入TS-GelRed（例如：每100mL琼脂糖溶液中加入10 μl TS-GelRed 10,000×水溶液）。 （相对较少，500 μl染 料大约可以做100块50 mL的胶。 由于TS-GelRed具有良好的稳定性，室温下在酸或碱缓冲液中 极 其稳定，耐光性强，可室温保存。摇晃，振荡 或者翻转以保证染料充分混匀。TS-GelRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。 含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备，并长期保存直到使用。 此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。
注意事项：
用泡染法染色时，染料用量较多，单次使用的染色液可重复使用3次左右。 3 × TS- Ge lR e d染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。
核酸染料比较
系统或 蓝色可 紫外透射仪 见光激发
250, 500/530 290, 380, nm 中 1200-600元 /0.5ml 10 µL 24-12元
中 550元/0.5ml 10 µL 11元
低 120元/1ml 5-10µl
低
核酸染料比较
EcoDye 灵敏度 稳定性 ++++ +++++ 安全无毒；没 有诱变性 室温/-4℃, 避 光 dsDNA 、 适用性 ssDNA 或 RNA 标准的紫外透 检测 射仪、可见光 312 nm UV 凝胶成 透射仪或激光 像系统 扫描仪 激发/发射波 295, 490/530 长 价格 nm 中 1000-600元 /0.5ml 用量/100mL Agarose Gel 价格/100mL Agarose Gel 5 µL 10-6元 270, 510/600 nm 中 1200-600元/0.5ml 10 µL 24-12元 Gelred ++++ +++++ 在 18.5 μg /mL S9 代谢活化时有微弱 的诱变性 室温 dsDNA 、ssDNA 或 RNA Gelgreen ++++ +++++ 安全无毒；没 有诱变性 SYBR Green ++++ ++++ 剂量达到1μg /plate 时，致突 诱变性比EB低 变 -20℃，避光保 -20℃，避光保 存6-12个月 dsDNA 、 存6-12个月 dsDNA 、 SYBR Gold ++++ ++++ SYBR Safe +++ +++++ 诱变性比EB要低得 多 GeneGreen ++++ ++++ Gold view ++ ++++ EB +++ ++++
常见核酸染料选择浅析
常见核酸染料选择浅析（李路军河南农业职业学院植物科学系河南郑州450000）摘要：由于只需简单温和的物理方法（光照）激发和检测，荧光染料是研究生物学微观世界特别是核酸时最常用的示踪工具之一。
DNA电泳后检测凝胶的EB大概是最为人熟知的荧光核酸染料。
除了染胶，荧光核酸染料还可用于荧光原位杂交中作为常见的复染剂。
下面比较一下在分子生物学实验和细胞学实验中常用的荧光染料。
关键词：核酸染料、EB、GeneFinder、Goldview、SYBER greenI、GelRed、GelGreen引言：作为生物体内的重要的大分子，核酸是研究生命现象与本质的物质基础，通过对它们的理化性质、复制与转录、表达与调控等的研究，可以了解生命有关的本质规律。
因此，对核酸的研究具有及其重要的意义。
但核酸肉眼不可见，对其的研究主要是借助一定的仪器来观察它的形态、大小、表达量，其中最常见的也是最简单的是琼脂糖凝胶电泳。
EB(溴化乙锭)是实验室最常用的核酸染料，有着简单、快速、灵敏度高的特点，但是由于其有着强烈的致突变能力和中度致癌性，对实验者和周围环境都有着较大的危害。
溴化乙锭(EB)是分子生物学实验室常用的一种核酸荧光染料。
但是，由于EB是一种强烈的致癌物，因此，如何消除EB对实验室的污染，是分子生物学实验室安全所必须面对的一个难题。
A bstract：Because only needs the simple temperate physical method(illumination)to stimulate and the examination,the fluorescent dye studies the biology microcosm is when specially the nucleic acid one of most commonly used tracing tools.After DNA electrophoresis,examines the gelatin EB is the fluorescence nucleic acid dye which probably the most person knew very well. Except dyes the rubber,the fluorescence nucleic acid dye may also use in the fluorescence home position hybrid taking the common counterstain.Following compares in the molecular biology experiment and the cytology experiment the commonly used fluorescent dye.Key word:Nucleic acid dye,EB,GeneFinder,Goldview,SYBER greenI,GelRed,GelGreenIntroduction：In the achievement organism's important macro-molecule,the nucleic acid is studies the biological phenomena and the essential material base,through to their physics and chemistry nature,the duplication and the duplication,the expression and the regulation and so on research,may understand the life related essence rule.Therefore,has and the vital significance to the nucleic acid research.But the nucleic acid naked eye is not obvious,is mainly draws support from certain instrument to its research to observe its shape,the size,the expression quantity,what most common is also the simple is the agarose gel electrophoresis.EB(bromination second grade spindle)is the laboratory most commonly used nucleic acid dye,has simply,fast,the sensitivity high characteristic,but because it has intense sends the sudden change ability and the moderatecarcinogenicity,has the big harm to the laboratory technician and the environment.Bromination second grade spindle(EB)is the molecular biology laboratory commonly used one kind of nucleic acid fluorescent dye.But,because EB is one kind of intense careinogen,therefore,how to eliminate EB to the laboratory pollution,is a difficult problem which the molecular biology laboratory security must face.1.EB核酸染料溴化乙锭（EB）是一种常规核酸染料，被广泛应用于观察、检测琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶中的DNA或RNA。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
环境安全、极其灵敏的核酸凝胶染色试剂GelRed&GelGreen-真正的EB替代者
水溶性包装产品通过美国环保标准的安全测试，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成环境污染。
G elRedTM和GelGreenTM是由美国 BIOTIUM 公司开发的两种集高灵敏度、低毒性和超稳定性于一身的，极佳的核酸凝胶荧光染色试剂。
目前，大多数商业化的核酸凝胶染色试剂总是在安全性、稳定性和灵敏性等方面不能完全令人满意。
例如，EB 作为使用最广泛的核酸凝胶染色试剂，能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度，但它是一种高诱变性的化学物质，且染色后背景荧光信号较高（图1）。
SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。
但 SYBR Green I尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解，稳定性差导致染色效果极不可靠。
SYBRsafe 被认为是市场上较为安全的核酸染料，但它的染色效果还远不及 SYBR Green I，且毒性依然较高(图3）。
GelRed和GelGreen无论用于预制凝胶染色还是凝胶电泳后染色，都表现出了极高的灵敏度。
为配合312nm-UV凝胶成像系统而设计的GelRed，在使用了我们新开发的具有专利的试验步骤后（该试验步骤中使用稀释的NaCl溶液替代传统的TBE缓冲溶液），在凝胶电泳后染色中优于或者至少相当于 SYBR Gold。
但与SYBR Gold 不同，GelRed在预制凝胶中使用时仍然有极高的灵敏度。
我们新开发的GelGreen可以满足使用 488 nm 激光凝胶扫描仪或者可见光激发的 Dark Reader 的研究人员的使用要求。
GelGreen 无论是在预制凝
胶还是凝胶电泳后染色中都与 SYBR Green I 灵敏度相当，但不存在后者的稳定性问题。
实际上，GelRed 和 GelGreen ，特别是GelRed非常稳定，可以长期在室温下保存。
当这两种染料稀释在TBE或者类似的电泳缓冲溶液中时甚至可以使用微波炉加热，便于采用常规方法制备预制凝胶。
含有染料的预制凝胶可以成批制备，长期保存。
同样重要的是，GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green 提高了安全性。
独立的测试服务公司（Litron Laboratories, Inc.）进行的标准艾姆斯氏测试结果表明，在18.5μg/mL(该浓度远高于推荐用于电泳后染色的约 4μg/mL 的 3X 染色液)浓度下，GelGreen没有诱变性，而 GelRed 也仅在 S9 代谢活化时有微弱的诱变性。
GelRed 和 GelGreen 的特殊化学结构使其难以穿透细胞膜进入细胞，正是这一特性降低了染料的细胞毒性。
见图3。
相反，SYBR Green I 广泛地用于活细胞线粒体和核 DNA 染色，这正是由于它能快速的被细胞吞入。
由于已知 SYBR Green I 对紫外线导致的突变有强烈的增强作用（Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91(2001)），因此它的高细胞膜透性使它在紫外环境观察时成为凝胶染色的主要有害物质。
图1：GelRed和EtBr预制胶染色（precast gel staining）对比图。
琼脂糖浓度为1%，缓冲液为TBE。
四个泳道的加样量从左至右分别为200 ng, 100 ng, 50 ng and 25 ng。
在300nm紫外灯下成像。
结果显示GelRed 较EtBr有着更高的灵敏度和更低的本底色。
图 2. GelGreen（绿色）GelRed（红色）在 PBS 缓冲溶液中结合dsDNA后的激发和发射光谱。
图3：分别用1X SYBR Green 1、SYBR Safe、GelRed和Gelgreen在 PBS 缓冲液中对Hela细胞染色5分钟和30分钟。
成像结果表明Gelred和GelGreen染色剂几乎没有穿透细胞膜进入细胞内，而SYBR Green 1、SYBR Safe 则完全进入细胞内，并与核酸结合（绿色发光部分）。
这充分证明GelRed和GelGreen具有极好的安全性。
更详细的安全检测报告可以到 官方网站下载。
特性:
1、高灵敏度
GelRedTM和GelGreenTM是目前最灵敏的凝胶核酸染料
2、稳定性极好
可随预制胶直接加热而不会降解；室温下可长期保存
3、更安全
艾姆斯氏试验结果表明，该染料的诱变性远小于溴化乙锭,其水溶性包装产品通过美国环保标准的安全测试
4、广泛的适应性
适用于预制凝胶染色和凝胶电泳后染色
5、染色过程简单
预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；电泳后染色也仅需30 分钟，因本底色极低而无需脱色或冲洗
6、对 DNA 和 RNA 的迁移影响极小
对核酸迁移的影响小于 SYBR Green I
7、与标准凝胶成像系统及可见光激发的观察装置完美兼容
使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时，GelRedTM可以完美替代 EB；使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时，GelGreenTM足以替代任意一SYBR染料
>>假货声明<<
上海开放生物科技有限公司是美国BIOTIUM 官方授权唯一总代理商，向广大用
户提供原装进口的产品。
目前，市场上有部分不法经销商利用EB、GoldView等
致癌染料，勾兑仿制美国GelRed产品，给广大用户的实验结果造成不良影响。
上海开放生物受美国方面委托，在此提醒广大用户，从总代理购买原装产品以保
证产品的质量及安全性。