GoldView核酸染料
DNA琼脂糖凝胶电泳-染料分析
核酸凝胶电泳染料的选择1.EB溴化乙锭（EB）由于其价格便宜、使用方便已成为最常用的核酸染料，被广泛应用于观察、检测琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶中的DNA或RNA。
然而EB是一种强诱变剂，具有中等毒性，对皮肤、眼睛、口腔和上呼吸道系统有刺激性作用，对人体有潜在危害性。
且废弃的EB染液易污染环境。
EB本身在紫外下不发光，与单链、双链或三链DNA结合后发出明亮的荧光，EB-DNA结合物会导致染料的光漂白和DNA单链断裂，且具有潜在的诱变作用。
EB的使用方法简单，可在制胶时将其加入进行前染，也可在电泳结束后进行后染。
前染有利于节约时间，但是易出现条带变形拖尾等问题，后染较费时，但效果较好。
2.GeneFinderGeneFinder TM是新型的核酸染料，可以代替EB作为各种核酸电泳的染色剂。
与强致癌性的EB不同，GeneFinder TM属于花青类染料，毒性较低，GeneFinder TM与dsDNA结合发出荧光，其检测核酸的灵敏度比EB染色法高。
GeneFinder TM染料最大吸收峰为470nm，与该染料结合的核酸在紫外线下呈现绿色荧光，另外，该染料同样能引起有机体突变，在使用时候一样要采取适当的保护措施。
3.GoldViewGoldView TM也是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldView TM与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
GoldView对于大片段DNA的染色效果较好，但对于500 bp以下的片段效果并不理想，而且它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般约5-10min条带就会消失。
所以应尽快拍照、观察。
另外，GoldView 灵敏度差，本底色严重，不适用于切胶回收。
且其毒性较大，尤其在紫外灯下，其诱导突变能力极高。
4.SybrGreenISybrGreenI也是一种常用的核酸染料，它与双链DNA(dsDNA)结合后，荧光大大增强，检测的灵敏度也高于EB。
关于电泳GoldViewTM 核酸染料安全性问题
关于电泳GoldViewTM 核酸染料安全性问题GoldViewTM 核酸染料——使用说明“注意事项”中有指出：虽然未发现GoldView有致癌作用，但对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。
最近看到的资料显示goldview的主要成分含有吖叮橙，吖叮橙是不致癌，但却是强烈致突变的物质。
吖啶橙(Acridine Orange，AO)简介3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3 ·HCl ·ZnCl2, 分子量438.12 g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。
它与细胞中DNA 和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA 结合量多发桔黄色或桔红色荧光。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA 染色。
因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。
吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。
goldview的染色效果：有人经过实验对比发现，信号不太灵敏，有些条带检不出来，而EB 胶却清晰可见。
关于GoldViewTM 核酸染料中吖叮橙毒性文献The effective ingredient in GoldView is acridine orange (extremely cheap from Aldrich or Sigma at ~100g/$140!)Acridine orange is a known gel stain since 1970s (“Analysis of single- and double-stranded nucleic acids on polyacrylamide and agarose gels by using glyoxal and acridine orange”. Proc Natl Acad Sci U S A. 1977 Nov;74(11):4835-8.Acridine orange is a highly toxic and known mutagen!Selected list of papers on acridine orange toxicity:Web, RB. Mutat Res. 1984 Jul;137(1):1-6.Wugmeister, M. Yale J Biol Med. 1983 Jan-Feb;56(1):9-13.Martin, SE. Mutat Res. 1981 Jun;82(1):41-6.Ashad, R. Letters in Applied Microbiology 2006, 42:94.因此在电泳实验过程中，小心注意点，做好防护工作！！！。
EB替代品及其优缺点
1.GeneFinder核酸染料GeneFinder是新型核酸染料，具有安全、灵敏等突出优点，可以代替溴化乙锭(EB)作为各种核酸电泳的染色剂。
与强致癌性的EB不同，GeneFinder毒性很低，使用安全，可有效保护实验操作者和环境。
GeneFinder与dsDNA结合荧光信号可增强800—1000倍，其检测核酸的灵敏度比EB染色法平均高10倍左右，与SYBRGreenI染料的灵敏度相当。
另外，该染料同样能引起有机体突变，在使用时候一样要采取适当的保护措施。
1.1.GeneFinder的特点：1. 安全性：GeneFinder核酸染料致突变性远低于EB数倍甚至数十倍2. 灵敏度：检测核酸的灵敏度平均高于EB染色法10倍左右3. 操作简单：本染料有多种使用方法，操作简单4. 适用范围：适用于多种核酸电泳分析，可以对DNA、RNA、及寡核苷酸等进行染色5. 兼容性：对常用酶（如Taq酶、逆转录酶、内切酶、连接酶等）没有抑制作用2.Goldview核酸染料GoldenView是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldenView与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
在100ml琼脂糖胶溶液中加入5-10µlGoldenView即可。
在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，也可用于染RNA。
无致突变性；而溴化乙锭EB是一种强致癌剂，选用GoldenView代替EB比较明智和安全。
目前尚未发现Geneview有致癌性，但是在使用中发现它有一定的刺激性，在使用过程中应戴上手套。
Goldview对于大片段DNA的染色效果还行，但是对于500bp以下的片段效果不是很好，还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般5-10min条带就会消失。
所以应该抓紧时间拍照后再观察。
另外Goldview不适用于胶回收。
灵敏度差，本底色严重，不利于回收，不稳定。
EB的危害及使用方法
EB是诱变剂，有累积效应，不要直接接触，但是要注意通过呼吸摄入，故此环境要通风。
cynosure1982网友说：EB可以被皮肤吸收。
做实验的时候一定要带手套。
它是DNA突变的诱变剂，可以嵌入DNA，使DNA发生突变，致癌。
但是，只要按照标准的操作使不会有问题的。
vivalk网友说：可以用GoldViewTM代替EBGoldViewTM 核酸染料——使用说明概述GoldViewTM是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldViewTM与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，而单链DNA呈红色荧光。
GoldView不仅能染DNA，也可用于染RNA。
通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验，致突变性结果均为阴性；而溴化乙锭（EB）是一种强致癌剂。
因此用GoldviewTM代替EB不失为一种明智的选择。
使用方法1. 将100ml琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%～2%）在微波炉中融化。
2. 加入5µl GoldView，轻轻摇匀，避免产生气泡。
3. 冷却至不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4. 电泳完毕在紫外灯下观察。
若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰、背景较低的照片。
注意事项1. 胶厚度不宜超过0.5cm，胶太厚会影响检测的灵敏度。
2. 加入GoldView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。
3. 通过凝胶电泳回收DNA片段时，建议使用GoldView染色，在自然光下切割DNA条带，避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。
4. 虽然未发现GoldView有致癌作用，但对皮肤、眼睛会有一定的刺激，操作时应戴上手套。
GreenView凝胶核酸染料10000×水溶液
EB 终结者Red 凝胶核酸染料10,000×DMSO（Nucleic Acid Gel Stain, 10,000×DMSO ）Cat number ：KGM025R For Research Use OnlyStore at 4℃ for six monthsExpire date ：一、 试剂盒说明EB 终结者Red 凝胶核酸染料是一种高灵敏度的用于检测琼脂糖凝胶以及丙烯酰胺凝胶中的核酸荧光染料，不论是双链还是单链的DNA 或者RNA ，EB 终结者Red 染料都有很灵敏的染色信号。
使用者可以选择在制备凝胶过程中或者制备完毕之后进行染色。
EB 终结者Red 染料可以匹配300nm 、254nm 或者蓝光紫外透射仪，也可以用于匹配了可见光激发器如488nm 激光器的凝胶成像仪。
本产品是10,000X 的EB 终结者Red 染料浓缩型溶液，用于制胶前染色可以被10,000倍稀释，用于制胶后染色可以5,000倍稀释。
1管10,000X 溶液至少可以用于染色100张迷你胶。
用EB 终结者Red 染色凝胶中的核酸可以用于下游的胶抽提和克隆实验。
EB 终结者Red 染色可以通过酚/氯仿抽提以及乙醇沉淀的方法很高效地从DNA 中去除掉。
EB 终结者Red 光谱特性Excitation (blue) and emission spectra (red) of EB 终结者Red bound to dsDNA in TBE buffer.EB 终结者Red Dye Ex/Em: 535/615 nm, bound to nucleic acid..二、试剂盒组份三、 操作说明1、制胶后染色1.1、根据您的实验步骤进行核酸的凝胶电泳。
1.2、以TE 、TBE 或者TAE buffer 稀释EB 终结者Red 10,000X 储液试剂5000倍，成为2X EB 终结者Red 染色液。
1.3、小心地将凝胶转移至聚丙烯容器中，缓缓倒入足量的2X EB 终结者Red 染色液，保证浸没胶体。
EB的替代物
溴化乙(ethidium bromide )：溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。
溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。
缺点：溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。
许多人认为溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性。
EB的替代物：GelRed和GelGreen、SYBR Green Ⅰ、GoldView、GelRed和GelGreen：是一种新型的聚次甲基染料，不能穿透细胞膜，但可以和游离的DNA 高效结合，是一种高灵敏的核酸染料，与EB染料灵敏度相当。
不具有致癌毒性，是一种安全的核酸染料。
废弃的Gill green在自然环境下会分解，因此无需特殊处理。
优点：1.无毒性：具有独特的油性和大分子量特点因此不能穿透细胞膜进入细胞内，诱变性远远小于EB。
2.灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色。
3.稳定性高:室温、酸碱溶液极其稳定，耐光强，不挥发。
4.信噪比高：样品荧光信号强，背景低。
5.用法简单：可制胶中加，也可电泳后染色。
缺点：价格昂贵。
SYBR GreenⅠ：是高敏度的DNA荧光染料，在紫外照射透视下，与双链DNA接合的SYBR GreenⅠ呈现绿色荧光，单链DNA则呈橘黄色。
适用于各种电泳分析。
优点:1.高灵敏度：与双链DNA的亲和力非常高，因此可用作电泳前染色，至少可检出20pgDNA，高于EB25~100倍。
2.信噪比高：样品荧光信号强，背景低。
3.适用范围广：适用于多种凝胶电泳方法，琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳。
4.对分子生物学中常用的酶（Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶）没有抑制作用。
与EB相比，诱变能力大大降低。
缺点：不稳定，易降解。
GoldView：是一种可以替代EB的新型核酸染料，采用琼脂糖电检测DNA时，其与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立
琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立王燕;彭莉萍;罗镇明【摘要】目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Goldview的最佳浓度和方法,尽可能减少实验中Goldview用量,控制其对实验室环境的污染.方法配置含不同浓度Goldview的上样缓冲液,混合不同浓度DNA溶液的琼脂糖凝胶电泳,然后对比预染样品法、前染法及后染法的染色效果.结果实验结果显示上样缓冲液中含0.4％Goldview的预染样品法电泳检测核酸的效果最佳且能检测的核酸样品浓度在16.5ng或以上为最佳.结论核酸染料Goldview在核酸的琼脂糖凝胶电泳中使用的最佳方案为预染样品法,实验中推荐浓度达到普通实验要求,并且最易控制对周围环境的污染.【期刊名称】《遵义医学院学报》【年(卷),期】2012(035)004【总页数】3页(P276-278)【关键词】琼脂糖凝胶电泳;核酸染料;Goldview【作者】王燕;彭莉萍;罗镇明【作者单位】遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学教研室,广东珠海 519041【正文语种】中文【中图分类】Q33目前实验室中所用的核酸染料主要有EB(溴化乙啶)、SYBR Green I和Goldview 等。
作为核酸染料它们对人体都存在一定程度的危害。
EB作为一种常规的核酸染料曾广泛的被应用于琼脂糖凝胶[1]和聚丙烯酰胺凝胶[2]中DNA与RNA的观察和检测，但EB是一种诱变剂，可插入核酸相邻碱基平面之间，引起基因突变，具有中等毒性，对人体有潜在的危害性[3]。
SYBR Green I是近些年新推出的一种荧光核酸染料，因其危害性较低而逐渐成为EB的替代品之一[4]，但ssDNA的检测灵敏度不高，效果不好，应用于DNA凝胶电泳中稳定性不高。
目前琼脂糖凝胶电泳中Goldview已被广泛使用，其染色效果和灵敏度与EB相近，且未证实有致癌性[5]，是EB较理想的替代品。
EB替代品及其优缺点
1.GeneFinder核酸染料GeneFinder是新型核酸染料，具有安全、灵敏等突出优点，可以代替溴化乙锭(EB)作为各种核酸电泳的染色剂。
与强致癌性的EB不同，GeneFinder毒性很低，使用安全，可有效保护实验操作者和环境。
GeneFinder与dsDNA结合荧光信号可增强800—1000倍，其检测核酸的灵敏度比EB染色法平均高10倍左右，与SYBRGreenI染料的灵敏度相当。
另外，该染料同样能引起有机体突变，在使用时候一样要采取适当的保护措施。
1.1.GeneFinder的特点：1. 安全性：GeneFinder核酸染料致突变性远低于EB数倍甚至数十倍2. 灵敏度：检测核酸的灵敏度平均高于EB染色法10倍左右3. 操作简单：本染料有多种使用方法，操作简单4. 适用范围：适用于多种核酸电泳分析，可以对DNA、RNA、及寡核苷酸等进行染色5. 兼容性：对常用酶（如Taq酶、逆转录酶、内切酶、连接酶等）没有抑制作用2.Goldview核酸染料GoldenView是一种可代替溴化乙锭（EB）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA时，GoldenView与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
在100ml琼脂糖胶溶液中加入5-10µlGoldenView即可。
在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光，也可用于染RNA。
无致突变性；而溴化乙锭EB是一种强致癌剂，选用GoldenView代替EB比较明智和安全。
目前尚未发现Geneview有致癌性，但是在使用中发现它有一定的刺激性，在使用过程中应戴上手套。
Goldview对于大片段DNA的染色效果还行，但是对于500bp以下的片段效果不是很好，还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般5-10min条带就会消失。
所以应该抓紧时间拍照后再观察。
另外Goldview不适用于胶回收。
灵敏度差，本底色严重，不利于回收，不稳定。
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GoldenView
使 用 说 明 书
GoldenView™ 核酸染料
概述
GoldenView™是一种可代替溴化乙锭（EB ）的新型核酸染料，采用琼脂糖电泳检测DNA 时，GoldenV iew™与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB 相当，使用方法与之完全相同。
在100ml 琼脂糖胶溶液中加入5-10µl GoldenV iew™即可。
在紫外透射光下双链DNA 呈现绿色荧光，也可用于染RNA 。
使用方法 1.
将100ml 琼脂糖凝胶溶液（浓度一般为0.8%~2%）在微波炉中融化。
2. 加入5-10µl GoldenView （如果背景过高可以适当减少用量，如果敏感度过低，可以适当增加用量），轻轻摇匀，避免产生气泡。
3.
冷却至不烫手时倒胶，待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4. 电泳完毕在紫外灯下观察。
若使用数码相机照像记录，则关闭相机的闪光灯，放在自动档即可；若使用凝胶成像系统照相，通过调节光圈、曝光时间，选择合适的滤光片，可得到成像清晰、背景较低的照片。
注意事项 1.
胶厚度不宜超过0.5cm ，胶太厚会影响检测的灵敏度。
2.
加入GoldenView 的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响，但不明显。
3. 通过凝胶电泳回收DNA 片段时，建议使用GoldenV iew 染色，在自然光下切割DNA 条带，避免紫外线与EB 对目的DNA 产生的损伤，可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。
4. 虽然未发现GoldenView 有致癌作用，但是各种核酸染料的致癌作用学术界一直存在争议，同时GoldenView 对皮肤、眼睛会有一定的刺激，为安全起见，我们强烈建议操作时依然应该每次带手套，不小心接触皮肤后应该立刻清洗，并妥善处理废弃物。
NOT FOR HUMAN OR DRUG USE。