SYBR GreenⅠ 核酸染料
DNAGREEN核酸染料使用说明
DNAGREEN核酸染料使用说明货号：G7140规格：0.5ml(10000×)保存：常温运输，4℃保存，有效期一年。
注意：DNAGREEN核酸染料属于微量核酸检测试剂，使用时请按照说明书操作。
产品简介：目前最常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I（属于花氰类染料）虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高，但由于其化学稳定性差；此外，SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位，很容易使DNA条带模糊和扭曲，电泳清晰度和分辨率下降。
所以在实际应用中依然不能有效替代EB。
本产品是同时具有EB稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料，其特点如下：1.低毒。
其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品，有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2.灵敏。
检测灵敏度跟EB相当，能满足常规核酸电泳实验要求。
3.稳定。
对光、水和热的稳定性跟EB相当，可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
4.无分子间位移现象。
不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。
5.使用方法多样。
既可以加入熔化的胶中，也可以电泳后染色，还可用于PAGE。
6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液（如SuperBuffer-2、TBE、TAE）兼容，但在SuperBuffer-2和TBE中背景最低。
7.观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源，可以使用现成的观察EB的300nm UV。
8.可用于RNA染色(也呈绿色)。
9.DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察（需要将胶放在黑色背景下）。
由于避免了UV对DNA的伤害，尤其适用于胶回收实验。
使用方法:电泳中染色：本方法是将DNAGREEN直接加入溶化的凝胶中使用，只适用于琼脂糖凝胶电泳，不适用于PAGE。
1.将DNAGREEN直接加入到融化的琼脂糖凝胶中，每100mL凝胶加3-10uL DNAGREEN，混合均匀后倒胶。
琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料（如EB和SYBR Green I，否则会相互干扰）。
SYBRGreen I 使用介绍
SYBR Green I使用介绍SYBR Green I核酸染料简介SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单，无须脱色或冲洗；至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低，可适用于多种电泳分析。
SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。
SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用；另外，SYBR Green I 与EB相比，诱变能力大大降低。
SYBR Green I 核酸染料特点● 灵敏高：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
● 操作简单：无须脱色或冲洗。
● 适用范围广：可适用于多种电泳分析。
● 使用方便：不影响其它修饰酶作用。
● 经济：价格比银染便宜。
电泳用SYBR Green I 使用方法简介一、SYBR Green I预染色方法1、该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
2、工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR Green Ⅰ工作液。
SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。
3、制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。
4、样品染色：向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。
SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。
5、DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和5μL DNA Marker稀释液和1μLSYBR Green Ⅰ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。
EB的替代物
溴化乙(ethidium bromide )：溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。
溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。
缺点：溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。
许多人认为溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性。
EB的替代物：GelRed和GelGreen、SYBR Green Ⅰ、GoldView、GelRed和GelGreen：是一种新型的聚次甲基染料，不能穿透细胞膜，但可以和游离的DNA 高效结合，是一种高灵敏的核酸染料，与EB染料灵敏度相当。
不具有致癌毒性，是一种安全的核酸染料。
废弃的Gill green在自然环境下会分解，因此无需特殊处理。
优点：1.无毒性：具有独特的油性和大分子量特点因此不能穿透细胞膜进入细胞内，诱变性远远小于EB。
2.灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色。
3.稳定性高:室温、酸碱溶液极其稳定，耐光强，不挥发。
4.信噪比高：样品荧光信号强，背景低。
5.用法简单：可制胶中加，也可电泳后染色。
缺点：价格昂贵。
SYBR GreenⅠ：是高敏度的DNA荧光染料，在紫外照射透视下，与双链DNA接合的SYBR GreenⅠ呈现绿色荧光，单链DNA则呈橘黄色。
适用于各种电泳分析。
优点:1.高灵敏度：与双链DNA的亲和力非常高，因此可用作电泳前染色，至少可检出20pgDNA，高于EB25~100倍。
2.信噪比高：样品荧光信号强，背景低。
3.适用范围广：适用于多种凝胶电泳方法，琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳。
4.对分子生物学中常用的酶（Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶）没有抑制作用。
与EB相比，诱变能力大大降低。
缺点：不稳定，易降解。
GoldView：是一种可以替代EB的新型核酸染料，采用琼脂糖电检测DNA时，其与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
LAMP染料选择
为满足现场快速检测需求，本研究比较了在反应体系中加入不同核酸染料对LAMP反应的影响，以为建立基于颜色变化判定试验结果的现场LAMP检测方法所参考。
对于反应前加入LAMP反应的四种核酸染料Calcein（钙黄绿素）, SYBR GreenⅠ, Eva Green和HNB, Calcein对反应速度的影响最小，是适合反应前加入环介导等温扩增反应以观察颜色变化的最佳颜色指示剂。
HNB的抑制作用最大且容易导致反应稳定性差，不建议用作LAMP反应的颜色指示剂。
而SYBR Green Ⅰ和Eva Green在反应前加入，浓度低时颜色变化不明显，浓度大了会抑制反应速度，因此也不建议用作LAMP反应前加入的颜色指示剂。
生工的GREENDYE染料就是SYBR Green I，10000×的阳性扩增反应中会产生大量的类似花椰菜结构的产物和白色焦磷酸续沉淀，扩增产物的检测方法多样，可用凝胶电泳检测、直接用肉眼检测或在反应体系中加人染料，根据颜色的变化进行检测，还可以利用浊度仪，根据扩增产物混浊度的不同对原始核酸分子进行实时定量分析。
1．LAMP引物的设计：LAMP引物的设计主要是针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3’端的F3c、F2c 和Flc区以及5’端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种引物。
FIP(Forward Inner Primer)：上游内部引物，由F2区和F1C区域组成，F2区与靶基因3’端的F2c区域互补，F1C区与靶基因5’端的Flc区域序列相同。
F3引物：上游外部引物(Forward Outer Primer)，由F3区组成，并与靶基因的F3c区域互补。
BIP引物：下游内部引物(Backward Inner Primer )，由B1C和B2区域组成，B2区与靶基因3’端的B2c区域互补，B1C域与靶基因5’端的Blc区域序列相同。
B3引物：下游外部引物(Backward Outer Primer )，由B3区域组成，和靶基因的B3c区域互补。
猪圆环病毒1型、2型、3型SYBR_GreenⅠ实时荧光定量PCR鉴别方法的建立及应用
·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘 要：猪圆环病毒（PCV ）包括猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪圆环病毒3型（PCV3）。
近些年来，PCV1、PCV2、PCV3基因型之间存在共感染，因此建立一种快捷、特异、敏感的PCV1、PCV2、PCV3的SYBR Green Ι实时荧光定量PCR 鉴别检测方法显得尤为必要。
本试验通过特异性引物筛选，各项反应条件优化，建立了实时荧光定量PCR 鉴别方法。
结果表明：PCV1、PCV2、PCV3检测下限分别为40.3、25.2、22.4 copies/μL 。
与猪瘟病毒（CSFV ）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV ）、猪伪狂犬病病毒（PRV ）、猪细小病毒（PPV ）均无交叉反应。
批内及批间变异系数均小于1%。
对98份PCV 疑似阳性病料检测结果表明，PCV1、PCV2、PCV3感染率分别为10.2%、65.3%、53.1%，共感染率为7.1%。
该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性，为PCV1、PCV2、PCV3的早期检测、定量检测及后期研究提供了技术手段。
关键词：猪圆环病毒；特异性；敏感性；SYBR Green Ι实时荧光定量PCR 中图分类号：S852.65文献标志码：A文章编号：1674-6422（2023）06-0085-07D evelopment and Application of a SYBR Green Real-Time Quantitative PCR Method for Differentiation of Porcine Circoviruses 1, 2 and 3收稿日期：2021-05-24基金项目：山东省重大科技创新工程项目（2023CXGC010705）；山东省现代农业产业技术体系项目（SDAIT-08-06）；山东省自然基金（ZR2022MC011）；济南市“新高校20条”资助项目（202228112）；山东省科技型中小企业创新能力提升工程（2023TSGC0734）；山东省农业科学院创新工程（CXGC2018E10, CXGC2023G03, CXGC2023E02, CXGC2023A21）作者简介：田瑶，女，硕士，主要从事动物病毒学与免疫学研究通信作者：李俊，E-mail：***************；韩先杰，E-mail：**********************猪圆环病毒1型、2型、3型 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR 鉴别方法的建立及应用田 瑶1,2，时建立2，彭 喆2，李 琛2，徐绍建2，吴晓燕2,3，李佳昕1,2，杨 莹2,3，王 硕2，刘 畅2，韩 红2，李 俊1,2,3，韩先杰1（1.青岛农业大学动物医学院，青岛266109；2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，济南250100；3.山东师范大学生命科学院，济南250100）2023,31(6):85-93Abstract: Porcine circovirus (PCV) includes three genotypes: Porcine circovirus 1 (PCV1), Porcine circovirus 2 (PCV2) and Porcine circovirus 3 (PCV3). In recent years, there have been co-infections among these 3 genotypes. Therefore, it is particularly necessary to develop a fast, specifi c and sensitive SYBR Green I real-time quantitative PCR method for differentiation of PCV1, PCV2 and PCV3. In this experiment, a real-time fl uorescent quantitative PCR method was developed by using specifi c primers and optimizing various reaction conditions. The results showed that the lower limits of detection were 40.3 copies/μL for PCV1, 25.2 copies/μL for PCV2 andTIAN Yao 1,2, SHI Jianli 2, PENG Zhe 2, LI Chen 2, XU Shaojian 2, WU Xiaoyan 2,3, LI Jiaxin 1,2,YANG Ying 2,3, WANG Shuo 2, LIU Chang 2, HAN Hong 2, LI Jun 1,2,3, HAN Xianjie 1(1. College of Veterinary Medicine, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China; 2. Institute of Animal Science and Veterinary Medicine , Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China; 3. College of Life Sciences, Shandong Normal University,Jinan 250100, China)· 86 ·中国动物传染病学报2023年12月猪圆环病毒（Porcine circovirus, PCV）是圆环病毒科圆环病毒属的一种无囊膜环状单链 DNA 病毒，也是迄今为止发现的具有自主复制能力的最小的动物病毒[1-2]。
SYBR Green I
SYBR Green I概念SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。
在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。
因此，SYBR GSYBR Green Ireen I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR 体系存在的双链DNA数量。
SYBR Green I 的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。
SYBR Green I核酸染料(电泳用)SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。
至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。
可适用于多种电泳分析。
SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳，和毛细管电泳等。
SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。
另外，SYBR Green I 与EB相比，诱变能力大大降低。
SYBR Green I 核酸凝胶染液(SYBR Green Ndcleic Acid Gel Stains)是一种高敏感性的荧光染液，用于检测琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶中的双链DNA和寡核苷酸。
当染液与核酸结合后，SYBR Green I 核酸凝胶染液的荧光信号会明显增强，因此经SYBR GreenI 核酸凝胶染液染色的凝胶显示出非常好的性价比，没有背景荧光。
为获得最佳的结果，凝胶最好在跑胶后再进行染色。
SYBR GreenI 核酸凝胶染液用于低含量的PCR产物，凋亡研究及异源双链分析中少量DNA的检测较为理想。
常用的核酸染料有哪些
EB（溴化乙锭）：溴化乙锭是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂，为强致癌诱变剂，但价格便宜。
它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。
在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。
EB的这种特性使其成为一种核酸染料，常用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸染色。
溴化乙锭在紫外区302nm和366nm处有吸收峰，在紫外光的照射下，溴化乙锭可被激发出橙红色的荧光（590nm）。
结合有DNA的溴化乙锭复合物的荧光强度要比没有结合DNA的染料高出20-30倍，因此溴化乙锭可检测到少至10ng的DNA条带，非常灵敏。
Gel Green和Gel Red：GelRed 和 GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定性于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。
其特点有：高灵敏度：GelRed 和 GelGreen 是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料之一；稳定性极好：可以使用微波炉加热，可以在室温下保存；更安全：艾姆斯氏试验结果表明，该染料的诱变性远小于溴化乙锭（EB）；广泛的适应性：适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色；染色过程简单：与EB一样，在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗；对 DNA 和 RNA 的迁移影响小：对核酸迁移的影响小于 SYBR Green 。
与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容：使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时，GelRed 可以完美的替代EB；使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时，GelGreen 足以替代任意一种 SYB染料。
但该染料会使小片段DNA迁移慢一些（与EB相比).Gold View I型/II型：Goldview对于大片段DNA的染色效果良好，但是在对于500bp以下的片段效果不是很好，还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般5-10min条带就会消失。
sybrgreen荧光染料原理
sybrgreen荧光染料原理SybrGreen是一种常用于荧光实验中的染料，其原理是通过与DNA结合来发射荧光信号。
SybrGreen染料属于靶向DNA结合的染料，能够与DNA的双链结构结合形成复合物，从而发射荧光信号。
SybrGreen的结构是一种孔雀石绿类似物，含有孔雀石绿的三苯基甲烷和二甲基氨基吡啶结构。
其对DNA结合的特异性通过与DNA之间的静电相互作用、氢键和疏水作用来实现。
SybrGreen与DNA结合后，其荧光发射强度会明显增加。
SybrGreen在实验中的应用非常广泛，可以用于许多DNA相关的实验，如实时荧光定量PCR、凝胶电泳和脱氧核糖核酸（DNA）染色等。
在实时荧光定量PCR中，SybrGreen用于检测PCR反应体系中的DNA扩增产物。
当PCR反应体系中存在DNA扩增产物时，SybrGreen与DNA结合形成复合物，通过荧光检测器检测到的荧光信号强度与扩增产物的量呈正相关。
SybrGreen的荧光信号可以通过PCR反应的循环数来定量分析扩增产物的初始模板数量。
通过绘制扩增曲线，可以根据荧光信号的变化来确定PCR反应的效果，并进行相对或绝对定量分析。
SybrGreen的使用非常方便，它不需要特定的标记或探针，只需在PCR反应体系中加入一定浓度的SybrGreen染料即可。
但是，需要注意的是，由于SybrGreen是非特异性染料，它可以与任何双链DNA结合，包括扩增产物以外的DNA，因此需要进行后续的熔解曲线分析来确定扩增产物的特异性。
此外，还需要注意的是，SybrGreen的荧光信号可能会受到PCR反应体系中其他物质的干扰，如副产物、背景荧光和PCR反应体系中的杂质等。
因此，在使用SybrGreen进行实验时，需要进行相应的优化实验来消除这些干扰因素。
总之，SybrGreen荧光染料的原理是通过与DNA结合来发射荧光信号，其广泛应用于实时荧光定量PCR等DNA相关的实验中。
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6μl
ddH O 2
补足至50μl
上海美季生物技术有限公司 Tel : 021-61452531 Fax : 021-61452532 Email : info@
该产品可用作实时定量 PCR专用荧光指示剂。用于任何一台 real-time PCR 仪上进行 PCR 反应。一般 使用时将 SYBR GREEN Ⅰ 稀释至 1X 浓度。 为了得到更高的荧光信号强度，根据所使用的聚合酶对其 耐受程度的不同，可以选择性的提高SYBR GREEN Ⅰ的浓度至3-4×。
上海美季生物技术有限公司
模板DNA
引物1[10 μM] 引物2[10 μM] 10×PCR Buffer dNTP Mixture (2.5mM each) Taq （2.5U/μl）
20×SYBR Green Ⅰ
<0.1μg
1μl 1μl 5μl 4μl
0.5-2μl
2.5μl
25mM MgCl2
特点
操作简单 价格便宜 适用范围广
储存方法
长期储存在 -20 ℃ 以下，避光 ；4Tel : 021-61452531 Fax : 021-61452532 Email : info@
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产品简介
SYBR GreenⅠ 核酸染料
SYBR Green Ⅰ是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料。与双链DNA结合后，其荧光大大增 强。这一性质使其用于扩增产物的检测非常理想。 SYBR Green Ⅰ的最大吸收波长约为 497nm，发射波长最大约为520nm。在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR Green Ⅰ荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射强荧光信号，而不掺入链中的SYBR Green Ⅰ染料分子仅有微弱荧光信号背景，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加同步。