Q_HNJD 011-2019混合型饲料添加剂大蒜素
山东省饲料添加剂和添加剂预混合饲料产物批准文号
饲料级甘氨酸铁络合物（Ⅱ）
2007.04.23
饲添（2007）2174
054
济南华鲁中牧化工有限公司
注册地址：济南市市中区济微路141号
生产地址：济南市市中区七贤镇文庄
饲料级矿物元素（Ⅱ）：氯化钴、碘化钾
2007.04.23
饲添（2007）2140
059
济南德超生物科技有限公司
注册地址：济南市济阳县孙耿开发区
生产地址：同上
饲料级甜菜碱盐酸盐（Ⅰ、Ⅱ）
2007.04.23
饲添（2007）2207
076
济南美诺和晟生物技术有限公司
注册地址：山东省章丘市相公镇
生产地址：同上
饲料级大蒜素（Ⅱ）、丙酸（Ⅱ）、微生物添加剂（Ⅱ）（枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌）
2007.06.08
饲预（2005）0739
预混料
2007.01.26
饲预（2007）4909
104
济南英大生物科技有限公司
注册地址：济南市桑园路50号
生产地址：济南市华山北路北陈工业园
预混料
2007.01.26
饲预（2007）2026
293
山东安特药业有限公司
注册地址：济南市历下区科院路十九号
生产地址：同上
预混料
2007.02.14
饲预（2007）5013
饲料级甜菜碱（I）、大蒜素（I）、饲料级复合微生物添加剂（I）（产朊假丝酵母、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌）、饲料级复合酶制剂（I）：（蛋白酶、淀粉酶、果胶酶：均产自黑曲霉、纤维素酶：产自李氏木酶、木聚糖酶：产自孤独腐质霉）
2007.01.26
饲添（2007）2143
大蒜素
大蒜素1.大蒜素的提取工艺1.1 提取方法大蒜素的提取方法主要有水蒸气蒸馏法、溶剂萃取法、超临界萃取法及超声、微波辅助提取等。
1.1.1 水蒸气蒸馏法其原理是将水蒸气通入不溶于水或难溶于水但具有一定挥发性的有机物质中( 大蒜油具有一定挥发性) , 使该有机物在低于100 ℃的温度下随水蒸气一起蒸馏出来, 再经进一步分离获得较纯物质。
本法的一般工艺流程为:大蒜去皮→洗净→加水捣碎→酶解→水蒸气蒸馏→油水分离→大蒜油孙淑爱[1]等探讨了蒸馏法提取大蒜油的适宜条件。
按照大蒜油的生产步骤和影响因素, 选择大蒜的破碎粒径、蒜酶激活剂—亚铁离子的浓度、发酵温度和蒸馏提取时间这4 个因素, 在三水平下对大蒜油的产率进行比较。
结果表明, 大蒜的破碎粒径为0.2 mm、亚铁离子的浓度为10 mmol/L、发酵温度在33 ℃、蒸馏提取时间为120 min 时, 大蒜油的产率最高, 为0.49 %。
水蒸气蒸馏法具有设备简单, 成本低、稳定性好等特点, 是最常用的方法之一。
但是因发酵和蒸馏温度相对较高, 蒜氨酸酶的活性下降, 大蒜素有损失, 使出油率较低。
而且所得的蒜油有一股熟味, 不够清新。
1.1.2 溶剂萃取法大蒜油微溶于水, 易溶于乙醇、苯、乙醚等有机溶剂, 利用这一性质可以用有机溶剂将大蒜油浸提出来。
该法得到的大蒜油与水蒸气蒸馏获得的大蒜油没有明显的区别。
有机溶剂的选择是关键, 要求该溶剂对大蒜油的溶解性好, 浸提结束后易于分离, 沸点差异显著,不含其它不良气味和溶剂残留。
溶剂法的一般流程为:大蒜去皮→洗净→捣碎→酶解→溶剂萃取→蒸馏分离→回收溶剂→大蒜油陈彬[2]等研究了用乙醚萃取法提取大蒜中的有机硫化物, 采用正交试验法考察了操作条件对提取物得率的影响, 确定了影响产物得率的主要因素为酶解温度、酶解时间、酶解pH、加水量以及离心pH 值。
确定的最佳提取条件为: 酶解温度25 ℃, 酶解时间为60 min,酶解pH 值7.0, 加水量100mL, 离心pH 值3.2。
大蒜素和辣椒粉两种辣味剂在动物生产中的应用概述_刘学剑
—!"—大蒜素和辣椒粉两种辣味剂在动物生产中的应用概述云南省文山州畜牧局刘学剑辣味剂是一类添加于动物饲料中使饲料具有辣味的特殊添加剂。
目前在动物生产中开发应用的辣味剂主要有大蒜素和辣椒粉，它们除具有调味增食，促进动物生产性能的发挥外，大蒜素还是一种广谱抗菌物质，具有防癌、降压、抗病毒等作用，辣椒粉具有健胃、消食和提高鸡蛋蛋黄的色泽等级等功效。
尤其是大蒜素已在医疗、兽药、农药、食品和饲料添加剂中广泛应用，是一类前景广阔的饲料添加剂。
为此，本文就大蒜素和辣椒粉在动物生产中应用概况作一简述，以供参考。
!大蒜素在动物生产中的应用概况大蒜素是百合科多年生宿根草本蒜中所含的生物活性成份，生产中使用的大蒜素是以一定载体吸附大蒜油后形成的预混料。
天然的大蒜油约含有&$’的丙基二硫化丙烯，#(’)#*’的硫化二丙烯，!(’)!*’的三硫化二丙烯。
人工合成的大蒜油约含%$)+$’的三硫化二丙烯，#$)%$’的二硫化二丙烯，少量的单硫化二丙烯和四硫化二丙烯。
由于大蒜素具有防癌、降压、抗病毒等功效，已被开发广泛应用在医疗、兽药、农药、食品和饲料添加剂中。
经大量的试验证实，在动物生产中应用大蒜素不仅具有调味增食的作用，而且大蒜素还能有效杀灭荧光极毛杆菌、鱼害粘球菌、鳗弧菌，爱德华氏菌、气单胞菌，鲁耶尔森氏菌等淡水鱼类主要致病菌，对草鱼肠炎病、烂腮病、赤皮和鲢鱼的出血病以及鱼类暴发性传染病均有防治效果；对引起畜禽疾病的福氏痢疾杆菌、巴氏杆菌、伤寒杆菌、白色葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌等均有良好的抑制和杀灭作用，具有保健促长的良好的效果。
同时大蒜素具有无残留、无抗药性、无致畸、致突变的特点，据报道，将大蒜素及碘化改性大蒜素样品用蒸馏水配制后，对小白鼠一次性经口灌注，检测样品的急性毒性，结果大蒜素,-%$.*#&/0120，碘化改性大蒜素,-%$.*#&/0120，均属于低毒物质3贾卫斌等，分，能降低龋齿的发病率。
饲料添加剂大蒜素编制说明
“饲料添加剂大蒜素”编制说明一、任务来源及工作简况1、任务来源本标准是国家标准化管理委员会2014年下达的第二批国家标准制修订计划，编号为20141772-Q-469，项目名称为《饲料添加剂大蒜素》。
本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。
2、制定本标准的必要性大蒜素是近年来发展起来的一种多功能饲料添加剂，以其作用广泛、效果显著、无残留、抗菌、消炎、抗病毒、无抗药性、降血压、抗动脉粥样硬化、抗氧化、提高机体免疫力、降低成本和刺激食欲等优点而备受养殖户和饲料厂家的青睐。
天然大蒜素油是由大蒜经过清洗、捣碎、提取过滤、蒸馏等工艺得到的产品。
大蒜转化为大蒜素油的成本很高，转化率不到1%。
当前饲料工业中使用的饲料添加剂大蒜素，一般是由人工合成的液体，饲料添加剂大蒜素（粉剂）是由饲料添加剂大蒜素被一定的载体吸附形成的，多为呈流动性的细小粉末。
饲料添加剂大蒜素是单质硫（硫磺）、硫化钠和氯丙烯为原料化学合成的以二烯丙基一硫醚、二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚和二烯丙基四硫醚为主要成分的硫醚类饲料添加剂大蒜素产品。
二烯丙基一硫醚在心脑血管疾病的防治上有良好的效果。
二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚性质稳定，杀菌力强。
二烯丙基四硫醚不稳定，久置会释放出硫和其它不明物质。
二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚之和约占大蒜素总含量的80%以上。
习惯上常把二烯丙基二硫醚和二烯丙基三硫醚称为大蒜素。
目前，大蒜素的研究主要在食品和农业检测领域。
大蒜素的主要检测方法有重量法、滴定法、分光光度法、气相色谱法、气相色谱-质谱法、高效液相色谱法等。
前三种方法操作繁琐，费时，灵敏度低，准确性差。
后三种方法相对简便、快捷。
气相色谱法、气相色谱-质谱法和高效液相色谱法三种方法相比较而言，目前文献中最常用的是气相色谱法。
一是因为气相色谱-质谱法仪器昂贵，操作要求高，二是因为二烯丙基二硫醚和二烯丙基三硫醚都没有紫外吸收，使用高效液相色谱法测定，检测灵敏度相对较差。
大蒜素的作用机制及其在动物生产中的应用
体 ，具有浓烈刺激味和大蒜特有的辛辣气味 ， 密度 为 １ ５ ． ５ ・ ～ ． ０ １ ９ ｍ ，折光率为 １０ ５ １８ ，能溶 ０ ０ ｇ ．５ ～ ．０ 于大多数非挥发性油 ，部分溶于乙醇 、乙醚 ， 在无
水 乙醚 、９％乙醇 重稳 定性 很 好 ，不溶 于水 、甘 油 ５
和丙 二醇 。
收稿 １ ：２ １－ ３ ２ ３期 ０ １０—６
的总含量超过 ９％，其余 为低沸点的丙酮 、乙醇 、 ２
丙基烯丙基硫醚和二丙基硫醚等杂质。大蒜油对酸 化学性质较稳定 ，常温下在酸 Ｉ（Ｈ５ ７ 条件下稳 ￣ ｐ ～ ）
定性 较好 ，一般在 非强酸环境 。
作者简介 ：吴字虹 （９ ３ ） １７ 一 ，女 ，中级畜牧师 ，主要从事动物卫生检疫方面的工作 。
１ 大蒜素 的化 学成 分及性 质 ． ２
天然大蒜油中有 １ 种含硫化合物 ，含量较高的 ６
是 丙 基 二 硫 化 丙 烯 （ ６％ ） 约 ０ 、硫 化 二 丙 烯 （３ ２％～ ３％） ９ 、三硫 化二 丙烯 （３ １％） １％一 ９ 、化二 丙烷 （％～ ４ ５ 及 甲基 二硫 化丙 烯 等 。人 工 合成 大蒜 油 主要 成 ％） 分 为 三 硫 化 二 丙 烯 （０ ５ ％ ８％ ） ０ 、二 硫 化 二 丙 烯 （０ ５ ％） ２ ％～０ 、少 量 单硫 化 二丙 烯 和 四硫化 二 丙烯 ，
肉仔 鸡饲 粮 中添加 合成 大蒜 素 ，结果 发现 ，大蒜素 可 以提高 肉鸡 的 日增重 、饲 料报 酬 、成活 率 ，增强 其 抵抗 力及 夏 季抗 应激 作用 ，增 强对 病毒性 疾 病 的 抵 抗力 。 ３２ 在 养猪 生 产 中的应 用 ．
大蒜 素具有香味 ，能消除饲料 中的药物及其 他物质带来 的不 良味道 ，可 明显改善饲料 的适 口
大蒜素的功能及其在养猪生产中的应用
［
ｌ
２
弱恳围 国 弱癌 圈 鳍 ０围囱嗣
杨 霞
（ 都 农 业 科 技 职 业 学 院 畜 牧兽 医分 院 ，成 都 成 ６ １０ １ ３） １
摘
要 ：文章对大蒜索在养猪生产 中的促进 生长 、增 强免疫功 能、提 高抗 感染能力以及 改善 环境 等作 用进行
了综 述 。
关 键 词 ： 大蒜 素 ；猪 ；应 用 中 图 分 类号 ：Ｒ ８ ．１ ８ ８ 文献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ： １０ — ０ ４ ２ １） １０ ４ — ２ ２ ２７ ；￥ ２ ０ １ ０ ８ （０ ０ １ － ０ ３ ０
大蒜 作为 调 味料 、药 物均 有悠 久 的历 史 …。近
残 留 、改 善畜 禽产 品 的风味 和饲养 环境 等功 能而 被 作 为 天然 的饲料 添加 剂应 用于 饲料 生产 中１。 ２ １
０ ２
年来 ，大蒜 中主要有效 成分 之一 的大蒜 素 ，因具 有 诱 食 、促生 长 、提高 饲料报 酬 、抑 菌杀 菌 、防霉 驱 虫 、增 强 动 物 机 体 抗 体 免 疫 功 能 、部 分 替 代 抗 生 素 、减 少微生 物产 生 的抗 药性 以及在 畜禽 产 品 中的
陈永 生， 平英 华． 菌糠饲料 资源 的开发利用 ［． Ｊ 食用菌 ， ９ １ １ １９ ，
１ （ ： —４ ． ３ ４） ４１ ２
张黎鑫， 力生， 王 杨海 ， 菌糠对奶牛生产性能和经济效益的 等．
影 ｈｌ ． 代 农 业 科 技 ， ０９ ６） １２ １５ ｉＪ 现 ｌ］ ２０ （ ： ９ — ９ ． 李 进 杰 ． 镭 ， 鹏 伟 ． 菇 菌糠 在 肉 羊 育 肥 中 的应 用 试 验 ［ ＿ 焦 李 平 Ｊ 】 饲 料 研 究 ， ０ ５２）３ — ６ ２０ （ ： ５ ３ ． 王 家 富 ， 发 云 ， 国 民 ， ． 糠 对 育 肥 兔 增 重 效 果 的 研 究 奠 杨 等 菌 ＩＪ中 国养 兔 ， ０ ７６ ： － ． Ｊ＿ ２０ （ ） ６ ８ 庞 思 成 ． 用 菌 糠 饲 喂 罗 非 鱼 技 术 Ｉｌ淡 水 渔 业 ， ９ ３ ２ （ ） 使 ｌ Ｊ １９ ， ３ ５ ：
山东省饲料添加剂和添加剂预混合饲料产品批准文号
鲁饲预字(2006)022011
2006.06.09
润华肾泰微量元素预混料（RHST）
Q/SRH003-2006
鲁饲预字(2006)022050
2006.06.09
济南迅达康生物科技有限公司(生产许可证号：饲预(2006)4546)
维生素预混料（金维他）
Q/JXDK002-2005
鲁饲添字(2006)051106
2006.04.28
饲料级乳酸钙
Q/SDY004-2006
鲁饲添字(2006)051221
2006.04.28
济南同创饲料有限公司(生产许可证号：饲添(2005)1968)
生产企业及产品名称
规 格
执 行 标 准
批 准 文号
发号日期
饲料级微生物添加剂（液体）（优活微、渔多收、旺仔、净水剂）
鲁饲添字(2006)017909
2006.04.26
山东润华兽药有限公司(生产许可证号：饲添(2006)2008)
维生素E预混剂（益免素）（RHVE）
Q/SRH001-2005
鲁饲添字(2006)023104
2006.06.09
济南齐鲁中牧生物科技有限公司(生产许可证号：饲添(2006)0587)
饲料级维生素K3预混剂
5%
Q/JZY001-2003
鲁饲预字(2006)198353
2006.04.30
齐鲁动物保健品有限公司(生产许可证号：饲预(2005)1724)
猪用复合预混料（齐鲁猪博士）
1%
Q/QLS001-2004
鲁饲预字(2006)195110
2006.05.26
猪通用复合预混料（齐鲁猪宝QL-6002）
Q_0900TGA022-2016混合型饲料添加剂 大蒜素
Q/0900TGA 泰安市国泰民安生物科技有限公司企业标准Q/0900 TGA022—2016混合型饲料添加剂大蒜素2016-08-18发布2016-09-18实施发布前言本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。
本标准自发布之日起有效期五年，到期应复审。
本标准由泰安市国泰民安生物科技有限公司提出并起草。
本标准主要起草人：王旺、李春利。
本标准于2016-08-18首次发布。
混合型饲料添加剂大蒜素1、范围本标准规定了混合型饲料添加剂大蒜素的要求、试验办法、检验规则、标签、标志、包装、运输、贮存、和保质期。
本标准适用于以本公司生产的大蒜油为原料，以二氧化硅为载体制成的混合型饲料添加剂大蒜素2、规范性引用文件下列文件对于本标准的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T5009.3-2010 食品中水分的测定GB/T5917.1-2008 饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T5918-2008 饲料产品混合均匀度的测定GB 10648 饲料标签GB 13078 饲料卫生标准GB/T 13079-2006 饲料中总砷的测定方法GB/T 13080-2004 饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T 13083-2002 饲料中氟的测定离子选择性电极法GB/T 14699.1-2005 饲料采样JJF 1070-2005 定量包装商品净含量计量检验规则2005年国家质量监督检验检疫总局第75号令《定量包装商品计量监督管理办法》3、要求3.1 感官产品呈白色或淡黄色粉末状、色泽均匀，无发酵，结块，具有强烈的大蒜气味。
3.2 粉碎粒度全部通过孔径为450um的试验筛。
3.3 总硫含量大蒜素中总硫含量应不低于10%3.4 水分应不大于10%。
3.5 卫生指标卫生指标见表1表1 卫生指标项目指标砷(以As计)，mg/kg ≤10铅（以pb计），mg/kg ≤30氟（以F计），mg/kg ≤8003.6 净含量应符合《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。
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Q/HNJD 河南君道生物科技有限公司企业标准
Q/HNJD011-2019混合型饲料添加剂大蒜素
2019-03-05发布2019-03-10实施
Q/HNJD011-2019
前言
本标准起草单位：河南君道生物科技有限公司。
本标准主要起草人：徐武西、李亚美。
本标准为首次发布。
混合型饲料添加剂大蒜素
1范围
本标准规定了混合型饲料添加剂大蒜素的原料要求、技术要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存。
本标准适用于以饲料添加剂大蒜素为主要原料，以蒙脱石或沸石粉、玉米芯粉等为载体，经混合加工而成的混合型饲料添加剂大蒜素。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法
GB/T5918饲料产品混合均匀度的测定
GB/T6435饲料中水分的测定
GB10648饲料标签
GB/T13079饲料中总砷的测定
GB/T13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法
GB/T18823饲料检测结果判定的允许误差
GB/T14699.1饲料采样
GB/T20195动物饲料试样的制备
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局令（2005）第75号《定量包装商品计量监督管理办法》中华人民共和国农业部公告第1773号《饲料原料目录》
中华人民共和国农业部公告第1849号《混合型饲料添加剂生产企业许可条件》
中华人民共和国农业部公告第2045号《饲料添加剂品种目录（2013）》
3原料要求
生产产品所用原料应符合《饲料原料目录》的规定，所用添加物应符合《饲料添加剂品种目录（2013）》的规定，严禁使用国家明令禁止的添加物和化学制品。
4技术要求
4.1感官
粉状物，色泽均匀一致，无结块、发霉变质及异味、异嗅。
4.2成品粒度
全部通过2.50mm编织筛。
4.3混合均匀度
混合应均匀，经测试后其均匀度之变异系数（CV）不大于7%。
4.4水分
不大于12.0%
4.5理化指标
表1主要营养成分指标
产品名称
混合型饲料添加剂大蒜素
Ⅰ型Ⅱ型Ⅲ型Ⅳ型Ⅴ型Ⅵ型
大蒜素，%≥1.00≥3.00≥5.00≥10.00≥15.00≥20.00总砷＜5mg/kg
铅＜10mg/kg
5试验方法
5.1感官
取适量样品，在非阳光直射条件下，观其色泽、形态，嗅其气味。
5.2成品粒度
成品粒度的测定按GB/T5917.1执行。
5.3混合均匀度
混合均匀度的测定按GB/T5918执行。
5.4水分
水分的测定按GB/T6435执行。
5.5总砷
总砷的测定按GB/T13079执行。
5.6铅
铅的测定按GB/T13080执行。
5.7大蒜素
按附录A的规定执行。
6检验规则
6.1批次
以同批原料、同一配方、相同设备的每日生产量为一个批次。
6.2采样
按GB/T14699.1执行。
6.3检验
6.3.1出厂检验
出厂产品由本公司质检部门负责检验，检验项目为感官、粒度、水分和大蒜素。
产品检验合格后方可出厂，每批出厂产品应附有质量检验合格证（章）和使用说明。
6.3.2型式检验
型式检验为全项目检验，每年不得少于一次。
如有下列情况之一时，应进行型式检验：
a)主要原、辅材料，配方，生产工艺或设备发生较大改变时；
b)停产半年以上再恢复生产时；
c)出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时；
d)国家有关部门监督检验与抽查时。
6.4判定规则
检测结果判定的允许误差按GB/T18823执行。
6.5复检规则
产品在检验中如有一项指标不符合本标准时，应重新加倍抽样进行复检。
复检结果中仍有一项指标不符合本标准时，则该批产品判为不合格品。
7标签、包装、运输和贮存
7.1标签
按GB10648执行。
7.2包装
包装物采用无毒、无害，对产品质量无影响的材料。
包装规格（净含量）为：100g、250g、500g、1Kg、2Kg等，也可根据用户提出的净含量要求进行包装。
包装净含量允许误差应符合《定量包装商品计量监督管理办法》的规定。
7.3运输
产品在运输过程中应防止日晒雨淋、包装破损，严禁与有毒、有害物质混运。
7.4贮存
产品应贮存于常温、通风、干燥处，严禁与有毒、有害物质混贮。
在常温条件下，产品保质期为12个月。
附录A
（规范性附录）
大蒜素含量的测定
A.1仪器
A.1.1紫外可见分光光度计
A.1.2酸度计
A.1.3离心机
A.1.4万分之一分析天平
A.2试剂和溶液
A.2.10.5M丙酮酸溶液
A.2.22N氢氧化钠溶液
A.2.32N盐酸溶液
A.2.415%三氯乙酸溶液
A.2.5海砂
A.2.6酸性乙酸乙酯
A.2.7乙酸乙酯与适量的2N盐酸溶液振荡，分离出乙酸乙酯再与等量的乙酸乙酯混合，0.2%的2，4-二硝基苯肼：称取0.2g2，4-二硝基苯肼溶于100ml2N盐酸溶液中。
A.3方法
A.3.1标样BH（丙酮酸-2，4二硝基苯腙)的制备
取0.5M的丙酮溶液50ml置于一个捷径的200ml的烧杯中（置于50～60℃的水浴加热），然后将100ml0.2%的2，4-二硝基苯肼溶液逐滴加入该烧杯中。
应在大致50min内完成，这时在烧杯中就有当量的规则黄色片状结晶析出，陈化几小时，使沉淀完全，倾出上清液，然后将神殿在烘箱中于60℃～70℃将其烘干，取制得的粗产品，用已经预热的乙酸乙酯溶液将其溶解，制成饱和溶液，趁热过滤，将滤液盛于一个干净的小烧杯中，稍冷却即得大量的BH析出。
陈化，倾出乙酸乙酯，沉淀放于烘箱中控温干燥，将干燥的样品置于干燥皿中待用。
A.3.2BH溶液的配制
在分析天平上准确称取干燥后的BH10.0mg，配成浓度为10.0ug/mL的BH溶液，即将10.0mgBH在小烧杯中溶解，转入100ml干燥的容量瓶A中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀。
用移液管准确吸取上述A溶液10ml于另一只干燥的100ml容量瓶B，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，待用。
A.3.3绘制D-C标准曲线
准确吸取已配制的待用BH溶液0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置于5支编号的干燥试管中，再分别对应加入6.6、6.4、6.2、6.0、5.8ml乙酸乙酯，使总体积为7.0ml，各液均用氢氧化钠溶液萃取(去除杂质)两次，每次5ml,合并氢氧化钠溶液与另外5支编号的干燥试管中。
静置40min后比色测定。
最大吸收波长420nm，以2N氢氧化钠溶液为空白溶剂，选用最小比色槽，室温下操作。
A.4样品的破碎和酶解
准确称取样品2.2271g，放入研钵中，加入3g处理后的大砂，将样品研碎（要保证尽量碎），以利于样品彻底酶解。
然后，加水转移至100ml的容量瓶中，定容至刻度，在水浴（25～35℃）中保温1h，使大蒜素彻底酶解。
A.4.1大蒜素酶解液的酸化及显色
取上述大蒜液各2.0ml，放入4支编号的干燥试管中，各加入8.0ml三氯乙酸溶液，剧烈振荡1min，离心分离，取离心液各2.0ml，置于另外4支编号的干燥试管中，各加入0.2%的2,4-二硝基苯肼溶液
2.0ml，离心分离。
A.4.2BH萃取分离
将上述4份沉淀分别用4、2、1mL的乙酸乙酯各溶取3次。
将溶液置于4支编号的试管中，各用2N 氢氧化钠溶液萃取两次，每次5.0ml，萃取液分别转入另外4支编号的干燥试管中，然后，各萃取液再用2.0ml乙酸乙酯常温萃取30min，陈化，取其沉淀弃取乙酸乙酯。
A.5比色测定
自大蒜液中加入2,4-二硝基苯肼溶液算起，40min后在420nm处测其BH消光值。
选用最小好比色皿，以氢氧化钠为空白试剂，常温下操作，测其的消光值A，从 A.3.3工作曲线可以对应查出BH浓度为=aug/ml。
A.6计算
从大蒜素酶解液到氢氧化铵BH提取液，溶液的浓度减小到原来的1/25。
另外1ugBH相当于37.798‰mg的大蒜素，所以在100mg大蒜酶解液中大蒜素的含量为：D=100×（25×a）×37.798‰，大蒜中大蒜素的百分含量为：D/2227.1×1/‰。