第二代测序在转化医学中的应用
一代测序技术和二代测序技术的原理
一代测序技术和二代测序技术的原理一代测序技术的原理一代测序技术，也称为Sanger测序技术，是最早被开发出来的测序方法。
其原理基于DNA链延伸的过程，通过添加特殊的反应试剂和荧光标记的碱基，可以逐个测定DNA分子中的碱基序列。
具体来说，一代测序技术首先需要将待测序列DNA分子进行复制，生成多个拷贝。
然后，DNA链延伸反应中加入ddNTP（二进制脱氧核苷酸），这种特殊的脱氧核苷酸会使得DNA链无法继续延伸，从而在不同位置上引入终止。
在延伸反应中，每个ddNTP都与一种特定的荧光染料结合，不同荧光染料代表不同的碱基。
接着，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，将延伸反应产物按照长度进行分离。
由于终止反应在不同位置引入终止，因此不同长度的片段会在电泳中形成不同的带状图案。
最后，通过荧光成像系统，可以检测到每个带状图案的荧光信号，并转化为数字信号，得到DNA序列。
一代测序技术的优点在于准确性高，可靠性强。
然而，其缺点是测序速度较慢，且只能同时测定少量的DNA分子。
二代测序技术是在一代测序技术基础上的一种新型测序方法，也被称为高通量测序技术。
相比于一代测序技术，二代测序技术具有更高的测序速度和更低的成本，因此被广泛应用于基因组学和生物医学研究领域。
二代测序技术的原理基于DNA分子的大规模并行测序。
其主要过程包括模板制备、测序反应和数据分析三个步骤。
模板制备阶段，将待测DNA样本进行分离和扩增，得到大量的DNA模板。
其中，常用的方法有PCR（聚合酶链反应）和桥式PCR。
接着，测序反应阶段，将DNA模板与引物和核苷酸混合，引物会结合到DNA模板的末端，并且每个引物上都带有一种特定的荧光标记。
然后，在反应混合物中加入碱基，并且只能加入一种特定的碱基，反应进行一定时间后，通过荧光成像系统可以检测到新加入碱基的荧光信号。
这样，就可以识别出新加入的碱基，并记录下来。
在数据分析阶段，将荧光信号转化为数字信号，并根据每个碱基的信号强度和位置信息，得到DNA的序列。
二代测序检测甲基化的方法
二代测序检测甲基化的方法二代测序是一种高通量测序技术，可以快速、精准地分析DNA序列。
甲基化是一种重要的表观遗传修饰方式，可以对基因表达和细胞功能产生重要影响。
因此，通过二代测序检测甲基化状态成为了研究人员关注的焦点。
本文将介绍基于二代测序的甲基化检测方法。
一、甲基化的检测原理甲基化是指在DNA分子中加入甲基基团，可以影响DNA的结构和功能。
为了检测DNA中的甲基化状态，研究人员通常采用亚硫酸氢盐处理和二代测序相结合的方法。
亚硫酸氢盐可以将未甲基化的胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U），而甲基化的胞嘧啶不受影响。
通过测序分析DNA中的U和C的比例，就可以确定DNA中的甲基化状态。
二、甲基化检测的实验流程1. DNA提取：从待检测的细胞或组织中提取DNA样本，保证样本的纯度和完整性。
2. 亚硫酸氢盐处理：将DNA样本与亚硫酸氢盐溶液反应，将未甲基化的C转化为U。
3. 文库构建：将经过亚硫酸氢盐处理的DNA样本进行文库构建，包括DNA片段的断裂、连接、文库扩增等步骤。
4. 二代测序：使用二代测序技术对DNA文库进行高通量测序，获得原始测序数据。
5. 数据分析：对原始测序数据进行质控、去除低质量序列和接头序列，然后将剩余的序列与参考基因组进行比对。
6. 甲基化位点鉴定：根据比对结果，统计序列中U和C的比例，确定甲基化位点的甲基化水平。
三、甲基化检测的数据分析甲基化检测的数据分析是整个过程中最关键的一步。
主要包括质控、比对、甲基化位点鉴定和甲基化水平分析等。
1. 质控：对原始测序数据进行质量控制，去除低质量的序列以及接头序列。
这一步骤可以保证后续分析的准确性和可靠性。
2. 比对：将质控后的序列与参考基因组进行比对。
通过比对可以确定序列的位置信息，为后续的甲基化位点鉴定提供基础。
3. 甲基化位点鉴定：根据比对结果，统计序列中U和C的比例。
如果某个位点的U和C比例明显偏差，即可判定该位点存在甲基化。
4. 甲基化水平分析：根据甲基化位点的甲基化水平，可以分析不同位点的甲基化状态。
二代测序技术简介
二代测序技术简介一、什么是二代测序技术？二代测序技术，也被称为高通量测序技术，是一种快速、高效的DNA 或RNA序列测定方法。
相比传统的Sanger测序技术，二代测序技术具有较高的测序效率和容量，能够同时测序数百万到数十亿个碱基对，大大提高了测序的速度和数据产量。
常用的二代测序技术包括Illumina 测序技术、Ion Torrent PGM 测序技术等。
二、Illumina二代测序技术的原理与过程1. 原理Illumina二代测序技术基于桥式扩增和碱基扩增的原理。
DNA样本经过打断、连接和PCR扩增等处理后，将单链DNA固定于特定表面上，并在每个DNA分子之间形成成千上万个桥式扩增复合物。
在模板DNA的存在下，通过逐个反复封闭、复制和荧光标记的方式，进行碱基的逐渐扩增，并利用荧光信号记录测序结果。
2. 过程（1）样本制备：包括DNA或RNA的提取、打断、连接和PCR扩增等步骤，以获得特定长度的DNA片段。
（2）文库构建：将DNA片段连接到Illumina测序芯片上的适配器上，并进行PCR扩增，形成DNA桥式扩增复合物。
（3）测序芯片加载：将DNA桥式扩增复合物置于测序芯片上，使得每个DNA分子都与芯片上的特定区域相结合。
（4）桥式扩增：通过逐个反复封闭、复制和荧光标记的方式进行碱基的逐步扩增，形成簇团。
（5）图像获取：利用高分辨率成像系统拍摄簇团的荧光信号。
（6）数据分析：将图像数据转化为碱基序列，通过比对和组装等算法，得到原始测序数据。
三、Illumina二代测序技术的优势和应用领域1. 优势（1）高通量：能够在较短时间内产生大规模的测序数据。
（2）高准确性：其错误率低于其他二代测序技术，能够提供高质量的测序结果。
（3）可扩展性：适用于不同规模的测序项目，从几个目标区域到整个基因组的测序，具有较高的灵活性。
（4）低成本：相对于传统的Sanger测序技术，具有更低的测序成本。
2. 应用领域（1）基因组学研究：能够对物种的基因组进行全面测序和变异分析，有助于揭示基因组结构和功能。
转化医学国际案例分享
转化医学国际案例分享转化医学是指将基础研究中的新发现转化成临床应用和治疗手段的过程，是将科学研究成果应用于临床实践的桥梁。
下面列举了10个国际转化医学的案例分享。
1. 基因编辑技术治疗遗传性疾病基因编辑技术如CRISPR-Cas9已经被成功应用于治疗一些遗传性疾病，例如囊性纤维化、血友病等。
通过编辑患者的基因，可以修复或替换有缺陷的基因，从而实现治疗效果。
2. 免疫细胞治疗癌症CAR-T细胞疗法是一种通过改造患者自身的免疫细胞，使其能够识别并攻击癌细胞的新疗法。
这一技术已经成功应用于治疗一些晚期癌症，如淋巴瘤和白血病。
3. 人工智能辅助诊断和治疗规划人工智能在转化医学中的应用正日益广泛。
通过分析大量的医疗数据，人工智能可以辅助医生进行疾病诊断和治疗规划，提高医疗效率和准确性。
4. 细胞治疗治疗心脏病干细胞和多能干细胞的研究已经为心脏病的治疗提供了新的思路。
通过将干细胞或多能干细胞移植到患者的心脏组织中，可以促进心脏组织的再生和修复，从而改善心脏功能。
5. 基因测序在个体化药物治疗中的应用通过对患者基因组的测序，可以预测个体对特定药物的反应。
这有助于医生选择最适合患者的药物和剂量，提高治疗效果和减少不良反应。
6. 转化医学在肿瘤免疫治疗中的应用肿瘤免疫治疗是一种通过激活患者自身的免疫系统来攻击肿瘤的新疗法。
这一疗法已经成功用于治疗一些恶性肿瘤，例如黑色素瘤和肺癌。
7. 基因测序在新生儿筛查中的应用新生儿筛查是一种通过对新生儿进行基因测序，以早期发现和预防一些遗传性疾病的方法。
这一技术已经在一些国家得到广泛应用，可以帮助早期发现并及时治疗一些潜在的健康问题。
8. 纳米技术在药物递送中的应用纳米技术可以将药物封装在纳米颗粒中，从而提高药物的递送效率和靶向性。
这一技术已经成功应用于治疗一些肿瘤和感染性疾病。
9. 基因编辑技术用于生殖健康基因编辑技术可以用于改变胚胎的基因组，从而预防一些遗传性疾病的发生。
高通量测序技术及其应用
高通量测序技术及其应用一、本文概述随着生物信息学的发展，高通量测序技术（High-throughput sequencing，HTS）已成为现代生物学研究的重要工具。
该技术以其高效、快速、准确的特点，在基因组学、转录组学、表观组学等多个领域发挥了重要作用。
本文旨在全面介绍高通量测序技术的基本原理、发展历程、主要类型及其在各个领域的应用实例，以期为相关领域的研究人员和技术人员提供参考。
文章将首先概述高通量测序技术的基本原理和发展历程，包括其从第一代到第三代的演进过程以及各自的技术特点。
接着，文章将详细介绍高通量测序的主要类型，如全基因组测序、外显子测序、转录组测序等，并讨论它们在基因组结构分析、基因表达调控、疾病机制研究等方面的应用。
文章还将探讨高通量测序技术在临床诊断、药物研发、农业生物技术等领域的潜在应用前景。
通过本文的阐述，读者将能够深入了解高通量测序技术的核心原理和应用价值，为其在生物学研究中的应用提供有益的启示和指导。
二、高通量测序技术的基本原理高通量测序技术，也称为下一代测序（Next Generation Sequencing，NGS）或大规模并行测序，是一种革命性的分子生物技术，它能在短时间内对大量的DNA或RNA分子进行序列测定。
其基本原理主要依赖于DNA或RNA分子的复制和测序。
高通量测序的基本原理首先涉及样本制备，包括DNA或RNA的提取、纯化和文库构建。
在文库构建过程中，DNA或RNA被切割成适合测序的短片段，并通过连接适配器进行标记，以便后续的测序反应。
接下来是测序反应，这是高通量测序技术的核心部分。
它采用了一种名为“桥式PCR”或“簇生成”的技术，通过在固体表面生成大量的DNA簇，每个簇都包含许多相同的DNA模板分子。
这些簇被测序仪器自动识别和定位，然后进行测序反应。
测序反应通常采用的是循环可逆终止法，即每个测序循环只添加一个碱基，并在添加后终止反应，然后通过荧光信号检测添加的碱基类型。
生物技术和转化医学的发展和应用
生物技术和转化医学的发展和应用生物技术和转化医学的发展是近年来科技进步的重要方向之一。
生物技术是指利用生物学、化学和物理学等学科的知识，应用生物大分子的特异性反应和分离纯化技术，进行制备药物、分析、检测和治疗等方面的研究和应用。
而转化医学则是将生物技术应用于临床现场，通过了解疾病的分子机制和个体化治疗，提高诊断和治疗的精确度和效果，为疾病患者带来更好的生活质量。
生物技术在药物制剂和生产上的应用生物技术的应用范围非常广泛，其中最为重要的是药物制剂和生产方面的应用。
基因工程技术、蛋白质工程技术、抗体工程技术和细胞工程技术等技术手段的应用，使得药物的品种和类型得到了极大的丰富和扩展。
以生物制造的生物类药物为例，这些药品大多数是由生物分子作为原材料进行制造的，并且具有显著的靶向性和安全性，因此广泛地应用于临床。
通过改变生产工艺和应用翻译后修饰等技术手段，可制造出一系列生物合成的药物原材料，如细胞素、抗体、重组蛋白等。
其中，重组人类胰岛素就是生物类药物的代表之一，它是治疗糖尿病的重要药物。
另外，生物技术也在创新药物的研发上发挥着重要作用。
例如，凝血因子治疗剂的研发利用了基因工程技术，使其成为治疗出血性疾病的重要工具。
抗癌药物的研发和分析，也需要借助生物技术的南腔北调和心领神会，从而使得药物的品种和类型得到更多的扩展和创新。
生物技术在检测和诊断上的应用在生命科学领域，基因检测和分析是非常重要的一部分。
生物技术的发展，使得基因检测的精确度和速度得到了大幅提高。
例如，PCR技术和新一代测序技术等，不仅可以帮助科学家更好地研究基因突变和疾病发生的机制，也有助于临床医生做出更加精准的诊断。
另外，基于大数据和人工智能技术的医疗诊断和预测也是目前的热点研究领域。
生物技术的应用，可以为这些诊断和预测提供更加精准和可靠的数据基础。
转化医学在临床治疗中的应用在转化医学领域，科学家们正在不断研究和探索个性化医疗的新方法。
例如，利用生物技术研发的适用于特定人群的个性化诊断和治疗方案，可以有效地提高治疗效果和预后。
临床医学中的转化医学研究
临床医学中的转化医学研究转化医学（Translational Medicine）是近年来兴起的一门学科，旨在将基础科研的成果转化为临床实践中的应用，从而推动医学进步，提高临床治疗效果和患者生存率。
在临床医学中，转化医学研究发挥着重要的作用，为疾病的早期诊断、个体化治疗和新药开发提供了理论和指导。
一、转化医学的概念与意义转化医学指的是将基础医学研究和临床医学紧密结合起来，将实验室的研究成果应用于人类临床实践中。
通过研究人类疾病的分子机制、生物学特性以及个体差异，转化医学可以更准确地诊断和治疗疾病，帮助患者获得更好的临床效果。
同时，转化医学也为研发新药和新治疗方法提供了科学依据，推动了医学的进步与发展。
转化医学的意义在于缩短基础研究到临床应用的时间，将科学研究成果迅速转化为临床实践中的应用。
这种转化过程有助于解决临床医学实践中的问题，并为患者提供更加精确和个体化的治疗方案，提高治疗效果和生活质量。
二、转化医学研究的内容与方法转化医学研究的内容十分广泛，涉及从患者样本的收集、基因组学、蛋白质组学等分子生物学研究，到动物模型的构建和临床试验的设计等多个层面。
这些研究内容贯穿整个转化医学过程，旨在加深对疾病机制的理解、发现新的治疗靶点，并验证其在临床治疗中的可行性。
转化医学研究的方法多样，常见的包括基因测序技术、分子定量分析、细胞培养、动物模型构建以及临床试验设计等。
这些方法的综合应用可以帮助研究者从多个层面多个维度来探索疾病的机制和治疗方法。
三、转化医学的应用案例1. 个体化治疗转化医学通过研究个体的基因组和蛋白质组等分子特征，为患者提供个体化的治疗方案。
例如，在肿瘤治疗中，通过对肿瘤组织的基因测序和蛋白质定量分析，可以判断患者对不同药物的敏感性，并提供相应的个体化治疗方案，提高治疗效果。
2. 新药开发转化医学为新药研发提供了理论和指导。
通过研究疾病的分子机制和信号通路，转化医学可以发现新的治疗靶点，并验证其在临床治疗中的可行性。
医学检验技术的新进展
医学检验技术的新进展引言随着医疗技术的飞速发展，医学检验技术也在不断地更新换代。
近年来，基因检测、免疫组化和生化分析等技术的应用和改进，给医学检验技术带来了新的进展。
本文将从不同类别的技术，介绍医学检验技术的新进展。
一、基因检测技术基因检测是指通过分析人体DNA中的遗传信息，对人体疾病风险和基因型进行检测和分析。
基因检测技术的发展，提供了一种全新的预防和治疗疾病的方式。
1. 基因测序技术基因测序技术是将DNA样本进行全片段或者目标区域的高通量测序，以获取个体基因组信息，并对基因的变异、突变和载体等进行分析。
随着二代大规模测序技术的应用，该技术的分析速度和精度得到了大幅度的提升。
目前，基于基因测序技术的癌症遗传突变检测，成为肿瘤早期筛查和治疗的重要手段。
2. 基因芯片技术基因芯片技术是通过在芯片上固定大量的探针，来快速、同时地检测多个基因或者SNPs位点的技术。
因此，基因芯片技术也叫做基因微阵列技术。
基因芯片技术具有高通量、高效和高信息含量的特点，可用于快速、准确地分析疾病发生、发展及其变化的机制等方面。
3. PCR技术PCR技术是一种用于扩增DNA序列的方法，具有高敏感、高特异性和高效率的特点。
PCR技术已被广泛应用于基因突变、基因表达、DNA序列分析等方面。
特别是在感染病和遗传疾病方面得到广泛的应用。
PCR技术也是分子诊断技术中最常用的技术之一。
二、免疫组化技术免疫组化技术是一种检测细胞或组织内特定蛋白质的分布和表达水平的技术。
它通过利用抗体与特定抗原的特异性结合，利用染色等手段可对样本中的抗原进行定位和检测。
目前，免疫组化技术被广泛应用于细胞和组织的病理诊断、病理生理学等方面。
1. 免疫荧光技术免疫荧光技术是利用荧光染料标记的抗体与特定的抗原结合，通过观察发出的荧光信号的方式，来检测和定位细胞或组织中的特定蛋白质。
免疫荧光技术具有高分辨率、高灵敏度和高特异性的特点，尤其适用于癌症诊断和治疗等方面。
二代测序知识梳理大全
二代测序知识梳理大全二代测序，也被称为高通量测序，是一种通过构建DNA文库，对DNA进行大规模、并行高通量测序的技术。
相对于传统的Sanger测序，二代测序以其快速、高度自动化以及低成本等优势，在基因组学、转录组学、表观基因组学等领域得到了广泛应用。
下面将对二代测序涉及的主要技术和相关概念进行梳理。
1. SBS（Sequencing by Synthesis）技术：单分子实时测序和二代测序中最常用的技术之一。
该技术是通过将DNA模板分子固定在表面上，利用特殊的引物和荧光标记的四个核苷酸进行DNA合成，每次合成一个碱基，并通过检测发出的荧光信号来确定该碱基。
这一过程被反复重复，从而实现对整个DNA序列的测定。
2. Illumina测序技术：目前最为常用的二代测序技术之一，采用SBS技术。
其特点是高通量、高精度和低成本，适用于快速测序和大规模测序。
Illumina测序采用的文库构建方法常见的有gDNA文库、mRNA文库、甲基化文库等。
3. Ion Torrent测序技术：采用电学信号检测DNA合成过程中释放的离子，基于质量变化原理进行二代测序。
Ion Torrent测序系统具有速度快、成本低、操作简单等优点，并且适用于小型项目和个体化医疗等领域。
4. PacBio测序技术：采用单分子实时测序原理进行测序。
该技术基于观察DNA合成过程中聚合酶的动态变化，并将其转化为序列信息。
PacBio测序具有长读长、直接测序、不需文库构建等优势，适用于基因组重组、转录组、血液学研究等领域。
5. SMRT（Single Molecule Real-Time）测序：是PacBio测序技术的商标名称。
SMRT测序具有高读长、高准确性、能够检测DNA甲基化等特点，在细菌学、宏基因组学、临床研究等领域有重要应用。
6. 数据分析：二代测序产生的原始数据通常是FASTQ格式的序列文件，需要进行适当的数据预处理、序列比对、变异检测等分析。
二代测序技术在医学领域中的应用
RNA-seq的优势
• 不局限于已知的基因组序列信息，适用于未 知基因组序列的物种的高通量转录组研究 • 相对于芯片技术，背景信号值低，没有检测 上限，对于基因表达谱有非常宽的检测范围。 在有内参的情况下，在定量方面显示出了较 高的准确度和可重复性。 • 不需要克隆的步骤，操作简单，需要的样本 量少，可在单细胞的水平上进行表达谱分析 • 通量高，成本比Tilling array或者大规模的 EST测序要低。
全外显子测序（WES）
• Nimblegen (Roche) • SureSelect (Agilent) RNA Oligo • Trusight (Illumina)
WES应用领域
• • • • 癌症相关（人） 遗传性疾病（人） 其它非传染性疾病（人） 主要用于寻找罕见突变，遗传性突变 及癌症相关的体细胞突变 • 可以做SNP，InDel分析，但由于捕获 区域较短，一般不用于CNV，SV分析。
二代测序技术在医学领域中的应用
魏冬凯
概要
• • • • 二代测序技术简介 常见医学领域NGS方案 石蜡包埋样本解决方案 CTC和ctDNA
二代测序技术简介
人类基因组 Human Genome
• • • • 30亿对碱基来自母亲 30亿对碱基来自父亲 线粒体基因组来自母亲 与人类共生的微生物基因组
Kuroda, M., Katano, H., Nakajima, N., Tobiume, M., Ainai, A., Sekizuka, T., … Sata, T. (2010).. PloS One, 5(4), e10256. doi:10.1371/journal.pone.0010256处理，会引入一定的偏倚。 • PCR会造成表达量的变化。 • 海量短序列数据的比对或拼接情况复杂， 对重复序列和多匹配序列的精确定位存在 明显问题。 • 高等真核生物可变剪接和反式剪接的鉴定 仍有相当的误差。 • 测序深度的确定因物种、器官、组织、时 期而变，很难有统一公式直接计算。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• MRSA是一种金黄色葡萄球菌，能够抵抗β -内酰胺类抗生 素。其中包括甲氧苯青霉素和其他更为的常见抗生素， 如苯恶洒唑青霉素，青霉素和苯恶洒唑青霉素（阿莫西 林）。大多数MRSA的传染是皮肤传染。
• 在这项研究中，研究者使用DNA测序技术——来自 Illumina公司的MiSeq设备——分析从12位病人体内分离 出来的MRSA，清晰的论证了MRSA细菌与此密切相关， 并且证明这是一次爆发。他们还透露，这次爆发范围比 先前意识到的更为广泛，两倍以上的人群携带或被同一 种爆发细菌品种感染。
2009年H1N1病毒爆发感染时， 有一名病人死于呼吸系统引起的 多器官衰竭，然而并不知道具体 的死因。科学家把病人的肺部穿 刺组织的DNA拿来做高通量测序。 最终在950万条序列中，含有 0.85%的序列来自于H1N1病毒基 因组，从而帮助科学家发现了该 病人的真正死因。在这样高人类 基因组干扰的背景下，目前其他 技术都难以快速发现致病病毒序 列、以及分子分型。
• 诊断实例：
• Dr. James Gern和Joseph DeRisi合作，用MiSeqDx从一个病危的十几岁的男孩 的脑脊液中抽提出核酸样本，测了8百万条核酸序列，从中检出了475条钩 端螺旋体的序列，从而判定这个男孩的病是因为钩端螺旋体感染。
• Dr. James Gern依据上述的判断，给男孩青霉素治疗，治好了这个男孩的病。 脑脊液是较难取得的体液，只能是采集很少的量，这就限制了所能得到的 核酸总量。
Chewapreecha, C., Croucher, N. J., Harris, S. R., Ph, D., Sanders, M., Sc, B., … Ph, D. (2012). Rapid Whole-Genome Sequencing for Investigation of a Neonatal MRSA Outbreak.
所有的人类生理活动都来源于基因组的调节。
人类基因组计划
人类基因组计划(human genome project, HGP)是由美国科学家于1985年率
先提出，于1990年正式启动的。美国、英国、法国、德国、日本和我国科 学家共同参与了这一预算达30亿美元的人类基因组计划。按照这个计划的 设想，在2015年，要把人体内约4万个基因的密码全部解开，同时绘制出 人类基因的谱图。换句话说，就是要揭开组成人体4万个基因的30亿个碱 基对的秘密。人类基因组计划与曼哈顿原子弹计划和阿波罗计划并称为三 大科学计划。被誉为生命科学的“登月计划”。
基因组调节着人类的生命活动方方面面。
DNA第二代测序技术（NGS）
• 第二代测序技术（next-generation sequencing）是一次可对几十 万到几得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌 的分析成为可能，所以又被称为深度测序(deep sequencing)。
• 钩端螺旋体，在病原体的常见程度排名中是较靠后的种类。在本案例中， 如果用PCR方法，挨个排查病原体，可能还没排到钩端螺旋体，核酸就不 够了。但高通量测序克服了核酸量不够的问题。
• 在本案例中，钩端螺旋体DNA只占总DNA的万分之0.6，含量极微，但经过 高通量测序，得到了475条钩端螺旋体的DNA，这让钩端螺旋体无处循形。
无创产前诊断
唐氏综合征，又称先天愚型或Down综合征，是由染色体异常 （多了一条21号染色体）而导致的疾病。60%患儿在胎内早 期即流产，存活者有明显的智能落后、特殊面容、生长发育 障碍和多发畸形。
无创产前诊断是要通过测孕妇外周血中的21号染色体DNA序 列的量，来推断胎儿是否有21号染色体三体综合征（唐氏综 合征）。
第二代测序的优势在哪里？
• 相比于sanger测序，NGS更加省时低成本，速度 快，覆盖度深，准确度高；
• 高通量测序人类基因组有助于发现与疾病相关的 基因；
• 对于疾病引起的基因突变，高通量测序可以为患 者医师提供更为准确的诊断依据；
• ……
感染性疾病的诊断和预防
• 高通量测序非常适合细菌，真菌和病毒等微生物 的全基因组测序，可用于这些微生物感染导致的 疾病，可对微生物进行鉴定分型，了解感染的类 型，已达到预防和诊断的目的。测序可同时给出 微生物的耐药性的信息，指导个体用药。
Wilson, M. R., Naccache, S. N., Samayoa, E., Biagtan, M., Bashir, H., Yu, G., … Chiu, C. Y. (2014). Actionable diagnosis of neuroleptospirosis by next-generation sequencing. The New England Journal of Medicine, 370(25), 2408–17. doi:10.1056/NEJMoa1401268
第二代测序在转化医学中的应用
The application of Next generation sequencing in Translational Medicine
• 一. DNA第二代测序技术 • 二.第二代测序技术在转化医学中的应用 • 感染性疾病的预防与诊断 • 无创产前诊断 • 肿瘤研究和诊断 • 药物研发 • 开发新的诊断试剂盒