培养基母液配制
培养基配制
（2）无机微量(100倍液，配制500ml） 无机微量(100倍液，配制500ml） 倍液 500ml 药品名称 MnSO4 ·4H2O 4H ZnSO4 ·7H2O 7H CuSO4 ·5H2O 5H H3BO3 Na2MoO4 ·2H2O 2 KI CoCl2· 6H2O 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 50倍称量 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 1150 22.3 8.6 0.025 6.2 0.25 0.83 0.025 430 1.25 310 12. 12.5 41. 41.5 1.25 定容于500ml 定容于500ml 蒸馏水中。 蒸馏水中。每 升培养基吸此 液10ml
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备） 2 2、培养材料表面灭菌：洗涤、清理；（此处 开始在超净台上操作）75%酒精浸泡30秒， 倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒出升汞； 无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备用。
四、实验步骤
3、接种：取出叶片置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的叶片边缘，将 叶片剪成适当大小（3-5mm见方），接种到 适当培养基中。重新包扎好瓶口，写好标签 （时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
实验三 月季的快繁
一、实验目的：对月季茎段进行快繁 ，掌握 利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法 二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：植物茎段（月季）
培养基母液的制备
配制2升MS+琼脂0.6%+蔗糖3%的固体培养基，阐述母液配制，培养基配制的全过程（1）母液配制：1确定制备的培养基为MS+琼脂0.6%+蔗糖3%为大量元素培养基，应注意溶解和添加顺序，防止沉淀。
2确定各母液的浓缩倍数，大量母液一般为浓缩10倍有机母液浓缩100倍，即所需配制的大量母液为200ml 微量元素20ml，铁盐20ml，有机元素20ml。
3根据公式：药品称取量（mg）=配方用量x浓缩倍数x母液体积计算出各药品的用量，即琼脂12g、蔗糖60g4用普通天平（1/100）称量药品，称号后的药品要分别放置。
5将药品分别放入烧杯中，分别溶解，经充分溶解后再混匀。
6将混合后的溶液移入容量瓶中，进行定容。
7混合均匀后，将母液转入试剂瓶。
8在试剂瓶上贴上标签，注明母液名称，浓缩和配制日期。
9放入冰箱中低温（2~4度）保存。
（2）培养基的配制：1根据配方计算所需的各母液，琼脂及蔗糖的量分别为大量：200ml 微量20ml 铁盐20ml 有机20ml 琼脂12g 蔗糖60g。
2在容器内装相当于1/3左右的纯水，加入称好的琼脂粉，并将其加热溶解再次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，最后加入称量的蔗糖并搅拌均匀。
3加水定容至2L，再搅拌均匀。
4调整培养基的pH5将配制好的培养基尽快分装。
6将分装后的培养基进行封口7用高压灭菌锅进行灭菌。
现在需要你配制2升MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+琼脂0.6%+蔗糖3%的固体培养基，已知大量元素母液10倍，微量元素母液100倍，铁盐50倍，有机物母液50倍，6-BA母液1mg/ml，NAA母液0.1mg/ml，请你阐述培养基的配制及灭菌的全部过程。
1根据配方计算所需的各母液，琼脂及蔗糖的量分别：为大量元素母液200ml，微量元素20ml，有机物40ml，6-BA4ml，NAA2ml，琼脂12g，60g.2在容器内装相当于1/3左右的纯水，在依次加入称好的琼脂粉，并将其加热溶解再次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，6-BA，NAA，蔗糖。
培养基母液的配制方法
培养基母液的配制方法一、实验目的1.了解无菌操作2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。
药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。
四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。
到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。
配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。
表1 MS培养基大量元素母液制备注意：(1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。
为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。
特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
(2)CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。
培养基母液的配置
培养基母液与培养基的配置摘要：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
关键词：培养基母液常用培养基植物激素1.常用培养基种类，培养基母液的各种成分的量以及配置过程1.1常用培养基：MS培养基MS培养基是目前使用最普遍的培养基。
其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。
由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。
MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。
MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。
因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。
和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。
B5培养基与其他培养基相比，它的主要特点是含有较低的铵，而铵这一营养成分可能对有些培养基有抑制生长的作用。
当愈伤组织和悬浮培养中对B5培养基与MS培养基进行对比培养试验时，发现有些植物的愈伤组织和细胞培养物在MS培养基上平内的脏物清理干净。
3.3在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。
为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。
3.4由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。
被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤害，不宜再用。
避免此现象发生的方法是:配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。
培养基母液的配制
培养基母液的配制植物在自然状态下生长时，具有完整的营养体，是属于自养型的，很多营养物质可以自制，对外界营养条件的要求比较简单,而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不同，属于异养型,要求的营养条件十分复杂,因此在人工合成养基的组成和制备上必须全面考虑，满足供应。
一、实验目的配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。
当需要连续和大量配制培养基时,如果每次都称量药品、溶解并定容，工作将十分繁琐，因此需要将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成适当的浓缩液。
要求拿握植物组织培养培养基母液的配制方法。
二、实验材料仪器冰箱、电子天平(0.0001g)容量瓶: 1000 ml, 500ml、250 ml、100 ml、25 ml广口储液瓶: 500 ml、250ml、50 ml、25 ml烧杯: 1000ml、500ml 、250m、100ml 、50 ml.数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺、标签纸、胶水、记号笔药品50%酒精、95%酒精、1N盐酸(1N盐酸(HC1)的配制:取浓盐酸825ml,加入蒸馏水1000ml,即为IN的HCI)、1 N Na0H(1N氢氧化钠(或氢氧化钾)的配制:称40 gNa0H (或氢氧化钾57.1g)加入蒸馏水100ml ,即为1N的Na0H( IN的K0H)几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品、蒸馏水三、实验步骤按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。
如Ms培养基各种母液的配制步骤如下:1、大量元素母液:包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序，将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解,然后按照顺序混合在一-起。
如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容。
最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。
在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃棒以减少误差。
定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液100 m或502、微量元素母液:因用量少,为了称量精确和方便,常配成100倍或100倍的母液,即每种药品扩大100倍或者1000倍。
培养基母液的配制方法
培养基母液的配制方法一、实验目的1.了解无菌操作2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。
药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。
四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。
到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。
配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。
表1 MS培养基大量元素母液制备序号药品名称培养基浓度（mg/L）扩大10称量(mg)1NH4NO31650165002KNO31900190003CaCl2·2H2O44044004MgSO4·7H2O37037005KH2PO41701700注意：(1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。
为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。
特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
培养基母液配制
培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍），贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用量量取。
由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微），不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基配制方便准确。
配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍，倍数不宜过高。
MS培养基母液及培养基配方法参考表2。
大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。
若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表1.2中化合物出现顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后，在1000 ml容量瓶中定容，然后移入磨口瓶中，贴上标签，置于普通冰箱（4℃）贮存。
微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为0.l~0.0001mg/l，所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。
一般将微量元素分别称量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中，但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。
配好后，贴上标签，贮存于4℃冰箱。
培养基中的铁盐母液一般单独配制。
目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。
称取Na2-EDTA 3.73 g，FeSO4 ·2H2O 2.78 g，分别溶解（可加热），然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。
转入细口瓶，贴上标签，4℃冰箱中保存。
氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时，母液浓度通常为原培养基配方的50倍（或100）。
常用氨基酸和维生素为水溶性物质，可用蒸馏水溶解，但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解，然后用重蒸馏水定容。
配制好后，转入细口瓶，贴上标签，-20℃（或4℃）冰箱中保存。
植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要，灵活设计其浓度，一般为 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。
培养基母液的配制
主题二 培养基及其制备
任务二培养基母液配制
知识回顾
水
N、P、K 大量元素
活性物质 （植物激素）
培养基
无机盐
Ca、Mg、S
微量元素 糖 维生素 Fe、Mn、Zn 、B 、Cu 、Mo
支持物质
有机物质
肌醇 氨基酸 有机添加物
任务二培养基母液配制中浓度问题 及相关计算
知识回顾
相当于土壤，提供离体器官生长所需要的营养、环境和活性物质 与土壤相比较，培养基缓冲性能很小，所以要求培养基各成分浓度精确
母液
母液1
成分
NH4NO3 KNO3 CaCl.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4.
浓缩倍数
10
浓度g/L
16.5 19 4.4 3.7 1.7
配制母液 毫升数
各成分的质量（g）
1000
母液2
KI H3BO4 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2.MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O
表2-1（P20）大量元素20倍浓缩液NH4NO3 浓度为 33000 mg/L表示1L培养基中质量为33000mg，即33g. CuSO4.5H2O0.05mg/L表示1L培养基中质量为0.05mg，即 10－5 g。
什么是培养基母液？
母液：即贮备液，指培养基配制时欲配制液的 浓缩液，一般母液配成比所需浓度放大10-100 倍。 这样不但可以保证各物质成分称量的精准性及 配制时的快速移取，而且浓缩液体积小便于低 温保藏。 母液配制时比所需浓度放大X倍，在配制培养 基时按配制培养基的体积（V升）的V/X吸取 母液即可。
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培养基母液配制
培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍），贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用量量取。
由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微），不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基配制方便准确。
配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍，倍数不宜过高。
MS培养基母液及培养基配方法参考表2。
大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。
若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表1.2中化合物出现顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后，在1000 ml容量瓶中定容，然后移入磨口瓶中，贴上标签，置于普通冰箱（4℃）贮存。
微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为
0.l~0.0001mg/l，所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。
一般将微量元素分别称量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中，但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。
配好后，贴上标签，贮存于4℃冰箱。
培养基中的铁盐母液一般单独配制。
目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。
称取Na2-EDTA 3.73 g，FeSO4 ·2H2O 2.78 g，分别溶解（可加热），然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。
转入细口瓶，贴上标签，4℃冰箱中保存。
氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时，母液浓度通常为原培养基配方的50倍（或100）。
常用氨基酸和维生素为水溶性物质，可用蒸馏水溶解，但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解，然后用重蒸馏水定容。
配制好后，转入细口瓶，贴上标签，-20℃（或4℃）冰箱中保存。
植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要，灵活设计其浓度，一般为0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。
如配0.5 mg/l NAA母液，称25 mg NAA 溶于50 ml重蒸馏水，或50 mg的NAA定溶于100 ml重蒸馏水中。
IAA要用棕色瓶暗中贮存，以免光照分解。
常用植物生长调节物质和维生素特征见表3。
生长素为醇溶性物质，配制时，应用少量95%酒精或稀碱溶解，然后用重蒸馏水溶解定容；细胞分裂素应先用少量1 N NaOH或HCl溶解，然后用重蒸馏水定容。
配制好的母液放置在4℃普通冰箱中备用。
这些母液保存时间不宜过长，当出现沉淀、浑浊及霉菌团时，应重新配制。
椰乳中因含有许多种细胞分裂素物质，如KT类似物
（9-β-D-ribofuranosylzeatin）、玉米素及玉米素核糖甙等，有时可与细胞分裂素相互代替。
采集到椰子时，应检查其汁液（保证没有变质），煮沸，滤纸过滤掉蛋白，高温高压消毒，贮存在-20℃下备用。
有时可直接加入培养基。
酵母提取液也一般也现用现配，称量酵母粉后，加热至沸腾30分钟，过滤去渣。
注意：
在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA 鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。
为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA 应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。
4、有机母液的配制
MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。
培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。
配制直接用蒸馏水溶解，定容至1L，注意称量时用电子分析天平。
配制培养基时，每配1L培养基取此液5ml。
注意：
5、激素母液配制
植物组织培养中使用的激素种类及含量需要根据不同的研究目的而定。
一般激素母液的配制的终浓度以0.5mg/ml为好，需要注意的是：
（１）配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、6BA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。
（２）细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
（３）配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
注意：
所有的母液都应保存在0~4℃冰箱中，若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。
个大气压时植物组织即无法生存。
（四）酸碱度：一般植物组织生长的最适宜pH为5～6．5。
在培养过程中pH可发生变化，加进磷酸氢盐或二氢盐，可起稳定作用。
（五）通气：悬浮培养中细胞的旺盛生长必须有良好的通气条件。
小量悬浮培养时巨常转动或振荡，可起通气和搅拌作用。
大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。