实验一 植物组织培养基母液配制的若干关键环节
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验一：培养基的配制学院：风景园林院学号：131001226 姓名：张晟菓一、实验目的1. 掌握植物组织培养实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、实验原理鉴于微生物种类及代谢类型的多样性，用于培养微生物的培养基的种类也很多。
培养基的配置的程序有器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，以及培养基的无菌检查等。
此次配制400mL MS培养基。
三、实验材料1.药品：激素：BA 1.0L（200mg/L）NAA 0.2L（200mg/L）母液：MS1（大量元素）20mL——浓缩20倍MS2（微量元素）2mL——浓缩200倍MS3（铁盐）2mL——浓缩200倍；MS4（维生素和氨基酸）2mL——浓缩200倍琼脂：2.2g蔗糖：12g（3%）无菌水2.玻璃器皿：移液管、试管、烧杯、量筒、玻璃棒、培养皿3.仪器设备：电子天平4.其他物品：药匙、滤纸、称量纸、pH计、记号笔、棉花等四、实验步骤1.玻璃器皿清洗：将试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷洗，然后用自来水和蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
晾干后备用。
2.量取母液：MS1（20mL），MS2（2mL），MS3（2mL），MS4（2mL）；加激素：BA（1.0mL），NAA（0.2mL）；加蔗糖：12g。
3.加水定容至400mL。
4.搅匀后用pH计、烧碱溶液及硫酸溶液调pH值至5.8。
5.加琼脂2.2g，用电磁炉加热溶解并搅拌5-6分钟，冒泡即可拿出。
6.趁热分装，包扎，贴标签。
五、实验结果培养基配置完成。
植物组织培养实验报告
植物组织培养实验报告学院：生命科学技术学院班级：11生物技术(制品)学号：**********姓名：**植物组织培养实验报告实验一植物组织培养母液的配制一、实验目的1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。
2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。
二、实验原理培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。
大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物（碳源、维生素、肌醇、氨基酸等）、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。
无机盐类由大量元素和微量元素组成。
大量元素中，氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在，但在培养基中多用硝酸类，也可以将硝酸类和铵类混合使用；磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供；钾是培养基中主要的阳离子；钙、钠、镁的需要量较少。
微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。
培养基中的铁离子，大多数以螯合物的形式存在，即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。
有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。
培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱，因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。
培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。
蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。
在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。
一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。
肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。
常用的植物生长调节物质包括以下三类：①生长素类：吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、二氯苯氧乙酸（2,4-D）②细胞分裂素：玉米素（ZT）6-苄基嘌呤（6-BA）和激动素（KT）。
③赤霉素：组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸（GA3）。
培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。
其中最为常见的为酵母提取物。
琼脂作为培养基的支持物，也是最常用的邮寄附加物，他可以是培养基呈固体状态，以利于组织和细胞的培养。
植物组织培养是否成功，在很大的程度上取决于培养基的选择之上。
实验一 培养基的配制与灭菌
铁盐
有机物质 2,4-D
200倍液
100倍液 1.0 mg/ml
5 ml
10ml 1ml
——
5 ml
10ml ——
5 ml
10ml 1ml
NAA
KT 蔗糖
1.0 mg/ml
1.0 mg/ml 30 g
0.2ml
1.0ml 30 g
——
—— 30 g
0.1ml 30 g
琼脂
pH值
8g
5.8
8g
5.8
8g
五、作业要求：完成实验报告，回答下面的思考题 1、根据以下所给母液浓度、蔗糖和琼脂量，配制烟草愈伤组织诱 导和培养的培养基（MS1），按MS配方（Murashige and Skoog, 1962）计算各种母液吸取量或药品的直接称量量。 2、简述高压蒸气灭菌的步骤；培养基采用高压蒸气灭菌应注意哪 些事项？
药品名称
母液倍或母 液浓度 （mg/ml）
配制1 L培养基 配制0.25 L培养基所需母液量(ml) 所需母液量(ml) 或质量（g） 或直接称量量（g） MS 1 MS 2 MS 3
大量元素 微量元素 铁盐 有机物质 2,4-D NAA KT 蔗糖 琼脂 pH值
10倍液 100倍液 200倍液 100倍液 1.0 mg/ml 1.0 mg/ml 1.0 mg/ml 30 g 8g 5.8
5.8
——
5.8
1）在烧杯内放入一定量的蒸馏水，用量筒或移液枪按上述表 格内配方加入各种母液及激素。 2）加入蔗糖30g，待蔗糖溶解后（可搅拌）加水定容至1L。 3）调节PH值，用酸度计测量PH值至5.8，常用1mol/l的HCl或 NaOH调整。 4）在MS1和MS2中加入琼脂8g，加热溶解，溶解过程中不断 搅拌，加热时烧杯口上盖上锡箔纸，防止水分过度蒸发。 5）分装：将配好的培养基及时分装到小三角瓶中，防止凝固 ，每瓶约30ml-40ml（约覆盖瓶底），分装时不要沾壁口。 6）封口：用封口膜将将三角瓶封口。
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基是培养植物细胞、组织和器官的基础培养介质。
配制
植物组织培养基的母液可以按照以下步骤进行：
1. 准备所需的化学品和试剂，包括无机盐、有机添加剂、维生素和其
他辅助物质。
这些化学品可以根据不同的植物种类和培养目的进行选择。
2. 称取所需的化学品，并依次加入无菌蒸馏水中。
搅拌溶解，直到所
有化学品完全溶解。
3. 调节pH值。
使用pH计测量溶液的pH值，如果需要，可以使用酸
或碱来调节pH值，直到达到所需的pH范围。
4. 向溶液中添加琼脂糖或琼脂糖替代物，作为凝胶剂。
溶解并搅拌直
到完全溶解。
5. 过滤溶液，以去除悬浮固体和杂质。
使用无菌滤纸或滤器进行过滤。
6. 灭菌。
将过滤后的溶液装入无菌烧瓶或容器中，使用高压灭菌器或
自动压力锅进行灭菌，通常在121℃高压下灭菌20-30分钟。
7. 灭菌后，将培养基倒入无菌培养瓶中，密封并保存在冰箱中或低温
环境中。
以上是植物组织培养基母液的配制步骤，具体的操作和配方可以根据
不同的要求和实验目的进行调整。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验指导2013.3附录培养基母液的配制（实验老师准备）一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。
二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。
另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。
三、实验器具与药品：电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。
配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。
植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。
四、培养基母液的配制过程首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。
（1）MS大量元素母液的配制按照MS培养基配方的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。
配制时先用量筒量取蒸馏水800ml，放入1000ml的烧杯中，依次分别称取KNO3 38g; NH4NO3 33g, MgSO4·7H2O 7.4g, KH2PO4 3.4g, CaCl2·2H2O 8.8g，按顺序先后倒入烧杯中，用玻璃棒搅动，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶，用蒸馏水定容至1000ml,然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
配制培养基时每升MS培养基吸取该母液量为50ml。
（2）MS微量元素母液的配制将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍，用电子天平分别依次称取MnSO4·4H2O 22.3g，ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g，KI 0.83g，Na2MoO4·2H2O 0.25g，CuSO4·5H2O 0.025g，CoCl2·6H2O 0.025g，并用重蒸水逐个溶解，待全部溶解用容量瓶定容后，装入1000ml倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
培养基母液配制中的若干关键环节
培养基母液配制中的若干关键环节培养基母液,也叫浓缩贮备液.它是以培养基配方配制成的高倍的浓缩液,不同组分母液,它的浓缩倍数不同,一般最低为10倍,高的有50倍、100倍、200倍,甚至1000倍.母液是一个方法比较简便、用量比较准确且被广泛采用的配制方法.本文就如何掌握培养基母液配制的操作要领作一阐述,以供参考.以MS培养基为例,其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.（见表1）1大量元素和微量元素母液的配制按规定用量,称取所需的各种药品,在配制时为减少工作量,可以把几种药品（如大量元素或微量元素）配在同一母液中（见表1）.但由于各种药品的混合,可能发生反应,生成沉淀物,以致母液失效.为避免类似现象发生,在大量元素、微量元素和维生素及氨基酸的母液配制时，可采用如下2种做法加以解决：①将要配在同一母液的大量元素、微量元素和维生素及氨基酸等化合物,按“表1”所列药品的先后顺序溶解药品,待前一种药品完全溶解后再加入后一种化学药品，以此类推；②使每种成份分别完全溶解,再把它们彼此混合.2铁盐母液的配制铁盐的成份含硫酸亚铁（FeSO4-7H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）.这两种化合物的溶解和混合较为严格,必须按如下方法配制,否则将会产生沉淀.该方法是：分别溶解FeSO4-7H2O和Na2-EDTA,加热并不断搅拌,使之完全溶解,冷却，将2种溶液混合,调PH至5.5,用蒸溜水加至所需容积,棕色瓶保存于冰箱之中.3植物生长调节物质母液的配制植物生长调节物质是培养基的重要组分之一,一般是植物激素类物质,如生长素类的IAA、IBA、NAA,赤霉素类的GA3,细胞分裂素类的2,4-D、KT和6-BA等.由于大多数生长调节物质难溶于水,因此配制方法也各不相同：①IAA,IBA和GA3先用少量95%酒精溶解,再加水定容，摇匀后贮于试剂瓶中、贴上标签后，存放在冰箱中；②NAA可用热水或少量95%酒精溶解,再加水定容至所需容积；③2,4-D可溶于少许0.1mol-L-1的NaOH溶液中,然后加水定容；④KT和6-BA可用少量0.1mol•L-1的HCl溶解,再加水定容；⑤玉米素先溶于少量95%酒精中,然后加水定容.植物生长调节物质浓度通常用ppm（mg•ml-1）和mo l•L-1表示,在配制母液时，常以ppm较为方便,一般配制成0.5ppm的母液,这个浓度既便于计算,也可避免冷藏时形成结晶.4有机附加物母液的配制在植物组织培养时,培养基中往往要加入一些有机附加物,如椰子汁,以促进组织培养活性.由于椰子汁的活性成分是耐热的,在配制时,要先把由果实中采集到的汁液加热煮沸以除去其中的蛋白质,过滤,然后置塑料瓶中贮存于的-20℃的低温冰箱内.MS培养基配制中的五点注意1母液配制必须严格分类配制高浓度的母液是植物组织培养的基本功。
实验1 培养基母液的配制
实验1、培养基母液的配制一、实验目的1、了解植物组织与细胞培养基的基本类型和组成。
2、掌握植物组织与细胞培养基各种母液的配制方法。
二、实验原理离体植物组织和细胞的生长、分化所需要的营养物质都是由培养基供给。
基本培养基通常包括大量元素、微量元素、有机物以及糖和水，完全培养基是在基本培养基的基础上，附加植物生长调节剂、椰乳、香蕉汁、番茄汁等天然提取物。
迄今为止，基本培养基的配方已有几百种，但较常用的有一二十种，如MS、White、N6、B5等。
实验用的培养基一般是先配成10-100倍的母液，用时再按配方配制培养基。
二、实验用品1、实验器材：冰箱、电炉、电子天平、移液管、量筒、烧杯（1000mL、500mL、50mL）、容量瓶、玻璃棒、试剂瓶（1000mL）、标签纸等。
2、实验试剂：MS培养基配方中的19种试剂，2,4-D，KT，NaOH，HCl，95%乙醇，HgCl2，次氯酸钠，蒸馏水等。
三、实验方法1、大量元素母液的配制按表1-1计算并称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL，即为10倍的大量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。
表1-1 MS培养基大量元素母液试的配制注意1: ①称取量的值（mg）=规定量(mg/L)×扩大倍数×母液体积(L)②每称量一种试剂，都要在备注栏中相应的部分做好标记，比如写上日期和划出“√”。
注意2：①为避免沉淀现象发生，应将Ca 2+、SO42-、Mg 2+和H 2PO 4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合；②CaCl 2·2H 2O 要在最后单独加入，在溶解CaCl 2·2H 2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO 2，以防沉淀。
另外，CaCl 2·2H 2O 放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。
③如遇沉淀，缓慢加入（注意搅拌）1mol/L 的Hcl 将其溶解。
2、微量元素母液的配制按表1-2计算并用分析天平称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL ，即为100倍的微量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。
组织培养实验-MS培养基及配制注意事项
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 组织培养实验-MS培养基及配制注意事项一、 MS 培养基母液的配制注意：1．除 CaCl22H2O 单独配制外，大量元素按照使用时高 10 倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在 500ml 烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl22H2O 配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩 100 倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（ FeSO47H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，母液成分 1 倍培养基用量浓缩倍数称取量（mg）母液体积（ml）配制 1 升培养基吸取量（ml）编号种类 1 大量元素KNO3 1900 10 19000 1000 100 NH4NO3 1650 10 16500 MgSO4 7H2O 370 10 3700 KH2PO4 170 10 1700 2 CaCl2 2H2O 440 10 4400 1000 100 3 微量元素 MnSO4 4H2O 22.3 100 2230 1000 10 ZnSO4 7H2O 8.6 100 860 H3BO3 6.2 100 620 KI 0.83 1000830 1000 1 Na2MoO4 7H2O 0.25 1000250 CuSO4.5H2O 0.025 100025 CoCL2.6H2O 0.025 100025 4 铁盐 Na2-EDTA 37.3 100 3730 1000 10 FeSO4.4H2O 27.8 100 2780 5 有机物甘氨酸 2.0 50 100 500 10 盐酸吡哆醇（VB6） 0.5 50 251 / 8盐酸硫铵素（VB1） 0.1 50 5 烟酸 0.5 50 25 6 肌醇 100 50 5000 500 10 定容在 1000ml 容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
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实验一、植物组织培养基母液配制的若干关键环节目的与要求：
熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法.
植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中.
为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。
这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。
现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。
以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1)
表1 MS培养基母液的配制
成分规定用量
/mg.L-1 扩大倍
数
称取量/ mg 母液定溶
体积/ml
配1LMS培
养基吸取量
/ml
大量元素
KNO3
NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4
CaCl2·2H2O 微量元数
MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O 1900
1650
370
170
440
22.3
8.6
20
20
20
20
20
1000
1000
38000
33000
7400
3400
8800
22300
8600
1000
1000
1000
1000
1000
1000
1000
50
50
50
50
50
1
1
H3BO3
KI
Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O
铁盐
Na2-EDTA FeSO4·7H2O
维生素和氨基酸
甘氨酸
Vit.B1
Vit.B6
肌醇
烟酸6.2
0.83
0.25
0.025
0.025
37.3
27.8
2.0
0.1
0.5
100
0.5
1000
1000
1000
1000
1000
100
100
100
100
100
100
100
6200
830
250
25
25
3730
2780
100
5
25
5000
25
1000
1000
1000
1000
1000
1000
1000
500
500
500
500
500
1
1
1
1
1
10
10
10
10
10
10
10
1 大量元素和微量元素母液的配制
按规定用量,称取所需的各种药品，在配制时为减少工作量，可以把几种药品（如大量元素或微量元素）配在同一母液中（见表1）.但由于各种药品的混合，可能发生反应，生成沉淀物，以致母液失效.为避免类似现象发生，在大量元素、微量元素和维生素及氨基酸的母液配制时，可采用如下2种做法加以解决：①将要配在同一母液的大量元素、微量元素和维生素及氨基酸等化合物，按“表1”所列药品的先后顺序溶解药品，待前一种药品完全溶解后再加入后一种化学药品，以此类推；②使每种成份分别完全溶解，再把它们彼此混合.
2 铁盐母液的配制
铁盐的成份含硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA）.这两种化合物的溶解和混合较为严格，必须按如下方法配制，否则将会产生沉淀.该方法是：分别溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，加热并不断搅拌，使之完全溶解，冷却，将2种溶液混合，调P H至5.5，用蒸溜水加至所需容积，棕色瓶保存于冰箱之中.
3 植物生长调节物质母液的配制
植物生长调节物质是培养基的重要组分之一，一般是植物激素类物质，如生
长素类的IAA、IBA、NAA，赤霉素类的GA3，细胞分裂素类的2，4-D、KT和6-BA等.由于大多数生长调节物质难溶于水，因此配制方法也各不相同：①IAA，IBA和GA3先用少量95%酒精溶解，再加水定容，摇匀后贮于试剂瓶中、贴上标签后，存放在冰箱中；②NAA可用热水或少量95%酒精溶解，再加水定容至所需容积；③2，4-D可溶于少许1mol·L-1的NaOH溶液中，然后加水定容；④KT和6-BA可用少量1mol·L-1的HCl溶解，再加水定容；⑤玉米素先溶于少量95%酒精中，然后加水定容.
植物生长调节物质浓度通常用ppm（mg·ml-1）和mol·L-1表示，在配制母液时，常以ppm较为方便，一般配制成0.5ppm的母液，这个浓度既便于计算，也可避免冷藏时形成结晶.
4 有机附加物母液的配制
在植物组织培养时，培养基中往往要加入一些有机附加物，如椰子汁，以促进组织培养活性.由于椰子汁的活性成分是耐热的，在配制时，要先把由果实中采集到的汁液加热煮沸以除去其中的蛋白质，过滤，然后置塑料瓶中贮存于的-200c的低温冰箱内.
以上各种混合液(母液)或单独配制药品，均应放入冰箱中保存，以免变质、长霉。
至于蔗糖、琼脂等，可按配方中要求，随称随用。