培养基母液的配制方法
MS培养基母液的配制与保存
仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0.1-1N NaOH，0.1-1NHCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。
优点：（1）保证各物质成分的准确性。
（2）便于配置时快速移取。
（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10X）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量①NH4NO31650 mg/L 16．5g②KNO31900 mg/L 19．0g③CaCl2·2H2O440 mg/L 4．4g④MgSO4·7H2O370 mg/L 3．7g⑤KH2PO4170 mg/L 1．7g2、MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22．3 mg/L（21．4 mg/L）223mg②ZnSO4·7H2O8．6 mg/L 86mg③CoCl2·6H2O0．025mg/L 0．25mg④CuSO4·5H2O0．025 mg/L 0．25mg⑤Na2MoO4·2H2O0．25 mg/L 2．5mg⑥KI 0．83 mg/L 8．3 mg⑦H3BO36．2 mg/L 62 mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml（即含0．25 mg的量）加入到母液中。
3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
9.4.植物培养基母液的配置
一、植物组织培养中的培养基
培养基：培养基是植物细 胞、组织和器官离体培养所需 的营养基质，其中含有植物细 胞生长分化所必需的各种营养 成分和生长调节物质。
固体培养
液体培养
培
水
养
基
无机盐
成 分
有机物
植物激素
培养体支持材料
辅助性物质
二、培养基母液的配置
（一） 母液配置的必要性 将配方中的药品一次称量供一段时间使用，
化学式
KI H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuLeabharlann O4.5H2O CoCL2.6H2O
用量（mg/l)
0.83 6.2 22.3 8.6 0.25 0.025 0.025
1.减少工作量 2.减少误差 3.便于母液的低温贮藏。
（二）大量元素母液的配置
（三）母液配制流程图
确定培养基
称量
贴标签 保存于冰箱
母液分装
溶解 定容
母液分装、贴标签
母液保存
保存
在冰箱内 低温保存
思考题
如何配置培养基母液？
Thank You!
即配成一些浓缩液，用时稀释，这种浓缩液就是浓 缩贮备液（简称母液）。
每种培养基往往需要十多种化合物，配制 起来很不方便，也很难达到准确和精确，特别 是微量元素和植物生长调节物质用量极少，很 难准确秤量。
微量元素（以MS培养基为例）
序号 化学名称
1
碘化钾
2
硼酸
3
硫酸锰
4
硫酸锌
5
钼酸钠
6
硫酸铜
7
氯化钾
培养基母液的制备
配制2升MS+琼脂0.6%+蔗糖3%的固体培养基，阐述母液配制，培养基配制的全过程（1）母液配制：1确定制备的培养基为MS+琼脂0.6%+蔗糖3%为大量元素培养基，应注意溶解和添加顺序，防止沉淀。
2确定各母液的浓缩倍数，大量母液一般为浓缩10倍有机母液浓缩100倍，即所需配制的大量母液为200ml 微量元素20ml，铁盐20ml，有机元素20ml。
3根据公式：药品称取量（mg）=配方用量x浓缩倍数x母液体积计算出各药品的用量，即琼脂12g、蔗糖60g4用普通天平（1/100）称量药品，称号后的药品要分别放置。
5将药品分别放入烧杯中，分别溶解，经充分溶解后再混匀。
6将混合后的溶液移入容量瓶中，进行定容。
7混合均匀后，将母液转入试剂瓶。
8在试剂瓶上贴上标签，注明母液名称，浓缩和配制日期。
9放入冰箱中低温（2~4度）保存。
（2）培养基的配制：1根据配方计算所需的各母液，琼脂及蔗糖的量分别为大量：200ml 微量20ml 铁盐20ml 有机20ml 琼脂12g 蔗糖60g。
2在容器内装相当于1/3左右的纯水，加入称好的琼脂粉，并将其加热溶解再次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，最后加入称量的蔗糖并搅拌均匀。
3加水定容至2L，再搅拌均匀。
4调整培养基的pH5将配制好的培养基尽快分装。
6将分装后的培养基进行封口7用高压灭菌锅进行灭菌。
现在需要你配制2升MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+琼脂0.6%+蔗糖3%的固体培养基，已知大量元素母液10倍，微量元素母液100倍，铁盐50倍，有机物母液50倍，6-BA母液1mg/ml，NAA母液0.1mg/ml，请你阐述培养基的配制及灭菌的全部过程。
1根据配方计算所需的各母液，琼脂及蔗糖的量分别：为大量元素母液200ml，微量元素20ml，有机物40ml，6-BA4ml，NAA2ml，琼脂12g，60g.2在容器内装相当于1/3左右的纯水，在依次加入称好的琼脂粉，并将其加热溶解再次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，6-BA，NAA，蔗糖。
MS培养基母液配方
MS培养基母液配方1、大量元素母液（10倍，1 L）NH4NO316.5 g KH2PO4 1.7 g（单独溶解后混匀）KNO319 g CaCl2·2H2O 4.4 g（单独溶解后混匀）MgSO4·7H2O 3.7 g（单独溶解后混匀）2、微量元素母液（200倍，1 L）KI 0.166 g Na2MoO4·2H2O 0.05 gH3BO3 1.24 g CuSO4·5H2O 0.005 gMnSO4·4H2O 4.46 g CoCl2·6H2O 0.005 gZnSO4·7H2O 1.72 g3、铁盐母液（200倍，500 mL；定容后调pH至5.5，加热至90℃左右螯合15~30 min）EDTA二钠（Na2·EDTA·7H2O） 3.73 gFeSO4·7H2O 2.78 g4、有机母液①（200倍，500 mL）盐酸硫胺素（VB1）0.01 g烟酸0.05 g盐酸吡哆醇（VB6）0.05 g5、有机母液②（200倍，500 mL）肌醇10.0 g6、有机母液③（200倍，500 mL）甘氨酸0.2 g7、植物激素1)0.1mg/mL 的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250mL。
2)0.1mg/mL NAA：取25mg的NAA可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量1N的NaOH溶解后，再加水定容至250mL。
3)2,4-D：2,4-二氯苯氧乙酸，相对分子量为221.0，用乙醇做助溶剂，cas号为94-75-7，分子式为，C8H6Cl2O30.2mg/mL 的2,4-D溶液：40mg 2,4-D，用少量95%乙醇溶解后，再用蒸馏水定容至200ml。
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基是培养植物细胞、组织和器官的基础培养介质。
配制
植物组织培养基的母液可以按照以下步骤进行：
1. 准备所需的化学品和试剂，包括无机盐、有机添加剂、维生素和其
他辅助物质。
这些化学品可以根据不同的植物种类和培养目的进行选择。
2. 称取所需的化学品，并依次加入无菌蒸馏水中。
搅拌溶解，直到所
有化学品完全溶解。
3. 调节pH值。
使用pH计测量溶液的pH值，如果需要，可以使用酸
或碱来调节pH值，直到达到所需的pH范围。
4. 向溶液中添加琼脂糖或琼脂糖替代物，作为凝胶剂。
溶解并搅拌直
到完全溶解。
5. 过滤溶液，以去除悬浮固体和杂质。
使用无菌滤纸或滤器进行过滤。
6. 灭菌。
将过滤后的溶液装入无菌烧瓶或容器中，使用高压灭菌器或
自动压力锅进行灭菌，通常在121℃高压下灭菌20-30分钟。
7. 灭菌后，将培养基倒入无菌培养瓶中，密封并保存在冰箱中或低温
环境中。
以上是植物组织培养基母液的配制步骤，具体的操作和配方可以根据
不同的要求和实验目的进行调整。
培养基母液的配制
培养基母液的配制植物在自然状态下生长时，具有完整的营养体，是属于自养型的，很多营养物质可以自制，对外界营养条件的要求比较简单,而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不同，属于异养型,要求的营养条件十分复杂,因此在人工合成养基的组成和制备上必须全面考虑，满足供应。
一、实验目的配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。
当需要连续和大量配制培养基时,如果每次都称量药品、溶解并定容，工作将十分繁琐，因此需要将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成适当的浓缩液。
要求拿握植物组织培养培养基母液的配制方法。
二、实验材料仪器冰箱、电子天平(0.0001g)容量瓶: 1000 ml, 500ml、250 ml、100 ml、25 ml广口储液瓶: 500 ml、250ml、50 ml、25 ml烧杯: 1000ml、500ml 、250m、100ml 、50 ml.数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺、标签纸、胶水、记号笔药品50%酒精、95%酒精、1N盐酸(1N盐酸(HC1)的配制:取浓盐酸825ml,加入蒸馏水1000ml,即为IN的HCI)、1 N Na0H(1N氢氧化钠(或氢氧化钾)的配制:称40 gNa0H (或氢氧化钾57.1g)加入蒸馏水100ml ,即为1N的Na0H( IN的K0H)几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品、蒸馏水三、实验步骤按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。
如Ms培养基各种母液的配制步骤如下:1、大量元素母液:包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序，将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解,然后按照顺序混合在一-起。
如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容。
最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。
在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃棒以减少误差。
定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液100 m或502、微量元素母液:因用量少,为了称量精确和方便,常配成100倍或100倍的母液,即每种药品扩大100倍或者1000倍。
培养基母液的配制方法
培养基母液的配制方法一、实验目的1.了解无菌操作2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。
药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。
四、实验步骤1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。
到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。
配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。
表1 MS培养基大量元素母液制备序号药品名称培养基浓度（mg/L）扩大10称量(mg)1NH4NO31650165002KNO31900190003CaCl2·2H2O44044004MgSO4·7H2O37037005KH2PO41701700注意：(1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。
为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。
特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
培养基母液配制
培养基母液配制培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍），贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用量量取。
由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微），不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基配制方便准确。
配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍，倍数不宜过高。
MS培养基母液及培养基配方法参考表2。
大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。
若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表1.2中化合物出现顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后，在1000 ml容量瓶中定容，然后移入磨口瓶中，贴上标签，置于普通冰箱（4℃）贮存。
微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为0.l~0.0001mg/l，所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。
一般将微量元素分别称量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中，但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。
配好后，贴上标签，贮存于4℃冰箱。
培养基中的铁盐母液一般单独配制。
目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。
称取Na2-EDTA 3.73 g，FeSO4 ·2H2O 2.78 g，分别溶解（可加热），然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。
转入细口瓶，贴上标签，4℃冰箱中保存。
氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时，母液浓度通常为原培养基配方的50倍（或100）。
常用氨基酸和维生素为水溶性物质，可用蒸馏水溶解，但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解，然后用重蒸馏水定容。
配制好后，转入细口瓶，贴上标签，-20℃（或4℃）冰箱中保存。
植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要，灵活设计其浓度，一般为 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。
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培养基母液的配制方法
一、实验目的
1.了解无菌操作
2.掌握培养基母液的配制方法
二、实验原理
配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
三、实验器材和药品
器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。
药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。
四、实验步骤
1、大量元素母液的配制
各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。
到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。
配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。
表1 MS培养基大量元素母液制备
注意：
(1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。
为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。
特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
(2)CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。
另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。
2、微量元素母液的配制
MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除Fe ）组成。
微量元素用量较少，特别是 CuSO4·5H2O、 CoCl2·6H2O ，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。
按照表2，表3配方，用电光天平称量，其它同大量元素。
配制培养基时，每配制1L培养基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ0.1ml。
表2 MS培养基微量Ⅰ的配制
表3 MS培养基微量Ⅱ的配制
注意：
使用电子分析天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳球将天平内的脏物清理干净。
3、铁盐母液的配制
铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。
目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。
这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。
配制方法同上，直接用蒸馏水加热搅拌溶解，定容至1L。
配制培养基时，配制1L取此液10ml。
表4 MS铁盐母液的配制
注意：
在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA 鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。
为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA 应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。
4、有机母液的配制
MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。
培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。
配制直接用蒸馏水溶解，定容至1L，注意称量时用电子分析天平。
配制培养基时，每配1L培养基取此液5ml。
注意：
由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。
被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤害，不宜再用。
避免此现象发生的方法是:配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。
表5 MS培养基有机物质母液的制备
5、激素母液配制
植物组织培养中使用的激素种类及含量需要根据不同的研究目的而定。
一般激素母液的配制的终浓度以0.5mg/ml为好，需要注意的是：(1)配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、6BA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用 1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。
(2)细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。
(3)配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。