霉菌和酵母菌的鉴定方法(2016.10.12)
【精品文档】霉菌和酵母菌检测
作业指导书版本号: A修改号: 0 标题：霉菌和酵母菌的测定页码: 1/2使用部门中心化验室编制审核批准日期日期日期检验目的和范围：对一定数量的样品或在无菌操作条件下获得的样品稀释液进行霉菌和酵母数的测定。
操作程序：1.0样品准备1.1样品编号：运用相应的标记，对样品进行编号，并记录在“微生物检验原始记录表中。
1.2样品稀释1.2.1样品稀释度的选择1.2.1.1固体样品选取10-1至10-2两个稀释度的样品稀释液。
1.2.1.2液体样品1.2.1.2.1常规产品检验选取原样。
1.2.1.2.2中间产品检验选取10-1至10-2两个稀释度的样品稀释液。
1.2.1.2.3问题产品检验根据样液污染情况，选取二至三个稀释度的样品稀释液。
1.2.2样品稀释方法1.2.2.1以无菌操作称取样品25g（或25mL），放入含有225mL灭菌生理盐水的玻塞三角瓶中，振摇30min，即为1:10稀释液。
1.2.2.2 用灭菌吸管吸取1:10稀释液10mL，注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。
1.2.2.3取1mL注入含有9mL灭菌生理盐水的试管中，另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1:100稀释液。
1.2.2.4按上条操作顺序，做10倍递增稀释液。
2.0培养基配备2.1按照生物试剂培养基的使用方法配制虎红琼脂培养基，并在46±1℃恒温或水浴中保温待用。
3.0接种培养3.1按样品编号在灭菌平皿底部作相应标记。
作业指导书版本号: A修改号: 0 标题：霉菌和酵母菌的测定页码: 2/23.2在两个灭菌平皿内倾入15mL虎红琼脂培养基，其中一个平皿作为培养基空白对照样品，另一个暴露至接种过程结束，作为实验环境对照样品。
3.3用1mL的灭菌吸管或注射器移取1mL选定的样品稀释液或样品原样至灭菌平皿内，每个样品做两个平皿。
3.4 按以上步骤，以1mL无菌生理盐水作为空白操作对照。
观察酵母菌及霉菌实验教案
察看酵母菌及霉菌实验教学设计
察看酵母菌和霉菌
目的要求
1、认识酵母菌的形态、构造特色。
2、认识霉菌的形态。
资料器具：
酵母菌培育液，长霉的橘子皮或馒头片，培育皿，盖玻片、载玻片、镊子，滴
管，吸水纸，碘液，解剖针，放大镜，显微镜等。
1、察看酵母菌
用吸管汲取一滴酵母菌培育液，平均地涂在载玻片上，盖上盖玻片，先用低倍
镜察看，再换高倍镜察看，就能够看到一个个椭圆形的小细胞，细胞中有显然的液泡，这就是酵母菌。
在盖玻片的一边滴加一滴碘液，从另一边用吸水纸吸引，就能看到被染成棕色的细胞核。
2、察看霉菌
先用肉眼，再用放大镜察看培育皿中的橘子皮或馒头片上的霉菌。
能够用解剖针挑取一些菌丝，放到载玻片的水滴中，并当心认真的展开，在显微镜下察看细菌丝的构
造及孢子等。
议论：1、显微镜下察看到的酵母菌的形态、构造有什么特色？试着画一个酵母菌的形态图。
2、霉菌与酵母菌的形态有什么差别？
1。
实验二 酵母菌的形态观察、霉菌的形态观察
实验二酵母菌的形态观察、霉菌的形态观察酵母菌和霉菌都是微生物，通过观察这两种微生物的形态特征可以确定它们的种类。
在实验室中，通常用显微镜观察微生物的形态，以帮助区分微生物的种类。
在本实验中，将观察酵母菌和霉菌的形态，以帮助区分它们。
实验步骤：1.准备显微镜，然后准备两种微生物样本：酵母菌和霉菌。
2.上照相纸，把每种样品的一小部分放在照相纸上。
3.用显微镜观察未涂抹物质的样品。
4.把溶液放在样品上，涂抹照相纸，再放入显微镜观察它们。
酵母菌的形态：在不涂抹任何物质的情况下，酵母菌呈流线形，由单个、多个的条状成分构成，在高倍镜下观察时呈多条状也可以看到酵母菌有两极分布的特点。
涂抹染色液后，酵母菌的特点是单个、多个长条状悬浮物，它们是由许多一样的小球状物体组成的，小球状物体有链分子状的特点，且在高倍镜下具有清晰的轮廓。
不涂抹染色液时，霉菌呈马尾形，有单个、多个马尾形条状成分。
马尾形较长，比酵母菌要长。
涂抹染色液后，霉菌的形态有许多变化，形状如贴壁小细节一样，贴壁小细节略微弯曲，表现在高倍镜下长条形，上面有明显的螺旋纹路。
总结：本实验中，通过显微镜观察了酵母菌和霉菌的形态，结果表明：酵母菌与染色液无关时呈流线形，由单个、多个的条状成分构成，在有染色液的情况下，它的特点是单个、多个长条状悬浮物，是由许多一样的小球状物体组成的，而霉菌不涂抹染色液时呈马尾形，有单个、多个条状成分，涂抹染色液后它的形状如贴壁小细节一样，贴壁小细节略微弯曲，表现在高倍镜下长条形，上面有明显的螺旋纹路。
本实验中，把酵母菌和霉菌的形态作了比较，两者存在明显的区别。
因此，可以从形态上来区分酵母菌和霉菌。
霉菌酵母菌检测方法国标
霉菌酵母菌检测方法国标
根据国家标准GB 4789.15-2016，食品实验室检测霉菌酵母菌的方法包括以下步骤：
1. 倾注培养法：使用无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌稀释液（蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液）的适宜容器内（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。
取1mL 1:10样品匀液注入含有9mL无菌稀释液的试管中，另换一支1mL无菌吸管反复吹吸，或在旋涡混合器上混匀，此液为1:100的样品匀液。
按此操作制备10倍递增系列稀释样品匀液。
每递増增稀释一次，换用1支1mL无菌吸管。
选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。
同时分别取1mI无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。
置水平台面待培养基完全凝固。
2. 镜检：挑取有代表性的菌落做镜检，要慎之又慎。
不同的形态的菌落做镜检，如使用倾注法，同一种酵母可能会出现不同的形态。
因此，挑取有代表性的菌落做镜检，我们要慎之又慎。
不则可能会做重复工作或漏检。
菌落总数、霉菌和酵母菌总数等微生物检验方法
菌落总数、霉菌和酵母菌总数等微生物检验方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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酵母菌和霉菌的检验
菌落总数稀释度选择及菌落计数报告方式
例 次 10-1 1 2 多不可计 164 多不可计 295 稀释液及菌落数 10-2 20 46 10-3 —— 1.6 16400 37750 两稀释 液之比 菌落总 数 报告方 式（个 /g,个/ml）
16000或 1.6 ×104 38000或平皿 进行计数，同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀 释倍数。即为每克（g)或每毫升（ml）检样中所含霉 菌和酵母数。 稀释度选择和菌落报告方式可参考GB/T4789.2。 6、报告：每克（g)或每毫升（ml）检样中所含霉菌 和酵母数以cfu/g(ml)表示。
3
4 5 6 7
多不可计 271
多不可计 多不可计 27 11
60
313 5 12 0
2.2
—— —— —— ——
27100
313000 270 30500
27000或 2.7 ×104
310000或 3.1 ×105
270或 2.7 ×102 3100或 3.1 ×104
多不可计 305 0 0
＜1×10 ＜10
第七章 食品中酵母菌和霉菌的检验
一、教学目的：了解酵母菌和霉菌的形态特征和生 物学特性；掌握霉菌和酵母菌检验的一般程序。 二、教学重点及难点：霉菌和酵母菌检验的一般程 序；样品的处理和稀释。
一、酵母菌和霉菌菌数的测定： 酵母菌和霉菌侵袭食品，发生霉坏。有些霉菌产生 毒素引起各种急性和慢性中毒，特别是有些霉菌毒 素具有具有强烈的致癌性，一次大量食入或长期少 量食入，皆能诱发癌症。对食品加强霉菌的检验， 在食品卫生学上具有重要的意义。 测定：食品检样经过处理，在一定条件下培养后， 所得1g或1ml检样中所含霉菌和酵母菌菌落数（粮 食样品指1g 粮食表面的霉菌总数）。 霉菌和酵母数数主要作为判定食品被霉菌和酵母 污染程度的标志，以便对被检样品做出适当的卫生 学评价。
霉菌和酵母菌介绍及检测方法
霉菌和酵母菌介绍及检测方法一、霉菌和酵母菌介绍：霉菌和酵母菌及其检验酵母菌是真菌中的一大类,通常是单细胞,呈圆形，卵圆形、腊肠形或杆状。
霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。
长期以来，人们利用某些霉菌和酵母加工一些食品，如用霉菌加工干酪和肉,使其味道鲜美;还可利用霉菌和酵母酿酒、制酱；食品、化学、医药等工业都少不了霉菌和酵母。
但在某些情况下，霉菌和酵母也可造成中腐败变质。
由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适于细菌生长的食品中出现,这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等。
由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术,它们能转换某些不利于细菌的物质,而促进致病细菌的生长；有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素.霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。
例如，酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等。
因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。
目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准.我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。
二、检验方法：霉菌和酵母的计数方法,与菌落总数的测定方法基本相似.主要步骤为:将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数。
对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。
具体检测标准参见:GB4789。
15-94,《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物检验霉菌和酵母计数》三、说明:1．样品的处理.为了准确测定霉菌和酵母数，真实反映被检食品的卫生质量,首先应注意样品的代表性。
对大的固体食品样品，要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料,再混合磨碎。
霉菌和酵母菌检测方法
霉菌和酵母菌检测方法
常见的霉菌和酵母菌检测方法包括以下几种：
1. 直接镜检法：采集被检物表面样品，然后在显微镜下直接观察样品中是否存在霉菌和酵母菌。
2. 培养法：将样品分别接种在含有适当营养物质的培养基中，然后在一定条件下培养，观察生长情况，判断其中是否有霉菌和酵母菌。
3. PCR检测法：对样品中的霉菌和酵母菌的特定基因进行PCR扩增，并通过电泳等技术检测扩增产物的种类和数量。
4. 气相色谱法：通过分析样品中的挥发性有机化合物，判断其中是否存在霉菌和酵母菌。
5. 快速检测法：利用特定化学试剂或生物标记物，在短时间内快速检测样品中的霉菌和酵母菌。
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霉菌酵母菌计数常用的培养基是孟加拉红（虎红），其中加入了一定量的氯霉素可有有效地抑制绝大多数细菌菌落的生长。但是由于一些难以预计的因素，例如培基的质量等。在孟加拉红培基上也可能生长出细菌菌落来，有时候未凸出琼脂表面的霉菌菌落也不太好判断。前面有很多网友以及在培训中碰到的许多学员都有问到这个问题。马群飞老师也曾做过专门的介绍鉴别的方法。我在马老师的基础上，专门针对这一问题做了一些比较性的实验。希望大家看了之后能有所收获。
可见明显的菌丝体
（三）染色法
挑取菌落用亚甲基蓝或革兰氏染色，酵母菌或霉菌在低倍镜下即可见到孢子或菌丝，而细菌不可见。
若是肉眼观察菌落形态还无法判断的话可以采用马老介绍的方法用普通光学显微镜观察菌落的边缘较薄较透光的部分。观察是否菌落
霉菌菌落
边缘交规整，调节聚焦螺旋可见到细腻如细沙的结构。若无法确认可用接种从边缘稍稍刮开菌落，即可在镜下见到卵圆形的孢子。
菌落紧密，边缘整齐，不易透光，几乎看不到细沙粒样的结构
（一）观察菌落特征
通常情况下三种菌落在孟加拉红培基上的特征比较
酵母菌菌落
细菌菌落
霉菌菌落
光滑、湿润、常带黏性，白色或粉红色。
培养时间较长时可呈皱缩状，切较干燥。
由于受到抑制，通常会很小，红色，常呈橄榄形。
绒毛状、棉絮状、蛛网状。具有菌丝体，菌落较大，扁平，较干燥。颜色多样，白色、黑色、黄色多见
（二）低倍镜观察菌落边缘形态：