鱼腥草叶总黄酮提取工艺研究

０．６ ｙ＝１１．１３７ｘ＋０．０００９
０．５ Ｒ２＝０．９９９８ ０．４
０．３
０．２
０．１
０．０ ０ ０．０１ ０．０２ ０．０３ ０．０４ ０．０５ ０．０６ 芦丁浓度（ｍｇ／ｍｌ）
图 １ 芦丁标准曲线 Fig.1 Rutin standard curve
１．３．３ 样品黄酮含量的测定 准确称取干燥鱼腥草叶粉末１ｇ，加入一定量，一
鱼腥草为三白草科蕺菜属植物蕺菜（Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ Ｔｈｕｎｂ．）的全草［１－２］，自古以来供食药两用［３］，现 被国家卫生部正式确定为“既是食品，又是药品”， 极具开发潜力［４－６］。其药理作用十分广泛［７］，具有抗菌、 抗病毒、增强机体免疫功能、利尿、抗肿瘤、抗衰 老、抗惊、镇痛、止血、止咳、促进组织再生、健 胃等作用［１，４，７－１０］。鱼腥草分布于我国中部、东南及西南部 各省区［１，４］，目前在云南、贵州、四川等地栽培较多［４］， 资源极丰富［９］。
Fig.2
８２７８７４ຫໍສະໝຸດ ７０６６６２
５０
６０
７０
８０
９０
温度（℃）
图 ２ 提取温度对提取率的影响 Effects of extracting temperatures on extracting rate
由图２可见，随着温度的升高提取率增加，在７０～ ８０℃之间，增加尤其显著；当温度超过８０℃以后提取 率增加缓慢。综合考虑温度太高可能使黄酮发生氧 化， 且杂质溶出较多，并且增加能耗，因此提取温度 以８０℃为宜。 ２．２ 提取时间对鱼腥草叶黄酮提取率的影响
图４ 表明，乙醇浓度以５０％ 最佳，当乙醇浓度在 ５０％ 以下时，随着浓度的增加，提取率也随之增加； 但当浓度超过５０％ 时，随着浓度的增加，提取率反而 减少。这可能是因为鱼腥草叶中黄酮为多种化合物的混 合物，包括各种黄酮苷和苷元，这些物质由于极性和 化学结构不同，在不同极性的提取溶剂中的溶解度也不 相同。本实验表明，体积分数为４０％～７０％ 的乙醇溶 液相对于其他浓度能更好地提取出鱼腥草叶中的黄酮类 化合物。 ２．４ 固液比对鱼腥草叶黄酮提取率的影响
剂，其中的主要成分是鱼腥草素，而对黄酮的研究较 少，特别是提取方面，国内外寥寥无几［１３，１５］，且主要 采用热水浸提法，由于黄酮类化合物中黄酮甙能溶于 水、乙醇、甲醇等极性溶剂，而黄酮体的甙元不溶于 水，只溶于乙醇等有机溶剂，所以采用水提法不能将 鱼腥草叶中的黄酮全部提取出来［１６］；且用水作为提取溶 剂，提取液易变质，杂质浸出多，不利于分离纯化， 现在已很少单一使用［１７－１９］。而采用乙醇提取，选择性 好，渗透性强，浸出率高，能较为彻底地将黄酮提取 出来，且有食用安全性高，易回收等优点［１７，２０］。另外， 因鱼腥草叶中的黄酮含量远远高于其根茎［１３－１４，２１－２２］，而且 西南山区因鱼腥草叶口感不好，食根不食叶［２２］；在贵州 人们更喜欢取食其根，叶常弃之不用［２１］。所以本研究选 择鱼腥草叶为原料，采用乙醇对其黄酮进行提取工艺的 研究，以期为综合利用鱼腥草资源，开发黄酮类制品 奠定基础。
194 2007, Vol. 28, No. 09
食品科学
※工艺技术
准确称取１ｇ干燥鱼腥草叶粉末，加入３０ｍｌ ６０％的 乙醇溶液，在８０℃下分别提取１、２、３、４、５ｈ，试 验结果见图３ 。
准确称取１ｇ 干燥鱼腥草叶粉末，分别加入６０％ 的 乙醇溶液１０、２０、３０、４０、５０ｍｌ，在８０℃下提取３ｈ， 试验结果见图５。
行正交试验，优化鱼腥草叶黄酮提取的工艺条件。
１．３．６ 提取率的测定 用正交试验得出的最佳工艺提取鱼腥草叶，共提取
三次，合并滤液，准确吸取滤液１ｍｌ，按１．３．２法测定， 根据回归方程计算黄酮含量，以此作为鱼腥草叶中总黄 酮的实际含量，以便作为以下计算提取率的依据。
各试验因素提取鱼腥草叶黄酮类化合物的含量
Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ Ｔｈｕｎｂ Ｌｅａｖｅｓ
ＹＥ Ｃｈｕｎ１，ＧＡＮ Ｊｉａｎ－ｑｕａｎ２，ＴＡＮ Ｓｈｕ－ｍｉｎｇ３，ＹＡＮＧ Ｃｏｎｇ－ｘｉａｎ１ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００２５， Ｃｈｉｎａ； ２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４００７１６， Ｃｈｉｎａ； ３．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００２５， Ｃｈｉｎａ）
定浓度的乙醇溶液，在一定温度下回流提取，冷却、 过滤并定容至１００ｍｌ，得测定用样液。准确吸取样液１ｍｌ 按１．３．２法测定吸光度，根据回归方程计算样品中黄酮 含量。
１．３．４ 单因素试验方法 分别研究不同提取温度、提取时间、乙醇浓度、
固料比对鱼腥草叶黄酮提取率的影响。
１．３．５ 鱼腥草叶黄酮提取工艺参数的优化 在单因素试验的基础上，采用Ｌ９（３４）正交试验表进
摘 要：本研究采用乙醇提取法从鱼腥草叶中提取总黄酮，在单因素试验的基础上用正交试验进行工艺参数的优 化，其优化的工艺条件为：提取温度８０℃，提取时间３ｈ，乙醇浓度５０％，固料比１：３０，在此工艺条件下进行 试验，黄酮提取率可达９２％ 以上。该优化工艺提高了黄酮的提取率，取得了较好的成效。 关 键 词 ：鱼腥草叶；黄酮；提取工艺
准确称取１ｇ 干燥鱼腥草叶粉末，分别加入３０ｍｌ ３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％ 的乙醇 溶液，在８０℃下提取３ｈ。试验结果见图４。
１００
提取率（％）
９０
８０
Fig.4
７０ ３０ ４０ ５０ ６０ ７０ ８０ ９０
乙醇浓度（％）
图 ４ 乙醇浓度对提取率的影响 Effects of ethanol concentrations on extracting rate
９５
９５
提取率（％） 提取率（％）
９０ ９０
８５
８５ ８０
Fig.3
７５
１
２
３
４
５
时间（ｈ）
图 ３ 提取时间对提取率的影响 Effects of extraction time on extracting rate
Fig.5
８０ １：１０ １：２０ １：３０ １：４０ １：５０
固液比（ｇ：ｍｌ）
图 ５ 固液比对提取率的影响 Effects of solid liquid ratios on extracting rate
从图３ 可以看出，提取时间为３ｈ 就可以达到比较 好的效果，尽管提取时间为５ｈ 时比３ｈ 的提取率稍有提 高，但考虑到实际生产应用中的生产周期和生产成本， 确定提取时间为３ｈ 较为适宜。 ２．３ 乙醇浓度对鱼腥草叶黄酮提取率的影响
１．３．１ 最大吸收波长的选择 以６０％ 乙醇为溶剂，以ＮａＮＯ２、Ａｌ（ＮＯ３）３、ＮａＯＨ
为显色剂，分别作芦丁标准品及鱼腥草叶的吸收曲线。 鱼腥草叶提取液的最大吸收波长为５０２ｎｍ，芦丁标准溶 液的最大吸收波长为５１０ｎｍ，由于芦丁标准溶液在５０２～ ５１０ｎｍ 之间的吸光度相差不大，因此后续标准曲线的制 作及鱼腥草叶提取液中黄酮的测定均选择５０２ｎｍ 为测定 波长。
芦丁 中国药品生物制品检定所；无水乙醇、硝 酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠均为分析纯。
ＦＷ８０微型高速万能试样粉碎机 河北省黄骅市新兴 电器厂；ＢＳ１１０Ｓ电子天平 北京赛多利斯天平有限公 司；１０１－２Ａ电子恒温鼓风干燥箱 上海锦昪科学仪器有 限公司；ＷＦＪ７２００分光光度计 尤尼柯（上海）仪器有限 公司等。 １．３ 方法
１．３．２ 工作曲线回归方程的建立［２３－２４］ 准确称取１０５℃烘至恒量的芦丁２０．３ｍｇ，用６０％乙
醇溶解并定容至１００ｍｌ，得浓度为０．２０３ｍｇ／ｍｌ的芦丁标 准溶液。
准确吸取上述芦丁标准溶液０、１．００、２．００、３．００、 ４．００、５．００、６．００ｍｌ于２５ｍｌ容量瓶中，各加３０％乙醇 至６ｍｌ，加５％ 亚硝酸钠溶液１．０ｍｌ，摇匀，放置６ｍｉｎ， 加１０％ 硝酸铝溶液１．０ｍｌ，摇匀，放置６ｍｉｎ，加４％ 氢氧化钠溶液１０．０ｍｌ，摇匀，用３０％ 乙醇定容，摇 匀，放置１５ｍｉｎ，以０ 管调０，在５０２ｎｍ 波长处测定 吸光度。以吸光度为纵坐标，芦丁标准溶液浓度为横坐 标，绘制标准工作曲线，得回归方程ｙ＝１１．１３７ｘ＋０．０００９， Ｒ２＝０．９９９８，表明测定吸光度与芦丁浓度呈良好的线性关 系（图１）。
１ 材料与方法
收稿日期：２００７－０６－１５ 作者简介：叶春（１９７３－），女，讲师，硕士，研究方向为食品分析、食品营养和保健因子的研究。
※工艺技术
食品科学
2007, Vol. 28, No. 09 193
吸光度 提取率（％）
１．１ 材料 鱼腥草叶 贵阳市花溪菜市场，弃茎根，去杂后
于５５℃烘干。 １．２ 试剂与仪器
鱼腥草的主要功能成分是黄酮类物质及挥发油［１０］， 研究表明其花、叶、果含有槲皮素、槲皮苷、异槲 皮苷、瑞诺苷、金丝桃苷、阿夫苷、芸香苷等黄酮 类物质［１０－１２］。鱼腥草中的黄酮能保持血管柔软，可防 治因动脉硬化引起的高血压、冠心病和脑卒中［７］；鱼 腥草所含的槲皮苷有很好的利尿、祛痰止咳、降血压、 降血脂、抗炎、抗流感病毒、抗水疙性口疮病毒等作 用［９，１３－１４］，可见鱼腥草黄酮有较高的开发价值。但长期 以来，国内外对鱼腥草的开发利用大多用它制成注射针
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ Ｔｈｕｎｂ Ｌｅａｖｅｓ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ． Ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ－ ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔｓ， ｔｈｅ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ： ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ８０ ℃， ｔｉｍｅ ３ ｈｏｕｒｓ， ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ５０％ ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｔｏ ｌｉｑｕｉｄ １：３０． Ｂｙ ｔｈｅ ａｂｏｖｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｔｈｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｓ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ９２％． Ａｐｐｌｙｉｎｇ ｔｈｉｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ｔｈｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ， ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｉｓ ｐｒｏｃｅｓｓ ｉｓ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃａｂｌｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ ｃｏｒｄａｔａ Ｔｈｕｎｂ． ｌｅａｆｓ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ 中图分类号：Ｏ６２３．５４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００７）０９－０１９２－０４