梅毒实验室检测方法的研究进展
梅毒分子生物学实验诊断方法的研究进展

( m A 、p7 T p )T 3 等的 2 以上 的混合抗原 ( 种 敏感性高 于单一抗原 ) 这 些重组抗原可被广 泛地用于多种 ,
梅 毒 的诊断 检测 方法 。
1 1 重 组 T 抗 原 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 (T — . P rP
E IA) LS
rP E IA 以重 组 抗 原 作 为 已知 抗 原 , 测 总 T . LS 检
1 基 于 r p抗 原 的梅 毒血 清学 方法 的研 究进展 T
传 统 的梅毒 血清 学 方 法是 检 测 非 T P特 异 性抗 体( 反应 素 ) T 和 P特异 性 抗体 。前者 主 要有 性 病研 究 实验 室玻 片试 验 ( D L 、 速 血 浆 反 应素 环 状 V R )快 卡 片试 验 ( P R R)和 甲苯 胺 红 不 加 热 血 清 反 应 素试
摘
4 10 ) 2 0 1
要: 梅毒 的临床表现十分复杂 , 断主要依靠 实验 室检测方法 。传统 的梅毒实 验室诊断方 法暴露 出诸多 缺点 , 诊
本文综 述 了国外一些分子生物 学技术用 于梅 毒实验室诊断的方法 ( 以基因工程重组 抗原的血清学 方法和 聚合 酶链
反应) 的研 究 进 展 。
原 。现对这 些试 剂盒 的简述 如下 : Bu o[ 用 5种 以 T rn 1 p裂 解 抗 原 和 4种 重 组 蛋 白作 为诊 断抗 原 的商 品化 E IA试 剂 盒 (C yh LS IESp—
ii、Bie ia S p ii Tr p Ch k、Tmp ELI ls o ls y h ls e— e A— SA Eu o r-
验( R S ) 其 共 同的主 要缺 点是 生物学假 阳性 T UT , 高, 因此 限于梅 毒 的筛 查 ; 后者 主要 有荧 光 密螺旋 体 吸收试 验 ( I — B ) T F' A S 、 p血 凝 试 验 ( P A T HA) r 、 p明 r
梅毒检测方法的研究进展

梅毒检测方法的研究进展摘要】梅毒是危害人类健康的普遍存在的性病之一,它主要是由梅毒螺旋体亚种(TP) 感染而引起的疾病。
快速、灵敏和特异性高的梅毒检测方法在不断的完善中。
本文从血清检测方法、病原体直接检测方法及PCR检测方法三个方面来阐述梅毒检测方法的进展,并且侧重对PCR检测方法进行了论述。
梅毒(syphilis)是一种比较普遍的性传播疾病,它主要是由梅毒螺旋体亚种(TP) 感染而引起的疾病,人是梅毒的唯一传染源[1]。
梅毒(syphilis)检查已经成为临床上检测的一个重要指标,检测的方法也由以前单一的检测方法发展多样性。
梅毒检测方法多样性,但是大致可以归为三类:血清学检测方法、病原体直接检测方法和PCR检测的方法,本文重点将阐述PCR检测的方法。
1血清学方法现在各医院主要采用的血清方法的检测手段,有双抗原夹心酶联免疫法(ELISA法)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、化学发光免疫分析法(CLIA法)、梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、胶体金法、荧光螺旋体抗体吸收试验(FTA—ABS )和蛋白质印迹法。
这些方法研究较多,方法的适用性各有所不同。
其中,双抗原夹心酶联免疫法 (ELISA法)是医院最常采用的方法,这种检测方法是检验科常规的操作技术,灵敏性高并且操作简单,试剂价格也比较便宜,适合医院大批量体检和梅毒感染的早期检查。
但是它的一个缺陷是不能作为疗效的检测手段,因为梅毒梅毒IgM和IgG的混合抗体,而IgG抗体在治愈后相当长的时间内很可能还是存在显示阳性。
2病原体直接检测方法病原体直接检测梅毒的方法一般只是适用在起病初期,其中最常用和经典的检测方式是暗视野显微镜检查和活检两种方法,但是这两种方法对于区别梅毒螺旋体和它的类似梅毒螺旋体的物质很困难,敏感性低,所以在实际运用中受到限制。
但是近来国内一般运用MDI法,该方法是一种综合相差对比、暗视野及其偏振光的可变投影显微镜,标本不要染色,也不需要任何加工处理,直接进行观察的方法。
梅毒实验室检测方法的研究进展

梅毒实验室检测方法的研究进展发表时间:2018-12-14T10:37:55.947Z 来源:《医药前沿》2018年34期作者:陈霭延[导读] 梅毒是人类独有的疾病,梅毒螺旋体(T.pallidum,TP)是梅毒的病原体,患者是梅毒唯一传染源。
(广西梧州市皮肤病防治院广西梧州 543000)【摘要】梅毒是由梅毒螺旋体(TP)引起的慢性、系统性性传播疾病,具有传染性强、潜伏期长、临床表现复杂和危害系数大等特点。
近年发病率呈增长趋势,早发现,早诊断、早治疗对控制梅毒的流行十分重要。
梅毒的诊断主要依靠实验室检测,TP尚不能进行体外培养,目前梅毒的实验室检测方法有病原学检查、血清学检查和梅毒的核酸检查试验。
因此,选择快速、特异性强、敏感性高的试验方法有利于梅毒的早期诊断及治疗。
【关键词】梅毒;实验室检验;病原学检验;血清学检验【中图分类号】R759.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2018)34-0389-03梅毒是人类独有的疾病,梅毒螺旋体(T.pallidum,TP)是梅毒的病原体,患者是梅毒唯一传染源。
梅毒有先天性和获得性两种,前者TP 通过胎盘由母体传染胎儿;后者主要经性接触传播,也可经输血引起输血后梅毒。
本病病程长,在发展过程中可侵犯任何器官和组织,引起多种多样的症状和体征,甚至危及生命。
另外,梅毒作为一个极其容易潜伏的疾病,往往患者患病多年都无非常明显的症状凸显[1]。
梅毒的实验室检测包括病原学检查、血清学检查和梅毒的核酸检查三大类。
近年来,随着分子生物学和免疫学技术的发展,使得快速、敏感、特异的梅毒诊断方法不断更新完善,有利于广泛开展流行病学调查、预防控制以及指导临床及时治疗,以控制梅毒的传播流行。
1.病原学检查方法病原学检测及梅毒螺旋体检查,适用于I、Ⅱ期梅毒有病损者的患者。
主要有三种方式,暗视野显微镜检查、镀银染色检查以及直接免疫荧光试验(DFA)检查,是诊断早期梅毒首选的方法,孕妇的羊水作暗视野显微镜检查TP,对先天梅毒具有诊断价值[2]。
梅毒螺旋体实验室诊断方法及进展

梅毒螺旋体实验室诊断方法及进展摘要】近年来梅毒的发病率正在逐年上升,同时随着免疫学和分子生物学技术的发展,梅毒的实验室检查取得了很大的进展,梅毒螺旋体抗体检测是目前梅毒诊断的主要方法,选快速、准确、特异性及敏感性强的诊断方法,是当前研究的主要热点问题。
【关键词】梅毒检测方法螺旋体分7个属,其中3个属能引起人类的疾病,分别为密螺旋体,疏螺旋体和钩端体。
密螺旋体有三个亚种(1a,1b,1c)1a苍白螺旋体 (subsp.pallidum)即梅毒螺旋体[1]。
引起严重的性传播疾病梅毒的病原体。
1.梅毒螺旋体检查1.1暗视野显微镜检查(D-F),不用染色,在暗视野下观察其形态和活动方式,是一种快速直接方法,但对取材要求高,还要注意操作方法的使用和结果的正确解释[2]其敏感性很低,但特异性高,阳性可早期作出诊断。
1.2 Fontana镀银染色法,可将螺旋体染成棕褐色,在光镜下易于查见。
但与类似梅毒螺旋体的其他物质容易混淆。
1.3 免疫荧光染色法(IFA法),用抗梅毒螺旋体抗血清或单身克隆抗体加非致病性螺旋体培养物进行吸收,再与异硫氰酸荧光素结合(FITC)用此方法来染梅毒螺旋体,在荧光显微镜下观察到绿色荧光螺旋体为阳性[3]。
其优点是区分梅毒螺旋体与其他条件致病性螺旋体。
1.4 家兔感染试验(Rabit Infection Test,RIT)是利用家兔对梅螺旋体注射愧不敢当未成年新西兰白兔睾丸内观察有无感染迹象,但是繁殖慢约30小时才能分裂一次[4],因此RIT检查时间长,而且费用也高,不适合临床应用,仅适用于科研。
1.5 PCR法是较新的方法,现大多数实验室多采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)。
FQ-PCR是一种采用PCR结合荧光探针的体外DNA扩增和检测技术;FQ-PCR除了定量准确、有较高的灵敏度和特异性外,还能实时监测并显示PCR的扩增过程,采用封闭的反应系统,有效地降低了实验室污染所造成的假阳性。
自动化定量检测梅毒的研究进展

自动化定量检测梅毒的研究进展摘要:梅毒是由梅毒密螺旋体感染引起的。
传统检测梅毒的方法需要熟练的技术员操作和解释结果。
最近的研究显示,自动化定量检测梅毒的方法正成为研究热点,将逐渐替代手工法,而自动化RPR检测特别适合于疗效监测。
关键词:梅毒;密螺旋体实验;乳胶凝集;RPR目前,在临床实验室常用的梅毒检测方法一般需手工进行,肉眼或显微镜观察结果,容易误判,而且不能准确定量,很难量化疗效。
国外已开始研究自动化检测梅毒的方法,自动化定量检测必将成为梅毒检测的发展趋势。
另一方面,我国梅毒感染呈上升趋势【1-2】,甚至胎传梅毒感染也呈逐年上升趋势【3】,不仅关系到病人本身,还关系到我国出生人口素质,因此,需要尽快提高梅毒的检测手段,早期诊断,早期治疗,更好为临床服务。
下面,本文就近年来自动化定量检测梅毒的研究进展做一综述。
一、传统梅毒检测方法----梅毒抗体检测【4】(一)、特异性抗体检测。
梅毒螺旋体的重要致病因子包括12种膜蛋白和几种溶血素,当人体感染梅毒螺旋体后,大约经过3周的潜伏期,在入侵部位出现硬下疳,然后5-15天后可在血清中检测出梅毒特异性抗体。
目前常用的有梅毒密螺旋体血凝试验(TPHA),梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA),酶联免疫吸附试验(ELISA),梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS),胶体金法,梅毒抗体蛋白印记法(Western-blot,WB)。
检查特异性抗体的试验目标是在临床进行确诊,该类检测能很好诊断各期梅毒,结果稳定可靠,但价格相对较高且耗时长。
其缺点是不适于大批量的筛选试验,无法对梅毒的疗效及预后进行判断,也无法确定梅毒是否已被治愈和再感染。
(二)、梅毒非特异性类脂质抗体检测。
梅毒非特异类脂质抗体为梅毒螺旋体侵犯及损伤组织所产生,出现较晚,一般在硬下疳出现4周才能检出,在梅毒早期患者经充分治疗后滴度可逐渐下降直至完全消失,当病情复发或再感染后可由阴性转阳或滴度逐渐上升。
梅毒检测技术进展

外 , 接荧光抗体法也是一 种较 为常用 的方法 , 法 通过异硫 直 该
用 活 的 或 死 的 T 或 其 成 分 测 定 血 清 中 TPIG IM P -g /g
抗体 。 31 T . P血 球 凝 集 试 验 ( P T HA) TP HA 用 火 鸡 或 羊 红 细 胞
作为抗原载体 , 附从兔 睾丸 中提取 的粗制 T 吸 P粉 碎 物 抗 原 ,
出 其 敏感 性 和 特 异 性 分 别 为 9 . 和 9 . 。但 T HA 操 92 85 P 作 较 麻 烦 , 需 时 间较 长 , 易 发 生 自凝 现 象 和生 物 学 假 阳性 。 所 且 32 T . P明 胶 凝 集 试 验 ( P TP A) T P 是 美 国 疾 病 预 防 控 PA 制中心 20 0 2年 推 荐 用 作 梅 毒 确 证 试 验 , 是 我 国实 验 室 近 几 也
3 TP抗 原 血 清试 验
采 用 病 变 组 织 中 的 分 泌 物 直 接 进 行 TP的 观 察 , 找 到 运 如
动 活 泼 的 苍 白螺 旋 体 可 直 接 诊 断 梅 毒 。 临 床 上 常 采 用 暗 视 野 显 微 镜 检 查 T , 一 、 期 梅 毒 的 皮 肤 黏 膜 损 害 、 巴结 病 变 P对 二 淋 具有快速 、 便和可靠的诊断价值 , 性病实验室常用的方法 , 简 是 但 由于 敏 感 性 较 低 且 临 床 标 本 要 求 较 高 而 限 制 其 应 用 l 。此 1 ]
梅毒实验室检测技术及策略的进展

中国艾滋病性病2〇21年3月第27卷第3期Chin J AIDS STD Vol.27 No.3 Mar 2021323DOI: 10.13419/ki.aids.2021.03.30•综述•梅毒实验室检测技术及策略的进展刘经纬,徐文绮,尹跃平(中国医学科学院北京协和医学院皮肤病医院/中国疾病预防控制中心性病控制中心,南京210042)摘要:梅毒螺旋体作为梅毒的病原体,可侵犯人体形成一种慢性的性传播疾病。
本病临床表现复杂,可侵犯人体全身器官,既能产生各种各样的症状和体征,又可多年无症状而呈潜伏状态。
梅毒的实验室检测方法主要有病原学检测法和血清学检测法。
针对不同人群以及疾病的不同进展,应合理选用一种或多种检测方法,提高梅毒实验室检测的准确率。
关键词:梅毒;实验室检测;检测策略中图分类号:K 759.1 文献标志码:A文章编号:1672-5662(2021)03-0323-04Progress of methods and strategies for laboratory syphilis detection LIU Jingwei, XU Wenqi, YIN Yueping.(Institute o f Dermatology, Chinese Academy o f Medical Sciences & Peking Union Medical College, National Center for STD Control, China CDC, Nanjing 210042, China)Correspondingauthor:YINYueping,Email:*****************Supported by the National Science and Technology Major Project (2018ZX10101001-004-003); the Initiative for Innovative Medicine, Chinese Academy of Medical Sciences (2016-I2M-3-021); Nanjing Incubation Program of the National Clinical Research Center (2019060001)Abstract: Treponema pallidum, as the pathogen of syphilis, can invade the human body and form a chronic sexually transmitted disease. The clinical manifestations are complex and can invade almost all organs of a body. It can not only produce various symptoms and signs, but also be latent without symptoms for many years. The laboratory detection methods mainly include pathogenic methods and serological methods. According to different groups or different progress of the disease, one or more methods should be appropriately selected to improve the accuracy of syphilis detection.Keywords: syphilis; laboratory detection; strategy梅毒是由梅毒螺旋体(7V e/K>n e m« p a//i W u m,T p)引起的一■种慢性感染性疾病,多发于低收入的国家和地区,通过性传播或者母婴传播途径感染。
梅毒螺旋体实验室检测方法研究进展

升趋 势 。2 0 1 2年 国家 卫生部 公 布 的 甲、 乙类 法 定 报告 传 染病 中 , 梅毒 发病 率 较 2 0 1 1年 上升 3 . 2 7 %, 死 亡率
上升 5 . 3 6 %, 应 引 起 重 视 。 因 此 早 期 检 出患 者 , 及 时
・
综述 与讲 座
・
梅 毒 螺旋 体 实 验 室 检 测 方 法研 究 进 展
王 宪灵 王 缚鲲
【 关键词 】 梅毒 ; 梅 毒螺旋体 ; 实验 室; 检测 【 中图分类 号】 R 7 5 9 . 1 ; R 4 4 6 【 文献标识码 】 A
【 文章编号 】 1 0 0 2 — 7 3 8 6 ( 2 0 1 4 ) 2 3 — 3 6 4 1 — 0 3
治疗 , 控制传染源 , 是控制梅毒传播 的重要措施。梅毒 检 测方 法 有多 种 , 现 就 梅 毒 螺 旋体 的实 验 室 常 见 的诊
断方法 作 一简要 综 述 。
1 病原 体 的检 测
与类 似螺 旋体 的鉴别 。 1 . 3 多功 能超 高倍 显 微 诊 断 仪 ( MD I ) 是 一 种 集 光 学、 光 电学 、 电子学 、 医 学 影像 学 和 多 媒体 计 算 机 技 术 于一 体 的高科 技 医学 显微 设备 , 其具 有共 轭变焦 、 高 清 晰度 、 高分 辨率 、 高放 大倍 率 的特点 , 有效 放 大 倍 率 可 达2 0 0 0 0倍 以上 。可 以快 速 、 便 捷 的进 行 标 本 观 测 。 其在 I 期梅 毒诊 断 的 阳性 率 为 8 3 . 7 5% [ 3 ] , 但 由于设 备 昂贵难 以普及 。
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良后 的方法 ,改 良措施是在抗 原悬液 中加人 了二胺 四乙酸 二钠灭活补 体从 而使 悬液 更加稳 定可保存4 个月 ,又在悬 液 中加入 了氯化 胆碱可 对待 测血 清直接化学灭 活从而减少 了加热灭活步骤 ,从而在检测 时更 加快速 、方便 。缺点是需要借 助显微镜 ,主观性强 ,易 出现漏检 。 2 . 1 . 4快速血 浆反应 素环状 卡片试验 ( R P R) :利用从 牛心 中提取 出 来 的有效成分一心磷 脂、卵磷脂及胆 固醇组成抗原 ,然后用特制 的活 性 炭颗粒进行吸 附,通过 肉眼观察 白色纸板上有 无黑色凝集颗粒 出现
而直 接进行 结果 判断 。该方 法操 作简便 、迅速 ,适用 于大 批量标 本
1 9 0 5 年首次发现,为纤细的密螺旋体,运动活泼,可以旋转、蛇行、
伸缩三种 方式运动 ,感 染机体后可产 生两类抗体 :一类为非特异性抗 体 ,该 类抗体能 与广泛分布于生物 组生物学 及免疫 学特性 ,梅毒实验 室
异性抗体检 测两 大类 】 。 2 . 1 非特 异性 抗体检测
2 . 2 特异性抗 体检测 2 . 2 . 1 荧光密螺旋体抗体吸收试验 ( F T A — A B S ):试验 以非致病 性密螺 旋 体R e i t e r 株作为 抗原来 吸收待 测血清 ,排 除 了同属抗原 交叉结合 的 可 能性 ,特异性好 。而且该法 因采用了整条螺旋体进 行检测 ,敏感 性 高。文献报道F T A - A B S 对各期梅 毒检测 的特异 性达到9 2 %,对 一期梅 毒 的敏感性为8 0 %,二 期为9 9 % ̄ 1 0 0 %,三期为9 5 % ̄ 1 0 0 %p l缺点是 使 用了活菌 ,存 在一定 的潜在 危险性。而且需要 使用荧光显 微镜 ,对 设备 和操作要求较高 ,所 以该法 的使用受 到了限制。 2 . 2 . 2 T P 血球凝集试验 ( T P H A):用羊或火鸡红细胞做抗原载体 ,吸附
诊断技术主要是从病原体 、血清学、分 子生物学 、脑脊液四方面开展。
1病 原体 直接检 测 1 . 1暗视野显微镜检 查T P( D F ):暗视野 显微镜可直接观察 到病 灶分 泌 物 中运动 活跃 的苍 白螺旋体 ,结合临床症状 可直接诊断梅毒 。该法
操 作简单 ,且经济 、快速 ,但敏感性较低 ,检测 阳性率 为6 5 %  ̄ 7 0 %, 主要受病程 、某些外加 因索以及检测人员 技术水平影响 ,而且对部分
复发或再感染的重要指标 。 2 . 1 . 5甲苯胺 红不 加 热血清 反应 素试 验 ( T R US T):该法 用类 脂质
二期梅毒皮疹 、隐性梅毒 或 口 腔 病灶标本不适用。 1 . 2镀银染 色方法检查T P( Wa r t b i n s t a r r y ):由于T P 具有亲 银性 ,可
阴性反应 ,尤其 是三期梅毒。
为黄色 ,T P 易被着色辨认 ,封片后可 以永久保存标本 。缺点是镀银染 色液需新鲜配 制 ,且不能观察T P 的运动方 式,易与类似1 ] P 的其他物质 混淆 ,故 临床应 用很少 ,多用于科研和教学 。 1 . 3免疫 荧光抗体染 色 :该法将T P 用异硫氰酸荧 光素标记 的抗T P 抗体 或单 克隆抗体染色 ,利用抗原抗体特 异性 反应 ,荧光 显微镜观察抗 原 抗体复合 物出现绿色荧光 ,表 明检 测标本 中含有T P ,但需要荧光显微 镜设备 ,技术条 件要求较高 。 2 梅毒 血清 学检 测 梅毒血 清学 检测根据所 用抗原不 同可分为非特异性 抗体检测和 特
【 摘 要 】梅 毒是 一 种严 重危 害人 类健 康 的性 传播 疾 病 ,临床上 主要 借 助 实验 室检 测对 其进 行诊 断 。近年 来 ,快速 、 灵敏和 特 异性 高 的检 测 方法在 不 断更新 完善 中。本 文主要从 病 原 学、血 清学 、分子 生物 学 、脑 脊 液 四方 面对梅毒 实验 室诊 断的 最新进 展作 一 综述 。 【 关键 词】 梅毒 ;病 原体 ;血 清 学 ;分子生物 学;脑 脊液
4 8 ・文献综述 ・
M a r c h 2 0 1 5 , V o 1 . 1 3 , N o . 7
梅毒 实验 室检测方法 的研究进展
刘 兵 冯 文莉
( 1 山西医科大学 ,山西 太原 0 3 0 0 0 1 ;2山西 医科大学第二医 院皮肤性病科 ,山西 太原 0 3 0 0 0 1 )
检 测 。缺点 是 当抗体 含量过 高 时 ,易 出现假 阴性 反应 ,即前带 现象 ( p r o m n e p h e n o m e n o n ) ,会有 漏检 l还易 出现生物学 假 阳性 反应 , 但是R P R 试验可检 测抗体滴度变 化 ,R P R 滴度变化 是观察治疗 效果 、
将T P 染成 棕褐色或黑褐 色,且层次清楚 ,反差 明显,形态清晰 ,背景
( 从牛心提 取的心磷脂和从 鸡蛋黄提取 的卵磷脂及胆 固醇 )为抗原来 检测血清 中的抗类脂质 抗体 ,原理 与R P R 试 验类似 ,只是 以 甲苯胺 红 染料颗粒 代替活性炭颗粒做 吸附剂 。试验 结果清 晰易读 ,简便快速 , 稳定性好 ,但对一期梅 毒、三期梅毒及 隐性梅毒进行检 测时会 出现假
中 图分类 号 :R 7 5 9 . 1
文 献标 识码 :A
文章 编号 :1 6 7 1 — 8 1 9 4( 2 0 1 5 )0 7 — 0 0 4 8 — 0 3
梅毒 ( s y p h i l i s )是 由苍 白密螺 旋 体 的苍 白亚 种 即梅 毒 螺旋 体 ( T r e p o n e m a p a l l i d u m,T P )所引起 的一种慢性 、接触 性传染病 ,近年 来其发病率有明显上升趋 势 。T P l  ̄ t F r i t z S c h a u d i n n 和E i r c h H o f ma n n 于