优化对羟基联苯法定量测定瘤胃液中乳酸含量
乳酸测定方法
乳酸测定方法本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March乳酸的测定：对羟基联苯比色法（参照高庆，2005）1.材料、试剂与仪器无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。
主要溶液：①钨酸溶液：L硫酸及10%(W/V)钨酸钠(Na2WO4·2H2O)溶液等体积混合，当天使用前配制；②20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O) 20g，加蒸馏水70ml，加热使之溶解，再加入蒸馏水定容至 100ml；③对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯溶于100ml 的L氢氧化钠溶液中( 配制时加热助溶，溶解后为澄清液体) ，贮存于棕色瓶中，保存于 4℃冰箱，可使用一个月；④乳酸标准储存液(1mg/ml)：精确称取无水乳酸锂，溶于50ml 蒸馏水中，加 L 硫酸20ml，后加蒸馏水定容至 100ml，混匀后保存于 4℃冰箱。
⑤4%(W/V)硫酸铜溶液：20%硫酸铜溶液10mL加蒸馏水稀释至50mL。
⑥乳酸标准应用液(200µg/mL):使用时取储存液10mL用蒸馏水稀释至50mL。
在冰箱中可保存数天。
主要仪器：UNIC UV-2100 紫外可见分光光度计、TGL-16B 离心机、恒温水浴锅、具塞试管5ml及具塞比色管20ml。
2. 方法青贮浸提液样品预处理取适量青贮浸提液样品5000r/min离心10min，取上清液适当稀释，吸取稀释液于洁净离心管中，加入钨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物（约30～45min），10000r/m 离心10min，取上清液置于5ml 洁净具塞试管中，60℃水浴保温30min 左右，冷却待用。
标准曲线的制作①用200Lg/mL乳酸应用标准液同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后(可以不稀释),按下表数量在预先编好号的试管中加入标准乳酸滤液和蒸馏水。
不同前处理对气相色谱法测定瘤胃中挥发性脂肪酸的影响
（ 新疆 畜牧 科 学 院饲 料研 究所 ， 新疆
乌鲁 木齐
８ ３ ０ ０ ０ ０ ）
摘 要 ： 通 过 对 瘤 胃样 品 不 同的前 处理 ， 确 定利 用 气相 色谱 方 法 测 定挥 发 性 脂 肪 酸 的检 测 方 法 的准 确
性。 结 果表 明 ： 气相 色谱 样 品 测定 前 一定 要进 行 水 系滤膜 的过 滤 。 样 品 可 以直接 水 浴 解冻 ， 进 行 离心 ， 对
１ ｌ ５℃ ， 再以 ｌ ５ ｏ Ｃ ／ ｍ ｉ ｎ速 率升 至 １ ８ ０ ％， ｌ ｍｉ ｎ ） ， 在 该 条件 下 ， 测定 的挥 发 酸组 分 可 以完全 分 离且 分析速 度
快， 峰 型 基本 对称 。
关键 词 ： 挥发 性脂 肪 酸 ； 气相 色谱
中 图分类 号 ： ￥ ８ １ ５
挥 发 性 脂 肪 酸 的测 定结 果 没 有 影 响 。使 用 Ｆ Ｆ Ａ Ｐ毛 细 血 管 色谱 柱 ， 测 定 最佳 条 件 为 ： 进样量１ Ｌ ， 线速 ５ ３ ． ９ ｃ ｍ ／ ｓ ｅ ｃ ， 色谱 柱 流量 ： ２ ． ９ ２ ｍＬ ／ ｍｉ ｎ ． 柱温条件 ： 程序升温（ 起 始 温度 ６ ０ ｃ 【 ＝ ， １ ｍｉ ｎ ， 以 ５℃／ ｍｉ ｎ速 率升 至
助燃 气 ： 空气 ； 标 准样 品 为 乙酸 、 丙酸 、 异丁酸、 丁酸 、 戊酸、 异戊 酸（ 均为 天 津光 复 生产 的 色谱 纯） 和 巴豆 酸
作者简介 ： 张俊瑜 （ １ ９ ８ ３ 一 ） 、 男， 新 疆察布查 尔县人 ， 硕 士， 助理研 究 员， 主要从事反 刍动物 营养 与饲料科 学方 面的研 究。
文献标 识码 ： Ａ
有机酸的分析与检验——对羟基联苯比色法测定乳酸含量
（二）操作步骤
2.试样中乳酸含量的测定
称取试样1.5g(称准至0.0002g)于150mL的三角瓶中，加50ml新 煮沸的冷蒸馏水，加40mL 1mol/L氢氧化钠标准溶液，煮沸5 分钟，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸标液（1mol/L）滴定， 酚酞指示液变红时停止滴定，记录消耗硫酸标液的体积数 （mL），每1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于90.08mg 乳酸（C3H6O3）。用空白试验校正。
（二）试剂与溶液
1.试剂 无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫
酸、40%乙醛溶液、无水葡萄糖、蔗糖均为分析纯试剂。 2.主要溶液 （1）钨酸溶液 （2）20%硫酸铜溶液 （3）4%(W/V)硫酸铜溶 （4）对羟基联苯溶液 （5）乳酸标准储存液(1mg/mL) （6）乳酸标准应用液(200μg/mL) （7）醛溶液(50μg/mL)
◆对羟基联苯比色法测定乳酸含量
（一）测定原理
在除去蛋白质，葡萄糖等干扰物质的啤酒中， 乳酸在铜离子的催化下，与浓硫酸作用生成乙醛，乙醛能与 对羟基联苯作用生成在565nm处有特征吸收的紫红色物质， 在一定范围内，乳酸浓度与波长为565nm的吸光度呈线性关 系，因此可以通过测定565nm处的吸光度来测定乳酸的含量。
（三）结果记录与计算
（1）乳酸含量测定结果数据记录如下表
测定内容
测定次数
硫酸标准溶液的浓度/mol/L 滴定管初始读数/mL 滴定管终读数/mL
试样消耗硫酸标准溶液的体积/mL 空白滴定消耗硫酸标准溶液的体积/mL
乳酸含量，w，% 乳酸平均含量/% 相对平均偏差/%
1
2
3
（三）操作步骤
1. 样品处理:
取约3mL左右啤酒酒液，3000r/min离心5min，吸取上清 液稀释一定倍数后，吸取稀释液2.00mL于洁净离心管中， 准确加入2.00mL钨酸溶液，混匀，室温静置至溶液有明显 絮状物出现(约30 ~ 45min)，10000 r/min离心10min， 取上清液加入0.3g活性炭，反复摇后置室温30min，过滤， 滤液收集于5mL具塞试管中，60℃水浴保温0.5h，冷却待 用。
(改)乳酸的对羟基联苯比色法测定
乳酸的对羟基联苯比色法测定1试剂乳酸溶液：称取乳酸钙（C6H10CaO6.5H2O，分子量308.29；乳酸为CH3CH(HO)COOH，分子量为90.08，即乳酸钙中含两份乳酸）0.1730g（即308.29/((90.08-1)×2)=1.730，乳酸含量为0.1g）。
用去离子水定容至100ml溶解，即这1000 ug/ml。
从中取出10ml，定容到100ml容量瓶中。
即含量为100ug/ml。
20%硫酸铜溶液：称取20克硫酸酮（CuSO4.5H2O）用100ml去离子水溶解。
对-羟基联苯试剂：称取1.5g，用浓度为5%（W/V）氢氧化钠溶液20ml溶解，去离子水定溶到100ml，棕色试剂瓶中冷藏保存备用。
不能加热溶解。
5%的氢氧化钠：称取5g氢氧化钠溶于100ml的蒸馏水中。
2步骤①青贮饲料浸提液1ml用去离子水进行稀释，稀释浓度根据青贮料的乳酸含量决定。
用20g，加入100ml去离子水，5℃下静置24h。
再取1ml浸提液稀释至100ml，即测出结果约为50ug左右，取1ml从②-⑧中直测。
（测出乳酸的结果一般为2%左右）。
②加入一滴20%硫酸铜溶液，摇匀。
③将试管置于冰水中，缓慢加入6ml浓硫酸，并混匀。
④放入沸水浴中煮沸5min。
⑤试管从沸水浴中取出后，用水冷却到室温，并加入0.2ml的对-羟基联苯试剂，小心摇匀试管内容物。
⑥将试管放入30℃恒温水浴中反应30min显色，振荡摇匀。
⑦为去除多余对-羟基联苯试剂，将试管在沸水浴中再煮沸3min。
⑧取出，冷却后，分光光度计波长560nm（乳酸的吸收波长为243nm）处比色测定OD值。
3 标准曲线的制作①取12支大试管，分为2组（原数据为6组），分别向每组试管中加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml浓度为100ug/ml的标准乳酸溶液。
系列中各乳酸含量为：0、20、40、60、80、100ug。
②向各试管中添加去离子水，即：1、0.8、0.6、0.4、0.2、0，定容至1ml。
有机酸的分析与检验——对羟基联苯比色法测定乳酸含量
有机酸的分析与检验——对羟基联苯比色法测定乳酸含量有机酸是一类含有羧基（COOH）的有机化合物，具有特殊的化学性质和广泛的应用。
有机酸的分析与检验对于实验室研究和工业生产都具有重要意义。
其中，对羟基联苯比色法可以用于测定乳酸含量。
乳酸（lactic acid）是一种常见的有机酸，是由乳酸菌在发酵过程中产生的。
乳酸广泛应用于食品工业、药品工业和医药领域。
因此，测定乳酸含量是非常重要的。
对羟基联苯比色法基于乳酸与对羟基联苯反应生成有色产物的原理进行测定。
该方法操作简便，灵敏度高，具有较高的准确性和精密度。
具体操作步骤如下：步骤一：制备标准曲线1.准备一系列乳酸浓度逐渐递增的标准溶液。
可以使用已知浓度的乳酸溶液进行稀释，或通过乳酸的溶液配制。
2.将标准溶液分别转移到不同的容量瓶中，加入定量的对羟基联苯试剂。
3.在常温环境下，利用分光光度计测量乳酸和对羟基联苯试剂反应产生的有色产物的吸光度。
4.利用所得吸光度数据绘制乳酸浓度与吸光度之间的标准曲线。
步骤二：样品处理1.取适量待测样品，用水稀释至一定体积。
2.将稀释后的样品分别转移到不同的容量瓶中。
3.各个容量瓶中加入定量的对羟基联苯试剂。
4.在常温环境下，利用分光光度计测量样品和对羟基联苯试剂反应产生的有色产物的吸光度。
步骤三：计算样品中乳酸含量1.根据标准曲线，利用所得吸光度数据计算出样品中乳酸的浓度。
2.根据样品的稀释倍数和最初样品的体积，计算出样品中乳酸的实际含量。
需要注意的是，实验过程中应该严格控制温度和时间，避免有色产物与空气中的氧气反应产生误差。
此外，对乳酸本身的特性和分子结构也需要了解，以正确操作和解读实验结果。
通过对羟基联苯比色法测定乳酸含量，可以实现对有机酸乳酸的定量分析。
这种方法具有操作简便、准确度高的特点，适用于实验室研究和工业生产过程中乳酸含量的测定。
实验三 青贮饲料乳酸含量的测定
四、试验中注意的问题
所测溶液应该根据pH进行稀释，否则 不能准确的测出青贮料的乳酸含量。 在加对-羟基联苯时不要加到试管壁上。 在比色前将试管中的溶液摇匀。
将试管放入30℃恒温水浴中30min,形成颜色。 在各试管中加入6ml浓硫酸（把试管放在冷水中， 加完摇匀），然后放入沸水浴中煮沸5分钟。 取出试管用冷水冷却，各加入0.2ml对-羟基联苯试 剂。 将试管放入30℃恒温水浴中30min,形成颜色。
Hale Waihona Puke 步骤再把试管放入沸水浴中煮沸1.5min，取 出冷却。 在560nm处比色。 标准曲线：18支试管分为6组，每组3支， 分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8， 1.0ml浓度为10ug/ml乳酸钙溶液，不足 10ug/ml ，
实验四青贮饲料乳酸含量的测定
一、实验所用仪器及试剂 1、仪器
分光光度计，30℃恒温水浴锅， 大试管（12支）， 标签纸， 移液管（枪）（2支），200ml烧杯，试管架，沸 水浴，滴管
2、试剂 ⑴20%硫酸铜溶液 20%硫酸铜溶液 20%硫酸铜溶液：称取20克硫酸铜（CuSO4.5H2O,特 级）用100ml蒸馏水溶解。 ⑵对-羟基联苯试剂：p-Hydroxydiphenyl（特级）， 对 羟基联苯试剂： 称取1.5g对-羟基联苯用浓度为5%(W/V)氢氧化钠溶 液20ml溶解（如果必要的话，进行加温溶解），溶 液透明，如果不透明，说明试剂不合格，不能用于 分析。进一步用100ml 的蒸馏水进行稀释后，冷藏 保存备用。 ⑶ 5%氢氧化钠: 称取5g 氢氧化钠溶于100ml的蒸 5%氢氧化钠 氢氧化钠: 馏水 ⑷浓硫酸 ⑸乳酸钙标准溶液：10ug/ml。 乳酸钙标准溶液： 乳酸钙标准溶液 10ug/ml。
二、试验步骤 青贮饲料浸出液1ml用蒸馏水进行稀释（50或100
乳酸含量的测定
乳酸含量的测定
乳酸含量的测定是一种常用的分析方法，可以用于确定样品中乳酸的含量。
本实验采用了一种改进的乳酸测定方法，具有快速、精确和可靠的优点。
实验过程如下：
1. 样品制备：将待测样品取适量放入离心管中，加入适量的冷开水稀释，并充分混合均匀。
2. 乳酸酶的活化：在样品中加入适量的乳酸酶，并在恒温水浴中进行活化反应。
反应时间和温度根据乳酸酶的特性来确定。
3. 添加指示剂：在活化反应结束后，向样品中加入适量的指示剂。
指示剂的选择应通过实验验证，以确保对乳酸能够产生准确的颜色反应。
4. 体系混合：将样品中的乳酸和指示剂充分混合，使其在反应体系中达到均匀分布。
5. 颜色反应观察：根据指示剂和乳酸之间的反应特点，在一定的时间内观察样品的颜色反应变化。
可以使用比色法或光度计等仪器对颜色强度进行定量测定。
6. 确定乳酸含量：根据标准曲线，利用测定得到的颜色强度值，计算样品中乳酸的含量。
需要注意的是，在实验过程中尽量保持操作的准确性和稳定性，避免外界因素对结果的影响。
此外，实验中所使用的试剂和仪器应保持干净和良好的状态，以保证测定结果的可靠性。
瘤胃液、血液中脂肪酸GC测定前处理方法
瘤胃液、血液中脂肪酸的测定方法1.试剂1.1. NaOH/Methanol（氢氧化钠甲醇溶液）：将2g氢氧化钠溶于100ml甲醇中，溶液放置一段时间后，可能产生碳酸钠白色沉淀而失效，此时重新配制。
溶液冷藏保存。
1.2. 盐酸/甲醇溶液：10ml乙酰氯慢慢加入到100ml无水甲醇中，冷藏保存。
1.3. Na2SO4溶液6.67g Na2SO4溶于100ml纯水中。
1.4. 正己烷/异丙醇混合溶液正己烷/异丙醇以3：2体积比例混合，冷藏保存。
1.5. 内标：内标（C17:0）0.05g溶解在10ml正己烷中，在冷藏状态下保存。
1.6. 正己烷使用色谱纯。
2.仪器高速离心机水解管氮吹仪恒温水浴锅气相色谱仪（FID检测器）3.操作步骤①萃取：用移液管取3ml瘤胃液样品或1ml血浆置于10ml水解管中，加入5ml 正己烷/异丙醇（3：2，v/v）混合液，轻轻晃动30s。
②吹干：在氮吹仪上用氮气将样品上层液吹干。
③加入0.5ml正己烷和1ml甲醇。
④碱酯化：向吹干的水解管中加入3ml氢氧化钾甲醇溶液，在50℃恒温水浴锅中水浴15min。
⑤酸酯化：向碱酯化完全的水解管中加入3ml盐酸甲醇溶液，拧紧盖子，在90℃恒温水浴锅中水浴120min。
⑥取出冷却到室温，3ml水和5.0ml正己烷，震荡，静置分层。
⑦吸取上层液体，定容10ml，加1g左右的无水NaSO4,干燥后可上机测定。
4.注意事项样品分析过程中每一步均要求混合均匀，但又不能剧烈震荡；有机层的转移须尽量完全；水浴过程中不停地检测试管是否密封完全，防止漏气，造成酯化不完全。
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畜牧 与饲 料 科 学
Ａ ｎ ｉ ｍ ａ ｌ Ｈ ｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ Ｆ ｅ ｅ ｄ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ
优化对羟基联苯法定量测定瘤胃液中乳酸含量
杨平 平 ， 甄玉国， 郑艳科 学 技术 学 院 ， 吉林 长 春 １ ３ ０ １ １ ８ ）
摘要： 对 羟基 联 苯 法 虽 用 于测 定 瘤 胃液 中乳 酸 的含 量 ， 但 传 统 方 法耗 时 长 ， 操 作 过程 繁 琐 。在 该 原 理 上 对 试
验 方 法进 行 了适 当的优 化 ， 使其反应过程在 ｌ ｈ 内完成 。 结 果表 明 ， 在 １ ０ ～ １ ０ ０ ｉ ｘ ｇ ／ ｍ ｇ范 围 内乳 酸 浓度 与 吸 光 度 呈 良好 的 线性 关 系， 标 准 曲 线 的 ＲＺ ＿ ＝ ０ ． ９ ９ ８ ７， 回收率为 ９ ７ ％～ １ ０ ５ ％。该 方 法 快 速 、 准确性 高， 适 合 瘤 胃液 乳
ｂ ａ ｓ ｅ ｄ ｏ ｎ ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｔ ｈ ｅ ｏ ｒ ｙ ， ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄ ｂ ｅ ｃ ｏ ｍｐ ｌ ｅ ｔ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｉ ｎ ｏ ｎ ｅ ｈ ｏ ｕ ｒ ． Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ａ ｔ １ ０ —１ ０ ０ Ｉ ￣ ｇ ／ ｍｇ ａ ｎ ｄ ａ ｂ ｓ ｏ ｒ ｂ ａ ｎ ｃ ｅ ｈ ａ ｄ ａ ｇ ｏ ｏ ｄ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｈ ｉ ｐ ， ａ ｎ ｄ Ｒ ｗａ ｓ ０ ． ９ ９ ８ ７ ， ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｉ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ９ ７ ％ ａ ｎ ｄ １ ０ ５ ％． Ｔ ｈ ｉ ｓ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｉ ｓ ｆ ａ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ｈ ａ ｓ ｈ ｉ ｇ ｈ ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｃ ｙ ． Ｓ Ｏ ｉ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｏｒ ｆ ｔ ｈ ｅ ａ ｎ ｌｙ ａ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｎ ｌ ａ ｌ ｍｅ ｎ ｌ ｆ ｕ ｉ ｄ ．
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乳 酸 是 反 刍 动 物 瘤 胃微 生 物 发 酵 饲 料 碳 水 化 合 物合 成 挥 发 性脂 肪 酸 的 重 要 中 间代 谢 产 物 ；同 时 ， 瘤 胃液 中 乳 酸 含 量 显 著 增 加 也 是 公 认 导 致 反 刍 动 物 瘤 胃急 性 酸 中 毒 的 重 要 因 素 ＿ １ ］ 。 因此 ， 准 确 检 测 瘤 胃液 中乳 酸 含 量 对 研 究 瘤 胃 微 生 物 区 系 变 化 及 瘤 胃 酸 中 毒有重要的理论和指导意义 。 乳 酸 的测 定 方 法 有 比色 法 ［ “］ 、 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ滴 定 法 ［ ５ ］ 、 酶
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ａｈ ｈ ｏ ｕ ｇ ｈ ｐ － ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ ｙ ｂ ｉ ｐ ｈ ｅ ｎ ｏ ｌ ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ ｉ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ｈ ａ ｓ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｅ ｄ ｉ ｎ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｎ ｎ ｌ ｍｅ ｎ ｌ ｆ ｕ ｉ ｄ ， ｔ ｈ ｅ ｄ ｉ ｓ ａ ｄ ｖ ａ ｎ ｔ ａ ｇ ｅ
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酸的测定。 关键词 ： 乳酸； 优化 ； 对羟基联苯法 ； 瘤 胃液 中 图分 类 号 ： ￥ ８ １ ６ ． ３ ２ 文献标识码 ： Ａ 文章 顺 序 编 号 ： １ ６ ７ ２ — ５ １ ９ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ — ０ ０ ０ １ — ０ ２
Ｏｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｌａ ｃ ｔ ｉ ｃ Ａｃ ｉ ｄ Ｃｏ ｎ ｔ ｅ ｎ ｔ ｉ ｎ Ｒｕ ｍｅ ｎ Ｆｌ ｕ ｉ ｄ ｂ ｙ Ｐ — ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ ｙ ｂ ｉ ｐ ｈ ｅ ｎ ｏ ｌ Ｃｏ ｌ ｏ ｒ ｉ ｍｅ ｔ ｒ ｙ