乳酸含量的测定
乳酸 检测标准
乳酸检测标准
1.范围
2.本标准规定了乳酸的检测方法，适用于各种样品中乳酸含量的测定。
3.原理
4.本方法采用高效液相色谱法，通过色谱柱分离乳酸与其他组分，使用紫外
检测器检测乳酸的峰面积，从而计算乳酸的含量。
5.试剂
3.1 乳酸标准品：纯度应大于99%。
3.2 甲醇：色谱纯。
3.3 超纯水：电阻率大于18MΩ·cm。
6.仪器
4.1 高效液相色谱仪：具有紫外检测器。
4.2 色谱柱：C18反相色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm。
4.3 恒温水浴锅：温度波动±0.5℃。
7.样品制备
5.1 称取适量样品，加入超纯水制成溶液。
5.2 将溶液过膜，供高效液相色谱分析。
8.分析条件
6.1 流动相：甲醇+水=70+30（体积比）。
6.2 流速：1mL/min。
6.3 检测波长：210nm。
6.4 柱温：30℃。
6.5 进样量：10μL。
9.操作步骤
7.1 打开高效液相色谱仪，预热30分钟。
7.2 将乳酸标准品和样品分别注入色谱柱中。
7.3 记录色谱图，得到乳酸的峰面积。
7.4 根据峰面积计算乳酸含量。
10.结果表示
11.根据峰面积计算乳酸含量，可以使用以下公式进行计算：
12.乳酸含量（%）= （峰面积/标准品峰面积）×标准品浓度×100%
13.其中，标准品浓度为乳酸标准品的浓度，单位为mg/mL。
血清乳酸含量测定的讨论
血清乳酸含量测定的讨论
血清乳酸含量测定是一种常见的临床检验指标，用于评估人体的乳酸代谢情况。
乳酸是一种代谢产物，在正常情况下通过乳酸脱氢酶酶系统迅速转化为能量。
然而，在某些疾病或应急情况下，乳酸产生过多或清除障碍，导致血清乳酸水平升高。
血清乳酸含量测定一般通过生化分析仪器进行，常见的方法有酶促动力学测定法、电化学法等。
这些方法基于乳酸脱氢酶催化乳酸转化为丙酮酸的反应过程，通过测定乳酸转化速率或产生的电流来间接计算血清乳酸含量。
血清乳酸含量测定在临床上有广泛应用，特别是在评估乳酸性酸中毒、休克、缺氧以及一些代谢性疾病等方面具有重要意义。
血清乳酸含量的异常增高可能与多种疾病相关，但需要结合临床数据和其他检验结果来进行综合诊断。
需要注意的是，血清乳酸含量的测定只是辅助诊断工具之一，不能作为单一判断某种疾病的依据，应由专业医生根据具体情况综合判断。
乳酸含量的酶法测定
中南民族大学硕士学位论文乳酸含量的酶法测定姓名：庹浔申请学位级别：硕士专业：分析化学指导教师：***20070515中南民族大学硕士学位论文摘 要 Ｌ－乳酸又称２－羟基丙酸，是以淀粉为原料，经过生物发酵精制而成的一种有机酸，为无色澄清粘性液体，水溶液显酸性。
与水、乙醇或乙醚能任意混合，在氯仿中不溶。
煮沸浓缩时酸合成乳酰乳酸，稀释并加热水解成乳酸。
因其左旋的特征，具有很好的生物相容性， 能与哺乳动物相容，可直接参与人体代谢而无任何副作用，被广泛应用于食品、医药等领域。
在食品行业中主要用于糖果，饮料（如啤酒，葡萄酒及乳酸类饮料）等食品加工业中，作为酸味剂及口味调节剂，被称为绝对安全的食品添加剂。
另还可用于清凉饮料、蔬菜的加工和保藏；在医药行业中L- 乳酸是一种重要的医药中间体；在临床检验中，乳酸浓度可反映组织血液灌流衰竭的严重程度，可作为组织缺氧的定量指标。
因此，乳酸的定量分析在临床、食品等科学中有重要意义。
近年来酶分析法在生物分析化学中得到了广泛的应用，已成为生命科学研究中的基础手段之一。
本论文分为四个部分，内容如下：第一章概述了乳酸的定量分析方法及酶法分析的理论知识和研究应用。
第二章研究了以紫外分光光度法为检测技术，酶催化动力学测定乳酸的方法。
在Tris-Hcl-水合肼缓冲液中（pH＝9.2），利用乳酸在氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)存在的条件下,由乳酸脱氢酶(L-LDH)催化生成丙酮酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)。
通过测定NADH在340nm处吸光度的变化率，可得出酶促反应速度，并制得标准曲线，样品中的乳酸可由标准曲线求得。
讨论了试剂用量、pH、温度和共存离子对测定的影响。
并测定了小牛血清、啤酒和白醋中乳酸的含量。
乳酸的酶法测定第三章研究了酶催化动力学荧光法测定乳酸。
基于Ｌ－ＬＤＨ催化下列反应：乳酸＋ＮＡＤ＋L-LDH利用ＮＡＤＨ是一种强荧光物质，而ＮＡＤ＋则无荧光的性质，通过测定ＮＡＤＨ荧光值的变化率得出其酶促反应速度，对应不同乳酸浓度制得标准曲线，从而可测出试样中的乳酸量。
有机酸的分析与检验——酸碱滴定法测定乳酸含量
有机酸的分析与检验——酸碱滴定法测定乳酸含量引言：有机酸是化学中重要的一类物质，广泛存在于生物体内和自然界中。
其中，乳酸是一种常见的有机酸，广泛应用于食品、医药等领域。
因此，对乳酸的测定和分析具有重要的实际意义。
本文将介绍一种常用的酸碱滴定法测定乳酸含量的方法。
一、仪器和试剂：1.仪器：滴定管、烧杯、电子天平、酸碱滴定装置。
2.试剂：氢氧化钠(NaOH)溶液，稀硫酸(H2SO4)溶液，甲酸(标准物质)。
二、实验操作：1.样品的制备：将待测的乳酸溶液称取一定量，转移到烧杯中。
2.滴定操作：a.将滴定管用稀硫酸溶液洗净，并用纯净水冲洗，再用酒精灯烘干。
(以去除可能存在的残留污染物和水分)b.在烧杯中加入适量的甲酸。
c.将烧杯中的甲酸溶液定量转移到滴定管中。
d.在酒精灯上加热烧杯中的乳酸溶液，使其接近沸腾。
e.使用酸碱滴定装置，滴定加有甲酸的滴定管，使乳酸与甲酸反应，生成乙酸。
f.继续滴定，直到溶液的颜色由红色变为黄色或透明。
3.温度和滴定点：为了保证实验的准确性和重现性，滴定操作应在45-50°C的温度下进行。
此时，滴定点可满足需要的准确性和灵敏度要求。
4.重复实验：为了确保结果的准确性，建议进行多次重复实验。
三、计算结果：乳酸的含量可以通过滴定过程中消耗的NaOH溶液体积来计算。
假设滴定过程中消耗的NaOH溶液体积为V，NaOH溶液的浓度为C，则乳酸的含量可以计算如下：乳酸含量(%)=(0.009*V*C)/m其中，0.009是换算系数，单位为mol/L；V为NaOH溶液消耗的体积，单位为mL；C为NaOH溶液的浓度，单位为mol/L；m为待测乳酸溶液的质量，单位为g。
结论：本实验利用酸碱滴定法成功测定了乳酸的含量。
通过滴定操作，实验者可以获得乳酸溶液的具体含量，为工业和食品加工等领域的生产和研究提供了重要的实验依据。
此外，我们还可以根据该方法的原理和步骤，对其他有机酸的测定进行相应的分析和操作。
乳酸含量的测定
乳酸的测定—中和滴定法应用范围：本方法采用滴定法测定乳酸(C3H6O3)的含量。
方法原理：供试品加水溶解后，再精密加入氢氧化钠滴定液（1mol/L）25mL，煮沸5分钟，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，酚酞指示液变红时停止滴定，读出硫酸滴定液使用量，计算乳酸含量。
试剂：1. 水（新沸放置至室温）2. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）3. 硫酸滴定液（0.5mol/L）4. 酚酞指示液5. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液6. 乙醇7.基准邻苯二甲酸氢钾8.基准无水碳酸钠试样制备：1. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷水使成1000mL。
标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。
每1mL氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。
根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。
C(NaOH)=m/0.2042*(V1-V2)M——邻苯二甲酸氢钾的质量；V1——氢氧化钠的消耗量；V2——空白贮藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。
2.酸滴定液（1 mol/L）配制：取硫酸30m L，缓缓注入适量的水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL，摇匀。
标定：取在270-300℃干燥恒重的基准无水碳酸钠约1.5g，精密称定，加水50mL 使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液颜色有绿色变为暗紫色。
有机酸的分析与检验——对羟基联苯比色法测定乳酸含量
有机酸的分析与检验——对羟基联苯比色法测定乳酸含量有机酸是一类含有羧基（COOH）的有机化合物，具有特殊的化学性质和广泛的应用。
有机酸的分析与检验对于实验室研究和工业生产都具有重要意义。
其中，对羟基联苯比色法可以用于测定乳酸含量。
乳酸（lactic acid）是一种常见的有机酸，是由乳酸菌在发酵过程中产生的。
乳酸广泛应用于食品工业、药品工业和医药领域。
因此，测定乳酸含量是非常重要的。
对羟基联苯比色法基于乳酸与对羟基联苯反应生成有色产物的原理进行测定。
该方法操作简便，灵敏度高，具有较高的准确性和精密度。
具体操作步骤如下：步骤一：制备标准曲线1.准备一系列乳酸浓度逐渐递增的标准溶液。
可以使用已知浓度的乳酸溶液进行稀释，或通过乳酸的溶液配制。
2.将标准溶液分别转移到不同的容量瓶中，加入定量的对羟基联苯试剂。
3.在常温环境下，利用分光光度计测量乳酸和对羟基联苯试剂反应产生的有色产物的吸光度。
4.利用所得吸光度数据绘制乳酸浓度与吸光度之间的标准曲线。
步骤二：样品处理1.取适量待测样品，用水稀释至一定体积。
2.将稀释后的样品分别转移到不同的容量瓶中。
3.各个容量瓶中加入定量的对羟基联苯试剂。
4.在常温环境下，利用分光光度计测量样品和对羟基联苯试剂反应产生的有色产物的吸光度。
步骤三：计算样品中乳酸含量1.根据标准曲线，利用所得吸光度数据计算出样品中乳酸的浓度。
2.根据样品的稀释倍数和最初样品的体积，计算出样品中乳酸的实际含量。
需要注意的是，实验过程中应该严格控制温度和时间，避免有色产物与空气中的氧气反应产生误差。
此外，对乳酸本身的特性和分子结构也需要了解，以正确操作和解读实验结果。
通过对羟基联苯比色法测定乳酸含量，可以实现对有机酸乳酸的定量分析。
这种方法具有操作简便、准确度高的特点，适用于实验室研究和工业生产过程中乳酸含量的测定。
乳酸含量测定
在Tris-Hcl-水合肼缓冲液中（pH＝9.2），利用乳酸在氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)存在的条件下,由乳酸脱氢酶(L-LDH)催化生成丙酮酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)。
，利用NADH 是一种强荧光物质,而NAD+则无荧光的性质，通过测定NADH 在340nm 处吸光度的变化率，可得出酶促反应速度，并制得标准曲线，样品中的乳酸可由标准曲线求得。
由于酶促反应的专属性,可以避免试样中众多共存组分的干扰,减少繁杂的预处理过程。
L-乳酸脱氢酶催化反应为可逆反应，且反应平衡偏向于丙酮酸转化为乳酸。
因此，为了保证反应平衡偏向于正方向,需加水合肼截获丙酮酸而生成丙酮酸腙,以减少丙酮酸的积累,加快酶促反应的速度。
而水合肼对乳酸脱氢酶又有抑制作用，过量的水合肼反而会降低酶促反应速度。
反应溶液的pH 值会影响酶的稳定性，酶活性部位中重要基团的解离状态，酶－底物复合物以及底物的解离状态，从而影响酶促反应速度。
最适pH 值为9.2。
最适温度为37℃。
发现Ni2+、Mn2+、Cu2+、Cr3+、Co2+对酶促反应速度有抑制作用根据米氏方程,1/v～1/c 为直线关系,因此用双倒数作图法所绘1/v～1/c 线作为测定乳酸的标准曲线, 线性范围较宽： 1.2 ×10-4～ 2.0 ×10-3mol/L 。
步骤：1. 配制50ml的甘氨酸缓冲液：甘氨酸3.75g,硫酸肼2.6g.,E D T A•2 N a 0.1 g，加适量去离子水用10 mol/ L N aO H 溶液调整p H 至9.3,再加去离子水至50 ml2. 配制5ml2.1mol/l的硫酸铵溶液，吸取0.8ml置于乳酸脱氢酶中进行稀释3. 称量NAD 0.01658g（663.4）溶于5ml蒸馏水瓶中（5mM），4℃保存至少可用2周4.在pcr小管中加入100μl的甘氨酸缓冲液，100μlNAD+,20μl不同浓度的乳酸锂，2μl的乳酸脱氢酶溶液，置于37℃中反应1小时后，用石英比色皿在340nm处测定吸光度，以乳酸锂浓度为横坐标，A340为纵坐标绘制标准曲线4. 在pcr小管中加入100μl的甘氨酸缓冲液，100μlNAD+,20μl不同时间段的进行适当稀释的发酵液，2μl的乳酸脱氢酶溶液，置于37℃中反应1小时后，用石英比色皿在340nm处测定吸光度，利用标准曲线得出稀释后的发酵的乳酸根含量。
血液乳酸含量的测量方法
血液乳酸含量的测量方法
测量血液中乳酸含量的方法有多种，其中包括酶催化法、化学氧化法、电化学法和酶电极感应器法。
其中，酶催化法是常用的理想方法，具有高灵敏度和宽线性范围的特点，适用于自动化分析仪。
酶催化法的原理是在NAD存在时，乳酸脱氢酶催化乳酸氧化成丙酮酸，同时生成NADH。
加入肼或氨基脲与丙酮酸生成复合物，使丙酮酸不断从反应体系中减少，促使反应向右进行。
在紫外可见分光光度计波长340nm处监测吸光度的升高速率，计算乳酸含量。
在测量血液乳酸含量时，需要注意以下几点：
1. 标本类型：应选择肝素-氟化钠作为抗凝剂，尽快分离出血浆。
避免选择草酸钾/氟化钠作为抗凝剂，因为草酸钾对乳酸脱氢酶有一定的抑制作用。
2. 采血前准备：为避免分析前其他因素对乳酸检测结果的影响，患者在采血前应保持空腹和完全静息至少2小时，以使血中乳酸浓度达到稳态。
在临床中，血浆乳酸水平可反映机体的代谢状况。
正常状态下，血浆乳酸水平较低。
如果血浆乳酸水平升高，可能表明机体存在某些代谢异常或疾病。
因此，定期监测血浆乳酸水平对于评估个体健康状况和预防疾病具有重要意义。
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乳酸的测定—中和滴定法
应用范围：本方法采用滴定法测定乳酸(C3H6O3)的含量。
方法原理：供试品加水溶解后，再精密加入氢氧化钠滴定液（1mol/L）25mL，煮沸5分钟，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，酚酞指示液变红时停止滴定，读出硫酸滴定液使用量，计算乳酸含量。
试剂：
1. 水（新沸放置至室温）
2. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）
3. 硫酸滴定液（0.5mol/L）
4. 酚酞指示液
5. 甲基红-溴甲酚绿混合指示液
6. 乙醇
7.基准邻苯二甲酸氢钾
8.基准无水碳酸钠
试样制备：
1. 氢氧化钠滴定液（1mol/L）
配制：取澄清的氢氧化钠饱和溶液56mL，加新沸过的冷水使成1000mL。
标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约6g，精密称定，加新沸过的冷水50mL，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。
每1mL氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于204.2mg的邻苯二甲酸氢钾。
根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。
C(NaOH)=m/0.2042*(V1-V2)
M——邻苯二甲酸氢钾的质量；V1——氢氧化钠的消耗量；V2——空白
贮藏：置聚乙烯塑料瓶中，密封保存；塞中有2孔，孔内各插入玻璃管1支，1管与钠石灰管相连，1管供吸出本液使用。
2.酸滴定液（1 mol/L）
配制：取硫酸30mL，缓缓注入适量的水中，冷却至室温，加水稀释至1000mL，摇匀。
标定：取在270-300℃干燥恒重的基准无水碳酸钠约1.5g，精密称定，加水50mL 使溶解，加甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2分钟，冷却至室温，继续滴定至溶液颜色有绿色变为暗紫色。
每1mL硫酸滴定液（1mol/L）相当于53.00mg的无水碳酸钠。
根据本液消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度，即得。
C(1/2H2SO4)= m/0.053*(V1-V2)
M——无水碳酸钠的质量；V1——硫酸的消耗量；V2——空白
3. 酚酞指示液
取酚酞1g，加乙醇100mL使溶解。
4. 溴甲酚绿混合指示液
取0.1% 甲基红的乙醇溶液20mL，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30mL，摇匀，即得。
操作步骤：精密称取供试品1g，精密加水50mL，再精密加入氢氧化钠滴定液（1mol/L）25mL，煮沸5分钟，加酚酞指示液2滴，趁热用硫酸滴定液（1mol/L）滴定，至溶液的粉红色褪去，并将滴定的结果用空白试验校正，记录消耗硫酸滴定液的体积数（mL），每1mL氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于90.08mg
乳酸（C3H6O3）。
乳酸(%)=(V2-V1)*C*0.09008/m
M——试样的质量；V1——样液消耗硫酸的体积；V2——空白消耗硫酸的体积C——硫酸的浓度
注1：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。