全血乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)
LDH检测
乳酸脱氢酶释放法lactate dehydrogenase release assay 碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。 本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。 细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH 的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。 本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。该酶联反应原理的示意图如下： 可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。一个试剂盒可进行100次检测。 包装清单： 保存条件： -20℃保存，一年有效。C0016-3需注意避免反复冻融。C0016-4需避光保存。试剂盒解冻后可以短期4℃存放，2-3天内有效。 注意事项： 冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活，4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。 如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过1%，并最好使用热灭活血清。如果一定需要使用10%血清，在检测时一定要设置没有细胞，但加入了相同体积培养液的对照孔，以用于消除背景。 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
乳酸脱氢酶制备
乳酸脱氢酶制备 原理: 乳酸脱氢酶（LDH）（EC1.1.1.27）存在于具糖无氧代谢途径的细胞中，为水溶性酶，催化如下反应： L（+）—乳酸+NAD+ →丙酮酸 + NADH +H+ 乳酸脱氢酶最早从牛心中分离并获结晶。制备的方法为捣碎心肌组织用水抽提，磷酸钙胶吸附，硫酸铵分级盐析及有机溶剂沉淀，最后结晶出乳酸脱氢酶。 乳酸脱氢酶活力检测原理是在pH10.0的条件下，LDH催化NAD±还原生成NADH。NADH在340nm有最大吸收，摩尔消光系数为6.2×103，NADH的分子量为663.44。 LDH活力单位定义为：25℃、每分钟催化生成1微摩尔NADH的酶量为1个活力单位。用紫外分光光度计测定酶反应进程的OD340的增量，可求出制备样品中的LDH活力。 试剂： (1)CaCl2?6H2O (2)Na3PO4 (3)冰乙酸 (4)0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2） (5)0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2） (6)0.3饱和度的硫酸铵溶液（19.5g/100ml） (7)丙酮
(8)硫酸铵粉末 (9)0.5mol/L DL-乳酸钠。 (10)2mmol/L NAD+溶液：称取133mg NAD+，溶于5ml蒸馏水中，加入约0.15ml 1mol/L NaOH 调pH为6.0，定容10ml，冰箱贮存。(11) 0.1mol/L pH10.0甘氨酸-氢氧化钠缓冲液 A液0.2mol/L甘氨酸溶液：称取15.01g甘氨酸用蒸馏水溶解，定容1L。 B液0.2mol/L NaOH溶液：称取8gNaOH用蒸馏水溶解，定容1L。 取100mlA液与64.0mlB液混合，蒸馏水定容200ml。 操作： 一、磷酸钙胶制备 （1）称取19.8g CaCl2?6H2O，溶于150ml蒸馏水中，用自来水稀释成1600ml。 （2）称取22.8g Na3PO4?12H2O溶于150ml蒸馏水中。 （3）将两溶液混合，用冰乙酸调pH至7.4，室温下放置，使磷酸钙胶沉淀。 （4）吸去上清液，4000r/min离心3min，收集胶体备用。 二、 LDH制备 1、LDH水提取 （1）取100g新鲜或短期冰冻保存的牛心，去除脂肪、血管，称重，切成小块，低温下绞碎。 （2）加入400ml冰冷的蒸馏水，冰浴中搅拌，提取20min。
血清乳酸脱氢酶同工酶测定
血清乳酸脱氢酶同工酶测定 （醋酸纤维素薄膜电泳法） [原理] 先将血清在醋酸纤维素薄膜进行电泳使乳酸脱氢酶的同工酶分离，然后在薄膜上进行酶反应，显色试剂中包括有底物（乳酸）、NAD+、吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）和碘硝基四唑蓝（INT），NAD+和PMS起递氢作用，INT最后接受氢被还原生成紫色的甲臜类化合物。其反应如下： LD 乳酸+NAD+丙酮酸+NADH2 NADH2+PMS NAD++PMSH2 PMSH2 +INT PMS+INTH2 [试剂] 1．PH8.6巴比妥缓冲液（离子强度0.05）：称取巴比妥钠10.3g，巴比妥1.84g，溶于热的蒸馏水中，冷后加蒸馏水至1L。 2．0.1mol/LpH7.5磷酸缓冲液：称取磷酸二氢钾2.16g，磷酸氢二钠 （Na2 HPO4.2H2O）30.13g, 溶于蒸馏水中，并稀释至1L。 3．0.5mol/L乳酸钠溶液：吸取60%DL—乳酸钠溶液9.25ml,加蒸馏水至100ml。 4．显色试剂：临用前配制下列试剂： （1）1mg/ml吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）水溶液； （2）辅酶Ⅰ（NAD+）10mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液1ml； （3）碘硝基四唑蓝[氯化2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-苯基四唑]（INT）12mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液3ml中； （4）0.5 mol/L乳酸钠溶液1ml。 其中（2）、（3）、（4）混合后为甲液，（1）为乙液；用时以甲液∶乙液=20∶1混合。应用前，将上述溶液充分混和；但PMS水溶液加入量为0.2ml，且应待其他三种溶液混和后再加。 4．洗脱液：正丙醇9份与二甲亚砜1份混匀即可。
乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒(乳酸底物法)产品技术要求sainuopu
乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒（乳酸底物法） 适用范围：用于体外定量测定人体血清中乳酸脱氢酶的活性。 1.1试剂盒包装规格 试剂1：1×25ml，试剂2：1×5ml；试剂1：2×60ml，试剂2：2×12ml； 试剂1：3×40ml，试剂2：3×8ml；试剂1：4×60ml，试剂2：4×12ml； 试剂1：2×400ml，试剂2：1×160ml；试剂1：1×10L，试剂2：1×2L； 试剂1：2×40ml，试剂2：2×8ml。 1.2试剂盒主要组成成分 2.1 外观 液体双试剂：试剂1无色至浅黄色澄清液体，试剂2无色至浅黄色澄清液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 试剂空白
2.3.1试剂空白吸光度：在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于0.5。 2.3.2试剂空白吸光度变化率：在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，用生理盐水作为样品加入试剂时，试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应不大于0.002。 2.4 分析灵敏度 测定活性为200U/L样本时，吸光度变化率（ΔA/min）不小于0.012。 2.5 线性范围 测试血清样本，试剂线性在[25，750]U/L(37℃)区间内：线性相关系数（r）不小于0.990；在[25，100]U/L区间内线性绝对偏差应不超过±10U/L；（100，750]U/L区间内,线性相对偏差不超过±10%。 2.6 重复性 用质控样品重复测试所得结果的重复性（变异系数，CV）应不大于5%。 2.7 批间差 不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。 2.8 准确度 相对偏差：相对偏差应不超过±10%。 2.9 稳定性 效期稳定性：试剂盒在2℃~8℃下有效期为15个月。取失效期的试剂盒进行检验，试验结果满足2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。
血气分析中血乳酸检测之临床意义
血气分析中血乳酸检测之临床意义？ 全测定在的应用 乳酸测定 §乳酸是糖()的。乳酸产生于骨胳，肌肉，脑和。经后由肾分泌。血乳酸测定可反映组织氧供和代谢状态以及量不足。乳酸水平的增高可见于多种临床疾病。 乳酸酸中毒 §相乳酸升高最常见于乳酸酸中毒，但也可与关联: –A型乳酸酸中毒：严重组织缺氧时发生，任何原因引起的组织缺氧将导致A型乳酸酸中毒发生。 –B型乳酸酸中毒：组织缺氧并不明显，但组织缺氧可同时存在。 A型乳酸酸中毒 § §严重 § § §局域性不足（组织缺氧） B型乳酸酸中毒 §药物引起 – – – –双呱类（药物） B型乳酸酸中毒 §疾病 –糖尿病 – –肝脏疾病 –(由于在血中的堆积，导致严重到可引起死亡的代谢性酸中毒和酮症的一类先天性代谢性疾病) –缺陷(影响糖类合成的酶缺陷) –缺陷(影响的疾病) – 正常参考范围 –
乳酸测定 §在以下科室或中检测乳酸有重要 意义： –外科手术(如) –重症监护科（ICU） – –（重点）实验室 乳酸测定临床应用 §心脏手术 §冠状动脉分流术 §体外膜氧合(交换膜式) §休克状况的评估 §内球囊植入术 §急诊科患者的分类救治 §创伤病人的评估 §的诊断 §烧伤患者 …… 开放性心脏手术 §通过血中乳酸测定对开放性心脏手术后进程的重要意义已经明确。通常手术后的恢复期，血中乳酸水平仅轻度升高，24小时至接近正常水平。若手术后的24小时内/后的血中乳酸结果不符合该模式，就需要进行容量支持、心脏、扩展和呼吸支持的治疗。 体外膜氧合(ECMO) §由于ECMO（体外循环交换膜式氧合作用）的强迫性与高费用，只有在病人的病情严重情况下才进行。血乳酸的测定作为是否需要进行ECMO的依据，也用来评价ECMO为组织供氧的效果。 休克状况的评估 §血乳酸升高常见于循环性休克的患者，循环性休克（严重）可由的减少（失血或脱水），心输出量减少或脓毒血症（）性血流紊乱等引起。虽然各种疾病的发生休克机理不一样，但休克情况下导致乳酸升高的原因似乎与组织缺氧或氧的利用缺陷有关。乳酸测定也同样用于疗效监测，如早期检测，乳酸结果可作为休克是否存在及严重性的重要指针，此时针对休克状况所采取的治疗措施是最为有效的。 冠状动脉分流术 §作为心肺分流术（CPB）的常规方法，需要诱导心动阻止，常引起乳酸的升高。如在CPB血乳酸检测峰值达到或超过L，手术后患者的死亡危险性更高。 §手术后，随着心脏血的再灌注，乳酸通常会降低。如再灌注后乳酸持续产生，即血乳酸浓度升高或不下降，表明心脏氧（）利用恢复到正常的延迟。这与功能降低相关，可能需要心脏兴奋剂或主动脉内球囊起博器的支持。 主动脉内球囊起博器植入术 §主动脉内球囊起博器植入术（IABP）有时作为在心外科手术遇到困难时的一种治疗手段。即便如此，其死亡率也是相当高的。如果有一个早期指标可提示
乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(二硝基苯肼微板法)
乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(二硝基苯肼微板法) 简介： 乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase ，LDH 或LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙酮酸(P)之间的氧化还原反应。其反应公式： 乳酸+NAD +→丙酮酸+NADH+H +。 L →P 为正向反应；P →L 为逆向反应，通过酶标仪检测440nm 处吸光度，进测得的丙酮酸钠含量计算酶的活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 准备样品： ① 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定， -70℃冻存，用于LDH 的检测。 ②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-70℃冻存，用于LDH 的检测。 ③高活性样品：如果样品中含有较高活性的LDH ，可以使用蒸馏水稀释。 ④(选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计 算单位蛋白重量组织或细胞内的LDH 含量。 2、 制作标准曲线：用LDH Assay buffer 准确稀释丙酮酸标准(5mmol/L)至0.5 mmol/L ， 按下表制备标准曲线。 编号 名称 TE0158 50T TE0158 100T Storage 试剂(A): 丙酮酸标准(5mmol/L) 1ml 1ml 4℃ 避光 试剂(B): LDH Assay buffer 1.5ml 3ml 4℃ 避光 试剂(C): NAD Buffer 0.3ml 0.6ml RT 试剂(D): 二硝基苯肼溶液 1.5ml 3ml 4℃ 避光 试剂(E): 碱性显色液 5.25ml 10.5ml RT 使用说明书 1份 加入物 0 1 2 3 4 5 丙酮酸标准(0.5mmol/L)(μl) 12.5 25 50 75 100
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶 科技名词定义 中文名称：乳酸脱氢酶 英文名称：lactate dehydrogenase;LDH 定义：广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。L-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于L-乳酸； D-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于D-乳酸，两者均以NAD＋为氢受体。在厌氧酵解时，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢，形成乳酸。 应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科） 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 求助编辑百科名片 催化机理 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶，几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2，〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 目录 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 血清乳酸脱氢酶（LDH）同工酶测定及意义 乳酸脱氢酶高的原因 乳酸脱氢酶偏低的原因 乳酸脱氢酶（LDH）实验 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介
编辑本段基本信息 英文名称：LDH（lactate dehydrogenase） 序列信息：1 gsgcnldsar frylmg 长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)} 正常范围：血清～L； 尿560～2050U/L； 脑脊液含量为血清的1/10。 编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 乳酸脱氢酶[1]（LD）分子量为135～140KD，由两种亚单位组成：H（表示heart）和M（表示muscle）。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LD1（H4）、LD2（H3M1）、LD3（H2M2）、LD4（HM3）、LD5（M4）。 LD催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应，在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应，而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化（为逆反应）。LD是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。 由于LD几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。由于半寿期长（10～163小时），多用于回顾性诊断，如对人院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测医学教育`网搜集整理。 LD在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主，LD2次之；肺以LD3．LD4为主；骨骼肌以LD5为主；肝以LD5为主，LD4次之。血清中LD含量的顺序是LD2>LD1>LD3>LD4>LD5.
血浆乳酸测定意义
全血乳酸(LA)测定在临床中的应用 急诊科苏中杰 【概况】：乳酸(Lactic acid, LA) 分子量90，是葡萄糖分子量的一半，是体内糖无氧代谢(糖酵解)的代谢终产物。主要由葡萄糖通过糖酵解途径在细胞浆中生成。乳酸主要产生于骨胳，肌肉，脑和红细胞，经肝脏代谢后由肾脏分泌排泄。血乳酸测定可反映组织氧供和代谢状态以及灌注量是否不足。 乳酸水平的生理性增高可见于剧烈运动所致的肌肉痉挛等，但病理性增高则最常见于乳酸性酸中毒等多种临床疾病，而与呼吸性碱中毒也有关联。 A型乳酸酸中毒：严重组织缺氧时发生，任何原因引起的组织缺氧将导致A型乳酸酸中毒发生。常见于休克、严重哮喘、一氧化碳中毒、心衰、局域性血流灌注不足（组织缺氧）。 B型乳酸酸中毒：组织缺氧存在但并不明显。包括： （1）.药物引起者有：酒精中毒、阿斯匹林、氰化物、双呱类（糖尿病药物）。 （2）.疾病引起者有：糖尿病、恶性肿瘤、肝脏疾病、甲基丙二酸血症(由于甲基丙二酸在血中的堆积，导致严重到可引起死亡的代谢性酸中毒和酮症的一类先天性代谢性疾病)、糖原酶缺陷(影响糖类合成的酶缺陷)、脂肪酸氧化缺陷(影响脂肪酸分解的疾病)、脓毒血症。 血浆乳酸的正常值为1.0士0.5mmol／L， <2mmol／L均可视为正常，大于此值即可诊断为“高乳酸血症”。在危重病人，虽然低灌注和缺氧是“高乳酸血症”的重要原因，但不是唯一的原因，儿茶酚胺分泌增加和碱中毒等也可因促进糖酵解而增加乳酸含量。此外，肝功能下降导致乳酸摄取减少也会造成血乳酸增加。由此可见，血浆乳酸水平可受许多非循环因素的影响，单纯的“高乳酸血症”并不足以判断外周灌注不足和缺氧。但在上述情况下，乳酸水平一般不会很高，往往<5mmol ／L，称为“中度高乳酸血症”。同时由于缓冲系统通常是正常的，一般不会伴有酸
乳酸脱氢酶细胞毒性检测
产品简介： 产品编号产品名称产品包装产品价格 C0016 100次176.00元碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。 本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。 细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。 本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。该酶联反应原理的示意图如下： 可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。一个试剂盒可进行100次检测。 包装清单： 产品编号产品名称包装 C0016-1 LDH释放试剂 1.5ml C0016-2 乳酸溶液2ml C0016-3 酶溶液1ml×2 C0016-4 INT溶液(10X) 0.2ml C0016-5 INT稀释液2ml —说明书1份 保存条件： -20℃保存，一年有效。C0016-3需注意避免反复冻融。C0016-4需避光保存。试剂盒解冻后可以短期4℃存放，2-3天内有效。 注意事项： 冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活，4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。 如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过1%，并最好使用热灭活血清。如果一定需要使用10%血清，在检测时一定要设置没有细胞，但加入了相同体积培养液的对照孔，以用于消除背景。 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒说明书 微量法
乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 货号：BC0685 规格：100T/48S 产品内容： 提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体7mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入1.3mL双蒸水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20℃保存，可保存两周，禁止反复冻融； 试剂三：液体7mL×1瓶，4℃保存； 试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存； 丙酮酸钠标准液：液体1mL×1支，4℃保存，2μmol/ml。 产品简介： LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。 LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。 试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取：
1.细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2.血清（浆）样品：直接检测。 3.丙酮酸钠标准液：取100μL标准液，倍比稀释至1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL，用2、1、0.5、 0.25、0.125、0μmol/mL做标准曲线。 二、测定操作表： 1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。 2.样本测定 试剂名称(μL)测定管对照管标准管待测样本1010- 标准液--10 试剂一505050 试剂二10-- 蒸馏水-1010 充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴15min 试剂三505050 充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min 试剂四150150150充分混匀，室温静置3min，取200μL转移至微量玻璃比色皿或在96孔板中，450nm下测定吸光度，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需要设一个对照。
血浆乳酸测定意义
全血乳酸(LA)测定在临床中得应用 急诊科苏中杰 【概况】：乳酸(Lactic acid, LA) 分子量90，就是葡萄糖分子量得一半，就是体内糖无氧代谢(糖酵解)得代谢终产物。主要由葡萄糖通过糖酵解途径在细胞浆中生成。乳酸主要产生于骨胳，肌肉，脑与红细胞，经肝脏代谢后由肾脏分泌排泄。血乳酸测定可反映组织氧供与代谢状态以及灌注量就是否不足。 乳酸水平得生理性增高可见于剧烈运动所致得肌肉痉挛等，但病理性增高则最常见于乳酸性酸中毒等多种临床疾病，而与呼吸性碱中毒也有关联。 A型乳酸酸中毒：严重组织缺氧时发生，任何原因引起得组织缺氧将导致A型乳酸酸中毒发生。常见于休克、严重哮喘、一氧化碳中毒、心衰、局域性血流灌注不足（组织缺氧）。 B型乳酸酸中毒：组织缺氧存在但并不明显。包括： （1）、药物引起者有：酒精中毒、阿斯匹林、氰化物、双呱类（糖尿病药物）。 （2）、疾病引起者有：糖尿病、恶性肿瘤、肝脏疾病、甲基丙二酸血症(由于甲基丙二酸在血中得堆积，导致严重到可引起死亡得代谢性酸中毒与酮症得一类先天性代谢性疾病)、糖原酶缺陷(影响糖类合成得酶缺陷)、脂肪酸氧化缺陷(影响脂肪酸分解得疾病)、脓毒血症。 血浆乳酸得正常值为1、0士0、5mmol／L， <2mmol／L均可视为正常，大于此值即可诊断为“高乳酸血症”。在危重病人，虽然低灌注与缺氧就是“高乳酸血症”得重要原因，但不就是唯一得原因，儿茶酚胺分泌增加与碱中毒等也可因促进糖酵解而增加乳酸含量。此外，肝功能下降导致乳酸摄取减少也会造成血乳酸增加。由此可见，血浆乳酸水平可受许多非循环因素得影响，单纯得“高乳酸血症”并不足以判断外周灌注不足与缺氧。但在上述情况下，乳酸水平一般不会很高，往往<5mmol／L，称为“中度高乳酸血症”。同时由于缓冲系统通常就是正常得，一般不
积液乳酸脱氢酶
积液乳酸脱氢酶 文章目录*一、积液乳酸脱氢酶的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、积液乳酸脱氢酶的 正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、积液乳酸脱氢酶的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、积液乳酸脱氢酶的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、积液乳酸脱氢酶的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应 积液乳酸脱氢酶的基本信息 1、定义乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机 体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是 能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶,几乎存在于所有组织中。同功 酶有五种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、 LDH-4(HM3)及LDH-5(M4),可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性,所以可以根据其组织特异性来协用诊 断疾病。正常人血清中LDH2,〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病。LDH几乎存在于所有 组织中,人体以肾脏食量最高,心肌、骨骼肌、肝、红细胞依次减少。积液中的乳酸脱氢酶较有诊断意义。 2、专科分类呼吸
3、检查分类胸腹水检查 4、适用性别男女均适用 5、是否空腹非空腹 积液乳酸脱氢酶的正常值和临床意义 1、正常值血清 100-300U/L; 尿 560-2050U/L; 脑脊液含量为血清的1/10。 2、临床意义异常结果: 渗出液中LD以化脓性感染积液活性最高,均值可达正常血清的30倍,其次为癌性积液,结核性积液略高于正常血清。炎症或充血性心功能不全胸腔积液时,LD活性可和血清活性相似。癌性胸腔积液LD活性则约为患者自身血清LD活性的3.5倍,而良性积液约为其自身血清LD活性的2.5倍,有助于鉴别诊断。 Light曾提出浆膜腔积液中LD200U/L,积液LD/血清LD比值0.6可作为渗出液的指标。急性心肌梗塞发作后,早期血清中LDH1和LDH2活性均升高,但LDH1增高更早,更明显,导致LDH1/LDH2的比值升高。肝炎、急性肝细胞损伤及骨骼肌损伤时LDH5都会升高。患活动性风湿性心脏病、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血、肾坏死等病LDH1也可升高。
乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase ,LDH）是存在于细胞浆内的一种酶，乳酸脱氢酶在生命体中糖代谢中扮演重要角色。 在我们培养的细胞中乳酸脱氢酶分别存在于以下三个地方： 1、存在于活细胞内。若你培养的是贴壁细胞(viable adherent cells)，那么贴在壁上的就是活细胞，此时的乳酸脱氢酶就存在于细胞内，所以测得贴壁细胞中的乳酸脱氢酶（LDH）活力就代表培养细胞中活细胞的量，我们称之为LDHV。 2、存在于漂浮于培养液中的凋亡小体(Apoptotic bodies)。由于凋亡小体有细胞膜，因此凋亡小体中的乳酸脱氢酶也没有释放到胞外。此时测得凋亡小体中的乳酸脱氢酶（LDH）活力就代表培养细胞中凋亡细胞(apoptotic cell)的量，我们称之为LDHa。 3、存在于培养液中。坏死的细胞(Necrosis)胞膜破裂乳酸脱氢酶释放，分布于培养液中, 此时测得培养液乳酸脱氢酶（LDH）活力就代表培养细胞中坏死细胞(necrotic cell)的量，我们称之为LDHn。 那么我们就可以计算细胞中凋亡或坏死的比率来衡量细胞损伤的程度。 凋亡% = LDHa/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 坏死% = LDHn/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 死亡% = (LDHa +LDHn)/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 其中(LDHa+LDHn+LDHv)代表细胞总LHD。 因为即使我们每次埋板的细胞数相同，但是由于细胞生长受多方面影响，所得的细胞数量也不一样，所以每次测得胞内和胞外乳酸脱氢酶的量都会不一样，所以不能单纯通过测上清中LDH的量或测细胞总LHD来评估细胞受损的程度，而通过上清LDH/总LDH的比率来评估细胞受损程度是比较符合实际。 另附简要操作：吸取细胞培养瓶中液体置离心管中离心，离心后沉淀于管底的是凋亡小体，上清液中的就是坏死细胞的LDH,将凋亡小体和贴附于培养瓶壁上的细胞破膜即可测定凋亡小体和活细胞的LDH.
血清乳酸脱氢酶LDH测定
血清乳酸脱氢酶LDH测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 实验原理 LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH， LDH NADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。 L-乳酸 + NAD+丙酮酸 + NADH + H+ 3 标本： 3.1 病人准备：无特殊。 3.2 类型：血清或EDTA血浆。 3.3 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<2%。 3.4 标本运输：常温条件下保存运输。 3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。 4 实验材料
4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司LDH试剂盒（沪 食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成 氯化钾 190mmol/L 试剂1（R1）乳酸 62.5mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 试剂2（R2）NAD+ 30mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 4.1.2试剂准备试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下， 试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。试剂1 与试剂 2 启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。 4.1.4 变质指示当试剂有看得见的微生物生长，有浊度， 或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 4.1.5 注意事项试剂中含叠氮钠为防腐剂。不可入口！避 免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的LDH校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。 5 仪器 AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤 6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
血乳酸检测的临床意义
乳酸产生于骨胳，肌肉，脑和红细胞。经肝脏代谢后由肾分泌排泄。血乳酸测定可反映组织氧供、代谢状态以及血灌注量。乳酸水平的增高可见于多种临床疾病。 血乳酸检测的临床意义： 1．预测和监控循环衰竭（休克）和中毒。 2．检测组织在动脉氧分压参考范围之内的缺氧情况。 3．评估原因不明的代谢性酸中毒，特别是伴有阴离子间隙升高和昏迷。 4．诊断急性肠血管闭塞。 5．检测分娩中胎儿的危险性。 6．诊断先天性乳酸酸中毒。 7．脑脊液乳酸检测用于鉴别诊断，监控治疗和预测脑和脑膜疾病。 [标本送检要求]肝素抗凝静脉血2ml，必须半小时内（从抽血计时）送检验科。 [收费标准]18元/项，收费编码250302008“乳酸（LAC）测定”。 附：乳酸酸中毒及临床应用 血乳酸升高最常见于乳酸酸中毒，但也可能与呼吸性碱中毒关联，可分为 A型：任何原因引起的严重组织缺氧时发生，包括休克严重哮喘、一氧化碳中毒、心衰、局域性血流灌注不足（组织缺氧）；B型：组织缺氧不明显，但可存在，包括药物（酒精中毒、阿斯匹林、氰化物、双呱类降糖药）和疾病（糖尿病、恶性肿瘤、肝脏疾病、甲基丙二酸血症、糖原酶缺陷、脂肪酸氧化缺陷、脓毒血症）。乳酸测定对指导重症监护患者救治有非常重要的作用，尤其是处理心肌梗塞、心功能不全、血流不足引起的组织缺氧。 正常参考范围12-16mg/dl；>32mg/dl需要救治；>72mg/dl死亡率高；可通过监测乳酸来评估治疗效果，乳酸水平降低说明组织氧供得到改善。 1．开放性心脏手术 通过血乳酸测定对开放性心脏手术后进程进行监测的重要意义已经明确。通常手术后的恢复期，血中乳酸水平仅轻度升高，24小时内降至接近正常水平。若手术后的24小时内/后的血中乳酸结果不符合该模式，就需要进行容量支持、心脏兴奋剂、扩展血管和呼吸支持的治疗。 2．体外膜氧合(ECMO) 由于ECMO（体外循环交换膜式氧合作用）的强迫性与高费用，只有在病人的病情严重情况下才进行。血乳酸的测定作为是否需要进行ECMO的依据，也用来评价ECMO为组织供氧的
乳酸脱氢酶测定标准操作程序
乳酸脱氢酶测定标准操作程序 1.摘要 乳酸脱氢酶常用于心机梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。 2.适用范围 程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清、血浆中LDH的浓度。 3.职责 使用AU5811自动生化分析仪进行测定LDH浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。 4.检测方法 上海科华生物工程股份有限公司生产的乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒采用的是乳酸法。 5.原理 乳酸氧化成丙酮酸（L→P），辅酶Ⅰ（NAD+）还原成还原辅酶Ⅰ（NADH）生成，其反应产生的NADH引起340nm处吸光度的上升，吸光度上升的速率与LDH的活力呈正比关系。 ++ + NADH NAD L LDH丙酮酸 乳酸 -H ?→ + ? + ? 6.仪器 AU5811自动生化分析仪 7.试剂 7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供 7.2试剂瓶内主要成分：Tris-HCl缓冲液、L(+)乳酸锂、MES缓冲液、NADH类似物、防 腐剂 7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为 12个月。试剂不可冰冻。 7.4试剂准备：试剂为即用式。 8.标准品和质量控制 8.1校准程序：此项目只需要用理论因子并做空白校准即可。以9g/L氯化钠溶液或去 离子水为空白。 8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。每日在测定前做
一 次质控，加试剂后做一次质控。该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。 8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。 8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》 8.5室间质评：分别参加河北省临检中心室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。 9.标本 9.1标本为及时分离的空腹血清，肝素、枸橼酸或草酸盐抗凝血浆。不可使用EDTA抗 凝血浆。采集的样本应在1小时内分析。若不能立即测定应及时分离血清，置于具塞试管内冰箱保存。 9.2标本拒收：由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请 单不符状况，一律要求重新留取标本。 9.3标本处理：收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。 10.测定程序 10.1分析参数：详见参数表。 10.2操作步骤：签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。 10.3获取结果：在AU5811仪器上或AU5811传送的中文系统电脑上查找相应结果。 10.4结果报告：对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。可报告的 结果直接发报告，对不可报告结果进行复检后发报告。 11.计算 标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。无需手工计算，每个标本的结果自动打印 12.废液处理 参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。 13.操作性能 13.1可报告范围：本法对LDH检测范围为0-1000 U/L。当样品测定值超过上限时，应将 样品用9 g/L氯化钠溶液作倍比稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。 13.2特异性/干扰：当样品中胆红素浓度≤40mg/L，甘油三酯浓度≤1000mg/dL时对测定
结晶乳酸脱氢酶的提取
实验一 乳酸脱氢酶的提取、纯化及活性测定 一、原理 乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, 简称LDH 、EC 、1、1、1、27）存在于一切有糖酵解作用的细胞 中，最早从牛心肌中分离并获得结晶，后来相继又从兔骨骼肌、鼠肝、猪心及枯草芽胞杆菌等材料中分离 出来。它是可溶性的酶，在NAD +的存在下，催化乳酸脱氢形成丙酮酸或使丙酮酸还原成乳酸，反应如下： 乳酸＋NAD + ??→?LDH 丙酮酸+NADH+H + 丙酮酸+2,3－二硝基苯肼???→?-O H 2丙酮酸―2,4―二硝基苯腙 ↓ 棕红色的苯腙硝醌化合物 因此，乳酸脱氢酶是肌肉糖酵解过程中的一个重要氧化还原酶。 提取和纯化乳酸脱氢酶的基本方法是用磷酸盐缓冲液抽提，用不同饱和度的硫酸铵分级盐析进行分离 等。为了进行乳酸脱氢酶同功酶的研究，在上述基础上还需进一步纯化。一般采用离子交换或分子筛进行 柱层析。 浓的乳酸脱氢酶溶液在3～15℃下可稳定几个月，但是高度稀释的酶溶液是很不稳定的。一般可将结 晶酶置于0.5饱和度硫酸铵溶液中，在低温下保存；或对0.1M ，Ph7.0磷酸盐缓冲液透析后冰冻保存，大 约在2个月内活性不降低。 从牛心肌中分离出来的乳酸脱氢酶分子量为135,000±15,000，具有4个H 型（H 4）亚基。乳酸脱氢酶 是一个重要的同功酶，有一定的器官特异性，它的变化在一定程度上更加敏感地反映器官的功能状态，因 此在临床诊断上有重要意义。该酶对一般的抑制剂有较高的稳定性，但对氯汞苯甲酸可引起酶的完全失活， 而半胱氨酸能使活力恢复。 乳酸脱氢酶具有底物立体专一性，要求L （+）－乳酸作为底物，它与某些来源于细菌的乳酸脱氢酶不 同，那些乳酸脱氢酶可使丙酮酸还原成D 或DL －乳酸。 酶活性的测定：采用2,4-二硝基苯肼比色法测定其总酶活性。以乳酸为底物，经LDH 催化，脱氢生成 丙酮酸，与2,4-二硝基苯肼反应，在碱性条件下，产物呈棕红色，于500nm 波长处比色，测得LDH 酶活性。 二、试剂与器材 试剂： 1．0.05M ，pH7.4磷酸盐缓冲液 2．0.08M ，pH7.0磷酸盐缓冲液 3．0.5M DL-乳酸钠溶液 4．0.002M NAD +溶液 5．0.1M pH10.0甘氨酸－氢氧化钠缓冲液 6．底物溶液：甘氨酸－NaOH 缓冲液2.7ml ，乳酸钠0.15ml ，NAD + 0.15ml 混合溶液。 7．2,4－二硝基苯肼：精确称取2,4－二硝基苯肼19.8mg ，溶于10mol/L 盐酸10ml 中，溶解后再加蒸 馏水至100ml 。 8．0.4M NaOH 溶液。 9．丙酮酸标准液。 10．DEAE-Sephadex-A50树脂。 器材： 1．普通离心机 2．低温高速离心机 3．紫外分光光度计 4．721分光光度计 5．层析柱
血浆乳酸测定意义教学内容
血浆乳酸测定意义
全血乳酸(LA)测定在临床中的应用 急诊科苏中杰 【概况】：乳酸(Lactic acid, LA)是糖无氧氧化(糖酵解)的代谢终产物。主要由葡萄糖通过糖酵解途径在细胞浆中由丙酮酸代谢生成,乳酸/丙酮酸的比例大约为20∶1。乳酸产生于骨胳，肌肉，脑和红细胞。经肝脏代谢后由肾脏分泌排泄。血乳酸测定可反映组织氧供和代谢状态以及灌注量是否不足。另外，肌乳酸的产生量与肌纤维收缩的强度、大小有密切的关系，所以运动后测定乳酸浓度可以对运动强度的大小作出相应的鉴定。乳酸的分子量只有90，是葡萄糖分子量的一半，是一种低分子化合物，从肌细胞中可以较顺利地弥散到血液中。各种不同强度的运动后3—12分钟，血乳酸可达到最高值，耐力运动后即刻血乳酸已经达到最高值。强度越大的，运动后血乳酸达到最高值的时间也越长。血乳酸的最高值是与肌乳酸的最高值成正比。因此，测定血乳酸的浓度也同样可以对运动强度的大小作出相应的鉴定。为此血乳酸测定也用于体育科研中。 乳酸水平的生理性增高可见于剧烈运动所致的肌肉痉挛等，但病理性增高则最常见于乳酸性酸中毒等多种临床疾病，而与呼吸性碱中毒也有关联。 –A型乳酸酸中毒：严重组织缺氧时发生，任何原因引起的组织缺氧将导致A型乳酸酸中毒发生。常见于休克、 严重哮喘、一氧化碳中毒、心衰、局域性血流灌注不足（组织缺氧）。 –B型乳酸酸中毒：组织缺氧存在但并不明显。 §药物引起者有：酒精中毒、阿斯匹林、氰化物、双呱类（糖尿病药物）。 §疾病引起者有：糖尿病、恶性肿瘤、肝脏疾病、甲基丙二酸血症(由于甲基丙 二酸在血中的堆积，导致严重到可引起死亡的代谢性酸中毒 和酮症的一类先天性代谢性疾病)、糖原酶缺陷(影响糖类合 成的酶缺陷)、脂肪酸氧化缺陷(影响脂肪酸分解的疾病)、脓 毒血症。