乳酸脱氢酶测定—速率法(精)
广东医疗服务项目 乳酸脱氢酶同工酶 速率法
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乳酸脱氢酶（LDH）测定-标准操作程序
三级文件标准操作程序第2页共3页生效日期：目的：建立乳酸脱氢酶（LDH）测定标准操作规程。
范围：适用于乳酸脱氢酶（LDH）测定的标准操作。
职责：生化部检验人员对本规程的实施负责。
规程：1 测定方法：乳酸脱氢酶在催化乳酸生成丙酮酸的同时将NAD+还原成NADH。
通过测定NADH在340nm处吸光度增加的速度可求得乳酸脱氢酶的活力。
LDHL-乳酸+ NAD+─────→丙酮酸+ NADH + H+2 仪器设备GS200全自动生化分析仪3 试剂3.1 乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒，包括试剂1（R-1）、试剂2(R-2)。
试剂成份含量R-1 L-乳酸锂≥76mmol/LR-2 NAD+≥31mmol/l3.2 分析用人基质质控血清（RANDOX）、血清3.3 试剂稳定性与贮存乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒在2-8℃避光保存可稳定一年；试剂R-1、R-2开启后在2-8℃避光保存可稳定一个月。
3.4 样本稳定性与贮存3.4.1 分析用人基质质控血清：该血清自生产之日起，在2-8℃下保持可稳定4年；该血清一旦复融，在25℃下可稳定24小时，在2-8℃下可稳定7天，在-20℃可稳定1个月。
3.4.2 待测血清：2-8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月。
样本不可反复冻融。
不可使用已被污染的样本。
4 操作步骤4.1 打开全自动生化仪，按照GS200全自动生化分析仪操作维护保养程序，完成普三级文件准操作程序第3页共3页生效日期：通测试流程。
4.2 检验方法分析方法：速率A；主波长：340nm；副波长：405nm；样品量：8.0ul；R-1：320ul，R-2：80ul；校准方式：K因子；反应方向：上升；测定温度：37℃。
样本与R-1混匀后反应5分钟，加入R-2混合后延迟53秒，测定104秒。
样本8.0ul 主波长340nmR-1 320ul R-2 80ul 副波长405nm测光测光K=81990 5 6 8 min4.3 计算△A/min×Vt×1000ALT（U/L）= ─────────────6.22×Vs×d△A/min = 每分钟吸光度变化率Vt = 反应液总体积（ml）1000 =U/ml到U/L的转换系数 6.22 = NADH的毫摩尔吸光系数Vs = 样本体积（ml） d = 比色杯光径（cm）5 检验结果的解释抗坏血酸≤50mg/dl、游离胆红素≤684umol/L（40mg/dl），结合胆红素≤855umol/L （50mg/dl）、乳糜微粒≤2500浊度单位对测定无影响。
乳酸脱氢酶测定(精)
乳酸脱氢酶测定(2,4-二硝基苯肼法)
实验原理:在PH8.9的环境下,LDH催化乳酸形成丙酮
酸,同时使氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)受氢形成还原型辅酶 Ⅰ(NADH),后者在340nm波长下吸光度的增加与 LDH的活力成正比(速率法).丙酮酸与2,4-二硝基苯肼 在碱性条件下显色,在510纳米波长下测吸光度值.(终 点法) 实验准备: 工作试剂配制:每瓶干粉均用5ML缓冲液溶解,混合均 匀为工作试剂. 4N氢氧化钠用蒸馏水5倍稀释,即4份蒸馏水1份4N氢 氧化钠.
临床意义
在急性心肌梗死后8～18小时乳酸脱氢酶开始升高，
24～72小时达高峰，持续4～16天恢复正常，平均 10天，峰值可高达正常水平的10倍。乳酸脱氢酶同 工酶LDH，，主要存在于心肌中，如LDH1＞LDH2， 则表示有心肌梗死。乳酸脱氢酶及其同工酶检测，对 某些心电图诊断作用不大，而对发病后较迟就医的急 性心肌梗死患者的诊断，有较大的意义。还有，肝脏 疾病、恶性肿瘤液 样品 0.5 标准管 0.5 0.02 样品管 0.5 0.02
混合37℃水浴15分钟，然后各管加显色剂500 μL， 37℃水浴15分钟取 出，各管加稀释氢氧化钠2.0ml,室温放置3分钟510纳米波长测定.
标准值:400U/L 波长510纳米,试剂空白调零,按公式计 算结果. 参考范围:150-350U/L 样本要求：最适样本为当日空腹采集 的无溶血、无乳糜的血清或肝素抗凝 血浆及时测定。
乳酸脱氢酶测定标准操作程序
乳酸脱氢酶测定标准操作程序1.摘要乳酸脱氢酶常用于心机梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
2.适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清、血浆中LDH的浓度。
3.职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定LDH浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒采用的是乳酸法。
5.原理乳酸氧化成丙酮酸（L→P），辅酶Ⅰ（NAD+）还原成还原辅酶Ⅰ（NADH）生成，其反应产生的NADH引起340nm处吸光度的上升，吸光度上升的速率与LDH的活力呈正比关系。
+++NADHNADL LDH丙酮酸乳酸-H−→+−+−6.仪器AU5811自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：Tris-HCl缓冲液、L(+)乳酸锂、MES缓冲液、NADH类似物、防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：此项目只需要用理论因子并做空白校准即可。
以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白。
8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控，加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》8.5室间质评：分别参加河北省临检中心室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
乳酸脱氢酶活力测定(精)
匀浆缓冲液：
10m mol/L pH6.5磷酸氢二钾磷酸二氢钾缓冲液。
操作方法
（一）制备肌肉匀浆 （二）LDH活力测定 （三）蛋白质含量测定 （四）数据处理
（一）制备肌肉匀浆
取瘦猪肉（或兔肉）一块除去脂肪及筋膜等，称取20g， 按W/V=1/4比例加入4℃预冷的10m mol/L pH6.5磷酸氢 二钾-磷酸二氢钾缓冲液，用组织捣碎机捣碎，每次10s， 连续3次。将匀浆液倒至烧杯中，置4℃冰箱提取过夜， 过滤后的红色液体为组织提取液，量总体积。
乳酸脱氢酶活力测定
目的要求
（1）学习LDH活力测定原理； （2）测定动物肌肉组织提取液LDH活力 及比活力。
原理
乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，简称LDH）广泛存在于动物、 植物及微生物细胞内，是糖代谢酵解途径的关键酶之一，可催化 如下反应： LDH 乳酸 +NAD+ 丙酮酸+NADH+H+ pH7.4-7.8
（二）LDH活力测定
实验时预先将丙酮酸溶液及NADH溶液放在25 ℃ 水浴 中预热。取2只光径为1cm的石英比色皿，在一只比色 皿中加入0.1mol/L pH7.5磷酸盐缓冲液3ml，置紫外分 光光度计中，于340nm处调A值为0；另一只比色皿用 于测定LDH活力，依次加入2.9ml丙酮酸溶液、0.1ml NADH溶液，加盖摇匀后测定A340nm，然后加入经稀释 （20倍）的酶液10μl，立即计时，每隔0.5min测A340nm， 连续测定3min。以A对时间作图，取最初线性部分， 计算Δ A340nm/min减少值。
思考题
乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程(SOP)
乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程（SOP）一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中乳酸脱氢酶（LDH）的活性。
二、临床意义（一）概述乳酸脱氢酶（LDH），又称L－乳酸－NAD+氧化还原酶，酶编号为EC 1.1.1.27，分子量约为34000道尔顿。
LDH是一种细胞质酶，存在于所有组织细胞中。
由于组织中的LDH 浓度比血浆高约500倍，即使组织的轻微损伤也将导致血清中活性的明显增高，在肝、心肌、骨骼肌和肾中发现高度组织特异性活性的酶。
（二）临床意义乳酸脱氢酶增高主要见于心肌梗死、肝炎、肺梗死、某些恶性肿瘤、白血病等。
某些肿瘤转移所致的胸腹水中乳酸脱氢酶活力往往升高。
目前，常用于心肌梗死、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
（三）医学决定水平170U／L:此值在参考范围以内，等于或低于此值可排除许多与LDH升高有关的疾病，而考虑其他的诊断。
此值还可作为病人自身的对照，用来与以前或将来的测定值作比较。
300U／L：高于此水平时，应考虑到可能引起LDH升高的各种疾病，如心肌梗塞、肝病变、传染性单核细胞增多症、进行性肌营养不良等。
因此，应作其他各种试验，以作出明确诊断。
血清溶血可使测定值增高，应予以注意。
500U／L：高于此值，常见于巨幼细胞性溶血，急性白血病、慢性粒细胞性白血病、转移癌和肝昏迷等，此时应作其他多种检测来作出正确诊断。
三、检验原理L-乳酸＋NAD+−−LDH丙酮酸＋NADH＋H+−→NADH的生成速率与样品中LDH活性成正比，在340nm波长处，通过连续监测吸光度的上升速率(△A／min)，即可计算出样品中LDH的活性。
四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
乳酸脱氢酶速率法正常值
乳酸脱氢酶速率法正常值1. 乳酸脱氢酶简介说到乳酸脱氢酶，听起来是不是有点像科学怪人发明的东西？其实，这个名字听起来虽然复杂，但它在咱们的身体里可是个大忙人！乳酸脱氢酶，咱们简称为LDH，主要是帮助咱们的细胞处理能量，特别是在运动时。
想想你在健身房挥汗如雨的情景，LDH就在那默默工作，帮助你把葡萄糖转化为能量。
2. LDH的作用和正常值2.1 LDH的作用你可能会问，LDH究竟是干嘛的呢？简单来说，当咱们的身体在大运动量时，比如跑步、打球，或者你在追公交时，身体的氧气供给会跟不上，乳酸就开始在体内积累。
这时，LDH就像是个小超人，帮你把乳酸转化成其他更容易处理的物质。
没有它，咱们就得忍受肌肉酸痛，简直比打了个大架还难受！2.2 正常值那么，乳酸脱氢酶的正常值又是多少呢？一般来说，正常范围大约是在120到250 U/L之间。
这个U/L可不是外星人用的单位，而是“单位每升”的意思。
要是你的LDH水平在这个范围内，那恭喜你，身体运转得挺不错的！但如果数值超出了这个范围，就要多加留意了，可能有些小问题在等着你。
3. LDH升高的原因3.1 可能的健康问题虽然LDH听起来很神奇，但它也可能是一些健康问题的信号。
比如说，肝脏、心脏或者肌肉出现了问题，LDH水平可能会飙升。
像那种感觉你在吃火锅的时候，突然发现自己加了太多辣椒，火辣辣的，那种惊悚感！这时候，医生可能会建议你做进一步检查，看看究竟是怎么回事。
3.2 生活中的影响你生活中遇到LDH升高的情况，也许会感到紧张，但别太过担心。
很多时候，可能只是因为你最近健身太拼，或者熬夜太多。
咱们的身体就像一台精密的机器，得好好保养才能运行顺畅。
多吃点营养的食物，保持充足的睡眠，这样LDH就会乖乖回到正常值了。
4. 如何保持LDH水平正常4.1 饮食调理要想LDH水平稳定，饮食可不能忽视。
多吃些新鲜水果和蔬菜，比如香蕉、菠菜，这些都是帮助调节身体机能的好帮手。
而且，少吃油腻食物，像是炸鸡、薯条，虽然好吃，但对身体可没啥好处，特别是LDH这个小家伙。
乳酸脱氢酶活力测定(精)
试剂与器材
材料：
动物的肌肉、肝、心、肾等 组织。
酶活力测定试剂：
（1）0.1mol/L pH7.5 磷酸缓 冲液 (PB)100ml； （2）NADH溶液：3.5mg纯 NADH以0.1mol/L pH7.5 PB 1ml稀释。 （3）丙酮酸溶液：2.5mg丙 酮酸钠，以以0.1mol/L pH7.5 PB 29ml稀释。 试剂（2）（3）最好在临用 前配制。
思考题
简述用紫外分光光度计测定以NAD+为辅 酶的各种脱氢酶测定原理。
提取液中LDH总活力单位= LDH活力（U）/ml ×总体积
LDH比活力
总LDH活力（U） 比活力（U/mg）=———————————— 总蛋白含量（mg）
注意事项
1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即用，应贮存在20℃ 低温冰箱中。
2、酶液的稀释度及加入量应控制A340/nm下降在0.1-0.2之 间，以减少实验误差，加入酶液后应立即计时，准确 记录每隔0.5min A340下降值。 3、NADH溶液应在临用前配制，如其纯度为75%，则应 折合到100%，增加试剂的称量。加酶液前NADH A340 控制在0.8左右。
LDH可溶于水或稀盐溶液，可制备组织匀浆，经浸泡、离心，得上 清为组织提取液。LDH测定方法很多，紫外分光光度法最为简便快 速。鉴于NADH和NAD+在340nm和260nm处有各自最大吸收峰值， 因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过340nm光吸收值的改变， 定量测定酶的含量。 本实验反应液中含丙酮酸及NADH，在一定条件下加入一定量酶液， 观察NADH在反应过程中340nm处光吸收减少值，减少越多，则 LDH活力越高。其活力单位定义为：在25 ℃ ，pH7.5条件下 A340nm/min下降为1.0的酶量为1个单位。可定量测定每克湿重组织中 LDH单位，定量测定蛋白质含量即可计算比活力（U/mg）。
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参考范围:104-205U/L 式中6 220为波长340nm处NADH的摩尔 吸光度。
方法评价
1.L-P反应速率法是根据正向反应而建立，其优点在
于：乳酸盐和底物溶液的稳定性较好，－20℃保存 可稳定6个月以上。且两溶液的浓度对测定方法的 影响最小。 2.线性范围较宽 本法在LDH活性为726U/L以内时 线性良好。超过此值最好将标本稀释后再测。 3.精密度好 LDH活性为65U/L时，日间CV为5.8%； LDH活性为149U/L时，日间CV为3.2%。 4.特异性高 由于血清中非LDH的NAD＋类氧化还原 酶的内源性底物很少，加上样本的高度稀释，因此， 这些酶的干扰作用可忽略不计。
LDH pH 8.8 L 乳酸 NAD 丙酮酸 NADH H
实验操作
样本要求:当日空腹采集的无溶血、无乳糜的
血清 试剂配制：取R15ml加R21ml混合即为工作试 剂 半自动生化分析仪测定参数
半自动生化分析仪测定参数
分 析 方 法 速 率 法 速 率 法 波长 温 度 试 剂 空 白 延 迟 时 间 30s 测 量 时 间 45s 因数 样 品 量 uL 试 剂 量 uL 吸 入 量 uL 500 单 位 反 应 方 向 正
乳酸脱氢酶测定—速率法
xiaobinxuer@
实验目的
熟悉血清乳酸脱氢酶测定（速率法）的原理，
测定参数的设置及酶活性单位的计算
实验原理
乳酸脱氢酶催化乳酸氧化生成丙酮酸，同时
使NAD＋还原为NADH，引起340nm处吸光 度的增加，吸光度的增加速率与样品中LDH 活性成正比。