乳酸脱氢酶测定标准操作程序
20血清乳酸脱氢酶测定
一、目的乳酸脱氢酶（LDH，LD）属于糖酵解酶，广泛存在于各种组织细胞的胞质中，以心肌、骨骼肌、肾脏含量最为丰富，其次肝、脾、胰、肺等，肿瘤组织，血液中均可检出。
红细胞内LDH含量较血清中高一百至数百倍，正常人血清中LDH主要来自红细胞，肝和骨骼肌。
二、测定方法连续监测法三、原理L—乳酸+NAD+ LDH丙酮酸+NADH+H+四．标本1.静脉抽取病人空腹血，臵于洁净干燥试管或含促凝剂的真空管内。
2.采血后应立即送到检验科生化室。
3.样品收到后立即分离血清，不能及时测定的血清应于2-80C保存。
4．严重溶血或脂血的标本不能测定。
五．设备及试剂1．希迈全自动生化仪。
2．上海复星长征公司乳酸脱氢酶试剂。
3．乳酸脱氢酶试剂应贮存于2—8℃冰箱。
六．操作步骤1．样本的准备：将编好号的样品离心，取血清加入样品杯放到样品盘的规定位臵，再把样品盘放到仪器中相应位臵。
2．试剂的检查：每天测定前先检查各种试剂的数量、效期、定标等情况，确认无误后方可进行测定。
3．操作方法：详见希迈生化仪操作手册。
七．质量控制每天操作过程中应使用上海复星长征公司的生化质控血清至少做一次室内质控，每年定期参加海南省临检中心所组织的室间质评。
八、干扰因素1、正常情况下，新生儿LDH含量最高，约为成人的两倍，随年龄增长逐渐降低至14岁时趋于稳定。
2、红细胞内LDH为正常血清的100多倍，故溶血标本不宜送检。
3、草酸盐可抑制LDH的活性，故不能用此抗凝剂的血浆测LDH。
4、LDH系细胞内酶，任何引起细胞膜通透性改变的情况（如剧烈运动、引组织缺氧等）均可使LDH在血中活性增高。
九、参考区间100 — 245 U/L十、实验室解释乳酸脱氢酶增高主要见于心肌梗塞、肝炎、肺梗塞、某些恶性肿瘤、白血病等。
某些肿瘤转移所致的胸腹水中乳酸脱氢酶活性往往升高。
目前，常用于心肌梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
十一、异常结果处理实验结果应与临床诊断相符，结果偏高的可用生理盐水稀释后重新测定。
乳酸脱氢酶（LDH）测定-标准操作程序
三级文件标准操作程序第2页共3页生效日期：目的：建立乳酸脱氢酶（LDH）测定标准操作规程。
范围：适用于乳酸脱氢酶（LDH）测定的标准操作。
职责：生化部检验人员对本规程的实施负责。
规程：1 测定方法：乳酸脱氢酶在催化乳酸生成丙酮酸的同时将NAD+还原成NADH。
通过测定NADH在340nm处吸光度增加的速度可求得乳酸脱氢酶的活力。
LDHL-乳酸+ NAD+─────→丙酮酸+ NADH + H+2 仪器设备GS200全自动生化分析仪3 试剂3.1 乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒，包括试剂1（R-1）、试剂2(R-2)。
试剂成份含量R-1 L-乳酸锂≥76mmol/LR-2 NAD+≥31mmol/l3.2 分析用人基质质控血清（RANDOX）、血清3.3 试剂稳定性与贮存乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒在2-8℃避光保存可稳定一年；试剂R-1、R-2开启后在2-8℃避光保存可稳定一个月。
3.4 样本稳定性与贮存3.4.1 分析用人基质质控血清：该血清自生产之日起，在2-8℃下保持可稳定4年；该血清一旦复融，在25℃下可稳定24小时，在2-8℃下可稳定7天，在-20℃可稳定1个月。
3.4.2 待测血清：2-8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月。
样本不可反复冻融。
不可使用已被污染的样本。
4 操作步骤4.1 打开全自动生化仪，按照GS200全自动生化分析仪操作维护保养程序，完成普三级文件准操作程序第3页共3页生效日期：通测试流程。
4.2 检验方法分析方法：速率A；主波长：340nm；副波长：405nm；样品量：8.0ul；R-1：320ul，R-2：80ul；校准方式：K因子；反应方向：上升；测定温度：37℃。
样本与R-1混匀后反应5分钟，加入R-2混合后延迟53秒，测定104秒。
样本8.0ul 主波长340nmR-1 320ul R-2 80ul 副波长405nm测光测光K=81990 5 6 8 min4.3 计算△A/min×Vt×1000ALT（U/L）= ─────────────6.22×Vs×d△A/min = 每分钟吸光度变化率Vt = 反应液总体积（ml）1000 =U/ml到U/L的转换系数 6.22 = NADH的毫摩尔吸光系数Vs = 样本体积（ml） d = 比色杯光径（cm）5 检验结果的解释抗坏血酸≤50mg/dl、游离胆红素≤684umol/L（40mg/dl），结合胆红素≤855umol/L （50mg/dl）、乳糜微粒≤2500浊度单位对测定无影响。
血清乳酸脱氢酶LDH速率法测定作业指导书
血清乳酸脱氢酶LDH速率法测定作业指导书1. 实验原理VITROS LDH试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
本法测LDH 采用丙酮酸和NADH作底物以产生乳酸和NAD+。
将一滴10ul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+。
用反射强度变化测出NADH的氧化率，再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。
测定方式：速率法波长：340nm测试时间和温度：37℃约5分钟反应过程：LDH丙酮酸+ NADH + H+———————→乳酸+ NAD2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。
2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3 标本采集与处理：Vitros测试血清和血浆的结果是一致的。
而其它一些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染，会使血清和血浆的测试结果有明显差异。
由于Vitros LDH干片对完整血小板内的LDH不敏感，因此对比方法的LDH结果会与Vitros肝素抗凝血浆的测试结果不一致。
样品采集后1小时内离心，然后吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多2天；不可冷冻保存。
4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5. 标本拒收的标准：污染、溶血标本不能使用。
6. 试验材料：6.1 测试AST所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit3；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。
强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.1 试剂组成：干片成分：反应成份是NADH和丙酮酸钠。
其它成份有聚合物颗粒，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。
干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.2 试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18～28℃。
血清乳酸脱氢酶测定
(1)正常LDHl、LDH2见于心肌损伤，如心肌梗塞、心脏手术、心脏移 植排异、充血性心衰、心肌炎。心梗病人出现症状后12一18小时血 清LDH升高，约在第3天达到高峰，7一18天才恢复正常。故对诊断发 病后数天才就医的病人特别有价值。LDHl>LDH2还见于肾梗塞、肾病， 巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、恶性贫血。 (2)恶性肿瘤以LDH3增高为主，LDH3明显大于LDHl，总LDH越高预后 越差。LDH2和LDH3增高见于肺癌、粒细胞白血病，LDH3和LDH4增高 见于淋巴瘤、胶原病和止血紊乱 (血小板增多症、凝血活酶释放)。 (3) LDH5增高见于骨骼肌损伤和肝胆疾病，如杜氏肌营养不良、横 纹肌溶解症、肌肉外伤，LDH5>LDH4见于肝损伤 (肝炎、肝硬化、肝 癌、心衰、肝淤血)，阻塞性黄疸时LDH 4与LDH5均增高，但以LDH4 最为明显。
0-5 30-8 40-97
5.7±2.9
（ 占总 LDH活性的百分比）
a
2
1
2
b
3 1 4 酶活性 5 酶活性 3 4 5
迁移位置 (a)
迁移位置
LDH同工酶电泳图谱
(b)
（a）正常人LDH同工酶电泳图谱 （b）心肌梗塞病人血清LDH同工酶电泳图谱
*生理及临床意义
在代谢调节上起 着重要的作用； 酶 用于解释发育过 活 程中阶段特有的代谢 性 特征； 同工酶谱的改变 有助于对疾病的诊断； 同工酶可以作为 遗传标志，用于遗传 分析研究。
乳酸脱氢酶的同工酶
人体心、肝和骨骼肌LDH同工酶谱
组织器官
心 肝 骨骼肌 正常血清
LDH1
35-70 0-8 1-10
27.1±2.8
LDH2
28-45 2-10 4-18 34.7±4.3
医院检验科血清乳酸脱氢酶(LDH)速率法测定 血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定方法
血清乳酸脱氢酶（1.DH）速率法测定1.实验原理VITROS1.DH试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。
本法测1.DH采用丙酮酸和NADH作底物以产生乳酸和NAD+0将一滴IOul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。
乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+。
用反射强度变化测出NADH的氧化率，再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。
测定方式：速率法波长：340nm测试时间和温度：37℃约5分钟反应过程：1.DH丙酮酸+NADH÷H+ --------------------------- 乳酸+NAD2.标本：2.1病人准备：无特殊。
2.2样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。
2.3标本采集与处理：Vitros测试血清和血浆的结果是一致的。
而其它一些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染，会使血清和血浆的测试结果有明显差异。
由于Vitros1.DH干片对完整血小板内的1.DH不敏感，因此对比方法的1.DH结果会与Vitros肝素抗凝血浆的测试结果不一致。
样品采集后1小时内离心，然后吸出血清。
处理样品时要将其当成生物污染品。
3.标本的存放：血清、血浆室温下最多2天；不可冷冻保存。
4.标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
5.标本拒收的标准：污染、溶血标本不能使用。
6.试验材料：6.1测试AST所需的物品包括：VitroS化学定标物Kit3；VitrOS特制质控液；Vitros7(⅛BSA稀释液。
强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.1试剂组成：干片成分：反应成份是NADH和丙酮酸钠。
其它成份有聚合物颗粒，粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，聚合物交叉连接剂和稳定剂。
干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。
6.1.2试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18~28℃。
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明乳酸脱氢酶（LDH）法操作说明操作简介：乳酸脱氢酶（LDH）法是一种常用的生物化学分析方法。
本文将详细介绍使用乳酸脱氢酶法进行实验操作的步骤。
材料准备：1. 乳酸脱氢酶试剂盒2. 样品溶液3. 乳酸标准品4. 实验用试管和显微管操作步骤：1. 样品制备- 将待测样品装入实验用试管中。
每个样品应分别装入不同的试管，以避免交叉污染。
- 若样品过浓稀，需要进行适当的稀释，确保样品浓度在测试范围内。
2. 标准曲线制备- 准备不同浓度的乳酸标准品溶液，浓度范围可根据实验要求而定。
- 将不同浓度的标准品溶液分别装入实验用试管中。
3. 试剂添加- 分别向样品管和标准品管中加入相同体积的乳酸脱氢酶试剂，充分混匀。
4. 反应温育- 将所有试管置于恒温水浴中，温度设定为适合乳酸脱氢酶反应的温度（一般为37°C）。
- 在设定的反应温度下，将试管保持在水浴中反应一段时间（时间根据实验要求而定）。
5. 反应终止- 在反应时间结束后，以适当的方法终止反应。
常见的终止方式是添加酸性试剂或采用其他合适的方法。
6. 测定乳酸脱氢酶活性- 使用光度计、分光光度计或其他合适的仪器，测定样品和标准品反应后产生的光吸收值。
吸收值与乳酸脱氢酶活性成正比。
- 通过标准曲线，将样品的吸收值转化为对应的乳酸脱氢酶活性。
注意事项：1. 本实验操作需要严格按照实验室安全操作规范进行，避免任何可能导致个人受伤或污染的行为。
2. 实验过程中的试剂、标样和废液等应按照实验室规定的方法处理，不得随意丢弃。
3. 在操作过程中，保持实验器材和试剂的洁净，尽量避免外界因素对实验结果的影响。
4. 操作时需注意避免交叉污染，尤其是样品的装管和试剂的配比过程。
5. 样品和标准品的选择要合适，浓度范围应覆盖实验要求。
6. 温育过程中，确保试管能均匀受热，并避免发生温度不稳定的情况。
总结：乳酸脱氢酶（LDH）法是一种可靠的生物化学分析方法，适用于乳酸脱氢酶活性的测定。
血清乳酸脱氢酶同工酶测定
血清乳酸脱氢酶同工酶测定（醋酸纤维素薄膜电泳法）[原理]先将血清在醋酸纤维素薄膜进行电泳使乳酸脱氢酶的同工酶分离，然后在薄膜上进行酶反应，显色试剂中包括有底物（乳酸）、NAD+、吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）和碘硝基四唑蓝（INT），NAD+和PMS起递氢作用，INT最后接受氢被还原生成紫色的甲臜类化合物。
其反应如下：LD乳酸+NAD+丙酮酸+NADH2NADH2+PMS NAD++PMSH2PMSH2 +INT PMS+INTH2[试剂]1．PH8.6巴比妥缓冲液（离子强度0.05）：称取巴比妥钠10.3g，巴比妥1.84g，溶于热的蒸馏水中，冷后加蒸馏水至1L。
2．0.1mol/LpH7.5磷酸缓冲液：称取磷酸二氢钾2.16g，磷酸氢二钠（Na2 HPO4.2H2O）30.13g, 溶于蒸馏水中，并稀释至1L。
3．0.5mol/L乳酸钠溶液：吸取60%DL—乳酸钠溶液9.25ml,加蒸馏水至100ml。
4．显色试剂：临用前配制下列试剂：（1）1mg/ml吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）水溶液；（2）辅酶Ⅰ（NAD+）10mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液1ml；（3）碘硝基四唑蓝[氯化2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-苯基四唑]（INT）12mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液3ml中；（4）0.5 mol/L乳酸钠溶液1ml。
其中（2）、（3）、（4）混合后为甲液，（1）为乙液；用时以甲液∶乙液=20∶1混合。
应用前，将上述溶液充分混和；但PMS水溶液加入量为0.2ml，且应待其他三种溶液混和后再加。
4．洗脱液：正丙醇9份与二甲亚砜1份混匀即可。
2 5． 2%醋酸：2ml 醋酸加水至100ml 。
[主要仪器]1. 恒温水浴箱2. 电泳仪和电泳槽3. 醋酸纤维素薄膜4. 载玻片5. 镊子6. 培养皿[操作步骤]1. 取8×2cm 薄膜一条，于无光泽面的一端2cm 处轻轻用铅笔画一直线（点样线），并在另一端上写上姓名，注明正极。
乳酸脱氢酶测定方法
乳酸脱氢酶测定方法>我们知道，现实生活中存在着各样各样的的酶，这些酶可以单独作用，也可以相互作用，对我们的人体产生很大的影响，但是相信大家对于酶的测定方法还不是很熟悉吧，不相同酶的测定有不相同的方式方法，而且方式方法也种类不一，现此刻乳酸脱氢酶测定方法成为很多人研究的领域话题，那么终究该如何测定呢，下面就让我们一起来了解一下乳酸脱氢酶测定方法吧。
方法：实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量防备起泡。
每次检测都应该做标准曲线。
如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品吻合试剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品 100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不波及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应 120 分钟。
为保证明验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用冲洗。
每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl 生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比率配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃，60 分钟。
3. 温育 60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡1-2 分钟， 350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液）100μl，37℃， 60 分钟。
5. 温育 60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，每次浸泡 1-2 分钟，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（ 30 分钟内，此时肉眼可见标准品的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色，后3-4 孔梯度不明显，即可终止）。
7. 依序每孔加停止溶液50μl，停止反应（此时蓝色立转黄色）。
停止液的加入序次应尽量与底物液的加入序次相同。
为了保证明验结果的正确性，底物反应时间到后应赶快加入停止液。
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乳酸脱氢酶测定标准操作程序
1.摘要
乳酸脱氢酶常用于心机梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
2.适用范围
程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清、血浆中LDH的浓度。
3.职责
使用AU5811自动生化分析仪进行测定LDH浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法
上海科华生物工程股份有限公司生产的乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒采用的是乳酸法。
5.原理
乳酸氧化成丙酮酸（L→P），辅酶Ⅰ（NAD+）还原成还原辅酶Ⅰ（NADH）生成，其反应产生的NADH引起340nm处吸光度的上升，吸光度上升的速率与LDH的活力呈正比关系。
++
+
NADH
NAD
L LDH丙酮酸
乳酸
-H
−→
+
−
+
−
6.仪器
AU5811自动生化分析仪
7.试剂
7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供
7.2试剂瓶内主要成分：Tris-HCl缓冲液、L(+)乳酸锂、MES缓冲液、NADH类似物、防
腐剂
7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为
12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制
8.1校准程序：此项目只需要用理论因子并做空白校准即可。
以9g/L氯化钠溶液或去
离子水为空白。
8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做
一
次质控，加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》
8.5室间质评：分别参加河北省临检中心室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
9.标本
9.1标本为及时分离的空腹血清，肝素、枸橼酸或草酸盐抗凝血浆。
不可使用EDTA抗
凝血浆。
采集的样本应在1小时内分析。
若不能立即测定应及时分离血清，置于具塞试管内冰箱保存。
9.2标本拒收：由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请
单不符状况，一律要求重新留取标本。
9.3标本处理：收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。
10.测定程序
10.1分析参数：详见参数表。
10.2操作步骤：签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。
10.3获取结果：在AU5811仪器上或AU5811传送的中文系统电脑上查找相应结果。
10.4结果报告：对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。
可报告的
结果直接发报告，对不可报告结果进行复检后发报告。
11.计算
标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。
无需手工计算，每个标本的结果自动打印
12.废液处理
参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。
13.操作性能
13.1可报告范围：本法对LDH检测范围为0-1000 U/L。
当样品测定值超过上限时，应将
样品用9 g/L氯化钠溶液作倍比稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。
13.2特异性/干扰：当样品中胆红素浓度≤40mg/L，甘油三酯浓度≤1000mg/dL时对测定
结果的影响可忽略。
13.3灵敏度：本试剂的检测限为15U/L。
13.4精密度:重复性CV%≤5% 批间差≤10%
14.注意事项
14.1试剂盒仅用于体外诊断。
测定结果仅作为相关疾病的临床诊断依据。
14.2使用试剂时请根据实际使用量多少，将试剂倒入干净容器再测定，其余试剂盖紧后
放回冰箱。
如试剂变混浊或空白吸光度值＜1.0A请勿使用。
14.3清等标本有些可能含有感染性成份，因此应以具有感染危险性而充分注意操作。
14.4试剂盒中含有防腐剂叠氮钠，切勿吞咽，避免与皮肤及粘膜接触。
如不慎接触，应
用大量清水冲洗。
如误服，应立即上医院诊治。
15.参考值
健康成年人：109-245U/L。
如果结果做为诊断指标应结合病史及其它临床检查结果。
16.临床意义
乳酸脱氢酶增高主要见于心机梗塞、肝炎、肺梗塞、某些恶性肿瘤、白血病等。
某些肿瘤转移所致的胸腹水中的乳酸脱氢酶活力往往升高。
目前，常用于心机梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
17.支持性文件
17.1AU5811自动生化分析仪使用说明书。
17.2 AU5811自动生化分析仪分析参数。
17.3上海科华生物工程股份有限公司提供的试剂说明书。
18.参考文献
18.1《全国临床检验操作规程》第三版，叶应妩等，2006
18.2Wroblewski, F & Ledne, J.S.,Proc. Soc. Exp. Biol. Med.,96,210(1955).
18.3Amador. E. Dorfman, L. E. and Acker,W. E.C.,Clin. Chem.,9,391(1963).
18.4Henry,R. J.,Chiamori,N. Golub, O.J.and Berkman, S., Am. J. Clin. Path.,34,381(1963)。