乳酸脱氢酶细胞毒性检测
乳酸脱氢酶360
乳酸脱氢酶360乳酸脱氢酶360（LactateDehydrogenase360,称LDH360）是一种专用于检测人体血液中乳酸脱氢酶的高灵敏检测试剂盒。
乳酸脱氢酶是一种多功能酶，可以在血液、组织和机体细胞中发挥多种作用。
它可以在体内合成或分解乳酸，参与细胞的建筑料的交换，还可以保护机体免受环境因素的破坏，对抗机体内毒素的毒性作用，参与血液循环中的氧气运输，以及调节细胞内磷酸脱氢这项重要反应。
LDH 360能够实现较高水平的检测灵敏度和准确性，为临床用户提供更加精确的诊断结果。
LDH 360基于四种不同活性的乳酸脱氢酶，即乳酸脱氢酶（LDH1）、脱氢葡萄糖醛酸酶（LDH2）、脱氢葡萄糖醛酸脱氢酶（LDH3）和脱氢羟肟醛酸脱氢酶（LDH4），以有效提升LDH 360的检测准确度。
LDH 360的原理是通过检测血液中的乳酸脱氢酶活性的变化，从而诊断患者的疾病情况，预测疾病的发展趋势。
乳酸脱氢酶是指在体内进行乳酸分解反应的酶，乳酸脱氢酶的活性可明显受到疾病的影响。
正常患者的乳酸脱氢酶活性一般都较低，但进行中某些疾病，活性会显著升高，比如肝病、心肌炎、糖尿病或肿瘤等。
因此，通过测定乳酸脱氢酶活性，就可以预测疾病的发生和发展情况。
LDH 360可以检测血液中的乳酸脱氢酶活性和血清中的乳酸脱氢酶含量，是一种高效，快速，精准的检测方法。
LDH 360括3个重要部分：一是LDH检测液，二是检测试剂盒，三是检测分析仪。
检测液由LDH 1、LDH 2、LDH 3和LDH 4组成，LDH1、LDH2、LDH3和LDH4检测试剂盒中包含各种抗体，可以检测样本中各个LDH基因的含量。
检测分析仪则可以用来测定检测试剂盒中抗体的反应结果，也可以读取血液中乳酸脱氢酶的活性水平，最终测定出患者的乳酸脱氢酶含量，以及预测疾病的发展趋势。
LDH 360的优势在于可以非常有效地检测血液中的乳酸脱氢酶活性，以更快的速度和更准确的诊断结果为临床用户提供服务。
两种膨润土细胞毒性的体外试验研究
Ｍｅｉ—ｂｉａｎ，ＬＩ Ｘｉａｏ－ｘｕｅ。ＹＡＮ Ｓｏｎｇ－ｘｕｅ，ＣＨＥＮ
ｏｆ
Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。Ｍｅｄｉｃｄ
Ｓｃｈｏｏｌ，ｚ呐咄Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｕｇｚｈｏｕ，ｇ，ｅｊｉｏａｇ
ｈ。
结果所有剂量２种膨润土的溶血率均明显高于对照组，差异有统计学意义（尸℃Ｏ．０５）。ＣＣＫ．８试验结 果表明，酸性土和有机土剂量分别≥３０、２０斗ｓ／ｍｉ时，细胞活性明显低于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜
０．０１）；ＮＲＵ试验和ＬＤＨ试验出现类似结果，并均呈剂量—效应关系。１８０脚ｒ／ｍＪ酸性土组与１２０、１８０¨固伽 有机土组的早期细胞凋亡率明显高于对照组，差异有统计学意义（Ｐ如．０５）。５个体外试验的结果均表
ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｗｏ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｂｅｎｔｏｎｉｔｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ．
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
Ｍｉｎｅｒａｌｓ；Ｂｅｎｔｏｎｉｔｅ；Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ；Ｉｎ ｖｉｔｒｏ
膨润土是一种广泛用于铸造、建筑、环境工程
（ＩＡＲＣ）列为对人致癌１３１。但是，至今膨润土细胞毒性 研究报道不多。最近Ｇｅｈ等１４１发现，膨润土可诱发细 胞凋亡及坏死，且具有潜在诱发细胞膜破裂的能 力。此外，不同膨润土对细胞的损伤作用可能不同阳。
等领域的非金属矿物质，我国是开采大国，浙江是
主要产地。已知膨润土不但可诱发尘肺【ｌ－２１，而且膨 润土成分之一晶体硅已被国际癌症研究中心
乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒一站式解决方案
乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒一站式解决方案乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LD 或LDH ，EC1.1.1.27 ）是一类NAD依赖性激酶，有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基，可构成6种四聚体同工酶。
动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体，常见的A、B 两种亚基构成的5种LDH同工酶（LDH1-5），C亚基则仅组成一种LDH同工酶即LDH-C4。
乳酸脱氢酶为含锌离子的金属蛋白，分子量为135-140kD，是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。
LDH广泛存在于人体组织中，以肾脏含量最高，其次是心肌和骨肌。
红细胞内LDH约为正常血清的100倍。
一、乳酸脱氢酶分类1.根据结合辅酶的不同，微生物体一般包含两种乳酸脱氢酶，NAD-依赖型乳酸脱氢酶（NAD-dependent lactate dehydrogenases，nLDHs）和NAD-非依赖型乳酸脱氢酶（NAD-independent lactate dehydrogenases，iLDHs）两大类。
2.按其催化底物的构型不同，NAD-依赖型乳酸脱氢酶可以分为NAD依赖型-L-乳酸脱氢酶（L-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）和NAD依赖型-D-乳酸脱氢酶（D-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）两大类，分别催化丙酮酸合成L-乳酸和D-乳酸。
3.根据天然电子受体的不同，可以将NAD-非依赖型乳酸脱氢酶分为三类。
第一类为膜蛋白，利用膜醌类作为外部的电子受体；第二类直接利用O2作为电子受体，根据氧化终产物的不同，又将其细分为乳酸氧化酶（Lactate oxidase，LOX）和乳酸单氧酶（Lactate monooxygenases，LMO），其中前者产生丙酮酸和H2O2，而后者产生乙酸、CO2和H2O；第三类是硫胺b2（flavocytochrome b2），存在于真菌中，它天然的电子受体为细胞色素c。
ldh法和mtt法
ldh法和mtt法一、介绍在细胞实验研究中，细胞增殖和生长的检测是必不可少的。
而常用的细胞增殖和生长检测方法有许多种，其中较为常见的是LDH法和MTT法。
这两种方法都是通过细胞的代谢和细胞的状态来反映细胞的增殖和生长情况的。
二、LDH法LDH法全称为乳酸脱氢酶检测法，是利用乳酸脱氢酶的氧化还原作用来检测细胞增殖和生长的方法。
该方法基于细胞膜通透性的变化，当细胞膜发生损伤或破裂时，细胞内的乳酸脱氢酶会释放到培养基中。
而乳酸脱氢酶检测法就是通过检测培养基中乳酸脱氢酶含量的变化来判断细胞是否发生了损伤或破裂，以此来推测细胞的增殖和生长情况。
三、MTT法MTT法全称为四氮唑盐（3-（4,5-二甲基-2-噻唑）-2,5-二苯基-二氮杂烷）法，是利用MTT盐的还原作用来检测细胞增殖和生长的方法。
该方法的原理是将MTT盐加入细胞培养液中，MTT盐通过细胞中的酶反应还原成具有紫色的甲醛样代谢产物。
而这个代谢产物则会在细胞中不断积累，从而使细胞颜色越来越深。
最后，通过检测细胞的颜色深浅来推测细胞的增殖和生长情况。
四、LDH法和MTT法的比较1.优点与缺点LDH法的优点是可以反映细胞的状态和增殖情况，适用于不同种类的细胞；缺点是需要时间较长，对细胞损伤有一定影响。
而MTT法的优点是简单易行，可作为高通量筛选的快速方法；缺点则是对细胞形态和生长状态的要求较高，对于一些较小或幼稚的细胞不适用。
2.应用范围LDH法和MTT法都常用于评估各种细胞因素（如生长因子、激素、细胞毒性物质等）对细胞生长的影响；同时也受到在细胞增殖实验和细胞毒性实验中的广泛应用。
此外，LDH法和MTT法也可应用于肿瘤和炎症等疾病的研究。
3.实验难度和操作技巧LDH法和MTT法均需要一定的实验基础和耐心，但LDH法一般操作难度稍高些。
五、总结细胞增殖和生长检测方法是细胞实验研究中非常重要的组成部分。
LDH法和MTT法是两种常用的检测方法，不仅能反映细胞的增殖和生长情况，也广泛应用于肿瘤和炎症等疾病的研究。
细胞膜毒性检测方法概括
首先，可进行细胞的毒性检测，通过台盼蓝拒染法检测细胞存活率变化，MTT或WST法检测细胞的活力。
其次，细胞功能的正常有赖于膜结构的完整及膜特性的保持，所以通过以下方法检测某种物质对细胞膜的毒性1.细胞膜通透性的变化：乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）广泛存在于生物细胞内，是活细胞胞浆内含酶之一，在正常情况下，不能透过细胞膜。
当细胞受损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可泄漏至细胞外介质中。
泄漏出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I 变成还原型辅酶I，通过测定NADH在340 nm处吸光度增加的速度可求得乳酸脱氢酶的活力，从而得到细胞膜是否损伤的结果。
国外有通过试剂盒检测腺苷酸激酶的释放以及通过共聚焦激光扫描显微镜检测碘化丙啶的吸收量。
检测膜胆固醇采用邻苯二甲醛比色法。
测定波长为510 nm，按照试剂盒说明检测。
2.可通过透射电镜观察细胞膜结构及以PI为荧光染料检测核膜完整性，现在更有利用原子力学显微镜（AFM）观察细胞的形态结构及比较细胞表面粘弹力的变化，比较药物对细胞膜作用前后的膜表面结构变化。
利用AFM的力曲线得到能表明机械性能参数的粘弹力来分析比较未作用药和作用药后的细胞，一般，作用药组细胞其弹性小于未作用药细胞。
3.细胞膜表面整合素的变化：整合素是一类广泛存在于细胞表面的糖蛋白，由α和β两个亚基以非共价键连接的异二聚体，目前发现由19种α亚基和8种β亚基以不同方式组合形成24种整合素亚型。
用流式细胞仪检测细胞表面整合素(integrinpl)的表达(平均荧光强度）4.Western blot检测细胞骨架蛋白F-actin和Tubulin-β细胞骨架是由蛋白质纤维构成的胞内网络，相当于细胞的骨骼，支持着整个细胞，它紧贴在细胞膜下，赋予细胞一定的形状,对细胞及细胞器的运动也起着至关重要的作用。
应用流式细胞仪检测细胞内F-actin和tubulin-β蛋白表达的情况（通过平均荧光强度来体现）。
乳酸脱氢酶活力测定注意事项
乳酸脱氢酶活力测定注意事项乳酸脱氢酶（LDH）活力测定是一种用于评估细胞损伤或组织损伤的常见实验方法。
以下是进行乳酸脱氢酶活力测定时的一些建议和注意事项：1.样品处理：样品的获取和处理对于测定结果至关重要。
确保样品的采集和处理过程中避免引入细菌、污染物或其他可能影响测定结果的因素。
2.温度控制：乳酸脱氢酶活性受温度影响较大，因此在整个实验过程中要保持恒定的温度。
通常，室温或37摄氏度是常用的温度条件。
3.反应时间：控制反应时间以确保测定的准确性。
一般来说，设定一个适当的反应时间，过短或过长的反应时间都可能影响测定结果。
4.底物浓度：底物（如乳酸）的浓度也会影响乳酸脱氢酶活力的测定。
确保底物的浓度在合适的范围内，并在测定前进行标定。
5.pH值：乳酸脱氢酶活性对pH值敏感，因此保持反应体系的适当pH值是必要的。
使用适当的缓冲液来调整和维持pH。
6.试剂质量：使用高质量的试剂，特别是酶的提取液和底物。
使用过期或质量不佳的试剂可能导致结果不准确。
7.标准曲线：在进行实验之前，制备标准曲线以用于计算未知样品的乳酸脱氢酶活性。
确保标准曲线的准确性和可重复性。
8.控制组：始终包括一个阴性对照组和一个阳性对照组，以确保测定的准确性和可靠性。
9.避免光照：避免样品或试剂受到直接阳光或强光的照射，因为光照可能影响测定结果。
10.记录实验条件：记录实验的所有条件，包括温度、时间、底物浓度、pH 值等。
这有助于排除实验中的潜在变量，并提高结果的可重复性。
在进行乳酸脱氢酶活力测定时，严格遵循实验方法、仪器使用说明和相关安全操作规程，以确保实验的准确性和可靠性。
在有需要的情况下，最好由经验丰富的研究人员进行实验，或在需要时咨询相关专业人士的建议。
LDH检测
乳酸脱氢酶释放法lactate dehydrogenase release assay碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。
本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。
同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。
细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。
通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH 的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。
LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。
LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。
本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。
吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。
该酶联反应原理的示意图如下：可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。
一个试剂盒可进行100次检测。
包装清单：产品编号产品名称包装C0016-1 LDH释放试剂 1.5mlC0016-2 乳酸溶液2mlC0016-3 酶溶液1ml×2C0016-4 INT溶液(10X) 0.2mlC0016-5 INT稀释液2ml—说明书1份保存条件：-20℃保存，一年有效。
细胞毒性T淋巴细胞生物杀伤效应的检测方法
细胞毒性T淋巴细胞生物杀伤效应的检测方法（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：王政, 田菲菲, 刘丁, 吕凤林【关键词】 T淋巴细胞生物杀伤细胞毒性细胞介导的免疫效应在机体抗感染免疫、抗肿瘤免疫、移植排斥效应和自身免疫性疾病发生机制中发挥重要作用, 主要效应细胞之一为细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphoclyte, CTL)。
近年来, 基于CTL特异性表位的多肽疫苗已经成为研究热点之一, CTL的活化及对靶细胞的杀伤效应成为衡量疫苗质量的重要因素之一。
目前已经报道许多新的评价CTL活性及其杀伤效应的方法, 现就此做一综述。
1 单个细胞水平测定CTL活性目前一般常用的有产生细胞因子的细胞记数法和有限稀释分析法(LDA)。
活化的T淋巴细胞可分泌一些功能性的细胞因子, 如IL2、IFNγ、TNFα等, 由于分泌不同种类细胞因子可以区分不同免疫功能的记忆细胞或效应细胞, 这样可以在体外评价外周血单个核细胞（PBMC）中抗原特异性T细胞的数量和功能状态。
目前常用的检测细胞因子的方法如ELISA、ELISPOT、PCR/RT PCR及细胞内因子检测等。
1.1 有限稀释分析法(Limiting dilution analysis, LDA) 该方法是迄今应用较广泛的定量分析系统［1］。
LDA 法使我们能够详细了解免疫反应动力学和记忆CTL(Memory CTL, mCTL) 细胞亚群的细胞周期［2］, 也是对pCTL和mCTL亚群细胞表面的激活标志物进行研究的良好方法。
但此方法也存在缺点, 主要是: (1)在LDA条件下, 深入刺激会使效应CTL(eCTL)细胞加快凋亡［3］, 使CTL活性测定值变动较大, 对eCTL细胞数量不能测定或测定值偏低。
(2)实验较繁琐, 因为在实验之前, 首先需要将淋巴细胞表面表达的CD分子, 如CD44或CD62L进行染色, 再用FACS法分类筛选, 然后在LDA条件下培养6 d; 这样就会造成T细胞数量损失, 特别是在活化状态进行筛选和分离时。
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产品简介：
产品编号产品名称产品包装产品价格
C0016 100次176.00元碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。
本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。
同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。
细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。
通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。
LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。
LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。
本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT
(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。
吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。
该酶联反应原理的示意图如下：
可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。
一个试剂盒可进行100次检测。
包装清单：
产品编号产品名称包装
C0016-1 LDH释放试剂 1.5ml
C0016-2 乳酸溶液2ml
C0016-3 酶溶液1ml×2
C0016-4 INT溶液(10X) 0.2ml
C0016-5 INT稀释液2ml
—说明书1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
C0016-3需注意避免反复冻融。
C0016-4需避光保存。
试剂盒解冻后可以短期4℃存放，2-3天内有效。
注意事项：
冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活，4℃可放置2-3天。
建议样品准备好后尽量当天完成测定。
如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过1%，并最好使用热灭活血清。
如果一定需要使用10%血清，在检测时一定要设置没有细胞，但加入了相同体积培养液的对照孔，以用于消除背景。
细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
如果希望进行乳酸脱氢酶活性的绝对定量，用户需自备乳酸脱氢酶标准品。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。