乳酸脱氢酶LDH检测试剂盒LD
大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒说明书
大鼠乳酸脱氢酶（LDH）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：通用名：大鼠乳酸脱氢酶（LDH）酶联免疫分析试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、或相关组织液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。
实验原理本试剂盒应用间接法测定标本中大鼠乳酸脱氢酶（LDH）水平。
用纯化的大鼠乳酸脱氢酶（LDH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的乳酸脱氢酶（LDH）标准品和未知浓度的乳酸脱氢酶（LDH）待检样品，温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的乳酸脱氢酶（LDH）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠乳酸脱氢酶（LDH）浓度。
试剂盒组成1 20倍浓缩洗涤液50ml×1瓶9 标准品S1（6 IU/L）0.5ml×1瓶2 链霉亲和素-HRP6ml×1瓶标准品S2（4 IU/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条标准品S3（2 IU/L）0.5ml×1瓶4 生物素标记的抗-IgG抗体6ml×1瓶标准品S4（1IU/L）0.5ml×1瓶5 显色剂A液6ml×1瓶标准品S5（0.5 IU/L）0.5ml×1瓶6 显色剂B液6ml×1/瓶10 密封袋1个7 终止液6ml×1瓶11 封板膜3张8 样品稀释液6ml×1瓶12 说明书1份标本要求1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融操作步骤1.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。
乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒一站式解决方案
乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒一站式解决方案乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LD 或LDH ，EC1.1.1.27 ）是一类NAD依赖性激酶，有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基，可构成6种四聚体同工酶。
动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体，常见的A、B 两种亚基构成的5种LDH同工酶（LDH1-5），C亚基则仅组成一种LDH同工酶即LDH-C4。
乳酸脱氢酶为含锌离子的金属蛋白，分子量为135-140kD，是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。
LDH广泛存在于人体组织中，以肾脏含量最高，其次是心肌和骨肌。
红细胞内LDH约为正常血清的100倍。
一、乳酸脱氢酶分类1.根据结合辅酶的不同，微生物体一般包含两种乳酸脱氢酶，NAD-依赖型乳酸脱氢酶（NAD-dependent lactate dehydrogenases，nLDHs）和NAD-非依赖型乳酸脱氢酶（NAD-independent lactate dehydrogenases，iLDHs）两大类。
2.按其催化底物的构型不同，NAD-依赖型乳酸脱氢酶可以分为NAD依赖型-L-乳酸脱氢酶（L-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）和NAD依赖型-D-乳酸脱氢酶（D-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）两大类，分别催化丙酮酸合成L-乳酸和D-乳酸。
3.根据天然电子受体的不同，可以将NAD-非依赖型乳酸脱氢酶分为三类。
第一类为膜蛋白，利用膜醌类作为外部的电子受体；第二类直接利用O2作为电子受体，根据氧化终产物的不同，又将其细分为乳酸氧化酶（Lactate oxidase，LOX）和乳酸单氧酶（Lactate monooxygenases，LMO），其中前者产生丙酮酸和H2O2，而后者产生乙酸、CO2和H2O；第三类是硫胺b2（flavocytochrome b2），存在于真菌中，它天然的电子受体为细胞色素c。
乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)试剂盒说明书
货号：MS1001 规格：100管/48样乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。
测定原理：LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：提取液：60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入1.3 mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；试剂三：液体5 mL×1瓶，4℃避光保存；试剂四：液体20mL×1瓶，4℃保存；样品测定的准备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为1000~5000：1的比例（建议2000万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。
乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P比色法)
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加入物(ml) 待测样品(血清、血浆、体液等) LDH 检测工作液
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乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 比色法)
简介：
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH 或 LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原 子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的 酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙 酮酸(P)之间的氧化还原反应。乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-P 比色法)是利用乳酸脱氢 酶催化上述逆反应，即丙酮酸+NADH+H+→乳酸+NAD+。在上述反应过程中，丙酮酸还 原成乳酸，同时 NADH 氧化成 NAD+，引起 340nm 处吸光度的下降。该 LD-P 法的优点 是：1、操作比二硝基苯肼比色法简单；2、重复性好；3、准确性比二硝基苯肼法好；4、
2、 处理后的样品应及时检测，否则 LD4 和 LD5 易失效。 3、 血清或肝素抗凝血浆检测效果较好，草酸类、EDTA 抗凝剂对 LDH 活性有抑制作用。
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4、 避免使用溶血样本。 5、 为了您的安全和健康，请穿实验服幵戴一次性手套操作。
自动分析仪计算公式：LDH(U/L)=ΔA/min×(106/6220)×(296/10)=ΔA/min×4758.8 注意：如果待测样品加入 LDH 保护工作液，其结果应除以 0.9。
小鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒操作说明操作说明
小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒操作说明操作说明小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒操作说明小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒实验原理小鼠乳酸脱氢酶(LDH）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被小鼠乳酸脱氢酶(LDH）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠乳酸脱氢酶(LDH）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明
乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明乳酸脱氢酶（LDH）法操作说明操作简介：乳酸脱氢酶（LDH）法是一种常用的生物化学分析方法。
本文将详细介绍使用乳酸脱氢酶法进行实验操作的步骤。
材料准备：1. 乳酸脱氢酶试剂盒2. 样品溶液3. 乳酸标准品4. 实验用试管和显微管操作步骤：1. 样品制备- 将待测样品装入实验用试管中。
每个样品应分别装入不同的试管，以避免交叉污染。
- 若样品过浓稀，需要进行适当的稀释，确保样品浓度在测试范围内。
2. 标准曲线制备- 准备不同浓度的乳酸标准品溶液，浓度范围可根据实验要求而定。
- 将不同浓度的标准品溶液分别装入实验用试管中。
3. 试剂添加- 分别向样品管和标准品管中加入相同体积的乳酸脱氢酶试剂，充分混匀。
4. 反应温育- 将所有试管置于恒温水浴中，温度设定为适合乳酸脱氢酶反应的温度（一般为37°C）。
- 在设定的反应温度下，将试管保持在水浴中反应一段时间（时间根据实验要求而定）。
5. 反应终止- 在反应时间结束后，以适当的方法终止反应。
常见的终止方式是添加酸性试剂或采用其他合适的方法。
6. 测定乳酸脱氢酶活性- 使用光度计、分光光度计或其他合适的仪器，测定样品和标准品反应后产生的光吸收值。
吸收值与乳酸脱氢酶活性成正比。
- 通过标准曲线，将样品的吸收值转化为对应的乳酸脱氢酶活性。
注意事项：1. 本实验操作需要严格按照实验室安全操作规范进行，避免任何可能导致个人受伤或污染的行为。
2. 实验过程中的试剂、标样和废液等应按照实验室规定的方法处理，不得随意丢弃。
3. 在操作过程中，保持实验器材和试剂的洁净，尽量避免外界因素对实验结果的影响。
4. 操作时需注意避免交叉污染，尤其是样品的装管和试剂的配比过程。
5. 样品和标准品的选择要合适，浓度范围应覆盖实验要求。
6. 温育过程中，确保试管能均匀受热，并避免发生温度不稳定的情况。
总结：乳酸脱氢酶（LDH）法是一种可靠的生物化学分析方法，适用于乳酸脱氢酶活性的测定。
LDH检测
乳酸脱氢酶释放法lactate dehydrogenase release assay碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。
本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。
同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。
细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。
通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH 的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。
LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。
LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。
本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。
吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。
该酶联反应原理的示意图如下：可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。
一个试剂盒可进行100次检测。
包装清单：产品编号产品名称包装C0016-1 LDH释放试剂 1.5mlC0016-2 乳酸溶液2mlC0016-3 酶溶液1ml×2C0016-4 INT溶液(10X) 0.2mlC0016-5 INT稀释液2ml—说明书1份保存条件：-20℃保存，一年有效。
乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒(乳酸底物法)产品技术要求derui
乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒
（乳酸底物法）
2.1外观和性状
外观和性状应符合表2要求。
表2 试剂盒内各组分的外观性状
2.2试剂空白
2.2.1试剂空白吸光度
试剂以生理盐水为空白时，在温度37℃、波长340nm、光径1.0 cm 条件下，吸光度≤0.50。
2.2.2试剂空白吸光度变化率
试剂以生理盐水为空白时，在温度37℃、波长340nm、光径1.0 cm 条件下，吸光度变化率≤0.002。
2.3分析灵敏度
试剂盒测试浓度为100U/L被测物时，吸光度变化率≥0.004。
2.4线性范围
2.4.1试剂盒在25 ~750U/L区间（范围）内，其回归系数r≥0.990。
2.4.2相对偏差或绝对偏差应符合表3 要求。
表3 相对偏差或绝对偏差
2.5精密度
2.5.1试剂盒重复性CV 值应≤5%。
2.5.2试剂盒批间相对极差（R）应≤10.0%。
2.6准确度
相对偏差（Bias%）应在参考物质靶值±10%以内。
2.7液体装量
试剂盒不同规格的净含量应不少于其标示量。
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产品简介： 乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH 或 LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原子或电子从
一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的酶，含有锌离子，广泛 分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙酮酸(P)之间的氧化还原反应。其 反应公式：
按待测样品(如血清)：LDH 保护工作液=9:1 的比例混合，4℃避光保存。
④(选做)样品准备完毕后可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋
白重量组织或细胞内的 LDH 含量。
2、配制 LDH 检测工作液：取 1 支 NAD，按 NAD：LD-L Assay buffer =1 支：100ml 的比例混合，即为
温度
37℃
波长
340nm
延迟时间
90s
检测时间
180s
待测样品
15μl
LDH 检测工作液
300μl
参考范围：
成年健康人
109～245U/L
注意事项： 1、处理后的样品应及时检测，否则 LD4 和 LD5 易失效。 2、血清或肝素抗凝血浆检测效果较好，草酸类、EDTA 抗凝剂对 LDH 活性有抑制作用。 3、避免使用溶血样本。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12 个月有效。
①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，室温保存 3
天，用于 LDH 的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，室温保存 3 天，用于 L品无法及时检测，需要放置时间较长，按下列方法操 作：取
LDH 保护剂 1 支，加入 1.5ml 的 LDH 保护稀释液，配制成 LDH 保护工作液，-20℃避光保存。
名称
100T
Storage
试剂(A):NAD
2支
-20℃避光
试剂(B):LD-L Assay buffer
200ml
4℃避光
试剂(C):LDH 保护剂
1支
4℃避光
试剂(D):LDH 保护稀释液
1.5ml
RT
自备材料：
离心管或小试管、水浴锅、比色杯、分光光度计或自动分析仪
操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
乳酸+NAD+→丙酮酸+NADH+H+。 其中：L→P 为正向反应；P→L 为逆向反应。 乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(LD-L 比色法)是利用乳酸脱氢酶催化上述正反应，即 L-乳酸+NAD+→ 丙酮酸+NADH+H+。在上述反应过程中，乳酸氧化成丙酮酸，同时 NAD+氧化成 NADH，引起 340nm 处吸光 度的升高。其升高速率与标本中 LDH 活性呈正比关系，通过分光光度计或自动分析仪检测 340nm 处吸 光度升高速率，通过计算获得乳酸脱氢酶的活性。该 LD-L 法的优点是：1、乳酸盐和 NAD+底物溶液的 稳定性比 LD-P 法中的丙酮酸和 NADH 底物溶液好；2、线性速率反应时间范围较宽；3、重复性比 LD-P 法和二硝基苯肼法好；4、准确性比二硝基苯肼法好；5、适用于自动分析仪。该试剂盒仅用于科研领 域，不宜用于临床诊断或其他用途。 产品组成：
2.0
混匀，37℃孵育 30s。
立即于 340nm 处读取各管吸光度，比色杯光径 1.0cm，记录为 A 测定 1。3min 后读取各管吸光度，记录 为 A 测定 2。 5、自动分析仪检测：如果样品中的浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的 检测最好能设置平行管。根据实验室的自动分析仪性能，设置参数，下列参数仅供参考：
LDH 检测工作液，即配即用，不宜久置。
3、手工比色检测：按照下表设置测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样
品中的 LDH 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行
管。
加入物(ml)
测定管
待测样品(血清、血浆、体液等)
0.1
LDH 检测工作液(37℃提前预热)