血清乳酸脱氢酶LDH测定
乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒说明书
乳酸脱氢酶（LDH ）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC0680规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体30 mL×1瓶4℃保存试剂一液体25 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三液体25 mL×1瓶4℃保存试剂四液体60 mL×1瓶4℃保存标准品液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用时加入1.3 mL 双蒸水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20℃保存，可保存两周，禁止反复冻融；2、标准品：2 μmol/mL 丙酮酸钠溶液。
产品说明：LDH （EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD +/NADH 之间互变。
LDH 催化NAD +氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30次）；8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g ）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
血清乳酸脱氢酶LDH测定
血清乳酸脱氢酶LDH测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，LDHNADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。
L-乳酸 + NAD+丙酮酸 + NADH + H+3 标本：3.1 病人准备：无特殊。
3.2 类型：血清或EDTA血浆。
3.3 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<2%。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司LDH试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成氯化钾 190mmol/L 试剂1（R1）乳酸62.5mmol/LTris缓冲液 100mmol/L试剂2（R2）NAD+ 30mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 4.1.2试剂准备试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂1 与试剂2 启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项试剂中含叠氮钠为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的LDH校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
乳酸脱氢酶(ldh)正常值范围
乳酸脱氢酶(ldh)正常值范围
乳酸脱氢酶是观察心肌疾病、肝胆疾病等的重要指标之一，正常值范围是109-245U/L。
如果乳酸脱氢酶数值偏高，则需要警惕肝脏疾病、心脏疾病等，及时去医院咨询进行进一步检查确定数值增高的病因，数值偏低则不需要过度担心。
乳酸脱氢酶是催化乳酸和丙酮相互转化的同工酶，存在于肝脏、心脏、肾脏中。
乳酸脱氢酶偏低有可能是因为内分泌失调或者由过于劳累、睡眠不好、心情不好等原因引起，乳酸脱氢酶偏低一般不是很严重，经过调理即可恢复。
但是如果出现乳酸脱氢酶偏高就要引起重视了，常见原因如下：
1、乙肝患者血清中乳酸脱氢酶含量就会出现增高，这
是由肝细胞受损引起的。
2、肌营养不良的患者血清中可以观察到偏高的乳酸脱
氢酶。
3、肝脏疾病、肺部疾病、心脏疾病、肾脏疾病等都可
能会引起乳酸脱氢酶偏高。
乳酸脱氢酶LDH法操作说明
乳酸脱氢酶LDH法操作说明LDH法细胞毒性检测：原理：乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富,正常时不能通过细胞膜,当细胞受损或死亡时可释放到细胞外,所以细胞死亡数⽬与细胞培养上清中LDH活性成正⽐,⽤⽐⾊法测定实验孔LDH 活性,并与靶细胞对照孔进⾏⽐较,可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率LDH（乳酸脱氢酶）是⼀种极为稳定的细胞质酶，存在于正常细胞的胞质中，⼀旦细胞膜受损，LDH 即被释放到细胞外；LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应转化成红⾊甲臢化合物，可通过酶标仪进⾏检测。
颜⾊形成的量与裂解细胞的数⽬成正⽐。
应⽤⼀个96-孔平板读数计收集可见光波长的吸收值数据。
这个分析可⽤于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整性，这种情况下⽬标细胞被效应细胞裂解，可判断细胞受损的程度。
乳酸脱氢酶（LDH）在胞质内含量⾮常丰富，细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜，但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH 的活性与细胞的死亡数⽬呈正⽐，通过⽤⽐⾊法测定并与靶细胞对照孔的LDH 活性进⾏⽐较，可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。
该实验⽅法操作简便、快速，可应⽤于CTL 和NK 细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性，⽬前已有LDH 法测定CTL 活性的试剂盒。
同时设4个对照:靶细胞最⼤释放组、体积校正对照组、背景对照组和⾃然释放组按5∶1、10∶1、20∶1（效应细胞∶靶细胞）细胞过度⽣长、密度过⾼、离⼼速度过⼤、培养箱内外温差过⼤等因素会造成细胞⾃然释放乳酸脱氢酶操作流程：设⽴效应细胞孔（不同浓度的效应细胞设⽴效应细胞⾃发释放组）：50µl效应细胞+50µl培养基实验组：靶细胞不变，改变效应细胞：50µl效应细胞+50µl靶细胞设⽴靶细胞⾃发释放组：50µl靶细胞+50µl培养基设⽴靶细胞最⼤释放组：50µl靶细胞+50µl培养基+10µl裂解液（10×）设⽴体积校正对照组：100µl培养基+10µl裂解液（10×）设⽴背景对照组：100µl培养基250g离⼼4分钟37℃孵育4⼩时离⼼前45分钟添加裂解液（10×）⾄靶细胞最⼤释放组250g离⼼4分钟取上清50µl转移⾄另⼀孔板（可选）于独⽴的孔中加50µl LDH阳性对照（1：5000）于每孔中添加50µl再次稀释的底物混合物室温避光孵育30分钟添加50µl终⽌溶液490nm测吸收值1.靶细胞接种数⽬的优化1.1.设⽴检测板1.1.1.准备靶细胞：调整细胞浓度0, 5,000, 10,000, 20,000/100µl，使⽤与细胞毒分析相同的培养基及孔板终体积。
乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程(SOP)
乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程（SOP）一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中乳酸脱氢酶（LDH）的活性。
二、临床意义（一）概述乳酸脱氢酶（LDH），又称L－乳酸－NAD+氧化还原酶，酶编号为EC 1.1.1.27，分子量约为34000道尔顿。
LDH是一种细胞质酶，存在于所有组织细胞中。
由于组织中的LDH 浓度比血浆高约500倍，即使组织的轻微损伤也将导致血清中活性的明显增高，在肝、心肌、骨骼肌和肾中发现高度组织特异性活性的酶。
（二）临床意义乳酸脱氢酶增高主要见于心肌梗死、肝炎、肺梗死、某些恶性肿瘤、白血病等。
某些肿瘤转移所致的胸腹水中乳酸脱氢酶活力往往升高。
目前，常用于心肌梗死、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。
（三）医学决定水平170U／L:此值在参考范围以内，等于或低于此值可排除许多与LDH升高有关的疾病，而考虑其他的诊断。
此值还可作为病人自身的对照，用来与以前或将来的测定值作比较。
300U／L：高于此水平时，应考虑到可能引起LDH升高的各种疾病，如心肌梗塞、肝病变、传染性单核细胞增多症、进行性肌营养不良等。
因此，应作其他各种试验，以作出明确诊断。
血清溶血可使测定值增高，应予以注意。
500U／L：高于此值，常见于巨幼细胞性溶血，急性白血病、慢性粒细胞性白血病、转移癌和肝昏迷等，此时应作其他多种检测来作出正确诊断。
三、检验原理L-乳酸＋NAD+−−LDH丙酮酸＋NADH＋H+−→NADH的生成速率与样品中LDH活性成正比，在340nm波长处，通过连续监测吸光度的上升速率(△A／min)，即可计算出样品中LDH的活性。
四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
组织ldh检测方法
组织ldh检测方法
乳酸脱氢酶同工酶（LDH）检测方法包括电泳法、离子交换柱层析法、免疫法、抑制法和酶切法等，但迄今最好的和用得最多的是电泳法。
具体操作如下：
1. 将适量细胞接种到96孔细胞培养板中，使待检测时细胞密度不超过80-90%满。
2. 吸去培养液，用PBS液洗涤一次。
换新鲜培养液（推荐使用含1%血清的低血清培养液或适当的无血清培养液），将各培养孔分成如下几组：包括无细胞的培养液孔（背景空白对照孔），未经药物处理的对照细胞孔（样品对照孔），未经药物处理的用于后续裂解的细胞孔（样品最大酶活性对照孔），以及药物处理的细胞孔（药物处理样品孔），并做好标记。
按照实验需要给予适当药物处理（如加入0-10μl左右特定的药物刺激，可设置不同浓度，
不同处理时间，对照孔中需加入适当的药物溶剂对照），继续按常规培养。
到预定的检测时间点前1小时，从细胞培养箱里取出细胞培养板，在“样品最大酶活性对照孔”中加入试剂盒提供的LDH释放试剂，加入量为原有培
养液体积的10%。
加入LDH释放试剂后，反复吹打数次混匀，然后继续在细胞培养箱中孵育。
3. 到达预定时间后，将细胞培养板用多孔板离心机400g离心5min。
分别取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相应孔中，随即进行样品测定。
4. 各孔分别加入60μl LDH检测工作液。
混匀，室温（约25℃）避光孵育30min（可用铝箔包裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动）。
然后在490nm处测定吸光度。
使用600nm或大于600nm的任一波长作为参考波长进行双波长测定。
以上信息仅供参考，具体操作建议咨询专业人士。
LDH的测定
2，酶活性的测定
加入物(ml) 加入物(ml) 测定管 对照管 血清 0.01 0.01 NAD＋ NAD＋底物缓冲液 0.5 0.5 37度水浴 37度水浴5min 度水浴5min NAD＋ NAD＋溶液 0.1 － 37度水浴 度水浴15min 37度水浴15min 2,4二硝基苯肼 2,4二硝基苯肼 0.5 0.5 NAD＋ NAD＋溶液 － 0.1 37度水浴15分钟 37度水浴15分钟 度水浴15 0.4mol/L溶液 0.4mol/L溶液 5.0 5.0 混匀，室温放置5min 5min后 440nm波长处比色 比色杯光径为1.0cm 波长处比色， 1.0cm， 混匀，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm， 用蒸馏水调零，读取各管吸光度。 用蒸馏水调零，读取各管吸光度。以测定管与对照管吸光度之差值查 校正曲线，得酶活性。 校正曲线，得酶活性。 单位定义： 100ml血清 37度 作用底物15min 产生1umol 血清， 15min， 1umol丙酮酸为 单位定义：以100ml血清，37度，作用底物15min，产生1umol丙酮酸为 一个金氏单位。 一个金氏单位。
乳酸＋NAD＋――丙酮酸＋NADH＋ ＋（正向L 乳酸＋NAD＋――丙酮酸＋NADH＋H＋（正向L-P，逆 向P－L）。 比色法原理：正向反应生成的丙酮酸与溶于酸的2 比色法原理：正向反应生成的丙酮酸与溶于酸的2，4二硝 基苯肼作用生成丙酮酸－二硝基苯腙，后者在酸性环境中 呈草黄色，在碱性溶液中显棕红色，颜色的深浅与丙酮酸 的浓度成正比，与标准浓度的丙酮酸生成的苯腙进行比色， 可推算LDH的活力。 可推算LDH的活力。 本法规定37度15分钟产生1umol丙酮酸的酶活力为一个单 本法规定37度15分钟产生1umol丙酮酸的酶活力为一个单 位，
乳酸脱氢酶(ldh)范围
乳酸脱氢酶(ldh)范围
乳酸脱氢酶（LDH）是一种在细胞和组织中广泛存在的酶，它是一种催化反应的酶，将产生的乳酸氧化为丙酮酸。
乳酸脱氢酶范围是指在人体内正常的乳酸脱氢酶的含量范围。
LDH是一种由五个亚基组成的酶，每个亚基都有不同的结构和功能特征。
在人体内，LDH主要存在于血清、红细胞、白细胞、肝、肌肉等组织中，其中血清中的LDH含量最高。
因此，血清LDH可以证明某些病情的诊断、病情监测和疾病预后。
正常情况下，成人血清LDH含量为每升100-240单位。
但是，这个范围可能会因为某
些疾病的影响而发生变化。
例如，对于心肌梗死等急性心脏疾病，LDH含量会显著升高，
而对于某些肿瘤，LDH含量也会升高。
此外，在贫血、骨髓瘤、某些肌肉疾病等情况下，LDH含量也可能发生变化。
除了血清LDH含量外，肌肉组织中的LDH含量也可能发生变化。
例如，在肌肉的损伤、炎症和肌萎缩等情况下，LDH含量可能显著增加。
值得注意的是，LDH含量在不同的实验室之间可能存在差异。
为了获得更加准确和可
靠的结果，应该在同一家实验室内进行血清LDH检测，并在相同的检测条件下进行检测。
总之，血清LDH在许多疾病的诊断和治疗中都起着重要的作用。
了解正常的LDH范围
及其可能发生的变化，对于病情的判断和治疗方案的选择都具有重要的意义。
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血清乳酸脱氢酶LDH测定
1 检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理
LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，
LDH
NADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。
L-乳酸 + NAD+丙酮酸 + NADH + H+
3 标本：
3.1 病人准备：无特殊。
3.2 类型：血清或EDTA血浆。
3.3 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<2%。
3.4 标本运输：常温条件下保存运输。
3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
4 实验材料
4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司LDH试剂盒（沪
食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成
氯化钾 190mmol/L 试剂1（R1）乳酸
62.5mmol/L
Tris缓冲液 100mmol/L
试剂2（R2）NAD+ 30mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 4.1.2试剂准备试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下，
试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂1 与试剂
2 启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，
或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.1.5 注意事项试剂中含叠氮钠为防腐剂。
不可入口！避
免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的LDH校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪
6 操作步骤
6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
8 计算方法
以LDH复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。
9 参考值范围
成人： 114～240
儿童：
1～30天 145～765 125～735
31天～1年 190～420 170～450
1～3岁 165～395 155～345
4～6岁 135～345 155～345
7～9岁 140～280 145～300
10～12岁 120～260 120～325
13～15岁 100～275 120～290
16～18岁 105～230 105～235
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
我室参考值：109—245u/l
10 临床意义
乳酸脱氢酶（LDH）由五种不同的同工酶组成，催化L-乳酸与丙酮酸的相互转换。
LDH存在于人体所有组织的细胞质中，在肝、心和骨骼肌中含量较高，在红细胞、胰腺、肾和胃中含量较低。
在多种病理情况下出现LDH活力的升高，如心肌梗死、癌症、肝脏疾病、血液疾病或肌肉疾病。
由于LDH缺乏器官特异性，因此在鉴别诊断时，有必要作LDH同工酶和其它酶类的测定，如碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶。
11 操作性能
11.1试剂空白吸光度（340nm、1cm光径&37℃）：≤0.50A。
11.2线性范围：1000U/L±10%，线性相关系数（r）≥0.990。
11.3准确度：用相对偏差（RE%）表示测定结果的不准确度，相对偏差（RE%）≤±10%。
11.4精密度：(1)批内精密度：变异系数（CV%）≤5%；(2)批间精密度：相对极差（%）≤5%。
12 超出范围结果处理
本试剂的线性范围为1000U/L。
当样本中乳酸脱氢酶活性高于1000U/L时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1:9稀释，重新测定，结果乘以10。
13 病危报警值的处理
无警告/危急值
14 方法局限性
14.1测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的控制。
14.2甘油三酯浓度＜9.5mmol/L或877mg/dL、胆红素浓度＜490μmol/L或29mg/dL对测定无影响。
溶血样本可对测定结果产生干扰，应避免用于测定。
14.3有关可能干扰本测定的药物或物质，。