RIPA裂解液
组织裂解液和细胞裂解液如何配制
组织裂解液和细胞裂解液如何配制组织裂解液和细胞裂解液是在实验室中用于将组织或细胞中的生物分子（如蛋白质、核酸等）裂解或溶解的溶液。
这些液体通常包含一系列试剂和缓冲液，以帮助维持理想的酸碱平衡和溶解条件。
以下是组织裂解液和细胞裂解液常见的配制方法。
1. 常用的组织裂解液配方为RIPA裂解液（RIPA lysis buffer），其成分包括：- 50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）-150mM氯化钠（NaCl）- 1% NP-40或Triton X-100-0.5%钠脱氧胆酸或SDS-0.1%SDS-1mMEDTA-1mM苯甲硫酸酯（PMSF）2.配制方法：a. 称取所需量的Tris-HCl缓冲液和NaCl溶解于蒸馏水中；b. 加入适量的PMSF和其他表面活性剂（如NP-40、Triton X-100）；c.配制完毕后，pH应调整至理想值；d.将裂解液过滤或使用高速离心去除悬浮物。
细胞裂解液的配制：1.常用的细胞裂解液配方为RIPA裂解液（同组织裂解液配方）或RIPA缓冲液（不含表面活性剂），以避免破坏裂解液中的蛋白质。
2.配制方法：a.同组织裂解液的步骤1；b.不加入表面活性剂，方便后续蛋白质的分析。
同时，裂解液的配制可以根据实验需要做出适当更改，以满足特定的研究目的和条件。
在裂解液的配制过程中，需要注意以下几点：1.所选择的缓冲液的pH应调整到适合所需实验的范围内，以确保溶液的稳定性；2.表面活性剂的添加量应适中，以满足蛋白质溶解的需要，但过多的添加会造成裂解液的稀释和稳定性下降；3.裂解液的配制应注意在低温下进行，以防止试剂的降解和活性的损失；4.在裂解液的使用过程中，最好将裂解液与细胞/组织充分接触，并且较长时间地孵育，以满足完整的裂解过程。
蛋白裂解液配方
蛋白裂解液配方
蛋白裂解液是一种在生物学和生物化学实验中常用的试剂，用于裂解或溶解细胞，释放细胞内的蛋白质。
以下是一个基本的蛋白裂解液的常见配方，但请注意，具体的配方可能因实验目的和样品类型而有所不同。
常见的蛋白裂解液配方：
1.RIPA缓冲液：
•50 mM Tris-HCl pH 7.4
•150 mM NaCl
•1% Triton X-100
•0.5% 钠脱氧胆酸
•0.1% SDS
• 1 mM EDTA
• 1 mM PMSF（苯甲磺酰氟）
注：可以根据实验需求加入蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂等。
emmli裂解缓冲液：
•2% SDS
•10% 甘油
•60 mM Tris-HCl pH 6.8
•100 mM DTT（二硫代硫酸钠）
注：此为常用于SDS-PAGE的裂解液，可用于蛋白质的电泳分析。
3.蛋白裂解酶消化液：
•50 mM Tris-HCl pH 8.0
•150 mM NaCl
• 1 mM EDTA
•1% Triton X-100
•0.5% NP-40
•蛋白酶（如胰蛋白酶）或其他特定的蛋白酶
注：此液体适用于进行蛋白酶的部分或完全消化。
请注意，这些配方中的成分可以根据具体的实验需求进行调整。
在制备蛋白裂解液时，应该遵循严格的实验室规范，并根据样品的特性和实验目的选择合适的裂解液。
此外，对于某些特定的实验，可能需要添加蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂等以保护蛋白质不被降解。
RIPA裂解液说明书
使 用 说 明 书◆RIPA裂解液◆目录号1912◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外RIPA裂解液目录号：1912目录编号包装单位191201 50ml191202 100ml产品介绍：RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。
RIPA裂解液的配方有很多种，本产品RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS 以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA 等多种磷酸酶抑制剂。
产品储存：4℃注意事项：1.裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。
2.用户使用前需加入蛋白酶抑制剂如PMSF或者根据需要再加入leupeptin，aprotinin等其它抑制剂。
3.裂解液中SDS 4℃保存易沉淀析出，使用前应该37℃-60℃水浴重新溶解完全后回复到室温使用。
4.裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）1.对于培养细胞样品：1)取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2)对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。
按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。
用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
3)对于悬浮细胞，离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。
按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。
RIPA裂解液(中)
版本：B11 修改日期：2024.03.06 RIPA 裂解液(中)产品简介：多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，如Triton 、SDS 、NP-40等，RI PA 裂解液（中）(RIPA Lysis Buffer)是采用一种经典的细胞组织快速裂解并获得总蛋白的裂解液，其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA 裂解液(弱)，所获得的蛋白质可用于Western 、免疫沉淀(Immunol Precipitation ，IP)等。
Leagene Medium RIPA Lysis Buffer 主要由Tris 、NP-40、sodium deoxycholate 等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。
该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
产品组成：操作步骤(仅供参考)：配制含有PMSF 的Medium RIPA Lysis Buffer ：取Medium RIPA Lysis Buffer 置于室温平衡，加入PMSF ，使其终浓度为1mM ，临用前配制，不可长期保存。
(一)贴壁细胞1、 去除贴壁细胞的培养液，用PBS 、NS 或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
2、 6孔板每孔加入150～250μl 含有PMSF 的Medium RIPA Lysis Buffer ，用手指轻弹细胞，使其松散，移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触，置于冰上或4℃裂解，通常裂解液作用于细胞1～3s 内，细胞就会被裂解，通常6孔板每孔细胞加入150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl 。
3、 10000～12000g 4℃离心 (如无低温离心机，室温离心亦可)，取上清。
4、 后续的SDS-PAGE 、Western 、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮细胞1、 低速离心悬浮细胞，弃上清，用PBS 、NS 或无血清培养液清洗1次，离心留取沉淀。
RIPA 裂解液(强)
产品编号产品名称规格BL504A RIPA裂解液(强)100ml产品简介：该RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。
RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1%Triton X-100，1%sodium deoxycholate，0.1%SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。
可以有效抑制蛋白降解。
用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。
由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
别名：RIPA Lysis Buffer使用说明：对于培养细胞样品：1、融解RIPA裂解液，混匀。
取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM。
2、对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。
按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。
用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。
按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。
再用手指轻弹以充分裂解细胞。
充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
3、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
北京普利莱基因技术有限公司 RIPA 裂解液说明书
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer) C1053描述：RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典和最常用的细胞组织快速裂解液。
使用RIPA 裂解缓冲液制备用于Western特别是用于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作，也适用于大部分抗原表位检测，特别是免疫共沉淀等实验。
组成：100 ml RIPA裂解缓冲液。
成分：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.储存：4 ℃保存12个月有效制备细胞裂解产物：1.800g 4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 μl, 107 cells=~100 μl PCV）；2.每50～100 μl PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250~500 μl）,冰浴放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；3.12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。
注意：如所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5分钟，迅速冰浴5分钟，再进行步骤3制备组织裂解产物：1.取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；2.加入0.5-1 ml 预冷RIPA 裂解缓冲液；3.4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；4.12000g 4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物。
注意：如所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5分钟，迅速冰浴5分钟，再进行步骤4说明：1.转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；2.在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白提取，避免某些不稳定蛋白的降解；3.RIPA裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂，用户可自行选择添加。
蛋白裂解液的种类
蛋白裂解液的种类蛋白裂解液是一种常用于蛋白质提取和分析的试剂，具有多种不同的种类和配方。
下面将介绍几种常见的蛋白裂解液及其特点。
1. RIPA裂解液RIPA（Radioimmunoprecipitation Assay）裂解液是一种常用的蛋白裂解液，用于细胞裂解和蛋白质提取。
它的主要成分包括盐类、离子型洗涤剂（如NP-40或Triton X-100）、蛋白酶抑制剂（如苯甲酰氟化物）和缓冲剂（如Tris-HCl）。
RIPA裂解液能够有效地破坏细胞膜，并且可以溶解大部分细胞组分，适用于多种蛋白质的研究。
2. SDS裂解液SDS（Sodium Dodecyl Sulfate）裂解液是一种常用的蛋白裂解液，用于蛋白质电泳分析。
它的主要成分是SDS和Tris-HCl缓冲液。
SDS裂解液能够使蛋白质变性并带负电荷，使其在电场中按照分子大小进行迁移，便于分析和测定。
3. Urea裂解液Urea裂解液是一种常用的蛋白裂解液，用于蛋白质的变性和解聚。
它的主要成分是尿素和Tris-HCl缓冲液。
尿素能够破坏氢键和疏水作用力，使蛋白质变性并解聚，便于后续的分析和提取。
4. NP-40裂解液NP-40（Nonidet P-40）裂解液是一种非离子型洗涤剂，常用于细胞裂解和蛋白质提取。
它的主要成分是NP-40和Tris-HCl缓冲液。
NP-40裂解液能够有效地破坏细胞膜，并且具有低表面张力和渗透压，有利于蛋白质的提取和分析。
5. RIPA-Lysis裂解液RIPA-Lysis裂解液是一种改良版的RIPA裂解液，常用于细胞裂解和蛋白质提取。
它的主要成分包括盐类、离子型洗涤剂（如NP-40或Triton X-100）、蛋白酶抑制剂（如苯甲酰氟化物）和缓冲剂（如Tris-HCl），与RIPA裂解液相似。
不同之处在于RIPA-Lysis裂解液中添加了额外的蛋白酶抑制剂和磷酸酯酶抑制剂，可以更好地保护蛋白质的完整性。
总结：蛋白裂解液是一种用于蛋白质提取和分析的重要试剂，常见的种类包括RIPA裂解液、SDS裂解液、Urea裂解液、NP-40裂解液和RIPA-Lysis裂解液等。
RIPA 蛋白裂解液说明书
ShineGene Molecular Biotech,Inc. 上海闪晶分子生物科技有限公司
2、在做免疫沉淀或免疫共沉淀时，最好在实验前进行蛋白的提取，以避免某些不稳定蛋白 的降解； 3、本品中未加入蛋白酶抑制剂，需自备 PMSF。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加 入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。 4、裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
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蛋白裂解液(RIPA)
使用说明书
本品是一种传统的细胞组织快速裂解液。使用本品裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等。主要成分为 50mM Tris (pH7.4)，150mM NaCl，1% NP-40， 0.1% SDS。 使用本品裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有 较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 保存条件：4℃ 制备细胞裂解产物： 1、800g 4℃离心 5 分钟，收集细胞，估计细胞离心后的体积(PCV,106 cells ≈ 20ul PCV, 107 cells ≈ 100 ul PCV) 2、每 50~100ul PCV 加入 5 倍体积的蛋白裂解液（250~500ul）,冰浴中放置 10 分钟，且每隔 5 分钟在漩涡混合仪震荡 30 秒； 3、12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物； 4、假如所得蛋白产物较为粘稠，可 95℃加热 5 分钟，然后迅速冰浴 5 分钟，12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。 制备组织裂解产物： 1、取 50-100mg 组织在冰上剪成碎片，用预冷的 PBS 洗涤 2 次，离心弃去 PBS； 2、加入 0.5-1ml 预冷的蛋白裂解液； 3、4℃用玻璃匀浆器匀浆 20-40 次，直到 95%的细胞被破碎，然后在冰浴中放置 10 分钟，且每 隔 5 分钟在漩涡混合仪震荡 30 秒； 4、12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物； 5、假如所得蛋白产物较为粘稠，可 95℃加热 5 分钟，然后迅速冰浴 5 分钟，12000g 4℃离心 10 分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物。 6、20%的甘油保存于-70℃或-20℃。 注意事项： 1、在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；
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RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)#C1053
C1053 100mL 135元
描述：
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，可能是经典但最常用的细胞组织快速裂解液。
使用RIPA Buffer制备用于Western特别是用于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作，适用于大部分抗原表位的检测，特别适用免疫共沉淀检测蛋白质-蛋白质之间的相互作用。
我们提供的RIPA Buffer的成分为：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS，适于绝大多数蛋白-蛋白相互作用的免疫共沉淀。
组成：100 ml RIPA Buffer：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.
保存：−20 ºC or 4 ºC
培养细胞裂解：
1. 贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍。
悬浮细胞，离心收集，PBS洗一遍。
洗去血清中lgG干扰对免疫共沉淀是有益的，但对Western Blot可能并非必要。
2. 通常每106个细胞可加0.1 ml RIPA buffer。
这大致相当于6孔板的单孔(1-2 x106细胞)加入0.1~0.15 ml，或一个75 cm2培养瓶(1-2x107细胞)加1~2 ml。
裂解液和细胞应充分接触。
如果RIPA buffer不足量，细胞裂解效率将会降低。
3. 冰上放置数分钟，细胞裂解。
可用枪头轻轻吹打。
轻轻倾斜培养皿使裂解产物流向瓶皿的一边或一角，然后将之转移到1.5 ml离心管。
剧烈振荡30秒。
4. 12,000×g，4 ºC离心5分钟，取上清，即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
组织块裂解：
1. 组织剪切成细小的碎片。
每100毫克组织加入1 ml RIPA裂解液。
用玻璃匀浆器匀浆上下手动匀浆20次。
2. 将匀浆物转移到1.5 ml离心管。
3. 12,000×g，4 ºC离心5分钟，取上清，即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
说明：
1. 裂解液临用前可新鲜加入最终浓度为1mM的PMSF或其它蛋白酶抑制剂。
所幸的是对大多数蛋白质而言，不加蛋白酶抑制剂可能也不会有明显影响。
2. RIPA裂解液中蛋白样品含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法但可用BCA法或改良Lowry法测定蛋白浓度。
我公司有上述三种蛋白浓度测定试剂盒。