一株强抗镉成团肠杆菌的分离鉴定

ｇ ｌ ｏ ｍｅ ｒ ａ ｎ ｓ ） ． 抗性研 究表 明该 菌株 具极 强 的抗 镉 能 力 ， 最 小抑 制 浓 度 （ ＭＩ Ｃ） 达２ ０ ０ ０ ｍｇ ／ Ｉ ， 具有 很
高 的应 用价值 ．
关键 词 ： 镉； 成 团肠 杆 菌 ； 分 离鉴 定 ； 抗镉 基 因
高度 抗镉 的微 生 物 ， 文 章 就是 基 于 镉 是 一 种 分 散 型 金属 元 素 ， 其 性质 与 锌 相 似 ， 常 伴 生 于 铅锌 矿 中 ， 从
铅锌 尾矿 中筛 选 出一 株 高度 抗 镉 的 成 团 肠杆 菌 ． 通
过对 该 菌株进 行 形 态 学 观 察 、 Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ快 速 鉴 定 、 １ ６ Ｓ
ｒ Ｄ ＮＡ序 列分 析 ， 为 应 用 微 生 物 监 测 和 修 复 镉 污 染
提 供必要 的基础 ．
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 抗 镉细 菌 的筛选 与分 离 分 离抗镉 细 菌 的矿土 样 品取 自北京 市远 郊东 三 岔 地 区一座 长期 废 弃 的铅 锌 尾 矿 ， 利 用 原 子 吸 收 分 光 光度 法对 矿土 样 品 中 的 重金 属 镉 进 行 了分 析 ， 发 现 镉含 量高 达 ２ ２ ６ ． ９ ｍｇ ／ ｋ ｇ ， 一 般 在 世 界 范 围 内土 壤 中镉 的含 量仅 为 ０ ． ０ １ ～２ ． ０ ０ ｍｇ ／ ｋ ｇ ， 中值含 量 为 ０ ． ３ ５ ｍｇ ／ ｋ ｇ ＿ ｌ ６ ］ ， 此 数据 充 分证 明此铅 锌 尾 矿 中镉 含
泛 关 注 ］ ． 而 应 用 微 生 物 修 复 技 术 的关 键 就 是 找 到
８ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ 、 １ ０ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ的一 系列平板 上 ， 以便 筛选 出
高 度 抗 镉 的 细菌 ． １ ． ２ 抗 镉 细 菌 的 鉴 定 （ １ ） 形 态 学观 察 将 分 离 得 到 的 纯 培 养 菌 株 革
兰 氏染 色后 ， 利用 Ｌ Ｅ Ｉ Ｃ Ａ ＭＰ Ｓ ３ ０显 微镜 进 行 初 步 的形态 观察 ． 纯 培养菌 株 细胞经 过 收集 、 清洗 、 固定 、 乙醇梯 度脱 水 、 干燥 以及 喷金等 操作 后 ， 利用 扫描 电 子 显微 镜 （ Ｓ Ｅ Ｍ） 观察 细 菌细 胞 的精 细 结构 ． 同时 利 用 Ｘ射 线 能谱 技 术 研 究 纯 培 养 菌 株 细 胞 表 面 的 特 征 元素含 量 ． （ ２ ）Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ分 析 利 用 细 菌 对 ９ ５种 不 同单 一
（ 咸 阳职 业 技 术 学 院 ， 陕西 成 阳 ７ １ ２ ０ ０ ０ ）
摘 要 ： 从 北 京 市 远 郊 东 三 岔 地 区 一 处 废 弃 的 铅 锌 尾 矿 中 筛 选 到 一 株 强 高 度 抗 镉 的 细 菌． 通 过 细 菌形 态学观 察 、 Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ快 速 鉴 定 、 部分 １ ６ Ｓ ｒ ＤＮＡ 序 列 分 析 ， 鉴 定 此 菌 株 为 成 团肠 杆 菌 （ Ｐ ａ ｎ ｔ ｏ ｅ ａ ａ ｇ —
碳 源 的代谢 情况 来 鉴定 菌种 ， 每种 细 菌 会 形 成 各 自 特 有 的代谢 指纹 图谱 ． 适用 于 土壤 细菌 的鉴定 ＿ ７ ］ ．
根 据细 菌革 兰 氏染 色 结 果 ， 选取适合 的 Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ
鉴 定板 （ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ＧＰ ， ＯＮ） ， 将 新 鲜菌 落用 生 理盐 水 制
养， ５ ～７天后 观察 ， 将 长 出菌落 依 次转 接 于镉 质量 浓
度为 １ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ、 ２ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ 、 ３ ０ ０ ｍｇ ／ Ｌ 、 ５ ０ ０ ｍ ｇ ／ Ｌ 、
成“ 二次 污染 ” ． 微 生 物 修 复技 术 被 认 为 是 一 种 理 想 的、 有发 展前 景 的技 术 ， 现 已受 到 环 境 工 作 者 的 广
第 ２ ６卷
第Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｇａ ｎ ｓ ｕ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ
Ｖ０１ ． ２ ６ ＮＯ ．２
Ａｐ ｒ ． ２ ０１ ４
２ Ｏ １ ４年 ４月
一
株 强 抗 镉 成 团肠 杆 菌 的 分 离 鉴 定
窦敏 娜 ， 王 宁堂， 王 晓 霞
对重 金属 镉污 染监 测 和治 理 的常规 办法 是应 用
物理 措施 、 化学 方法 ． 大多数 物理 措施 及化 学方 法不
仅 成本 昂贵、 持 效期 短 、 对 大 面 积 的 污 染 作 用 不
大口 ］ ， 并且 会破 坏环 境 结 构 及 微 生 物 区 系 ， 可 能 造
２ ５ ０ ｍｇ ／ Ｌ 的缓 冲蛋 白水 固体平板 ， 在３ ０℃条件下 培
中 图分 类号 ： Ｘ５ ３
文献 标志 码 ： Ａ
文章 编号 ： １ ０ ０ ４ — ０ ３ ６ ６ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ２ — ０ ０ ０ ９ — ０ ３ １ ０ ０ ０ ｍＬ， Ｐ Ｈ为 ７ ． １ ～７ ． ３ ） ２ ５ ｍＬ中 ， ３ Ｏ℃振 荡 培 养 过夜． 静置 后取 含菌 上清 液 ２ Ｏ Ｉ 涂 布 于 含 镉
备 成适合 的浊度 菌悬 液 ， 用 ８孔移 液 器 将 菌 悬 液 分 加在 Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ鉴 定 板 的各 孔 中 ， 每孔 １ ５ ０ ｆ Ｌ， 共 ９ ６ 孔， 置 于培 养箱 内， ３ ０℃ ， 培养 ４ ～２ ４ ｈ ． 定 期用 微 平 板 计数 器记 录各 孔 吸光度 变化 ， 自动检 索数 据库 ， 得 到鉴定 结果 ｌ ８ ］ ．在 Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ９ ５孔平 板上 ， 除对 照孔 不 含碳源外 ， 每孔 都 含 有 Ｔ ｅ ｔ ｒ ａ ｚ ｏ ｌ ｉ ｕ ｍ Ｖｉ ｏ ｌ ｅ ｔ缓 冲 营