实验-肠道致病菌的分离鉴定
合集下载
肠道杆菌的分离鉴定
300
≤13
14~16
≥17
≤28
－
≥29
≤12
13~14
≥15Байду номын сангаас
≤12
13~14
≥15
≤11
12~14
≥15
≤13
14~22
≥23
≤15
16~20
≥21
≤12
13~16
≥17
七、肠道杆菌血清学鉴定
原理：细菌作为颗粒性抗原在相应抗体作用下可形成肉 眼可见的凝集颗粒。
可疑菌落 -阴性
可疑菌落 +阳性
标本
SS培养基
②
①
P
N ③
Name time 小辫法
④ 分区划线法
注意：每划完一个区进行下一区之前取菌环要灭菌
粪便标本接种： 标本：1）病人粪便（阳性标本）； 2）正常人粪便（阴性） 培养基：SS平板 操作：将SS平板上分两个区，分别接种病人和正 常人标本。 要求：使用正确的画线方法，必须培养出单个菌落以备后续实
氨苄西林
AM
ATCC25922 金黄色葡萄球菌
10
ATCC25923
大肠埃希氏菌
庆大霉素
GM
ATCC25922 金黄色葡萄球菌
10
ATCC25923
链霉素
S
大肠埃希氏菌 ATCC25922
10
金黄色葡萄球菌
红霉素
E
ATCC25923 肺炎链球菌
15
ATCC49619
磺胺甲基异 噁唑
SMX
金黄色葡萄球菌 ATCC25923
葡磷胨水 （绿色盖） E.a
葡磷胨水 （绿色盖） E.coli
标本中未知细菌的分离和鉴定
血平板 生长现象 形态学 特 征 触酶 试验 甘露醇试 验
结论：现象与论点、 结论：现象与论点、论据
浓汁标本可疑菌药敏实验结果
药品名称
抑菌圈直径
结论： 结论：
咽拭子
分离培养 血平板） （血平板）
革兰染色
革兰染色
胆汁溶菌试验 奥普托辛试验
荚膜染色 石炭酸复红单染） （石炭酸复红单染）
？
粪便标本
SS平板 SS平板
结果观察
1、菌落观察 2、形态学观察
（二）生化反应 触酶试验： 触酶试验： H2o2
氧化氢酶
H2o + o2
(-) (+)
菌种：可疑菌落 菌种： 试剂：3%过氧化氢 试剂：3%过氧化氢 方法： 方法：见右图 结果： 结果：见右图
甘露醇实验
甘露醇生化反应管
药敏实验
浓汁标本可疑菌生长现象及生化反应结果 观察
玻片凝集试验
粪便标本可疑菌生长现象及生化、 粪便标本可疑菌生长现象及生化、血清反 应结果观察
SS平板 SS平板 生长现象 形态学 特 征 单糖发酵试验 血清学试验
葡萄糖 乳糖
结论：现象与论点、 结论：现象与论点、论据
粪便标本可疑菌药敏实验结果
药品名称
抑菌圈直径
结论： 结论：
二、标本中未知肠道感染细菌 的分离鉴定程序
脓血便、 脓血便、肛拭子
标本 SS平板,EMB平板 SS平板,EMB平板 平板 选择/ 选择/鉴别培基
克氏双糖铁培养基, 克氏双糖铁培养基, 动力-靛基质动力-靛基质-尿素 半固体琼脂培养基
血清学鉴定 生化反应
玻片凝 集试验
设计性实验
临床标本中病原菌的分离与鉴定
3.尿 3.尿 标本： 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等 其他：革兰染液、靛基质试剂、 4.粪便 4.粪便 标本：肛门拭子 标本： 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等 菌多价血清、
结论：现象与论点、 结论：现象与论点、论据
浓汁标本可疑菌药敏实验结果
药品名称
抑菌圈直径
结论： 结论：
咽拭子
分离培养 血平板） （血平板）
革兰染色
革兰染色
胆汁溶菌试验 奥普托辛试验
荚膜染色 石炭酸复红单染） （石炭酸复红单染）
？
粪便标本
SS平板 SS平板
结果观察
1、菌落观察 2、形态学观察
（二）生化反应 触酶试验： 触酶试验： H2o2
氧化氢酶
H2o + o2
(-) (+)
菌种：可疑菌落 菌种： 试剂：3%过氧化氢 试剂：3%过氧化氢 方法： 方法：见右图 结果： 结果：见右图
甘露醇实验
甘露醇生化反应管
药敏实验
浓汁标本可疑菌生长现象及生化反应结果 观察
玻片凝集试验
粪便标本可疑菌生长现象及生化、 粪便标本可疑菌生长现象及生化、血清反 应结果观察
SS平板 SS平板 生长现象 形态学 特 征 单糖发酵试验 血清学试验
葡萄糖 乳糖
结论：现象与论点、 结论：现象与论点、论据
粪便标本可疑菌药敏实验结果
药品名称
抑菌圈直径
结论： 结论：
二、标本中未知肠道感染细菌 的分离鉴定程序
脓血便、 脓血便、肛拭子
标本 SS平板,EMB平板 SS平板,EMB平板 平板 选择/ 选择/鉴别培基
克氏双糖铁培养基, 克氏双糖铁培养基, 动力-靛基质动力-靛基质-尿素 半固体琼脂培养基
血清学鉴定 生化反应
玻片凝 集试验
设计性实验
临床标本中病原菌的分离与鉴定
3.尿 3.尿 标本： 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等 其他：革兰染液、靛基质试剂、 4.粪便 4.粪便 标本：肛门拭子 标本： 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等 菌多价血清、
实验六 微生物生理生化反应观察
2.明胶水解实验：每人接种二支明胶生化 管（分别接种大肠杆菌和金黄色葡萄球 菌），20℃培养2天，从20℃取出即观察 和记录各管的明胶水解情况，得出结论。
3.尿素水解实验：每人接种两支尿素生化 管（分别接种变形杆菌和金黄色葡萄球 菌），37℃培养2天，观察和记录每管培 养前后颜色变化，得出结论。
结果观察
克氏双糖铁
乳糖 葡萄糖 硫化氢
大肠杆菌 +黄色
黄 色
-
+ 伤寒杆菌 红 黑 黄 色 色色
痢疾杆菌
红 色
黄 色
-
变形杆菌
红 色
黑 色
+
生化反应管
尿素 H2S 葡萄糖 乳糖
- - ++ +
动力
+
-+ +- +
-- +- + ++ -+
智仙也。名之者/谁？太守/自谓也。太守与客来饮/于此，饮少/辄醉，而/年又最高，故/自号曰/醉翁也。醉翁之意/不在酒，在乎/山水之间也。山水之乐，得之心/而寓之酒也。节奏划分思考“山行/六七里”
生化反应管原理（2）
糖发酵试验，细菌具有多种酶系统能分解糖类，产 酸产气。不同的细菌对各种糖类的分解不同，因而 可以利用糖发酵进行各种细菌(特别是肠道细菌)的 鉴别。
大肠杆菌能发酵乳糖、葡萄糖产酸产气。 志贺痢疾杆菌、沙门氏菌、变形杆菌不分解乳糖，
但能分解葡萄糖产酸。 宋内氏痢疾杆菌迟缓发酵乳糖产酸，能分解葡萄糖
译文的美感，培养学生的翻译兴趣，但可能会降低译文的准确性。因此，需两种翻译方式都做必要引导。全文直译内容见《我的积累本》。目标导学四：解读文段，把握文本内容1．赏析第一段，说说本文
微生物实验 肠道病原菌的分离与鉴定
实验十 粪便中病原菌的分离鉴定-2
【目的要求】
1.熟悉粪便中肠道杆菌的分离与鉴定程序。 2.了解肠道杆菌生化反应、免疫学检测原理、结果和意义。 3.掌握肠道杆菌的生物学性状。
粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定程序
粪便标本
涂片，染色，镜检 （意义不大）
双糖铁培养基
SS培养基
生化反应： IMViC
药敏试 验
伤寒沙门菌
三、肠道杆菌的生物学性状--志贺菌
志贺菌
【实验报告】
记录粪便标本病原菌的分离与鉴定的步骤及结果。
大肠埃希菌
Rod-Shaped Bacterium, E. coli (division) (SEM x22,245) E. coli (0157:H7) a rod prokaryote. Hemorrhagic type
E. coli with fimbriae
三、肠道杆菌的生物学性状--伤寒沙门菌
血清学 试验
PCR试 验
一、上节课实验结果
1.SS琼脂平板结果及初步推断
结果： 平板上有几种菌？
ห้องสมุดไป่ตู้
二、本节课实验内容
1.双糖铁培养基结果观察 细菌动力，对葡萄糖和乳糖发酵的情况，是否产生硫化氢？
原始管
反应管
双糖铁培养基结果
菌名 大肠埃希菌
葡萄糖 （底层）
⊕
痢疾杆菌
+
伤寒沙门菌
+
肖氏沙门菌
⊕
乳糖 （斜面）
氨苄西林
氨苄西林
敏感 中介 耐药 10ug >=17 13--16 <=14
复方新诺明
>=16 9--15 <=10
复方新诺明
【目的要求】
1.熟悉粪便中肠道杆菌的分离与鉴定程序。 2.了解肠道杆菌生化反应、免疫学检测原理、结果和意义。 3.掌握肠道杆菌的生物学性状。
粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定程序
粪便标本
涂片，染色，镜检 （意义不大）
双糖铁培养基
SS培养基
生化反应： IMViC
药敏试 验
伤寒沙门菌
三、肠道杆菌的生物学性状--志贺菌
志贺菌
【实验报告】
记录粪便标本病原菌的分离与鉴定的步骤及结果。
大肠埃希菌
Rod-Shaped Bacterium, E. coli (division) (SEM x22,245) E. coli (0157:H7) a rod prokaryote. Hemorrhagic type
E. coli with fimbriae
三、肠道杆菌的生物学性状--伤寒沙门菌
血清学 试验
PCR试 验
一、上节课实验结果
1.SS琼脂平板结果及初步推断
结果： 平板上有几种菌？
ห้องสมุดไป่ตู้
二、本节课实验内容
1.双糖铁培养基结果观察 细菌动力，对葡萄糖和乳糖发酵的情况，是否产生硫化氢？
原始管
反应管
双糖铁培养基结果
菌名 大肠埃希菌
葡萄糖 （底层）
⊕
痢疾杆菌
+
伤寒沙门菌
+
肖氏沙门菌
⊕
乳糖 （斜面）
氨苄西林
氨苄西林
敏感 中介 耐药 10ug >=17 13--16 <=14
复方新诺明
>=16 9--15 <=10
复方新诺明
实验二肠杆菌科细菌的分离鉴定ⅰ(培养基制备)
熟悉培养基的制备流程
01
掌握培养基的基本成分和作用。
02
熟悉培养基的制备流程，包括称量、溶解、调pH值、灭菌等
步骤。
了解不同培养基的特性和用途，以便选择合适的培养基进行分
03
离鉴定。
了解肠杆菌科细菌的生物学特性
熟悉肠杆菌科细菌的形态、染色、 生长特性等基本生物学特性。
了解肠杆菌科细菌的抗原构造和 抵抗力。
进行分离和纯化。
肠杆菌科细菌鉴定
总结词
鉴定是确定分离得到的肠杆菌科细菌的种类和属性的 过程。
详细描述
在鉴定阶段，可以采用多种方法对细菌进行鉴定。形态 学鉴定可根据细菌的形态、染色反应等特征进行初步分 类。生理生化鉴定则通过检测细菌对不同底物的代谢反 应、酶活性等指标，进一步确定其属、种分类。此外， 分子生物学方法如16S rRNA基因测序也为细菌鉴定提 供了高分辨率和高准确性的手段。通过综合运用这些方 法，可以准确地对肠杆菌科细菌进行鉴定，为后续研究 提供基础数据。
04
实验结果与分析
菌落观察与记录
菌落形态
观察并记录不同菌落的形状、大小、颜色、光泽度等 特征，以便后续的鉴别和分类。
生长速度
记录不同菌落在培养基上的生长速度，了解其生长特 性。
菌落特征
通过显微观察和染色等方法，进一步了解菌落的细胞 形态、排列方式等特征。
生化试验结果分析
糖发酵试验
分析不同菌种对糖的发酵能力，了解其代谢 特性。
05
注意事项与安全防范措施
实验过程中的注意事项
实验前准备
确保实验室内环境清洁，穿戴实验服 和口罩，检查实验器材是否齐全。
培养基制备
按照标准配方准确称量试剂，严格控 制培养基的pH值和灭菌时间，确保 培养基的质量。
医学微生物学实验
（2）伤寒杆菌
生物学特性: G镜下为杆状,有菌毛，除个 别外都有周鞭毛，一般无荚 膜，均无芽孢。 兼性厌氧，营养要求不高, 不发酵乳糖或者蔗糖，对葡 萄糖，麦芽糖，甘露糖发酵， 产酸不产气，其他沙门菌产 酸产气，可在普通琼脂培养 基上生长 最适宜温度为37度,最适宜 pH为7.4
菌落特点: 圆形,凸起,无色，细小，半透明,表面光滑, 湿润,直径2-3mm.
紫外线对细菌的影响 取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养 皿中，然后按图所示揭开平皿盖，臵于紫外线 下照射30分钟，然后盖好盖子，臵37℃培养 24h后取出观察结果。
1.2.2化学消毒剂对细菌的影响
1 促进菌体蛋白质变性或凝固。
2 干扰细菌酶系统和代谢。 3 损伤细菌的细胞膜，影响细菌的化学组成，物理 结构和生理活动，从而发挥防腐、消毒至灭菌作用。
方法： （每4个人一组，两支鲎试剂，一支实验一支对照） 1.取两支鲎试剂打开，分别加入0.1ml 鲎试剂 溶解水，使之溶解 2.其中一支加入0.1ml内毒素，标记上实验组， 另一支加入0.1ml溶解水，作为对照 3.垂直放入37℃温箱，20--30分钟观察结果 结果： 实验组出现凝固，对照组不出现凝固
⊕
-
痢疾杆菌
伤寒杆菌
-/+
分离培养方法
将粪便标本以分区划线法接种到SS培养基。 (每个实验室8个平板） (接种好后，做好标记，用胶布按班绑好) 放入37℃温箱中培养24小时。取出放4℃冰 箱中保存备用。
三、消毒灭菌（2学时）
1. 细菌在Байду номын сангаас然界的分布及理化因素 对细菌的影响
2. 高压蒸汽灭菌法
病原生物学实验课2-肠道病原菌的分离与鉴定1ppt-Po
方法
本实验四人一组，每人取6只小试管，排成一列，计四列 为一完整试验。分别标明每列管号和诊断菌液如“O”、 “OH”、“PA”、“PB”。按下表先向每管加生理盐 水0.5ml，再加10倍稀释病人血清0.5ml于第l管，做顺序 的等倍稀释，最后加入等量的诊断菌液，充分混匀，置 37℃ 2~4h，再放室温24小时后观察结果。
E.M.B琼脂培养基的制备
成分
蛋白胨
10g
磷酸氢二钾
2g
琼脂
20g
乳糖溶液(20％)
50ml
伊红溶液(2％)
20ml
美蓝溶液(0.5％) 20ml
蒸馏水磷酸氢二钾加温溶化于蒸馏水中
②校正pH值为7.6加入琼脂
③煮沸溶化过滤后分装三角瓶中，每瓶定量分装
④15磅30min高压灭菌
用途 用于分离肠道致病菌，是一种鉴别培养基。并有 弱的选择作用。
肥达氏反应
肥达氏反应通常用已知的伤寒杆菌“O”、“H”菌液和 甲、乙型副伤寒杆菌“H”菌液与病人血清作定量凝集试 验(试管法)，以检测病人血清中有无相应抗体存在，根据 抗体含量多少及增长情况用于伤寒、副伤寒病的辅助诊断。
材料 ①待检可疑伤寒病人血清(1:10稀释) ②诊断菌液：伤寒杆菌“O” (O) 伤寒杆菌“H” (OH) 甲型副伤寒杆菌“H” (PA) 乙型副伤寒杆菌“H” (PB) ③生理盐水 ④吸管，小试管等。
谢谢大家！
试管
1
2
3
4
5
6
生理盐水（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
病理血清10X（ml）
0.5↘
0.5↘
0.5↘
0.5↘
0.5↘
0.5→ 弃去
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
有鞭毛，有动力，短小杆菌。 （二）、培养特征
1、需氧或兼性厌氧，最适温度37℃， PH7.2~7.4。
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
第11页
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
(沙门氏菌（红色）侵入人体细胞 第12页
• 2、对营养要求不高，在普通培养基生长良 好，37 ℃，24h，能形成菌落中等大小，直 径2～3mm，圆形或卵形，表面光滑湿润， 无色半透明，边缘整齐菌落
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
第23页
四、微生物检验
（一）、基本步骤（程序定→汇报
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
第24页
• 1、前增菌：用无选择性培养基使处于濒死状 态M恢复活力;
• 2、选择性增菌：使沙门氏菌优势繁殖，基它 细菌变到抑制;
BS上菌落
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
SS上菌落
第28页
3、五项生化试验
H2S、靛基质 、 PH7.2尿素酶、KCN 、 赖氨酸脱羧酶
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
第29页
（1）三糖铁培养培养
经典沙门氏菌在三糖铁培养上特征： 表面（-）粉红色、底层（+）黄色、 H2S （+）底层有黑色、有动
• 3、在液体培养基中，呈均匀混浊性生长， 无菌膜。
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
第13页
• （三）、生化特征
• 1、发酵GLU，甘露醇，山梨醇产酸产气（伤 寒鸡伤寒沙门氏菌少数不产气）
• 2、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇
• 3、多数产生H2S（+），不产靛基质（-）， 不分解尿素（-），不产生乙酰甲基甲醇（ V—P）（-），
• 3、选择性平板分离培养：分离出所需细菌;
1、需氧或兼性厌氧，最适温度37℃， PH7.2~7.4。
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
第11页
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
(沙门氏菌（红色）侵入人体细胞 第12页
• 2、对营养要求不高，在普通培养基生长良 好，37 ℃，24h，能形成菌落中等大小，直 径2～3mm，圆形或卵形，表面光滑湿润， 无色半透明，边缘整齐菌落
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
第23页
四、微生物检验
（一）、基本步骤（程序定→汇报
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
第24页
• 1、前增菌：用无选择性培养基使处于濒死状 态M恢复活力;
• 2、选择性增菌：使沙门氏菌优势繁殖，基它 细菌变到抑制;
BS上菌落
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
SS上菌落
第28页
3、五项生化试验
H2S、靛基质 、 PH7.2尿素酶、KCN 、 赖氨酸脱羧酶
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
第29页
（1）三糖铁培养培养
经典沙门氏菌在三糖铁培养上特征： 表面（-）粉红色、底层（+）黄色、 H2S （+）底层有黑色、有动
• 3、在液体培养基中，呈均匀混浊性生长， 无菌膜。
食品质量检测技术肠道致病菌的检验与鉴定
第13页
• （三）、生化特征
• 1、发酵GLU，甘露醇，山梨醇产酸产气（伤 寒鸡伤寒沙门氏菌少数不产气）
• 2、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇
• 3、多数产生H2S（+），不产靛基质（-）， 不分解尿素（-），不产生乙酰甲基甲醇（ V—P）（-），
• 3、选择性平板分离培养：分离出所需细菌;
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验四 肠道致病菌分离鉴定
病原生物学教研室
Content
示教： 主要肠道杆菌，大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌 及变形杆菌的形态、染色性 主要肠道杆菌的培养特性：SS平板/EMB平板 主要肠道杆菌的生化反应：双糖、尿素分解反应
操作： 肥达反应 粪便肠道致病菌的分离和鉴定——血清学 (*续)
于孔底 （＋＋）上层液半透明，细菌在孔底有明显凝集 （＋）上层液混浊，孔底有少量凝集 （－）不凝集，同于对照
• 书写报告：＋＋反应的最高稀释度为凝集效价
肥达试验结果分析（2）
凝集效价：伤寒沙门菌O≥ 1：80，H≥ 1：160 副伤寒沙门菌H≥ 1：80
动态观察：双份血清，效价≥ 4倍 O与H抗体的诊断意义：O—IgM, H—IgG
粪便标本肠化反应 （双糖管）
血清学鉴定
SS 平板挑取可疑菌落2个 (无色,透明,小菌落)
接种双糖管
培养,观察
SS平板—— 分离肠道病原菌的强选择培养基
成分：
基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌绿、 中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄）
非致病菌:紫黑色
双糖管
▼ 观察：
上层：乳糖,Fe2+ 固体
下层：葡萄糖 半固体
致病菌红色
发酵乳糖
非致病菌黄色
H2S试验
发酵葡萄糖(产酸产气)及动力
指示剂:酚红（pH6.8-8.4, 黄 红）
乳糖 葡萄糖 动力 硫化氢 尿素酶
大肠埃希菌 ＋
+
－
痢疾志贺菌 －
+
－
－
伤寒沙门菌 －
+
+
+/－
副伤寒杆菌 －
作用：
乳糖，中性红：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌 落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。
胆盐、枸橼酸钠、煌绿：抑制肠道非致病菌如E.coli的生长，对肠道 致病菌抑制作用弱。可增加标本接种量以提高肠道病原菌分离率。
病原菌:小,无色,透明 非致病菌:大,红色
EMB平板
病原菌:透明,无色
+
+
－
变形杆菌
－
+
+
+
双糖管结果观察
红 色
黄 色
可疑肠道致病菌
黄 色
黄 色
大肠埃希菌
双糖管接种方法
穿刺—斜面接种法
肥达试验
原理：
伤寒沙门菌菌 体O 抗原
伤寒沙门菌鞭 毛Ｈ抗原
甲型副伤寒沙门 菌鞭毛H抗原
肖氏沙门菌鞭毛 Ｈ抗原
已知抗原
病人血清中 的未知抗体
凝集
肥达试验
操作：
微量 板
1
2
3
4
录像： 厌氧菌
肠道杆菌的分类
肠杆菌科
埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 克雷伯菌属 变形杆菌属
ETEC, EIEC, EPEC, EHEC, EAEC
痢疾、福氏、 鲍氏、宋内
伤寒，副伤寒， 猪 霍乱，肠炎
肠道杆菌的基本特征
形态结构相似 培养要求不高 生化反应活跃 抗原结构复杂 抵抗力不强 易发生变异
5
6
7
8
伤寒O 0.2ml
0.2ml
伤寒H 0.2ml
生 理
混
盐 水
匀
副甲H 0.2ml
病
人
血
清
肖氏H 0.2ml
0.2ml 0.2ml 0.2ml
1:20
1:40
1:80
生理 1:160 1:320 1:640 1:1280 盐水
Ag加样方向
抗 原
肥达试验结果分析（1）
凝集程度：
（＋＋＋＋）上层液澄清，细菌全部凝集于孔底 （＋＋＋）上层液基本透明，细菌大部分（75％）凝集
17
O、H抗体均高：肠热症 O、H抗体均低：未患病 O抗体不高，H抗体高：回忆反应，预防接种 O抗体高，H抗体不高：感染早期，交叉反应
上次实验结果观察：
脓汁标本中的两种菌落：
黄色，完全溶血
革兰染色
白色，不溶血
接种甘露醇发酵管
观察是否发酵甘露醇
The End
Thanks
以上有不当之处，请大家给与批评指正， 谢谢大家！
病原生物学教研室
Content
示教： 主要肠道杆菌，大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌 及变形杆菌的形态、染色性 主要肠道杆菌的培养特性：SS平板/EMB平板 主要肠道杆菌的生化反应：双糖、尿素分解反应
操作： 肥达反应 粪便肠道致病菌的分离和鉴定——血清学 (*续)
于孔底 （＋＋）上层液半透明，细菌在孔底有明显凝集 （＋）上层液混浊，孔底有少量凝集 （－）不凝集，同于对照
• 书写报告：＋＋反应的最高稀释度为凝集效价
肥达试验结果分析（2）
凝集效价：伤寒沙门菌O≥ 1：80，H≥ 1：160 副伤寒沙门菌H≥ 1：80
动态观察：双份血清，效价≥ 4倍 O与H抗体的诊断意义：O—IgM, H—IgG
粪便标本肠化反应 （双糖管）
血清学鉴定
SS 平板挑取可疑菌落2个 (无色,透明,小菌落)
接种双糖管
培养,观察
SS平板—— 分离肠道病原菌的强选择培养基
成分：
基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌绿、 中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄）
非致病菌:紫黑色
双糖管
▼ 观察：
上层：乳糖,Fe2+ 固体
下层：葡萄糖 半固体
致病菌红色
发酵乳糖
非致病菌黄色
H2S试验
发酵葡萄糖(产酸产气)及动力
指示剂:酚红（pH6.8-8.4, 黄 红）
乳糖 葡萄糖 动力 硫化氢 尿素酶
大肠埃希菌 ＋
+
－
痢疾志贺菌 －
+
－
－
伤寒沙门菌 －
+
+
+/－
副伤寒杆菌 －
作用：
乳糖，中性红：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌 落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。
胆盐、枸橼酸钠、煌绿：抑制肠道非致病菌如E.coli的生长，对肠道 致病菌抑制作用弱。可增加标本接种量以提高肠道病原菌分离率。
病原菌:小,无色,透明 非致病菌:大,红色
EMB平板
病原菌:透明,无色
+
+
－
变形杆菌
－
+
+
+
双糖管结果观察
红 色
黄 色
可疑肠道致病菌
黄 色
黄 色
大肠埃希菌
双糖管接种方法
穿刺—斜面接种法
肥达试验
原理：
伤寒沙门菌菌 体O 抗原
伤寒沙门菌鞭 毛Ｈ抗原
甲型副伤寒沙门 菌鞭毛H抗原
肖氏沙门菌鞭毛 Ｈ抗原
已知抗原
病人血清中 的未知抗体
凝集
肥达试验
操作：
微量 板
1
2
3
4
录像： 厌氧菌
肠道杆菌的分类
肠杆菌科
埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 克雷伯菌属 变形杆菌属
ETEC, EIEC, EPEC, EHEC, EAEC
痢疾、福氏、 鲍氏、宋内
伤寒，副伤寒， 猪 霍乱，肠炎
肠道杆菌的基本特征
形态结构相似 培养要求不高 生化反应活跃 抗原结构复杂 抵抗力不强 易发生变异
5
6
7
8
伤寒O 0.2ml
0.2ml
伤寒H 0.2ml
生 理
混
盐 水
匀
副甲H 0.2ml
病
人
血
清
肖氏H 0.2ml
0.2ml 0.2ml 0.2ml
1:20
1:40
1:80
生理 1:160 1:320 1:640 1:1280 盐水
Ag加样方向
抗 原
肥达试验结果分析（1）
凝集程度：
（＋＋＋＋）上层液澄清，细菌全部凝集于孔底 （＋＋＋）上层液基本透明，细菌大部分（75％）凝集
17
O、H抗体均高：肠热症 O、H抗体均低：未患病 O抗体不高，H抗体高：回忆反应，预防接种 O抗体高，H抗体不高：感染早期，交叉反应
上次实验结果观察：
脓汁标本中的两种菌落：
黄色，完全溶血
革兰染色
白色，不溶血
接种甘露醇发酵管
观察是否发酵甘露醇
The End
Thanks
以上有不当之处，请大家给与批评指正， 谢谢大家！