常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作程序
常用液相色谱柱使用与保养
常用液相色谱柱使用与保养液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种分离和分析物质的方法，广泛应用于化学、生物化学、环境科学、食品科学等各个领域。
在液相色谱系统中，色谱柱是其中最为重要的组成部分之一，对色谱分离的效果和分析结果有着重要影响。
因此，正确的使用和保养色谱柱是保证色谱实验质量和延长色谱柱寿命的关键。
一、色谱柱的选择1.根据分析需要选择合适的色谱柱类型，如反相、离子交换、凝胶、手性等。
选用的色谱柱应能实现样品分离的目标。
2.考虑色谱柱尺寸，如柱径和柱长。
柱径越小，理论板高度越高，分离效果越好，但同时也容易增大柱后压力。
柱长则决定了分离时间，通常根据样品的复杂程度和实验要求进行选择。
3.考虑色谱柱填充物，如C18、C8、C4等反相填料。
填充物的理化性质不同，会对分离效果产生影响。
根据样品性质和分离目标选择填料。
二、使用色谱柱的注意事项1.在使用前检查色谱柱外观，确保柱壁完好无损，无裂缝或损坏。
同时检查柱头端口是否干净，无污物残留。
2.进行柱前的处理，如样品预处理和溶剂预处理，保证样品的稳定性和纯度，避免对色谱柱产生不利影响。
3.操作时避免剧烈振荡、震动或摇晃色谱柱，以免对柱填料产生机械损伤。
4.在柱温控制装置的帮助下，保持色谱柱运行温度的稳定，以确保分离结果的重复性和再现性。
三、色谱柱的保养1.使用前、使用后和中间暂停使用时需正确保管色谱柱。
使用前，色谱柱应存放在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射。
使用后，将色谱柱用保护帽覆盖，防止灰尘、气体和湿气进入柱内。
中间暂停使用时，用适当的主流溶液保养柱床，避免干燥。
保养柱床时需将色谱柱倒放，使柱床保持湿润状态。
2.避免在色谱柱上溢液，以免引起柱床断裂或填料活化。
使用前，尽量将样品溶液过滤或超声处理，避免样品中存在大颗粒杂质。
3.保证洗涤液和贮存液的纯度和质量，避免因杂质和离子引起色谱柱填料的损坏。
对于需要多次使用的色谱柱，洗涤液需要选择与柱填料相容的溶剂进行洗脱。
液相色谱柱安全操作及保养规程
液相色谱柱安全操作及保养规程液相色谱柱是一种常见的分析仪器，在化学、生化、食品、药品、环境等领域得到广泛应用。
因为该分析仪器设备复杂、性能优越、分析精度高，所以在使用时需要注意安全操作和保养规程。
本文将从以下几个方面详细介绍：•操作前准备•操作过程注意事项•操作后的清洗和保养操作前准备在开始操作前，第一步必须检查液相色谱柱的状态，避免因使用中出现损坏等问题影响分析结果。
首先要检查柱罐和柱床是否正常。
若柱床内出现裂缝、变形或渗漏现象，柱就已损坏，不能再继续使用。
其次需要确认流量计、泵、检测器等其他连接设备是否正常，以免造成柱损坏或分析结果失真。
接下来，需要准备相关耗材和溶液，耗材包括固相保护罐、固相萃取柱、色谱柱、纯水、甲醇、乙醇、氨水等。
使用前，要确保各种溶剂都为新开封的纯溶液。
在操作前准备中，还应注意操作手套的使用。
液相色谱柱是高精度分析设备，因此在安全操作中必须佩戴手套，避免因手上油脂、灰尘或细菌等的污染而引起柱床阻塞或色谱杂质的产生。
操作手套应该选用热塑性弹性体材料制作的，手套的外表面需要干爽、无粉、不胶着。
操作手套更换频率应视实际操作情况而定，但至少要每小时更换一次，以保证色谱柱系统的稳定性。
操作过程注意事项在进行液相色谱柱分析前，必须注意以下事项：1. 注入样品时必须注意准确注入样品时必须严格按照固定的容积，并尽可能使样品溶剂与色谱柱中的溶剂相同。
如果溶剂不同，会使分析结果产生偏移和误差。
2. 溶剂配制要准确在制备溶剂时，必须准确控制各浓度和体积，防止出现误差。
为了避免混杂、污染等情况发生，液相色谱柱系统的各项操作必须迅速和准确，尽量避免无意义而又不必要的搅动和震动。
3. 流量、温度要控制恰当液相色谱柱系统，包括液相色谱泵、流量计、检测器、自动采样器等，为了得到可靠数据，必须准确和恰当地控制它们。
流量、温度、进样量等参数的不正确设置，可能会导致实验失误或者测量数据不准确。
流量控制器的精度一般设为0.1%，进样器量程要与所确定体积相吻合，保持恰当的温度，则可以避免柱床挤压和杂质的产生。
液相色谱柱的使用及保养
C18, C18, C18, C18,
phenyl, CN, NH2, Silica C8, phenyl, CN, Silica C8, Silica C4 C18, C8
色谱柱的清洗
对所做的样品要有充分的了解
用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗
硅胶柱的一般方法
先用甲醇洗去极性杂质
回收率低，不出峰
“不可逆”吸附 固定相过强或流动相过弱 非特异性吸附
色谱柱以外的因素（一）
“柱效”问题，不一定是色谱柱问题！
仪器问题：连接不好造成死体积
进样器
检测器
管路，连接口 保护柱 在线过滤器堵塞
流动相问题：色谱柱未平衡好 进样量太大
色谱柱与仪器的联接
影响实验结果好坏的最重要因素
是决定性的步骤
样品预处理常用的方法
高速离心 过滤、超滤 选择性沉淀 衍生反应 液-固萃取 其他
/ 液-液萃取
Sep-Pak样品处理小柱
样品预处理的过程
去除微粒
过滤
过滤膜/过滤装置
有机(0.5m)/无机(0.45m)
膜片可更换
流速∶1.0 ml/min 纸速∶20 cm/min (用记录仪时，接检测器10mV档) 检测器灵敏度∶0.5-1.0AUFS (用记录仪时) 检测器时间常数∶小于0.2
谱带展宽（ml） =1000×W（cm）/20 （记录仪） =1000×W（min） （工作站）
液相色谱实用技术（二）
样品衍生∶氨基酸分析
PT法 IA CG O方 NS C
R
-
N C H O CO ຫໍສະໝຸດ 2氨 基 酸异酯 硫 氢 酸 苯
S R N H O H C C H NC O
液相色谱柱的使用和维护保养
液相色谱柱的使用和维护保养液相色谱柱是一种广泛使用的分离技术，可用于分离和测定复杂混合物中的组分。
由于液相色谱柱具有精确分离、操作简便、分离效率高等特点，因此，越来越多的实验室都开始使用该技术。
在使用液相色谱柱时，正确的维护保养非常关键。
本文将介绍液相色谱柱的使用方法和维护保养技巧，以便确保您的分离实验能够得到最佳的结果。
一、液相色谱柱的使用1. 准备工作使用液相色谱柱之前，必须先进行预备工作。
这包括：清洗和准备液相色谱柱以免携带有污染物。
准备需要分离和测定的样品。
准备适当的流动相。
流动相必须符合样品的性质。
液相色谱柱的流动相应该是无色的，纯净的水或相应的缓冲液，并具有必要的缓冲能力。
根据柱的尺寸来选择适当的样品注射量。
2. 柱的装配通常情况下，液相色谱的柱是由管状的柱壳、填充柱节、柱端固定件和柱段之间的密封件组成。
在对柱进行装配的时候，对组件应该加强检查以保证每一个元件的质量。
柱被放置在可控压力的色谱装置中，直到达到设定的温度，流动相通过柱床高度。
在样品通过柱床的过程中，要确保流动相的速度恰好足够将所有的组分都分开并在规定的时间内溶出。
3. 分析过程准备工作完成后，可以开始进行样品的分离实验。
在整个过程中，以下措施应予以注意：在样品从样品室进入色谱柱之前，流动相必须在柱中流动。
否则，在注入样品时，将有空气囤积在柱床中，会在透射检测器处产生噪音。
更换液相色谱柱的流动相时需要小心，因为对于一些化学品来说，即使是微量的杂质也会对结果产生影响。
如果发现柱床粘住或困住，不应使用力量来拉动柱子，而应该使用相反方向的流动相，以使样品回到某一个位置，并反向流动一会，这样可以避免样品损坏柱子床。
二、液相色谱柱的维护保养液相色谱分析的成功与否，除了预备工作和分析过程外，还与样品的制备、取样位置以及样品进入液相色谱柱中的流动相的条件等因素有关。
因此，经常做好液相色谱柱的保养工作，可以有效防止柱子损坏，延长其寿命并保证实验结果的准确。
日积月累-常用液相色谱柱的规范化使用与保养标准操作程序.
1 目的规范液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。
延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。
提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。
2 范围本SOP适用于###########使用色谱柱的仪器分析操作人员及相关管理人员。
3 责任本程序由新药研发部组织实施，###########备仪器操作人员具体执行。
4 定义液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。
色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。
运载溶剂（Shipping Solvent）：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。
保存条件（Storage Conditions）：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。
保存溶剂（Storage Solvent）：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。
5 程序5.1 液相色谱柱的分类目前，我公司色谱分析涉及到的液相色谱柱主要有6大类，具体详见5.2。
5.2 液相色谱柱的使用与保养（仅列举常用分析柱）5.2.1液相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂（Shipping Solvent）饱和，密封，由于运输过程周期较长，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。
若老化方法不正确或时间不够，极易导致色谱柱在使用较短时间后即产生分离度下降、峰形变差、峰拖尾等柱效降低的情况。
需根据色谱柱不同类型选择不同饱和与老化方法。
1、普通C8及C18反相色谱柱（C8&C18 Reversed-phase chromatography column）：（1）准备新鲜超纯水及色谱级乙腈或甲醇，冲洗色谱仪器系统，保证仪器系统管路干净。
液相保护柱安全操作及保养规程
液相保护柱安全操作及保养规程液相保护柱是一种重要的分析仪器，承担着保护液相色谱柱和延长使用寿命的重要任务。
液相保护柱使用时需要严格遵守安全操作规程和进行定期保养，以确保其正常运行和延长使用寿命。
本文将介绍液相保护柱的安全操作规程和保养规程，旨在提高使用者的安全意识和保护仪器的维护质量。
安全操作规程1. 仪器安装液相保护柱应安装在一个干燥、通风、远离水源和化学品的地方。
在安装液相保护柱时，应确保仪器与色谱柱和检测器之间的连接正确且紧固，以避免连接处泄漏。
2. 操作前的准备在使用液相保护柱前，首先要检查保护柱的状态是否正常。
应检查保护柱是否清洁，有无损坏或磨损，保护柱内部是否存在杂质，并进行必要的清洁。
此外，还应检查保护柱的连接是否紧固，以确保其正常运行。
3. 操作过程在使用液相保护柱时，应注意以下几点：•使用液相保护柱前，应先进行洗脱，以保证样品不会粘附在柱子表面；•液相保护柱要与样品充分接触，可采用多种方法如插管或长针头等；•使用液相保护柱时不要超过其最大流量，以免影响保护柱的使用寿命；•液相保护柱使用一段时间后，应及时更换，以确保保护液相色谱柱的效果。
4. 操作后的处理在使用液相保护柱后，应立即清洗保护柱，以避免保护柱内部的杂质对色谱柱造成污染。
清洗液相保护柱的方法包括：用甲醇、乙醇或水洗，然后用纯水清洗干净并放置在自然通风处待干燥。
保养规程1. 周期性检查液相保护柱在使用一段时间后，应进行常规的检查。
检查内容包括：•检查保护柱连接处是否有泄漏；•检查保护柱是否有磨损或损坏；•检查内部填充物是否存在杂质或缺失；•检查保护柱表面是否清洁。
2. 常规维护液相保护柱在日常使用中，应做好以下几点常规维护：•定期清洗液相保护柱，以保证柱内无杂质或残留物；•定期更换液相保护柱，以确保保护柱的有效期；•定期检查保护柱连接处是否紧固；•避免液相保护柱受到高温、高压、振动或较强的机械冲击，以避免损坏保护柱。
3. 不良情况处理如果发现液相保护柱发生不良情况，如柱子表面出现损伤或污垢、柱子内部出现杂质、连接处泄漏等情况，应立即停止使用，并采取以下处理措施：•清洗和更换液相保护柱，如柱子表面出现损伤或污垢；•检查、清除杂质或更换液相保护柱，如柱子内部存在杂质；•确认连接处是否正确，如连接处泄漏，应及时紧固。
色谱柱维护系统安全操作及保养规程
色谱柱维护系统安全操作及保养规程色谱柱是色谱分析的核心部件，对于任何一种色谱柱维护系统，都需要注意其安全操作和保养规程。
本文就通过对色谱柱维护系统的安全操作和保养规程进行概述，希望能够对相关从业人员有所帮助。
安全操作1. 使用前检查在使用色谱柱前，必须对其进行检查，确保没有受到损坏或者有其他异常情况。
具体需要注意的内容如下：•检查色谱柱的接口是否正确，是否与仪器连接牢固；•检查柱体是否有异味；•检查柱体表面是否晶莹剔透；•检查柱尖是否损坏；•对柱子进行表面清洁后，观察柱子是否有损伤或表面划痕等。
2. 使用时注意在使用色谱柱的过程中，也要注意以下安全操作：•在操作之前要戴好手套、面罩和护目镜等安全装备；•操作前，要熟悉试剂的性质，并对一定会产生危险的试剂进行特别注意；•操作人员必须严格遵守操作规程，确保自己和周围人员的安全；•操作期间禁止抽烟、喝饮料或进食等易造成创伤的行为。
3. 停用后处理停用后的色谱柱，也需要特别处理才能保障安全：•在停用之前，要将流路关闭，把柱子从仪器上拆下来；•在取下柱子后，在空气中晾干4~5个小时，使得柱子干燥，避免受潮；•在存放的时候，避免阳光直接曝晒。
保养规程色谱柱是分析样品的基础设备，在使用过程中，需要在保证其性能的同时，进行正确的保养，以确保其寿命和性能一直处于在稳定的状态。
1. 清洗柱子在使用前后，需要对色谱柱的柱体进行清洗处理。
步骤如下：•先将柱子插入，确保流路紧闭，电压关断；•开启胶管瓶，在样品成功进入废柱处时关闭胶管瓶；•反向从样品向废针冲洗；•开启旋钮，调整反向泵和正向泵的比例为3:7时，开始正向注入清洗溶液洗脱样品，连续运行3个扫描周期长度；•调整正向和反向泵的比例为1:1，清洗溶液在整个柱子内循环1个小时左右（视污染程度而定）；•关闭胶管瓶，将柱子拿出来，用纯水和90%甲醇交替冲洗，保证柱子表面干净；•最后，将柱子放置在胶盖里面干燥。
2. 保养柱子在使用色谱柱一段时间之后，为了保持柱子的性能，在必要的时候还需要对柱子进行保养处理。
液相色谱柱使用与维护
4、故障处理 30分钟，再换100%甲醇0.2流速冲洗10分钟 ，再换三氯甲烷0.2流速冲洗10分钟，再换 异丙醇0.1流速冲洗10分钟，再换三氯甲烷 0.2流速冲洗10分钟，再换100%甲醇0.2流速 冲洗10分钟，最后换10%甲醇0.2流速冲洗30 分钟，即可使用。
4、故障处理 4.3、色谱柱前端严重污染或柱头塌陷： 先按5.1.2处理，在冲完100%甲醇后停止操 作，取下色谱柱，用扳手打开色谱柱，用平 头螺丝刀将污染或塌陷部分的填料挖出（注 意向柱头滴入100%甲醇，保持柱头湿润状态 ：同时按前述方法处理色谱柱筛板），再将 事先用100%甲醇调成糊状的好的填料填入柱 头，多填出一点，然后装好色谱柱，用100% 甲醇冲柱，从0.2流速开始逐渐提升流速至 2.6-3.0（将新填的填料压紧），再把流速
1.3、新柱使用前应在其前端再加一根保护 柱。 1.4、按照冲柱的流程用5-10%甲醇或乙腈（ 与流动相中的有机溶剂一致）先冲洗保护柱 （先不接新色谱柱，废液直接排掉）30分 钟，再接色谱柱冲洗。 1.5、换上流动相，开始平衡系统，接下来 的操作步骤与旧色谱柱相同。
2、色谱柱柱使用过程中的注意事项 2.1、排气时一定要先打开排气阀，即使 系统有超压停机的保护功能，但是色谱柱已 经被瞬间高压冲塌柱头，基本无法使用。 2.2、使用过程中，要避免高浓度缓冲盐 溶液与有机相相遇，容易使缓冲盐溶液中的 盐分析出，损害色谱柱。 2.3、使用过程中，要避免气泡进入系统
色谱柱使用与维护
1、新色谱柱使用前的准备 1.1、按照色谱柱的出厂检验报告中的系统 条件测定报告中给出的被检测物质，考察色 谱柱性能是否与出厂时一致，发现问题及时 处理，避免影响样品测定。 1.2、确认色谱柱性能与出厂时一致后，登 记色谱柱台账：品牌、尺寸、填料、P/N 号 码（对应色谱柱规格）、S/N号码（色谱柱 序列号，每根都有唯一的序列号）
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目录页码1. 目的 (3)2. 范围 (3)3. 责任 (3)4. 定义 (3)5. 程序 ............................................................................................................................. 3～256. 相关文件 (25)7. 参考资料 (25)8. 其它 (25)1 目的规范液相色谱柱的使用与管理；液相色谱柱标准化老化与再生；剖析液相色谱柱常见问题与解决办法。
延长色谱柱使用寿命，降低色谱柱使用成本。
提高分析人员液相色谱柱使用与维护水平。
2 范围本SOP适用于原料药研究部、制剂研究一部、制剂研究二部、制剂研究三部、中试中心使用色谱柱的仪器分析操作人员及相关管理人员。
3 责任本程序由新药研发部组织实施，并由相关部门经理及药学研究助理监督，设备仪器操作人员具体执行。
4 定义液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。
色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。
运载溶剂（Shipping Solvent）：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。
保存条件（Storage Conditions）：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件，包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存条件。
保存溶剂（Storage Solvent）：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与比例的溶液。
5 程序5.1 液相色谱柱的分类目前，我公司色谱分析涉及到的液相色谱柱主要有6大类，具体详见5.2。
5.2 液相色谱柱的使用与保养（仅列举常用分析柱）5.2.1液相色谱柱的老化处理与使用保养程序新购色谱柱出厂前均采用适合的运载溶剂（Shipping Solvent）饱和，密封，由于运输过程周期较长，柱床容易干涸，所以新柱使用前需重新饱和与老化。
若老化方法不正确或时间不够，极易导致色谱柱在使用较短时间后即产生分离度下降、峰形变差、峰拖尾等柱效降低的情况。
需根据色谱柱不同类型选择不同饱和与老化方法。
1、普通C8及C18反相色谱柱（C8&C18 Reversed-phase chromatography column）：（1）准备新鲜超纯水及色谱级乙腈或甲醇，冲洗色谱仪器系统，保证仪器系统管路干净。
（新柱老化前，此步决不可忽略）（2）将色谱柱反向连接，不接检测器。
用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗20～30min。
（目的是冲洗出柱入口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）（3）再将色谱柱正向连接，不接检测器。
用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗20～30min。
（目的是冲洗出柱出口端无机杂物与筛板孔杂物，使筛板正常）（4）连接检测器，开启柱温达30℃～40℃，用水-有机相（90：10～95:5），以0.3～0.6ml/min流速冲洗4h以上。
（目的是充饱和色谱柱，去除柱内空气）（5）用水-有机相（10：90～5:95），以0.3～0.6ml/min流速冲洗2h以上[或在120min内以水-有机相（95:5→0:100）梯度变化，以0.3～0.6ml/min流速冲洗]→再用100%有机溶剂，以0.3～0.6ml/min流速冲洗1h以上→最后用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗1h以上。
（目的是老化色谱柱）（6）在平衡前根据水相-有机相的比例，首先调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例，以1ml/min流速冲洗30左右（目的是相平衡过渡）。
如果流动相中含有缓冲盐，决不可在柱老化后立即用流动相平衡，必需先用90%以上水进行预平衡30min以上，否则，会导致缓冲盐在柱内析出结晶，严重时会将新柱永久不可逆地损坏。
（7）然后更换成新制并经0.45um滤膜过滤，超声脱气后的流动相，按检测方法平衡至少1h，待基线稳定后，开始进样检测。
（8）由于是新柱首次使用，在进样完成后需立即对色谱柱进行净化和有机溶剂饱和。
方法是：用水-有机相（90：10～95:5），以0.6ml/min流速冲洗1h以上→再用水-有机相（90：10～95:5），以1ml/min流速冲洗30min以上（或者采用溶剂梯度变化至100%有机相冲洗120min以上）→最后用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗1h以上。
若流动相中有缓冲盐，建议用100%水冲洗1h以上后，再重复上述净化程序（但个别品牌C8或C18色谱柱不耐受纯水冲洗者例外）。
在新色谱柱使用几次，均正常后，运行完毕净化处理程序可简化为：用水-有机相（90：10～95:5），以1ml/min流速冲洗1h以上→再用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗30min以上→选择柱说明书中保存条件（Storage Conditions）规定的保存溶剂（Storage Solvent）冲洗10倍柱体积以上→封口，保存。
（9）净化完毕，若次日不再使用，可取下色谱柱，用封头螺丝密封，交色谱柱管理人员入库保存于防尘环境下，备案。
（10）备注：老化用有机溶剂推荐使用色谱级甲醇，不同品牌色谱柱需区别对待；水需用去离子的超纯水。
若色谱柱使用后入库保存，长时间未使用，重新使用时仍需重新饱和。
方法是：用水-有机相（90：10～95:5），以0.6ml/min流速冲洗1h以上→再用100%有机溶剂，以1ml/min流速冲洗30min以上→然后调整水-有机相的比例接近流动相水相-有机相的比例，以1ml/min流速冲洗30左右→最后用流动相平衡1h以上，进样检测。
必需注意流动相pH值不能超过色谱柱pH耐受范围，过酸容易使键合相变态，过碱则易导致硅胶溶解柱床塌陷。
（11）特别提示：当供试品溶液中含有一定量表面活性剂，多次进样后，由于表面活性剂会在筛板及硅胶表面形成表面膜，导致峰变宽、拖尾甚至分叉。
此时，处理方法如下：将色谱柱反向连接接，不接检测器，用水-乙腈（90：10～95:5），以0.6ml/min流速冲洗2h以上→再用100%乙腈，以0.6ml/min流速冲洗1h以上→然后正向连接好色谱柱，用水-乙腈（90：10～95:5），以1ml/min流速冲洗1h以上→再用100%乙腈，以1ml/min流速冲洗1h以上，即可恢复。
（12）警告：无论何时，必须保证色谱柱柱床不干涸，尤其是进样检测和柱冲洗过程中不能让流动相长时间（30min以上）走空，否则易使色谱柱干涸且带入大量几乎无法排出的气泡，甚至导致柱床局部塌陷或中部开裂。
使用与保存时，严禁用力甩，绝对杜绝不小心猛烈撞击或高处掉落，否则，易导致柱床机械性损坏，则再无再生可能。
2、正相色谱柱（Normal –Phase Chromatography column）：目前，正相色谱分析最常用的是氨基柱与氰基柱。
（1）氨基柱（-NH2）：氨基柱可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。
使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。
新购氨基柱老化处理及使用基本程序如下：1）若需要在正相条件下使用：①用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲洗约50倍柱体积[备注：氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，eg.正己烷-乙腈（99：1）]。
②再根据待分析用正相流动相极性选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲洗约10倍柱体积。
③用正相流动相平衡1h以上，确保柱压控制在6000Psi以内，以防止柱头塌陷。
待基线平稳后，进样检测。
如果要使用的流动相中含有缓冲盐类，在使用流动相平衡之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，冲洗约10倍柱体积，避免缓冲盐在分析柱内析出。
④分析完毕，用异丙醇，以0.5ml/min流速冲洗色谱柱约30倍柱体积→再用甲醇，以1ml/min流速冲洗色谱柱约10倍柱体积→再用异丙醇，以0.5ml/min 流速冲洗色谱柱约10倍柱体积。
若使用的分析用流动相中含有缓冲盐类，分析完毕需先用不含缓冲盐的同比例流动相冲洗约30倍柱体积，再按上述方法冲洗。
⑤再用色谱柱说明书中规定的正相保存溶剂以1ml/min冲洗约10倍柱体积，保存即可，一般用正己烷-乙腈（99：1）。
⑥重新在正相条件下使用时，重复上述①～⑤过程即可，时间可适当减少一半左右。
2）若需要在反相条件下使用：①先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲洗约30倍柱体积→再依次以0.5ml/min的流速，用等量的氯仿→异丙醇→甲醇→甲醇-水（50：50）分别冲洗柱子约10倍柱体积→再以0.5ml/min的流速，用pH11.0以下的氢氧化钠溶液冲洗柱子约30倍柱体积（注意：pH值切不可超过11.0）→立即用水以0.5ml/min 的流速冲洗柱子约30倍柱体积→最后换成反相流动相平衡1h以上，待基线平稳，进样检测。
（备注：若要使用的反相流动相中含有缓冲盐类，在用反相流动相平衡之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，冲洗约10倍柱体积，避免缓冲盐在分析柱内析出。
在反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围及流动相中水的比例，pH值越低越易发生键合相水解，流动相中水的比例越高也越易发生键合相水解。
最理想的pH范围在pH 3.0-7.0，决不允许超过11.0。
）②反相条件下使用完毕，净化处理程序同C18柱,但需注意，冲洗溶剂中有机相不能低于10%；净化完毕，先用甲醇以0.5ml/min的流速冲洗柱子约10倍柱体积→然后用异丙醇以0.5ml/min的流速冲洗柱子约10倍柱体积→最后用色谱柱说明书中规定的正相保存溶剂[一般用正己烷-乙腈（99：1）]以1ml/min冲洗约10倍柱体积→密封，保存即可。
（2）氰基柱（-CN）：氰基柱可以同时用于正相条件和反相条件，但多用于正相色谱条件。
使用时需注意，正相反相交替使用时必需用异丙醇过度，保证柱保存溶剂与流动相互溶。
新购氰基柱老化处理及使用基本程序与氨基柱基本相同，主要程序如下：1）若需要在正相条件下使用：①用异丙醇或正己烷以0.5ml/min的流速冲洗约30倍柱体积。
（备注：氰基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂，eg.正己烷或异丙醇。
）②再根据待分析用正相流动相极性选用极性相近的氯仿、异丙醇或二氯甲烷以相同的流速冲洗约10倍柱体积。
③用正相流动相平衡1h以上，确保柱压控制在6000Psi以内，以防止柱头塌陷。