ABI公司 SNPshot试剂盒,中文说明书
宝生物荧光定量PCR使用说明
① 按下列组份配制 PCR 反应液（反应液配制请在冰上进行）。
试剂 SYBR® Premix Ex TaqTM（2×） PCR Forward Primer（10 µM） PCR Reverse Primer（10 µM） DNA 模板 dH2O（灭菌蒸馏水） Total
司独自开发的Buffer系统相结合，具有高扩增效率，高扩增灵敏度，高扩增特异性之特点。
●操作注意 以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前一定认真阅读。
1． 本制品请于 4℃避光保存，避免冻结制品。实验证明，4℃保存一年半制品性能稳定，反复冻融制品性 能可能下降。
2． 使用时请上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。 3． 本制品中含有荧光染料SYBR® Green I，保存制品或配制PCR反应液时应避免强光照射。 4． 反应液的配制、分装请一定使用新的（无污染的）枪头、Microtube 等，尽量避免污染。
1．热变性
Primer
荧光物质
2．引物退火
Polymerase
3．延伸反应
●试剂盒特长
1． 适用于 Real Time PCR 反应，可以快速、准确地对目的基因进行检测、定量。 2． 在 2×浓度的Premix中，预先混有SYBR® Green I，PCR反应液配制时，只需加入模板、引物、灭菌
蒸馏水便可进行Real Time PCR反应，操作简单方便。 3． DNA聚合酶使用了改良后的TaKaRa Ex TaqTM HS，可以进行Hot Start法PCR反应，再与TaKaRa公
*3 建议反应液体积为 25 ～ 50 µl。
ABI 型使用维护操作规程
ABI 7500型荧光定量核酸扩增仪作业指导书1.目的：使ABI 7500型核酸扩增荧光定量检测仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
2.范围：ABI 7500型核酸扩增荧光检测仪。
3.性能参数：详见说明书4.程序：4.1.依次打开电脑显示器及电脑主机电源，进入windows XP 界面4.2.打开PCR主机电源4.3.点击桌面7500 software V2.0.6 图标，打开软件4.4.主界面点击SET UP 菜单下ADVANCED SETUP4.4.1.在试验属性界面：选择正确的机器型号，试验类型及试剂类型（探针法/染料法）4.4.2.在plate setup 界面，首先设定试验使用的探针，及样品名称，然后按照事先加样的位置顺序设定样品名称、类型，包括待检样本、阴性对照、阳性对照、阳性标准品、阳性室内质控样本。
4.4.3.在run method界面，编辑与试剂盒提供的温度程序相同的温度程序，包括温度与时间，及循环数4.5.将预先加好的0.2ML样品管按照设定顺序放置到仪器里面，进入到RUN界面，点击绿色START 按钮，弹出保存试验对话框，设定保存后，试验立即开始运行。
界面显示运行倒计时。
运行过程中在amplification plot界面可以查看实时的扩增曲线，在temperature plot界面可以查看实时的温度变化情况。
温度循环结束后试验自动结束。
5.结果分析5.1.在analysis setup里面修改各个探针的baseline与threshold数值，点击绿色analyze图标，软件及完成自动分析。
5.2.在amplification plot界面查看所有样品的扩增曲线。
6.整体曲线的观察,将所有曲线选中进行整体观察。
6.1.观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一 Ct值出现上涨的情况。
6.2.观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。
ABI公司测序仪
ABI公司测序仪的应用, Ph.D.Technical Product Specialistchenyd@提要DNA测序仪应用概况ABI遗传分析仪家族1 4 16 48 96测序仪三大功能测序仪可以用来做什么？Diagram from Celera Genomics线粒体DNA测序MITOMAP: A Human Mitochondrial Genome Database.–Mouse Karyotype ZooWeb-Karyotypes home page Human Karyotype医学测序杂合子检测：发现新突变112006-11-17 |© 2006 Applied Biosystems细菌和真菌鉴定MicroSeq® ID Analysis SoftwareMicroSeq® 500 16S Bacterial Identification Kit MicroSeq® D2 LSU Fungal Identification KitDNA Sequencing of the 16S ribosomal RNA gene Classification of Eubacteria, Yeasts,and Filamentous Fungi Sequence polymorphisms Bacterial category A biothreat agents Food pathogens Same day results122006-11-17 |© 2006 Applied BiosystemsSAGE™ Analysis基因组范围的基因表达图式分析 鉴定转录子(mRNA)132006-11-17 |© 2006 Applied Biosystems基于测序的HLA配型Donor / Recipient compatibility prior to tissue transplantation HLA typing products - distributed directly by Celera Diagnostics for research purposes only.1-866-235-3723/cdx/HLA_TypingReferenced to GENBANK: HLA–C 6p21.3 major histocompatibility complex, class I, C. 142006-11-17 |© 2006 Applied Biosystems功能强大的片段分析• 片段长度多态性• AFLP和T-RFLP• BAC指纹图谱 • 相对荧光定量• LOH和QMPSF• 构象分析扫描突变• SSCP和CSCE• InVivoScribe B细胞和T细胞clonality • TILLING152006-11-17 |© 2006 Applied Biosystems相对荧光定量细胞淋巴瘤(cell lymphomas) 及其他肿瘤中的等位基因丢失 染色体不平衡 部分和全部染色体丢失LOH (Loss of Heterozygosity) P53 17p13.1非遗传的in-vivo LOH162006-11-17 |© 2006 Applied Biosystems寻找新的SNP位点Mutation Profiling - SNP Discovery and Analysis172006-11-17 |© 2006 Applied BiosystemsSNP扫描SNPlex™ Genotyping SystemSNaPShot® Multiplex System SNP Validation Linkage Mapping and Association Studies Pharmacogenomic Research182006-11-17 |© 2006 Applied BiosystemsSSCP突变快速扫描SSCPAmplify region of interest Heat denature in HiDi formamide and NaOHA T A T A TG C G CRapidly chill and electrophoresis under non denaturing conditionsGCWT Wild Type20rfuMUTmobilityMutant© 2006 Applied Biosystems2006-11-17 |SSCP WorkflowPost PCR PurificationSSCP data on ABI 3130 Series植物AFLP®分析AFLP技术原理AFLP工作流程AB公司AFLP相关产品AFLP Data Generated on AB SystemsExpt1:Polymorphic peakCommon peakExperiment 2: AFLP collaboration with U.S. customerCustomer Research Project GoalsGenotypes from AFLP Analysis of Hedysarum LinesHedysarum Variety Identification by AFLP AnalysisHO U5 01 09HO U5 01 18HO U5 01 11HO U5 01 14MicroSeq®细菌鉴定500 bp试剂盒全长基因试剂盒FDA Draft Guidelines分子生物学手段鉴定微生物MicroSeq®Microbial Identification Kit试剂盒组成细菌鉴定策略forwardreverseMicroSeq®工作流程or样品制备特别简单MicroSeq®真菌鉴定真菌鉴定试剂盒rDNA在真菌染色体上的排列测序目标是D2强项：MicroSeq®ID 软件methylSEQr Bisulfite Conversion Kit 甲基化分析重亚硫酸钠转化试剂盒Applied Biosystems Products for Each Step of the WorkflowmethylSEQr™Bisulfite Conversion Kit。
SNAP_试剂盒操作说明-2
6.
三聚氰胺检测试剂盒最低检出限为 0.3ppm
试剂盒性能特点 1. SNAP 试剂盒除了应用于生鲜牛乳外，还可以检测纯牛乳产品、全脂乳粉、脱脂乳粉。 配制复原乳操作如下： a) 称取适量全脂或脱脂奶粉，将其加入具盖离心管或其它密闭容器中 b) 向离心管或容器中添加适量 50°C 5°C 蒸馏水（全脂奶粉按 粉：水=1：7，脱脂奶 粉按 粉：水=1：7.5） ，封盖密闭。 注：容器中复原乳的量达到容器容积的 1/2 左右为最佳。容器中复原乳过多，振摇不充 分，复原乳过少，则容易产生过多泡沫或空气进入。 c) 用力上下振摇离心管至少 30 秒，使离心管中的奶粉充分溶解。 d) 倒置离心管，观察离心管壁是否有未溶解的奶粉颗粒。 注：步骤 c)-d) 非常重要 e) 将配制好的复原乳放置在 0-4°C 的冰箱中冷却至 4°C 及以下。 注：静置可以使奶粉充分水合，且可去除部分泡沫。静置时间不可过长，否则会引起脂 肪上浮，造成检测偏差。 f) 从冰箱中取出的复原乳在进行检测前应摇匀。 如需要，复原乳的检测结果应根据复原比例换算至奶粉结果。 SNAP 三聚氰胺试剂盒的最低检出限可以达到 0.3ppm，并在一定范围内可以半定量地判 断牛奶中三聚氰胺的残留量（如下表）
SNAP
SNAP
样品管帽
检测板 移液管
样品管
试剂球
使用所需设备， 使用所需设备，但未提供（ 但未提供（可联系爱德士或爱德士授权经销商） 可联系爱德士或爱德士授权经销商） 1. 加热器，能保持 45℃±5℃的操作温度。
2. SNAPshot®
读数仪或 SNAPshot® DSR 读数仪。
检测前准备 1. 从铝箔包装袋中拿出 SNAP 检测板、移液管和样品管，将检测板置于加热器上。未使用 的 SNAP 检测板上检测窗（参照点、样品点）和激活环的颜色如下： β-内酰胺类试剂盒为浅蓝色 四环素类试剂盒为浅粉色 黄曲霉毒素 M1 试剂盒为绿色 磺胺二甲嘧啶试剂盒为橙绿色 庆大霉素试剂盒为橙色 三聚氰胺试剂盒为浅蓝色 2. 确定加热器温度在 45 C ± 5 C 恒定至少 5 分钟（加热器应自动恒温在此温度范围内） 。 3. 确认样品管底部的试剂球未受潮，摇动试管可使试剂球灵活移动。 4. 试剂盒可以在使用当天保存在室温（18-22℃）中 24h。
植物(Plant)激素脱落酸(ABA)ELISA试剂盒说明书
上海笃玛生物科技有限公司本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断植物（Plant）激素脱落酸（ABA）ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被激素脱落酸（ABA）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的激素脱落酸（ABA）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本：请1000x g离心20分钟，取上清即可检测。
4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
上海笃玛生物科技有限公司试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
SNP分型
1、测序方法这个是最原始的，也是最简单的（操作简单，工作量不小啊！）一种方法，估计各位都明白，就不再累述了！2、Taqman探针法Taqman探针法可是一种无敌的方法，可用于基因荧光定量分析、甲基化检测、SNP分型、miRNA定量分析等等，差不多只要能用到的分子检测技术都有Taqman的身影。
Taqman探针法SNP分型技术的核心就是特异性的MGB探针技术，已证实的Taqman探针，3·段结合MGB技术，能更好的进行等位基因的区分。
MGB分子结合到DNA螺旋小沟，通过稳定MGB探针/模板联合体提高杂交的检验。
这种超强的稳定性可使短至13个碱基的探针提高错配的辨别力，并为困难多变的序列设计提供更高的灵活性。
所有的MGB探针都包括一个不发荧光的猝灭基团（NFQ），它能真正消除传统猝灭基团产生的背景荧光，提高信噪比，从而提供检测灵敏性。
Taqman探针法还有个好处据说AB公司能提供数以万计的现成探针，只要你付得起钱就可以了，什么可将illumina SNP芯片上的所有SNP位点都检测一遍。
Taqman探针法的缺点就是探针购买太贵，一般他们的试剂盒是1500人份的，价格可以咨询AB公司在国内的总代！1000份左右标本，几个位点用Taqman还是蛮核算的。
3、Beckman SNP genomestream技术Beckman技术的特点就是单碱基延伸法，设计时每个位点共设计3条引物，2条是扩增引物，1条为单碱基延伸引物（这个引物也可理解为探针）。
现在Beckman探针法可做到48重（也就是一次检测48个SNP 位点），引物及探针的设计可以直接提交给Beckman（这点同Taqman，不赚你，赚谁啊！），他们帮你有偿设计啊！Beckman的技术比较适合恰好有12个位点，48个位点检测，假如你的只有几个位点，或者恰巧不是12或48的倍数时，这个就有些不合算了！另外标本量不能太低，Beckman检测采用384板，一两百个样本那就算了吧！4、SNPshotSnaPshot技术平台是Applied Biosystems,ABI公司推出了专为检测SNP 设计的分析软件和试剂盒可对多个SNP 位点同时进行基因分型,也被称为minisequencing 。
ABIPRISM3730型遗传分析仪基本操作培训
一种毛细管/一种胶，多种应用
从测序切换到片段分析时，无须换胶和毛细管 实验参数由Run Module文件定义
Type of Run
Spatial Calibration Spectral Calibration
Sequencing
Existing Run Modules (Supported in 3100/3100Avant)
Fragment Analysis
35
FragmentAnalysis22_POP4 FragmentAnalysis36_POP4 HIDFragmentAnalysis36_POP4 FragmentAnalysis50_POP4 FragmentAnalysis50_POP6 SNP22_POP4 SNP36_POP4
质粒DNA (200ng/ µL)
引物 (3.2 pmol/µL) BigDye 去离子灭菌水
循环条件
1 µL 1 µL 8 µL 10 µL 总体积 20 µL
96 °C 1 min → (96 °C 10 sec → 50 °C 5 sec → 60 °C 4 min) x 25个循环 →4 °C保温
信号更强，测序更长 峰间距更均匀，序列判读更准确 峰高更均匀，杂合子判读更准确 困难模板测序的成功率更高
z 从v1.0、v2.0到v1.1不必做光谱校正 z 从v3.0到v3.1不必做光谱校正 z 从v1.0、2.0、1.1到v3.0、3.1要做光谱校正
9
质粒测序的反应体系
标准反应体系
4
DNA测序的原理
DNA测序基本过程
通过一种特殊的PCR反应（测序PCR），使 DNA分子大量复制，而且复制过程平均地在 每一个碱基上终止，在每一个位置上都有一 部分反应被终止，也有一部分反应继续进行
SNP说明书
Matrix Standard DS-02/3130 and 3100 Series SystemsProduct P/N 4323014Insert P/N 4363121 REV A Printed in USA For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.Dye-labeled oligonucleotides included in the Matrix Standard Set DS-02 [dR110, dR6G, dTAMRA, dROX, and LIZ] are used to generate the "multicomponent matrix" required for the SNaPshot ® Multiplex Kit on the Applied Biosystems 3130 and 3100 Series Systems. The Data Collection software utilizes the multicomponent matrix to automatically correct for the spectral overlap in samples labeled with DS-02 dyes.Matrix standards do not need to be run with every set of sample injections. A set of five matrix standards only needs to be run once in order to generate a matrix file which is then applied to samples run under similar conditions. For more information on the use of matrix standards, refer to the instrument User's Manual or Getting Started Guide.The kit consists of one tube of matrix standard which is sufficient for eight 16-capillary array runs. This tube contains a mixture of DNA fragments of specific sizes, each labeled with a unique fluorescent dye within the DS-02 dye set. The standards are diluted in 1x TE buffer and are stable for one year when stored at 2°C to 8°C. (Do not freeze.)Preparing the Matrix Standard Set DS-02 for the Applied Biosystems 3130 and 3100 Series Systems:WARNING! CHEMICAL HAZARD. Hi-Di™ Formamide. Exposure causes eye, skin, and respiratory tract irritation. It is a possible developmental and birth defect hazard. Read the MSDS, and follow the handling instructions. Wear appropriate protective eyewear, clothing, and gloves.1. Thoroughly mix the contents of the Matrix Standard Set DS-02 tube and spin briefly in a microcentrifuge.2. Prepare the Matrix Standard by combining 5 µL of the tube labeled "Matrix Standard DS-02 for the 3130 and 3100 Series system" supplied in the kit and 195 µL of Hi-Di™ Formamide (P/N 4311320) in a 1.5 mL microcentrifuge tube.3. Mix thoroughly and spin briefly in a microcentrifuge.4. Denature:For convenience, we recommend dispensing the contents of the tube into a 96-well microtiter plate first, and then using a GeneAmp ® PCR System 9600 thermal cycler for denaturation.If a GeneAmp 9600/9700 thermal cycler is available for denaturation, follow steps A and B below.A) Dispense 10 µL of the Matrix Standard / Hi-Di™ Formamide mixture into two columns (16 wells) of a 96-well microtiter plate.B) Cover the plate and denature at 95°C for 5 minutes. Immediately place on ice.ORIf a GeneAmp 9600/9700 thermal cycler is not available, follow steps C and D below.C) Heat the mixture at 95°C for 5 minutes to denature, and immediately place on ice.D) Dispense 10 µL of the denatured mixture into two columns (16 wells) of a 96-well microtiter plate.5. Place the 96-well microtiter plate on the instrument.6. Refer to your User's Manual or Getting Started Guide for instructions on running samples.Note: In the spectral display window on some versions of Data Collection software, the LIZ dye is displayed in a light blue color instead of the orange color used in ABI P RISM GeneScan ® or Gene Mapper™ software. If the LIZ dye is displayed in light blue, the color will not cause any problems with data output or analysis. If you would like to change the color to orange, simply open the "Instrument" menu within the menu bar of the "Run View" window, select "Data Acquisition" and then select "Set Color." The "Edit Dye Display Information" window will automatically open. Click on the fifth dye color tile. Then select an orange color of your choice on the color wheel and click ok.©Copyright 2004. Applied Biosystems All rights reserved. ABI PRISM, Applied Biosystems, GeneScan, LIZ, and SNaPshot are registered trademarks and Gene Mapper, Hi-Di, ROX, and TAMRA aretrademarks of Applera Corporation or its subsidiaries in the U.S. and/or certain other countries.Product Insert 8/Dec/2004。
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sNPSHOT 试剂盒
1. 关于试剂盒：
一次最多检测10个SNP位点
试剂盒包括对照模板和引物的Mix试剂，做对照反应。
2．产品简介
需要备的东西：
1）SNPshot Multiplex Ready reaction MIX
2）模板和引物
3）对照的Multiples Control DNA and Primer Mix 只提供对照模板和对照引物，用于做对照反应
4)ddNTP 荧光标记颜色组合
分三种包装
备注：-20℃保存
4 软件及其它材料要求
1. GeneScan-120 LIZ Size Standard Recommended
2. 3700 Data Collection version 1.1 (enabled with 3700 data collection 5-Dye Update File P/N
4324208)
3. SNP1_POP5 (凝胶)
5 自备材料
1）Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) 碱性磷酸酶
2）PCR纯化试剂盒
6 基本流程
备注:
PCR产物须纯化，0.01 to 0.4 pmol 模板（PCR产物纯化试剂盒）
7 对照反应
1）对照引物
小片段来，片段越小，标记基团在分子量上占得比例就越大，所以与实际片段长度相差越大。
2）对照反应体系，如下表：
备注：颠倒混匀，混匀后，迅速置于冰上。
如果常温20分钟以上，会导致背景加深。
3）实验样品
多个引物混合后，推荐各引物终浓度0.2u M，
注Snapshot MIX 引物设计为反应后，耗尽所有反应中的引物。
推荐各引物初始浓度为0.2u M。
如某一引物浓度特别低或特别高，应调整引物浓度。
在6引物组合中，引物浓度范围，0.05 u M 到1 u M ，是适宜的。
模板浓度一般不需调整。
4）反应体系
SNaPshot Multiplex ready Reaction mix 冰上解冻。
注：依据引物及模板体积，适当调整水的体积。