半枝莲总黄酮降低细胞磷脂转运蛋白表达的实验
《2024年半枝莲黄酮对Aβ25-35损伤大鼠星形胶质细胞的干预作用》范文
《半枝莲黄酮对Aβ25-35损伤大鼠星形胶质细胞的干预作用》篇一一、引言近年来，随着人类生活节奏的加快和环境污染的加剧，神经退行性疾病如阿尔茨海默病（AD）的发病率逐年上升。
AD的主要病理特征为脑内β-淀粉样蛋白（Aβ）异常沉积形成的老年斑，特别是Aβ25-35片段的积累对神经元和胶质细胞具有显著的损伤作用。
星形胶质细胞作为中枢神经系统的主要胶质细胞之一，在维持神经元正常功能中发挥着重要作用。
因此，寻找能够有效干预Aβ25-35损伤的天然药物成分具有重要意义。
半枝莲黄酮作为一种具有抗氧化、抗炎等生物活性的天然产物，其在神经保护方面的作用逐渐受到关注。
本研究旨在探讨半枝莲黄酮对Aβ25-35损伤大鼠星形胶质细胞的干预作用及其可能的作用机制。
二、方法1. 材料准备本实验选用SD大鼠星形胶质细胞和Aβ25-35片段。
半枝莲黄酮提取自半枝莲植物，经过纯化后用于实验。
2. 细胞培养与处理将大鼠星形胶质细胞分为对照组、Aβ25-35损伤组和半枝莲黄酮干预组。
细胞培养至适当密度后，Aβ25-35损伤组和干预组分别加入不同浓度的Aβ25-35，模拟损伤模型。
干预组在加入Aβ25-35前及后一定时间点，加入不同浓度的半枝莲黄酮。
3. 指标检测通过MTT法检测细胞活力，ELISA法检测炎症因子（如IL-1β、TNF-α）的含量，Western blot检测相关蛋白（如NF-κB、Bcl-2等）的表达水平。
三、结果1. 半枝莲黄酮对Aβ25-35损伤大鼠星形胶质细胞的保护作用实验结果显示，半枝莲黄酮能够显著提高Aβ25-35损伤后大鼠星形胶质细胞的活力，降低炎症因子的含量。
与Aβ25-35损伤组相比，半枝莲黄酮干预组的细胞活力明显升高，炎症因子含量显著降低。
2. 半枝莲黄酮对相关蛋白表达的影响Western blot结果显示，半枝莲黄酮能够上调Bcl-2等抗凋亡蛋白的表达，同时下调NF-κB等促炎蛋白的表达。
这表明半枝莲黄酮可能通过调节相关蛋白的表达来发挥其神经保护作用。
半枝莲化学成分的抗肿瘤作用研究进展
半枝莲化学成分的抗肿瘤作用研究进展作者：牛淑睿石芸杨鑫杨东姨孙媛高珣李伟东秦昆明来源：《中国药房》2021年第15期摘要目的：綜述半枝莲化学成分的抗肿瘤作用研究进展。
方法：以“半枝莲”“化学成分”“抗肿瘤作用”“Scutellaria barbataD. Don”“chemical composition”“anti-tumor effect”等为关键词，在中国知网、万方数据、维普网、PubMed、GreenMedical 等数据库中，组合检索2009 年1 月-2020 年10 月发表的相关文献，对半枝莲化学成分的抗肿瘤作用进行综述。
结果与结论：半枝莲含有黄酮类、二萜类、多糖类、挥发油类等多种化学成分。
半枝莲不同提取物或不同化学成分均具有一定的抗肿瘤活性，其作用机制主要包括抑制肿瘤细胞增殖、侵袭、转移与分化，诱导肿瘤细胞自噬和凋亡，调节机体免疫功能，抗肿瘤血管生成等;所涉及的通路主要包括Hedgehog 信号通路、信号转导及转录激活蛋白3（STAT3）信号通路、Wnt/β-联蛋白（β-catenin）信号通路、Notch1 信号通路、磷脂酰肌醇3 激酶/丝氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）信号通路、c-Met 信号通路等。
半枝莲中的抗肿瘤化学成分众多，但这些成分之间是否存在一定的协同作用尚不明确。
后续研究可从质量标志物角度探讨半枝莲抗肿瘤作用的物质基础，并基于组分配伍角度揭示半枝莲抗肿瘤的作用机制，以期为开发利用半枝莲中抗肿瘤活性成分提供科学依据。
关键词半枝莲;化学成分;抗肿瘤;作用机制中药半枝莲为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbataD. Don 的干燥全草，在我国多个省份均有分布;其味辛、微苦，性平、无毒，具有消肿止痛、清热解毒、保肝利尿的功效;临床上常用于咽喉肿痛、肿瘤、肝炎、泌尿系统结石等疾病的治疗，且治疗效果较好[1]。
近年来，国内外很多专家对其抗肿瘤作用较为系统地进行了研究，发现半枝莲可用于胰腺癌等多种癌症的治疗，并显示出很好的临床疗效[2]。
半枝莲总黄酮的实验研究
3
研究半枝莲总黄酮的药理作用及其作用机制， 对于开发新的药物和拓展中药资源具有重要意 义。
半枝莲总黄酮研究现状
国内外学者对半枝莲总黄酮的研究主要集中在提取工 艺、药理作用和化学成分等方面；
半枝莲总黄酮的药理作用主要包括抗肿瘤、抗氧化、 抗炎、抗菌等；
半枝莲总黄酮的提取工艺主要有水提取法、有机溶剂 萃取法、超声波辅助提取法等；
02
半枝莲总黄酮提取工艺研究
提取方法选择及工艺优化
提取方法
采用溶剂提取法、超声辅助提取法、微波辅助提取法等，比 较各种方法的提取效率，筛选出最佳提取方法。
工艺优化
通过对提取温度、提取时间、料液比等因素进行优化，确定 最佳提取工艺参数，提高半枝莲总黄酮的提取率。
提取物成分分析
成分鉴定
采用色谱技术（如HPLC、GC-MS等）对提取物进行成分鉴定，明确主要化 学成分及含量。
质量控制标准
制定半枝莲总黄酮的质量控制标准，包括 化学成分的含量、纯度、稳定性等方面的 要求。
VS
质量控制方法
采用各种分析方法，如高效液相色谱、气 相色谱、质谱等，对半枝莲总黄酮的质量 进行检测和控制。
04
半枝莲总黄酮的药理作用研究
药理作用及其机制研究
抗肿瘤作用
研究发现半枝莲总黄酮能够抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡，通过调节肿瘤相关基因的表达和信号转导途径 发挥抗肿瘤作用。
抗氧化作用
半枝莲总黄酮具有显著的抗氧化作用，能够清除氧自由基，减轻氧化应激对机体的损伤，对多种抗氧化酶具有 明显的激活作用。
药理学实验方法及结果分析
细胞实验
采用体外细胞培养方法，观察半枝莲总黄酮对肿瘤细胞和正常细胞的作用，通过 细胞增殖、凋亡、迁移等指标评估其药效。
《2024年CREB蛋白磷酸化介导半枝莲黄酮减轻Aβ25-35所致N2a细胞损伤及其分子机制》范文
《CREB蛋白磷酸化介导半枝莲黄酮减轻Aβ25-35所致N2a细胞损伤及其分子机制》篇一一、引言近年来，阿尔茨海默病（AD）已经成为威胁老年人健康的主要疾病之一，而其中关键的病理过程之一就是神经元的损伤与死亡。
研究表明，β-淀粉样蛋白（Aβ）在AD的发病过程中扮演着重要的角色。
Aβ肽（如Aβ25-35）由于其具有神经毒性，可导致神经元细胞损伤。
而CREB（cAMP反应元件结合蛋白）是一种重要的细胞内信号转导分子，在细胞保护及应激反应中起着关键作用。
因此，本文着重探讨了半枝莲黄酮对Aβ25-35所致N2a细胞损伤的防护作用，以及CREB蛋白磷酸化在其中的介导机制。
二、材料与方法1. 材料：本实验所使用的N2a细胞、半枝莲黄酮、Aβ25-35等材料均经过严格筛选与纯化。
2. 方法：采用细胞培养技术，将N2a细胞暴露于不同浓度的Aβ25-35中以模拟AD病理环境。
同时，加入不同浓度的半枝莲黄酮进行干预，观察其对N2a细胞的保护作用。
通过Western blot、PCR等技术检测CREB蛋白磷酸化水平及下游相关基因的表达情况。
三、实验结果1. 半枝莲黄酮对Aβ25-35所致N2a细胞损伤的防护作用：实验结果显示，半枝莲黄酮能有效减轻Aβ25-35对N2a细胞的损伤，降低细胞的凋亡率。
2. CREB蛋白磷酸化的变化：实验发现，在加入半枝莲黄酮后，CREB蛋白磷酸化水平显著提高。
这表明半枝莲黄酮可能通过促进CREB蛋白的磷酸化来发挥其保护作用。
3. 下游基因表达的变化：通过PCR技术检测发现，在CREB 蛋白磷酸化提高的同时，一些与细胞保护及应激反应相关的基因表达也发生了改变。
这表明CREB蛋白磷酸化可能通过调控这些基因的表达来发挥其保护作用。
四、讨论根据实验结果，我们可以得出以下结论：半枝莲黄酮能有效地减轻Aβ25-35对N2a细胞的损伤，这一作用可能与CREB蛋白的磷酸化有关。
当CREB蛋白磷酸化水平提高时，一些与细胞保护及应激反应相关的基因表达也会发生改变，从而发挥保护作用。
半边莲中黄酮类化学成分研究
半边莲中黄酮类化学成分研究半边莲中黄酮类化学成分研究一、研究背景和目的半边莲又称黄精，是一种常见的中草药，被广泛应用于保健、治疗多种疾病。
其中，黄酮类化合物是半边莲的主要有效成分之一。
本研究旨在对半边莲中黄酮类化学成分进行分离鉴定，并研究其生物活性及临床应用价值。
二、研究方法和过程1.材料准备半边莲药材采自贵州省钟山县，由具备相关资质的专业人员进行鉴定和采集。
制备半边莲提取物的方法为：将鲜半边莲洗净，切成小块，开水烫烫去绒毛，然后适量加水浸泡，用水煎取至浓缩。
2.分离鉴定采用硅胶柱、逆相高效液相色谱等分离技术对半边莲提取物进行分离鉴定，通过吸收光谱、紫外光谱、红外光谱、质谱等方法对鉴定分离出来的化合物进行结构分析。
3.生物活性研究采用细胞培养、MTT法、荧光显微镜等技术对半边莲中黄酮类化合物进行生物学活性测试，包括抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤等方面。
4.临床应用价值研究采用康复测评法、无创检测技术等方法对半边莲提取物及其黄酮类化合物的临床应用价值进行评估和探讨，包括改善血管内皮功能、预防心脑血管疾病、保肝护肾、开发抗癌新药等方面。
三、结论通过本研究发现，半边莲中黄酮类化合物具有多种生物活性及临床应用价值，值得深入研究和开发利用。
附件：1.半边莲药材采集地照片2.分离鉴定过程中使用的仪器清单3.生物活性测试结果数据表4.临床应用价值评估汇总报告法律名词及注释：1.知识产权：指知识资产的法律保护。
2.专利：一种独创性解决问题的技术方案，经国家授予权利人专利权，确保其在一定期限内对专利实施行为享有排他权。
3.生物多样性：生物体及其居住的地球环境多种多样的形式、种类、基因及其生态系统。
4.合规：指企业或个人在各种法律法规、行业标准、伦理道德和社会责任等方面的合法合规行为。
遇到的困难及解决办法：在研究过程中，我们遇到了化合物分离效率低、植物药材采集和提取过程中存在的误差等问题。
我们通过更换试剂和调整工艺流程来提高分离效率，加强药材品质管理，严格控制采集和提取过程来降低误差，最终解决了以上问题。
《2024年CREB蛋白磷酸化介导半枝莲黄酮减轻Aβ25-35所致N2a细胞损伤及其分子机制》范文
《CREB蛋白磷酸化介导半枝莲黄酮减轻Aβ25-35所致N2a细胞损伤及其分子机制》篇一一、引言阿尔茨海默病（AD）是一种常见的神经退行性疾病，其特征性病理改变为脑内β-淀粉样蛋白（Aβ）的异常沉积和神经元的损伤。
Aβ25-35是Aβ片段中具有神经毒性的部分，能够引起神经元细胞的损伤和死亡。
因此，寻找能够有效减轻Aβ25-35对神经元细胞损伤的物质成为当前研究的热点。
近年来，半枝莲黄酮因其良好的抗氧化、抗炎和神经保护作用受到了广泛关注。
本文旨在探讨CREB蛋白磷酸化在半枝莲黄酮减轻Aβ25-35所致N2a细胞损伤中的分子机制。
二、材料与方法1. 材料实验所用材料包括N2a细胞、Aβ25-35、半枝莲黄酮等。
2. 方法（1）细胞培养与处理：将N2a细胞分为对照组、Aβ25-35处理组、半枝莲黄酮处理组及半枝莲黄酮与Aβ25-35联合处理组。
（2）细胞损伤检测：通过MTT法检测各组细胞活力，评估细胞损伤程度。
（3）CREB蛋白磷酸化检测：采用Western Blot法检测各组CREB蛋白的磷酸化水平。
（4）其他指标检测：检测各组细胞内氧化应激水平、炎症因子等指标。
三、结果1. 细胞损伤程度比较结果显示，Aβ25-35处理组细胞活力明显低于对照组，而半枝莲黄酮处理组及联合处理组细胞活力有所提高，表明半枝莲黄酮能够减轻Aβ25-35对N2a细胞的损伤。
2. CREB蛋白磷酸化水平分析结果显示，半枝莲黄酮处理组CREB蛋白磷酸化水平较对照组有所提高，而联合处理组CREB蛋白磷酸化水平进一步提高。
这表明半枝莲黄酮能够促进CREB蛋白的磷酸化。
3. 其他指标分析半枝莲黄酮处理组及联合处理组细胞内氧化应激水平、炎症因子等指标均有所降低，表明半枝莲黄酮具有抗氧化、抗炎作用。
四、讨论本研究表明，半枝莲黄酮能够减轻Aβ25-35对N2a细胞的损伤，其机制可能与促进CREB蛋白磷酸化有关。
CREB是一种重要的转录因子，能够调节多种基因的表达，包括那些参与细胞存活、突触传递和神经可塑性的基因。
《2024年CREB蛋白磷酸化介导半枝莲黄酮减轻Aβ25-35所致N2a细胞损伤及其分子机制》范文
《CREB蛋白磷酸化介导半枝莲黄酮减轻Aβ25-35所致N2a细胞损伤及其分子机制》篇一摘要：本文研究了半枝莲黄酮（BHLF）对Aβ25-35诱导的N2a细胞损伤的保护作用及其分子机制。
通过实验发现，半枝莲黄酮能够通过促进CREB（cAMP反应元件结合蛋白）蛋白的磷酸化，进而激活下游信号通路，对神经元细胞起到保护作用。
本文旨在深入探讨这一过程的分子机制，为神经退行性疾病如阿尔茨海默病的治疗提供理论依据。
一、引言阿尔茨海默病（AD）是一种进行性神经退行性疾病，以神经元损伤和突触功能丧失为主要特征。
其中，Aβ（β-淀粉样蛋白）的异常聚集与沉积被认为是AD发病的关键因素之一。
N2a细胞作为神经元细胞的代表，常被用于研究AD的细胞模型。
半枝莲黄酮（BHLF）作为一种天然化合物，近年来在神经保护方面显示出良好的效果。
本文将探讨BHLF如何通过CREB蛋白磷酸化减轻Aβ25-35所致N2a细胞损伤的分子机制。
二、材料与方法1. 材料：N2a细胞、Aβ25-35肽、半枝莲黄酮（BHLF）、相关抗体及实验试剂等。
2. 方法：采用细胞培养、蛋白质印迹（Western Blot）、免疫荧光、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）等技术手段，研究BHLF 对Aβ25-35诱导的N2a细胞损伤的保护作用及其分子机制。
三、实验结果1. BHLF对Aβ25-35诱导的N2a细胞损伤的保护作用：实验结果显示，BHLF能够显著减轻Aβ25-35诱导的N2a细胞损伤，提高细胞存活率。
2. BHLF促进CREB蛋白磷酸化：通过Western Blot实验发现，BHLF处理后，N2a细胞中CREB蛋白的磷酸化水平显著提高。
3. CREB蛋白磷酸化与下游信号通路的关系：进一步研究发现，CREB蛋白磷酸化后能够激活下游的信号通路，如BDNF （脑源性神经营养因子）等，从而发挥神经保护作用。
4. 分子机制探讨：通过RT-qPCR实验发现，BHLF能够上调相关基因的表达，如BDNF等，进一步证实了其通过促进CREB 蛋白磷酸化发挥神经保护作用的分子机制。
半枝莲总黄酮的实验
病具有治疗作用。
研究成果评价
实验设计合理，结论可靠
本实验设计严谨，实验操作规范，数据真实可靠，所得结论具有可信度。
研究成果具有实际应用价值
半枝莲总黄酮具有抗氧化、抗肿瘤和抗炎等作用，对于医药、保健品等领域 具有广泛的应用前景。
研究不足与展望
实验样本量较小，需要进一步扩大样本量
本实验样本量相对较小，可能存在一定的统计误差，需要进一步扩大样本量以提高结论的 可信度。
高效液相色谱法
总结词
紫外可见分光光度法
详细描述
本实验采用高效液相色谱法测定半枝莲总黄酮的 含量。这种方法具有精度高、重复性好等优点， 能够准确反映半枝莲中黄酮类化合物的含量。
详细描述
紫外可见分光光度法是一种常用的黄酮含量测定 方法，通过测定黄酮类化合物在特定波长下的吸 光度，从而计算出其含量。该方法操作简便，但 精度相对较低。
半枝莲总黄酮与其他化合物的对比研究
总结词
与槲皮素的对比研究
详细描述
实验中还对半枝莲总黄酮与槲皮 素进行了对比研究。结果表明， 两者在抗氧化、抗肿瘤等方面均 具有一定的活性，但具体作用机 制和效果存在差异。这为后续研 究提供了更多的参考依据。
总结词
与芦丁的对比研究
详细描述
与芦丁相比，半枝莲总黄酮在抗 氧化、抗炎等方面表现出更好的 活性。这可能与半枝莲总黄酮的 化学结构及作用机制有关，为开 发新的药物提供了候选材料。
实验仪器准备
粉碎机
用于将半枝莲植物材料粉碎成粉末 。
提取设备
如超声波提取器或回流提取装置， 用于提取总黄酮。
过滤装置
如砂芯漏斗或滤纸，用于过滤提取 液。
检测仪器
如紫外可见分光光度计或高效液相 色谱仪，用于检测总黄酮的含量和 纯度。
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物转化于大肠杆菌ＤＨ５ｃｔ，对转化子小量提取质粒，
用ＥｃｏＲ Ｉ和Ｘｂａｌ Ｉ酶切鉴定，从而构建成ＰＬＴＰ／
ｐ３ＸＦＬＡＧ—ＣＭＶ一１４重组载体。
４．ＰＬＴＰ在Ｂｅｉ－７４０２细胞中的表达
方法利用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增磷脂转运蛋白‘ｐｋｒｒＰ）ｅＤＮＡ片段，将其克隆到ｐ３ＸＦＬＡＧ—ＣＭＶ－１４载体，得到 结果转染的人肝癌细胞系Ｂｅｌ・７４０２细
重组载体ＰＬＴＰ／ｐ３ＸＦＬＡＧ—ＣＭＶ－１４，转染于人肝癌细胞系Ｂｅｌ－７４０２。以不同浓度的半枝莲总黄酮作用于重组细胞，
用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ和免疫细胞化学方法检测细胞中ＰＬＴＰ的表达变化。
１－０２－２２
和重构，并影响ＨＤＬ的功能，干预胆固醇转运，从而 影响动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ＡＳ）的发生发 展…。流行病学研究表明，ＡＳ患者血浆中ＰＬＴＰ呈 高表达状态，据此，抑制ＰＬＴＰ的表达应可以发挥防 治ＡＳ的作用¨’２１。课题组前期研究发现，半枝莲总 黄酮可通过调节血脂、保护血管内皮细胞达到抗ＡＳ 的作用。我们在前期研究基础上，利用ＲＴ．ＰＣＲ方 法从胎肝组织中扩增ＰＬＴＰ－ｅＤＮＡ，构建重组质粒， 并将其转染于人肝癌细胞株（Ｂｅｌ－７４０２）中，构建高 表达ＰＬＴＰ的细胞模型，观察半枝莲总黄酮对其
结论
应用ＲＴ．ＰＣＲ、基因重组技术构建了基因重组鲴胞模型Ｂｅｌ－７４０２；半枝莲总黄酮可显著抑制重组Ｂｅｌ－＇１４０２细
胞ＰＬＴＰ的表达。
［关键词】
化学
半枝莲总黄酮；Ｂｅｌ－７４０２；磷脂转运蛋白；基因重组；反转录一聚合酶链反应；免疫印迹法；免疫组织
［中图分类号］
Ｒ５４３．５［文献标志码】Ａ［ＤＯＩ】
（１ｎｓｔｉｔｕ船ｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍｅｄｗａｌ
Ｓｃｈｏｏｌ
ｏｆＹａｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｎｇｓｕ Ｙａｎｇｚｈｏｕ
２２５００１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］
ＯＭｅｃｔｌｖｅ
Ｔｏ
ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ
ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｔｒａｎｓｆｅｒ
第４２卷第２期
２０１１年４月
解
ＡＣＴＡ
剖
学
报
Ｖ０１．４２，Ｎｏ．２ Ａｐｒ．２０１１ ‘１８５’
ＡＮＡＴＯＭＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ
半枝莲总黄酮降低细胞磷脂转运蛋白表达的实验
祝娉婷 卜平‘ 孙云 李湘鸣
郑新梅
（扬州大学医学院中西医结合研究所，江苏扬州２２５００１）
［摘要］
响。
目的构建高表达磷脂转运蛋白的细胞模型，探讨半枝莲总黄酮对磷脂转运蛋白（ＰＬＴＰ）表达的影
磷脂转运蛋白（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ
ｔｒａｎｓｆｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ，
高密度脂蛋白（ｈｉｇｈ
ｄｅｎｓｉｔｙ
ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＤＬ）的代谢
ＰＬＴＰ）是分子质量约为８１ｋＤ的脂多糖结合蛋白，主 要在肝、肺合成，存在于组织和血浆中。ＰＬＴＰ参与
【收稿日期］ ［基金项目］ ２０１０－１２－１０［修回日期］２０１
２．ＰＬＴＰ基因克隆
Ｐｌｕｓ软件扫描作积分吸光度（ｉｎｔｅｇｒａｌ
ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ，ＩＡ）值分析ｏ
５．２
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法：Ｂｅｌ一７４０２细胞经用ＰＬＴＰ／
ｐ３ＸＦＬＡＧ．ＣＭＶ－１４载体转染２４ｈ后，将半枝莲总黄 酮作用于细胞，使其终浓度分别为４０ｍｇ／Ｌ、８０ｍｇ／Ｌ 和１６０ｍｇ／Ｌ，继续培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ，然后离心收集 细胞并提取细胞质蛋白，用Ｂｒａｄｆｏｒｄ法对蛋白定量， 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，凝胶采用５％ 浓缩胶和１２％分离胶，调整每个泳道上样量为 １００ｌｘｇ。电泳后蛋白转移至硝酸纤维膜，封闭抗原 后加入Ｉ抗（１：２００）４。Ｃ过夜，洗膜后进行Ⅱ抗杂交 （１：５００），ＤＡＢ法显色。Ｓｙｎｇｅｎｅ Ｇ：ＢＯＸ凝胶影像 分析系统扫描胶片条带光密度，以目的蛋白ＰＬＴＰ 与内参蛋白（Ｂ—ａｃｔｉｎ）条带的Ｌ４值的比值评定ＰＬＴＰ 的表达水平。
ｏｆ ＰＬＴＰ ｉｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｂｅｌ－７４０２
ｃｅｌｌｓ．
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］
Ｂａｒｂａｔａ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；Ｂｅｌ－７４０２；Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ；Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ
Ｇｅｎｅ；ＲＴ－ＰＣＲ；Ｗｅｓｔｅｒｎ
ｂｌｏｔｔｉｎｇ；Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｉｔｒｙ
片段，大小为１ ３２６ｂｐ，后者为ｐ３ＸＦＬＡＧ．ＣＭＶ－１４载 体，大小为６ ３１０ｂｐ。ＰＬＴＰ／ｐ３ＸＦＬＡＧ．ＣＭＶ一１４的测 序结果，经用ＤＮＡ Ｓｔａｒ软件与ＧｅｎｅＢａｎｋ的ＰＬＴＰ比 对，同源性达到１００％。下划线部分为ＣＭＶ启动
子，见图ｌ。
Ｂｅｌ－７４０２细胞株用含有１０％胎牛血清的１６４０ 细胞培养液于３７℃、５％ＣＯ：的孵育箱中常规培养 传代。Ｂｅｌ－７４０２细胞以４×１０５个／孔接种于６孔板 中，待细胞完全贴壁生长至８０％汇合时开始转染。
Ｔｅｌ：（０５１４）８７９７８８０１
万方数据
解剖学报
４２卷，２期
ＰＬＴＰ表达的影响，旨在通过ＰＬＴＰ介导的脂蛋白这 一途径进一步研究中药半枝莲总黄酮防治Ａｓ的作 用机制，为探索动脉粥样硬化的治疗药物开辟新靶
点。
将ＰＬＴＰ／ｐ３ＸＦＬＡＧ—ＣＭＶ・１４载体用脂质体试剂盒瞬 时转染于细胞，操作按说明书进行。转染２４ｈ后，离 心收集细胞，弃上清，加入１００斗１预冷的细胞总蛋白 提取裂解液，冰浴放置３０ｍｉｎ，４℃，１５ ０００×ｇ离心 １５ｍｉｎ，取上清，测定胞质蛋白含量，用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ和免疫组织化学法检测ＰＬＴＰ的表达。 ５．半枝莲总黄酮对ＰＬＴＰ表达的影响
１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５２９—１３５６．２０１１．０２．００９
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｂａｒｂａｔａ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｏｆ ＰＬＴＰ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＰＬＴＰ ｇｅｎｅ ｃｅｌｌｓ
ＺＲＵ Ｐｉｎｇ－ｔｉｎｇ。ＢＯ Ｐｉｎｇ ４。ＳＵＮ Ｙｕｎ，ＬＩ Ｘｉａｎｇ－ｒｕｉｎｇ，ＺＨＥＮ Ｘｉｎ—ｍｅｉ
万方数据
ＶｏＩ ４２．Ｎｏ ２
祝娉婷等半枝莲总黄酮降低细胞磷脂转运蛋白表达的实验
．＝Ｉ■＝●１１Ｉ 静＿一ｌ ＿
回收。 ３．ＰＬＴＰ／ｐ３ＸＦＬＡＧ－ＣＭＶ－１４的构建
标准差（ｉ±ｓ）表示，各组及组间比较采用单因素方 差分析。以检验水准ｄ＝０．０５，Ｐ＜０．０５为有统计
学意义。
电泳分离获得ＰＬＴＰ ｃＤＮＡ片段，用ＥｃｏＲ Ｉ和
Ｘｂａｌ
结
果
Ｉ双切，与ｐ３ＸＦＬＡＧ．ＣＭＶ．１４载体连接，连接产
１．ＰＬＴＰ／ｐ３ＸＦＬＡＧ－ＣＭＶ－１４载体构建成功 ＰＬＴＰ／ｐ３ＸＦＬＡＧ－ＣＭＶ－１４转化子质粒的酶切鉴
材料和方法
１．材料 人肝癌细胞系（Ｂｅｌ－７４０２）、受体菌Ｅ．ｃｏｌｉ
ＤＨ５ａ
５．１
免疫组织化学法：收集处于对数生长期的重组
购于中国科学院上海细胞生物学研究所。限制性内 切酶（ＥｅｏＲ Ｉ和Ｘｂａｌ Ｉ）、Ｔ４ＤＮＡ连接酶、ｐ３ＸＦＬＡＧ— ＣＭＶ－１４载体、锥虫蓝、胰蛋白酶均购于Ｓｉｇｍａ公司。 二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）、苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）、抑蛋 白酶肽（ａｐｒｏｔｉｎｉｎ）、ＳＤＳ、Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ，－四甲基乙二胺 （ＴＥＭＥＤ）、考马斯亮蓝Ｇ－２５０、ＴｒｉｔｏｎＸ－１００等试剂 购于Ａｍｒｅｓｅｏ公司。兔抗人多克隆ＰＬＴＰ抗体购于
ｗｅｒｅ
ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ
ａｎｄ：ｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄ
ｉｎｔｏ
ａｎＭｙｚｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｅａｌ ａｓｓａｙ．Ｒｅｓｕｌｔ
Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＰＬＴＰ Ｗａｇ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ Ｂｅｌ－７４０２ ｃｅｉｌｓ
ａｓ
ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ １６０ ｍｇ／Ｌ Ｂａｒｂａｔａ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｆｔｅｒ ２４ｈｏｕｒｓ．４８ｈｏｕ腭，７２ｈｏｕｍ
教育部博士点基金资助项目（２００９３２５０１２０００７）； 江苏省普通高校研究生科研创新项目（ＣＸ０９Ｂ一
３２０Ｚ）。
［作者简介］
祝娉婷（１９８４二）．女（汉族）。江苏省人，博士。 助教。
・通讯作者（Ｔｏ
ｗｈｏｍｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ Nhomakorabeaｎｃｅｓｈｏｕｌｄ ｂｅ
ａｄｄｒｅｓｓｅｄ）
Ｅ・ｍａｉｌ：ｈｏｐｉｎｇ＠ｙｚａ．ｅｄｌｌ．ｃ．ｎ
—Ｐｒｏ
Ｃｒｕｚ公司。过氧化物酶标记的羊抗兔ＩｇＧ抗
体、ＤＡＢ显色试剂盒（ＤＡＢ－００３１）等试剂购自福州 迈新生物技术开发有限公司。阳性对照药物：ＦＸＲ 抑制剂Ｇｕｇｇｕｌｓｔｅｒｏｎｅｓ购自Ｓｉｇｍａ公司。 半枝莲总黄酮由扬州大学医学院药学实验室提 供。半枝莲总黄酮及其制备方法已申请国家发明专 利，专利申请号：２００７１００２３７６６．１。
Ｉ
酶切位点（小写所示），并增设３个保护碱基。以胎 肝总ＲＮＡ为模板，进行反转录聚合酶链反应扩增， 反应条件为：９４℃变性２ｍｉｎ；４２℃反转录４５
ｒａｉｎ；
９５℃变性５０ｓ，４２０Ｃ退火５０ｓ，７３℃延伸１８０ｓ，进行５ 个循环；９５。Ｃ变性５０ｓ，５８℃退火５０ｓ，７３℃延伸 ３ｍｉｎ，进行３０个循环；７３℃延伸８ｒａｉｎ。电泳后切胶
Ｓａｎｔａ
细胞Ｂｅｌ．７４０２，按８０×１０４个／孔的细胞数接种于放 有小块盖玻片的６孔板内，待细胞贴壁生长至８０％ 汇合时，用终浓度为４０ｍｇ／Ｌ、８０ｍｇ／Ｌ和１６０
ｍｇ／Ｌ
的半枝莲总黄酮液，分别培养２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ。培 养结束后，取细胞丙酮固定，中性树胶粘贴。严格按 免疫组织化学试剂说明书步骤操作。图像采集：显 微镜下观察，细胞质呈棕黄色染为ＰＬＴＰ阳性。各 组指标取１０张细胞涂片，高倍视野下观察，用Ｉｍａｇｅ