病毒TCID50测定的标准操作规程
tcid50法
tcid50法TCID50法是一种常用的病毒感染力测定方法，用于评估病毒的感染力和浓度。
TCID50法全称为50%细胞传染病毒感染量法，是通过观察细胞感染情况来确定病毒的感染量。
下面将介绍TCID50法的原理、步骤和应用。
一、原理TCID50法是通过连续稀释病毒悬液，将其与细胞共培养，观察细胞感染情况，最后根据感染阳性和阴性的比例计算病毒的感染量。
具体原理如下：1. 取一定量的病毒悬液，进行连续稀释。
2. 将不同稀释度的病毒悬液与细胞共培养。
3. 观察培养后的细胞，根据细胞的感染情况判断阳性和阴性。
4. 根据阳性和阴性的比例，使用统计学方法计算出病毒的感染量。
二、步骤TCID50法的操作步骤如下：1. 准备好所需的培养基、细胞和病毒悬液。
2. 进行病毒的连续稀释，一般为10倍稀释。
3. 将不同稀释度的病毒悬液分别与细胞共培养，通常为96孔板形式。
4. 培养一定时间后，观察细胞的感染情况，记录阳性和阴性的孔数。
5. 根据阳性和阴性的比例，使用统计学方法计算出病毒的感染量。
三、应用TCID50法广泛应用于病毒学研究和生物制品生产中，具有以下几个方面的应用：1. 评估病毒的感染力：通过TCID50法可以确定病毒的感染力大小，对于病毒学研究和防控具有重要意义。
2. 测定病毒的浓度：通过TCID50法可以估算病毒的浓度，为病毒制备和应用提供参考。
3. 监测疫苗效果：通过TCID50法可以评估疫苗的效果，判断其对病毒的抑制作用。
4. 生物制品质量控制：TCID50法可以用于生物制品的质量控制，保证产品的安全有效性。
总结：TCID50法是一种常用的病毒感染力测定方法，通过观察细胞的感染情况来评估病毒的感染量。
其原理简单易懂，步骤清晰明了。
TCID50法在病毒学研究和生物制品生产中具有重要应用价值，可以评估病毒的感染力和浓度，监测疫苗效果，并用于生物制品的质量控制。
通过TCID50法的应用，可以更好地了解和控制病毒的感染过程，为病毒学研究和疫苗生产提供科学依据。
TCID50测定方法
查看文章病毒TCID50测定（组织半数感染量）方法步骤2009-11-27 21:50操作步骤(1) 准备细胞取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。
每个孔的细胞铺成单层大约60％丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。
细胞对照选取16个孔即可。
滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。
也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。
(2) 稀释待测病毒液。
A法为参考书上标准的操作方法B法参照书将液体量减少后的结果病毒稀释液根据是否需要胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。
A向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液。
向1号试管中加入0.2ml病毒，依次10倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。
B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数。
首次滴定可以多稀释几个滴度。
根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500µl，即10-1为50µl 加入450µl的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为100µl加入900µl 孵育液中。
若接种8个孔，则相应增加液体量。
上述的配液并不是固定不变的，可以根据接种的量自行调整。
【！此步操作注意事项：1）建议每个稀释度接种8个孔，若要统计分析则还要增加至16个孔。
2）病毒稀释过程中一定将病毒液与孵育液充分混匀。
2）此过程中需要使用加样器和tip头。
使用前用75%乙醇擦拭加样器，并用紫外线照射20min，确保无菌。
使用新高压的tip头，外包装一定在超净台（或安全柜中打开）。
】(3) 接种取细胞培养板，用多道加样器（又称排枪）吸去96孔板中的培养液，吸取孵育液加在每孔中再轻轻吹打一次，然后吸出孵育液（此步目的是去除血清，因为血清能干扰病毒的吸附）。
2020年病毒TCID50测定.pdf
病毒TCID50测定操作步骤(1) 准备细胞取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。
每个孔的细胞铺成单层大约60％丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。
细胞对照选取16个孔即可。
滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。
也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。
(2) 稀释待测病毒液。
A法为参考书上标准的操作方法B法参照书将液体量减少后的结果病毒稀释液根据是否需要胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。
A向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液。
向1号试管中加入0.2ml病毒，依次10倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。
B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数。
首次滴定可以多稀释几个滴度。
根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500µl，即10-1为50µl加入450µl的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为100µl加入900µl孵育液中。
若接种8个孔，则相应增加液体量。
上述的配液并不是固定不变的，可以根据接种的量自行调整。
【！此步操作注意事项：1）建议每个稀释度接种8个孔，若要统计分析则还要增加至16个孔。
2）病毒稀释过程中一定将病毒液与孵育液充分混匀。
2）此过程中需要使用加样器和tip头。
使用前用75%乙醇擦拭加样器，并用紫外线照射20min，确保无菌。
使用新高压的tip头，外包装一定在超净台（或安全柜中打开）。
】(3) 接种取细胞培养板，用多道加样器（又称排枪）吸去96孔板中的培养液，吸取孵育液加在每孔中再轻轻吹打一次，然后吸出孵育液（此步目的是去除血清，因为血清能干扰病毒的吸附）。
将稀释好的病毒液加到96孔板上，每孔100µl，根据观察的习惯，一般从右到左，从上到下，从高稀释度到低稀释度（10-1，10-2 ）到原液加样。
病毒TCID50测定PDF.pdf
病毒TCID50测定操作步骤(1) 准备细胞取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细胞消化后加10ml培养液正好传一块96孔板，要传匀）。
每个孔的细胞铺成单层大约60％丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。
细胞对照选取16个孔即可。
滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。
也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。
(2) 稀释待测病毒液。
A法为参考书上标准的操作方法B法参照书将液体量减少后的结果病毒稀释液根据是否需要胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。
A向每支试管中加入1.8ml病毒稀释液。
向1号试管中加入0.2ml病毒，依次10倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。
B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数。
首次滴定可以多稀释几个滴度。
根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500µl，即10-1为50µl加入450µl的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为100µl加入900µl孵育液中。
若接种8个孔，则相应增加液体量。
上述的配液并不是固定不变的，可以根据接种的量自行调整。
【！此步操作注意事项：1）建议每个稀释度接种8个孔，若要统计分析则还要增加至16个孔。
2）病毒稀释过程中一定将病毒液与孵育液充分混匀。
2）此过程中需要使用加样器和tip头。
使用前用75%乙醇擦拭加样器，并用紫外线照射20min，确保无菌。
使用新高压的tip头，外包装一定在超净台（或安全柜中打开）。
】(3) 接种取细胞培养板，用多道加样器（又称排枪）吸去96孔板中的培养液，吸取孵育液加在每孔中再轻轻吹打一次，然后吸出孵育液（此步目的是去除血清，因为血清能干扰病毒的吸附）。
将稀释好的病毒液加到96孔板上，每孔100µl，根据观察的习惯，一般从右到左，从上到下，从高稀释度到低稀释度（10-1，10-2 ）到原液加样。
病毒TCID50测定.pptx
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书山有 路
每个所加液体的体积是 0.08ml。图中给出的计算方法是有问题的，请先忽略不看。 从图中我们可以知道半数致死的稀释度肯定是介于 10^-6 到 10^－7 之间，肯定可以表
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书山有 路
示成 10^-6.xx。那么这个.xx 到到底是多少呢？ 这实际上是一个线性插值的问题。求解见下图：
2)Reed-Muench 法 观察 CPE, 找出能引起半数细胞瓶或管感染的病毒稀释倍数，按计算出该病毒液的 TCID50
TCID50的测定方法
TCID50可用Reed-Muench法、内插法、或Karber1、Reed-Muench法将病毒液在灭菌小试管内作连续的10倍稀释,即用1ml吸管吸取0.2ml病毒液,加入已装有1.8ml的hanks液或earle液的第一支小试管内,将混合液充分振荡,并另换1支新的1ml 吸管,吹打混合后,吸取0.2ml移入第二管1.8ml的hanks液管中,更换吸管,如上充分振荡和吹打混匀后,再吸取0.2ml移于第三管。
连续如此操作,即可作成连续的一系列10×稀释液。
吸取每一稀释度的病毒液0.1ml,加入于小试管内已长成单层的敏感细胞培养物中,每个稀释度的病毒液接种4-10个细胞管。
于37℃旋转或静置培养,逐日观察（一般需7-10天左右）,直至终点,也就是看到能够引起病毒增殖（根据细胞病变或血凝素测定等）的病毒最高稀释度。
按表14-2所举例子（每个病毒稀释液接种8个细胞管）计算TCID50数分别列于第四和第五列（根据箭头所示方向）,第六列为细胞管总数,第七列为出现细胞病在10-3（91.6％）和10-4（40％）变的细胞管数占细胞管总数的百分率。
可见该病毒株的TCID50之间,其确切稀释倍数可按下列公式计算：91.6（高于50％的百分数）-5091.6（高于50％的百分数）-40（低于50％的百分数）＝41.6/51.6＝0.8应是0.1ml 将由上式获得0.8加在高于50%死亡的稀释度的对数（3）上,因此该病毒的TCID50。
10-3.8稀释的病毒液。
查反对数得6310,即该病毒6310倍稀释液0.1ml等于1个TCID502、内插法在计算出表14-2第七列,即出现细胞病变的细胞管数的基础上,也可按内插法计算：91.6（高于50％的百分数）-40（低于50％的百分数）50（半数量的比率）-40（低于50％的百分数）＝（相应的病毒液稀释度的对数）-（-4）（40％相应的病毒液稀释度的对数）/TCID50的对数-（-4）（40％相应的病毒液稀释度的对数）解上式得TCID的对数为0.8,结果与Reed-Muench503、Karber法按表14-3及5 Karber公式计算TCID效价：50s＝阳性管比率总和。
病毒TCID50测定
病毒TCID50测定之阳早格格创做收配步调(1) 准备细胞与出一齐细胞培植板，每个孔约莫传8000～10000个细胞（一个T25瓶的细胞消化后加10ml培植液正佳传一齐96孔板，要传匀）.每个孔的细胞铺成单层约莫60％歉度即可交种病毒（下午传佳板第二天早上便能用）.细胞对付照采用16个孔即可.滴定与对付照不妨正在一齐培植板上举止，收配中注意不要窜孔.也不妨分别正在分歧的细胞培植板上举止，然而要包管真验条件普遍.(2) 密释待测病毒液.A法为参照书籍上尺度的收配要领B法参照书籍将液体量缩小后的截止病毒密释液根据是可需要胰酶去采用符合的液体，无论哪种皆无血浑.A背每收试管中加进释液.背1号试管中加进0.2ml病毒，依次10倍系列密释至相宜浓度，末尾一收试管.B正在EP管中用无血浑的孵育液10倍倍比密释病毒本液(10-1，10-2…10-10等)，根据病毒大概的滴度决定密释的倍数.尾次滴定不妨多密释几个滴度.根据交种的孔数密释病毒，惯例每个密释度交种4孔，则每个密释度配500µl，即10-1为50µl加进450µl的孵育液中；如每个密释度交种8个孔，则各配造1ml，即10-1为100µl 加进900µl孵育液中.若交种8个孔，则相映减少液体量.上述的配液本去不是牢固稳定的，不妨根据交种的量自止安排. 【！此步收配注意事项：1）修议每个密释度交种8个孔，若要统计分解则还要减少至16个孔.2）病毒密释历程中一定将病毒液与孵育液充分混匀.2）此历程中需要使用加样器战tip头.使用前用75%乙醇揩拭加样器，并用紫中线映照20min，保证无菌.使用新下压的tip 头，中包拆一定正在超洁台（大概仄安柜中挨启）.】(3) 交种与细胞培植板，用多讲加样器（又称排枪）吸去96孔板中的培植液，吸与孵育液加正在每孔中再沉沉吹挨一次，而后吸出孵育液（此步手段是去除血浑，果为血浑能搞扰病毒的吸附）.将密释佳的病毒液加到96孔板上，每孔100µl，根据瞅察的习惯，普遍从左到左，从上到下，从下密释度到矮密释度（10-1，10-2 ）到本液加样.【切记：树立仄常的细胞对付照.屡屡真验要沉复4次，估计尺度好.】37℃CO2培植箱中孵育1h，与出培植板吸去病毒液（从矮浓度背下浓度吸与可预防窜孔），加进保护液200µl继承正在37℃ CO2培植箱中培植.(4) 培植将培植板搁置于CO2培植箱.培植温度，培植天.(5) 测定截止与出培植板，隐微镜下瞅察细胞病变.估计要领1) Spearman-Karber 法LgCCID50 /0.2ml= - （X0 - d/2 + d×∑R1/N1）X0 = 局部病变最矮密释度对付数d = 密释果数对付数N1 = 每个密释度所种的孔数R1 = 病变孔数∑ = 积战2) Reed-Muench法瞅察CPE,找出能引起对付合细胞瓶大概管熏染的病毒密释倍数，按估计出该病毒液的TCID50TCID50 是指构造培植物（细胞）对付合致死计量.它有几个本量咱们必须明黑：1）它表示的是计量，不是浓度； 2）它是一个单位；3）它的值等于1，本量上问它的值等于几是一个不意义的问题，便像问km的值等于几一般，如果非要道出的的值等于几，那咱们只可道它的值正在所有情况下皆等于1.明黑那三个本量对付于明黑TCID50非常要害，然而是那三个本量时常被误解，所以引导对付TCID50的明黑出现偏偏好.最先咱们去瞅一下那个表示法的意义：病毒浓度为它表示的是每个TCID50的病毒，那战氯化钠的浓度为个mol的氯化钠是一般的讲理.时常不妨听到人道尔的病毒的TCID50是10^xx.那个道法是不科教的，该当道尔那个溶液里含有几个TCID50的病毒大概者道尔那个溶液的病毒溶度是xxTCID50/ml.明黑了TCID50的观念之后，咱们再去瞅瞅TCID50是怎么样估计的？请瞅例子：每个所加液体的体积是0.08ml.图中给出的估计要领是有问题的，请先忽略不瞅.从图中咱们不妨知讲对付合致死的密释度肯定是介于10^-6到10^－7之间，肯定不妨表示成10^-6.xx.那么那个.xx到到底是几呢？那本量上是一个线性插值的问题.供解睹下图：PD/[log(dilution above 50%)-log(dilution below 50%)]=[(%next above 50%)-50%]/[(%next above 50%)-(%next below 50%)]＊注意：如果您的病毒是以3倍3倍天密释那么上头那个公式的log便该当是以3为底的log，其余密释度与此相类似.正在本例子中PD/[(-6)-(-7)]=(80%-50%)/(80%-0%)log(50％的致死的密释度供解得到50％的致死的密释度为根据TCID50的定义，便把那个密释度所含的病毒的量定义为1个TCID50.正在本例中即定义把病毒密释到为1个TCID50.交下去咱们便不妨根据那个定义去供本液的病毒溶度.常常供解每ml含有几个TCID50的病毒.咱们先要去供解那个问题：已知把病毒密释到为1个TCID50，那么病毒本液曲交与个TCID50.很隐然个TCID50.再供解1ml有几个TCID50便简朴了：设1ml那样的病毒本液便有x个TCID50x=10^6.375/0.08=2.9*10^8所以每ml那样的病毒本液有2.9＊10^8个TCID50，即该病毒本液的溶度为2.9*10^8TCID50/ml[如果对付于上头尔道的“很隐然“您一时隐然不起去的话，尔不妨助您举那样的一个例子：您把溶度已知的DNA溶液密释100倍(即密释到10^-2密释度测0D值截止创造那释液含有1个ug的DNA，那么很隐然不妨知讲如果曲交与该当含有100ug 的DNA，该DNA 溶液的溶度为100ug/0.080ml=1250ug/ml.如果您还很隐然不起去的话，修议您不要进止战理工科相闭的处事，您可去当总统什么的，千万别当财务部部少！]证明：咱们已经证据，TCID50法测到的滴度d=log10值比尺度空斑法下0.7.将TCID50/ml变换为PFU/ml：T=1×108.3 TCID50/ml=1×108.3-0.7 PFU/ml=1×107.6PFU/ml≈4×107 PFU/ml.二次沉复考查得到的滴度值应出进个log10值（100.7）.MOI 是multiplicity ofinfection的缩写，华文译为熏染复数.保守的MOI观念起源于噬菌体熏染细菌的钻研.其含意是熏染时噬菌体与细菌的数量比值，也便是仄衡每个细菌熏染噬菌体的数量.噬菌体的数量单位为pfu.普遍认为MOI是一个比值，不单位，本去其隐含的单位是pfu number/cell。
病毒TCID50测定
病毒TCID50 测定操作步骤（1）准备细胞取出一块细胞培养板，每个孔大约传8000〜10000个细胞（一个T25瓶的细胞消化后加 10ml 培养液正好传一块96 孔板，要传匀）。
每个孔的细胞铺成单层大约60 ％丰度即可接种病毒（下午传好板第二天早上就能用）。
细胞对照选取16 个孔即可。
滴定与对照可以在一块培养板上进行，操作中注意不要窜孔。
也可以分别在不同的细胞培养板上进行，但要保证实验条件一致。
（2）稀释待测病毒液。
A 法为参考书上标准的操作方法B 法参照书将液体量减少后的结果病毒稀释液根据是否需要胰酶来选择适合的液体，无论哪种都无血清。
A 向每支试管中加入 1.8ml 病毒稀释液。
向 1 号试管中加入 0.2ml 病毒，依次 10 倍系列稀释至适宜浓度，最后一支试管。
B在EP管中用无血清的孵育液10倍倍比稀释病毒原液（10-1 , 10- 2…10-10等），根据病毒大致的滴度确定稀释的倍数。
首次滴定可以多稀释几个滴度。
根据接种的孔数稀释病毒，常规每个稀释度接种4孔，则每个稀释度配500口 l，即10-1 为50 口1加入450口1的孵育液中；如每个稀释度接种8个孔，则各配制1ml，即10-1为 100口1加入900^1孵育液中。
若接种8个孔，则相应增加液体量。
上述的配液并不是固定不变的，可以根据接种的量自行调整。
【！此步操作注意事项：1）建议每个稀释度接种 8个孔，若要统计分析则还要增加至 16 个孔。
2）病毒稀释过程中一定将病毒液与孵育液充分混匀。
2）此过程中需要使用加样器和tip头。
使用前用75%乙醇擦拭加样器，并用紫外线照射 20min ，确保无菌。
使用新高压的 tip 头，外包装一定在超净台（或安全柜中打开）。
】（3）接种取细胞培养板，用多道加样器（又称排枪）吸去 96 孔板中的培养液，吸取孵育液加在每孔中再轻轻吹打一次，然后吸出孵育液（此步目的是去除血清，因为血清能干扰病毒的吸附）。
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病毒TCID50测定的标准操作规程（编号：014）
1、目的及适用范围
该SOP 适用于病毒滴度测定，即病毒半数感染量TCID 50的测定。
2、主要仪器及试剂
倒置显微镜、细胞培养箱、微量移液器、DMEM 细胞培养液、小牛血清、0.1M PBS 、胰酶
3、操作步骤
3.1准备细胞：取生长良好的细胞，按常规方法消化，运用10%FBS DMEM 制备细胞悬液；对细胞进行计数，调整细胞浓度为1×10个/mL 的悬液，然后加入到96 孔细胞培养板上，100µL/孔。
37℃，5%CO 培养一定时间使其铺满单层。
523.2准备病毒：将待测定病毒进行10倍梯度稀释，选取6-8个梯度进行试验。
3.3感染病毒：96孔板中细胞长满单层后，将培养液吸出，加入稀释好的病毒也，每个梯度8-16孔，每孔100μL ，置37℃，5%CO 培养一定时间后观察病变孔数并记录。
23.4 根据如下方法计算
3.4.1Reed －Muench 氏法
例：某病毒其稀释度及接种细胞后观察到的CPE 结果如下： 病毒稀释度
出现CPE 的孔数 103
16/16 104
16/16 105
16/16 106
13/16 107
7/16 108
1/16 109
0/16
1010 31。