病毒TCID50测定的标准操作规程

病毒TCID50测定的标准操作规程（编号：014）

1、目的及适用范围

该SOP 适用于病毒滴度测定，即病毒半数感染量TCID 50的测定。

2、主要仪器及试剂

倒置显微镜、细胞培养箱、微量移液器、DMEM 细胞培养液、小牛血清、0.1M PBS 、胰酶

3、操作步骤

3.1准备细胞：取生长良好的细胞，按常规方法消化，运用10%FBS DMEM 制备细胞悬液；对细胞进行计数，调整细胞浓度为1×10个/mL 的悬液，然后加入到96 孔细胞培养板上，100µL/孔。37℃，5%CO 培养一定时间使其铺满单层。

523.2准备病毒：将待测定病毒进行10倍梯度稀释，选取6-8个梯度进行试验。

3.3感染病毒：96孔板中细胞长满单层后，将培养液吸出，加入稀释好的病毒也，每个梯度8-16孔，每孔100μL ，置37℃，5%CO 培养一定时间后观察病变孔数并记录。

23.4 根据如下方法计算

3.4.1Reed －Muench 氏法

例：某病毒其稀释度及接种细胞后观察到的CPE 结果如下： 病毒稀释度

出现CPE 的孔数 103

16/16 104

16/16 105

16/16 106

13/16 107

7/16 108

1/16 109

0/16

1010 31