用鸡胚实验在体观察血管发育
流感病毒的鸡胚培养,收获及血凝效价测定实验报告
篇一：鸡胚培养法鸡胚培养法（病毒分离培养）鸡胚是发育的机体，适合许多人类和动物病毒及立克次体的生长增值，常用于痘类病毒、粘液病毒、和疱疹病毒的分离、鉴定、抗原准备、疫苗生产以及病毒性质等方面的研究。
鸡胚培养病毒，常用的接种途径包括绒毛尿囊膜，尿囊腔、羊膜腔以及卵黄囊接种四种。
根据不同病毒，不同实验目的以及不同来源的标本，选择不同的途径接种鸡胚进行培养，即可达到分离培养病毒和传代病毒的目的。
本片主要介绍尿囊腔和羊膜腔两种接种途径在病毒分离培养和传代中的应用。
鸡胚的接种方法、孵育及收获一、仪器和器材spf鸡卵或鸡胚、二级生物安全柜、孵卵箱或恒温箱、检卵灯、照蛋灯、开卵钻、卵盘、1ml、1次注射器、医用胶布、液体石蜡、无菌镊子、巴氏吸管、15 ml无菌离心管、试管架、96孔微量反应板、加样槽、移液器、75%酒精、生理盐水等。
二、鸡胚的孵育应选择保存温度在100左右，时间不超过10天，卵壳薄而色浅的鸡卵，用于鸡胚的孵育。
特别脏的鸡卵需用清水清洗，用布擦干后孵育，干净的鸡卵不必做任何处理。
将鸡卵置于380c---390c孵卵箱，在孵卵箱底层盛水器中放入干净自来水，以保证鸡胚发育的湿度，病保持良好的通风，孵育至第四天，于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育情况。
受精鸡卵可见清晰地血管小团和发育的鸡胚迹象，似蜘蛛壮，未受精鸡卵仅能看见模糊的卵黄黑影，无鸡胚迹象。
在孵育过程中，应随时对鸡胚进行检查，淘汰濒死或已经死亡的鸡胚。
若在恒温箱里孵育鸡胚，则应在恒温箱底层放入装满水的广口容器，并从孵育的第3天起，每天180度转到鸡胚1—2次，是鸡胚发育匀称。
也可直接订购孵育9—11日龄的鸡胚。
如何判断鸡胚存活状态：1胎动：于检卵灯下可见活胎有明显的自然运动，但胎龄大于14天的胚胎，胎动不明显，甚至无胎动，死胎则无任何胎动，胎发红似出血样，有的呈现黑快。
2血管：活胚可见清晰地血管，卵壳较薄者还可见血管的搏动。
死胎血管模糊，成淤血带或淤血块。
发育生物学试验
发育生物学实验Experiments of Development Biology【课程编号】 【课程类别】限选课程【学分数】 3 学分 【适用专业】 生物科学【学时数】 96 学时 【编写日期】2009年9月15日一、教学目标通过本实验教学，使学生能掌握基本的发育生物学实验操作方法、正确使用仪器、准确取得实验数据，学会实验数据处理和科学表达实验结果的方法。
在确保基础实验训练的基础上，强化综合性实验技能训练，注重学生创新思维的培养和综合技能训练。
使学生对自己所学的解剖学, 生物化学，分子生物学等实验技术充分的实践, 学会用传统生物学方法和现代生物学方法验证动植物发育过程中的生物学现象，学会在科学实验中进行协作和配合；提高学生的科研能力，培养良好的科研素质。
二、教学内容和学时分配实验一、鸡胚培养和发育过程观察层次基础性主要内容：学习和掌握鸡胚胎发育所需要的条件，观察鸡胚胎发育的外部形态变化，掌握器官形成的基本规律。
明确环境因素对胚胎发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚发育的大体阶段以及各阶段的形态特征；了解实验室鸡胚胎孵化的基本条件，明确环境对胚胎发育和健康胚胎的重要性。
实验二、鸡胚血管发生的阻断实验层次综合性主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，利用血管阻断剂，通过鸡胚操作，观察药物对血管发育的影响。
明确环境因素对胚胎血管发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚血管发育的基本规律和形态特征；掌握实验室鸡胚血管阻断实验的基本方法，明确药物对胚胎血管发育和健康胚胎的重要性。
实验三、小鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养与发育观察层次综合性主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，在小鸡出壳后24小时， 分离培养肌肉组织的卫星细胞，观察骨骼肌卫星细胞的增殖分化能力。
并对分离得到的鸡骨骼肌卫星细胞表达卫星细胞特异的标志基因Desmin 和 Pax7 进行表达分析。
教学要求：了解鸡胚骨骼肌卫星细胞在发育中的作用，掌握鸡胚骨骼肌卫星细胞分离培养的基本方法。
鸡胚卵黄囊膜血管缺血模型的建立与研究
鸡胚卵黄囊膜血管缺血模型的建立与研究潘莲;李晨军;李焰;张馨月;任凯歌【摘要】目的探究鸡胚卵黄囊膜(sac membrane)右侧腹主血管结扎后鸡胚血管的变化,为研究血管再生及缺血后再灌注提供研究模型及理论基础.方法选用受精的罗曼鸡鸡胚,随机分为两组,实验组结扎鸡胚右侧腹主血管,对照组不结扎.对两组鸡胚在相同的培育条件下进行实时拍摄,利用Photoshop软件处理图片,Image J软件分析两组血管的长度、角度以及密度变化.结果有效的建立了鸡胚体外(outshell)模型以及血管缺血模型,并实现了体外实时动态拍摄.鸡胚sac膜腹主血管结扎后,结扎侧血管出现淤血、退化的现象;随着培养时间增加(6h以后),未结扎侧血管长度较对照组均有增加,角度偏转明显(P＜0.05).与对照组比较,实验组未结扎侧血管密度变化无统计学意义(P＞0.05).结论在鸡胚Sac膜血管可实现血管定向生长调控,结扎鸡胚Sac膜血管可以作为一种方便、有效的缺血研究模型建立方法;在缺血缺氧环境下,血管的生长速度及方向会产生明显的改变.%Objective To explore the changes in chick embryo vessel after the ligation of right abdominal aortic vessel of chick embryo yolk sac membrane and provide study model and theoretical basis for the study on revascularization and ischemia reperfusion.Methods Fertilized Roman chick embryos were selected and randomly divided into two groups.The right abdominal aortic vessels of the chick embryos in the experiment group were ligated,while those in the control group were not ligated.Real-time shooting was conducted on the chick embryos in the two groups under the same incubation conditions.Images were processed with Photoshop (software).The changes in the length,angle and density of vessels in the two groups were analyzedwith Image J (software).Results Chick embryo outshell model and vascular ischemia model were effectively established and outshell real-time shooting realized.After the ligation of right abdominal aortic vessel of chick embryo yolk sac membrane,the vessels on ligation side had congestion and degeneration;with the increase of incubation time (six hours later),the vessels on not ligated side were longer than those in the control group,and the angular deflection was significant (P ＜0.05).Compared with the control group,the changes in vessel density on the not ligated side in the experiment group had no statistical significance (P ＞ 0.05).Conclusion The directed growth of vessels can be controlled in chick embryo yolk sac membrane vessels.The ligation of chick embryo yolk sac membrane vessels can be used as a convenient and effective method to establish ischemia study model;under ischemic and anoxic conditions,the growth speed and direction of vessels will have significant changes.【期刊名称】《西南国防医药》【年(卷),期】2017(027)006【总页数】5页(P544-548)【关键词】鸡胚;卵黄囊膜;血管缺血;模型【作者】潘莲;李晨军;李焰;张馨月;任凯歌【作者单位】646000四川泸州,西南医科大学口腔医学院;646000四川泸州,西南医科大学口腔医学院;成都军区总医院附属口腔医院;成都军区总医院附属口腔医院;646000四川泸州,西南医科大学口腔医学院;646000四川泸州,西南医科大学口腔医学院【正文语种】中文【中图分类】R826.61机体的血循环保证了组织器官的正常生长、发育，而血管缺血对组织发育、创面愈合及肿瘤生长均有重要影响。
鸡胚发育过程
胚胎发育过程相当复杂，以鸡的胚胎发育为例，其主要特征如下:第一天，在入孵的最初24h，即出现若干胚胎发育过程。
4h心脏和血管开始发育；12h心脏开始跳动，胚胎血管和卵黄囊血管连接，从而开始了血液循环；16h体节形成，有了胚胎的初步特征，体节是脊髓两侧形成的众多的块状结构，以后产生骨骼和肌肉；18h消化道开始形成；20h脊柱开始形成；21h神经系统开始形成；22h头开始形成；24h眼开始形成。
中胚层进入暗区，在胚盘的边缘出现许多红点，称“血岛”第二天，25h耳开始形成、卵黄囊、羊膜、绒毛膜开始形成，胚胎头部开始从胚盘分离出来，照蛋时可见卵黄囊血管区形似樱桃，俗称“樱桃珠”。
第三天，60h鼻开始发育；62h腿开始发育；64h翅开始形成，胚胎开始转向成为左侧下卧，循环系统迅速增长。
照蛋时可见胚和延伸的卵黄囊血管形似蚊子，俗称“蚊虫珠”第四天，舌开始形成，机体的器官都已出现，卵黄囊血管包围蛋黄达1/3，胚胎和蛋黄分离。
由于中脑迅速增长，胚胎头部明显增大，胚体更为弯曲。
胚胎与卵黄囊血管形似蜘蛛，俗称"小蜘蛛"。
第五天，生殖器官开始分化，出现了两性的区别，心脏完全形成，面部和鼻部也开始有了雏形。
眼的黑色素大量沉积，照蛋时可明显看到黑色的眼点，俗称“单珠”或“黑眼”。
第六天，尿囊达到蛋壳膜内表面，卵黄囊分布在蛋黄表面的1/2以上，由于羊膜壁上的平滑肌的收缩，胚胎有规律的运动。
蛋黄由于蛋白水分的渗入而达到最大的重量，由原来的约占蛋重的30%增至65%。
喙和“卵齿”开始形成，躯干部增长，翅和脚已可区分。
照蛋时可见头部和增大的躯干部两个小圆点，俗称“双珠”。
第七天，胚胎出现鸟类特征，颈伸长，翼和喙明显，肉眼可分辨机体的各个器官，胚胎自身有体温，照蛋时胚胎在羊水中不容易看清，俗称“沉”。
第八天，羽毛按一定羽区开始发生，上下喙可以明显分出，右侧蛋巢开始退化，四肢完全形成，腹腔愈合。
照蛋时胚在羊水中浮游，俗称“浮”。
肿瘤细胞诱导血管生成模型具体步骤及详细说明
肿瘤细胞诱导血管生成模型具体步骤及详细说明肿瘤血管生成是指肿瘤微环境诱导的在原有血管基础上生成以毛细血管为主的血管系统，并在肿瘤组织内建立血液循环的过程。
肿瘤血管生成与肿瘤微环境密切相关，受多种促血管生成因子和（或）血管生成抑制因子的调节。
1、鸡胚准备和接种组织：选择北京白鸡种蛋，洗净，用l：1000苯扎溴铵（新洁尔灭）液浸泡3分钟，置37.8土0.5℃培养箱中孵育。
鸡胚发育第7天，蛋壳消毒后，标记制作2cmX3cm左右观察窗。
接种组织视研究目的而定，一定要在接种当日取材，充分清洗除去血污和粘液，再剪成1——2mm 组织小块。
2、组织接种：在制备鸡胚观察窗的次日，即鸡胚发育第8天进行组织接种。
每个鸡胚可接种5—7个组织小块于接种部位CAM表面，再用透明胶纸封好，继续孵育。
3、接种组织的收获与观察：组织接种后每12小时观察一次，到组织接种第11天（鸡胚发育第18天）收获接种组织，取出鸡胚，置接种组织连同周围的CAM于解剖显微镜下观察，并用10％甲醛固定保存，部分组织可作石蜡切片，用作血管生成研究的免疫组化染色等。
4、CAM的血管生成表现：组织接种24小时后，CAM血管开始向接种组织生长，随培养时间的延长，血管数目及直径均明显增加；第2天，新细小血管直接趋向组织；第3天，新生血管形成以接种组织为中心，10——20条放射状血管网；尔后，CAM血管继续明显增加。
非接种部位与接种部位比较，CAM 血管数目少，大血管与小血管呈脉样均匀分布；而接种部位的CAM血管在接种组织周围弥散样增加，以组织为中心向周围呈放射状分布，在首先与组织发生联系的区域CAM血管更多。
第4天，可见新生细小CAM血管生长形成中、粗血管，并在中、粗血管继续分支出细小血管，形成新的血管网。
CAM血管管腔结构清晰，可区别动、静脉。
注意事项该类体外实验研究，有很多人为因素影响，不能代表体内生理反应，因为内皮细胞在生长因子存在的条件下培养了很长一段时间，已被激活。
鸡胚实验报告
一、实验目的1. 了解鸡胚的发育过程及形态变化；2. 掌握鸡胚培养的基本操作技能；3. 熟悉鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用。
二、实验原理鸡胚是一种常用的实验动物模型，其胚胎发育过程与哺乳动物胚胎发育过程具有相似性。
通过观察鸡胚的发育过程，可以了解胚胎发育的规律和机制。
鸡胚培养是生物科学研究和医学领域的重要技术手段，可用于病毒分离、疫苗制备、基因功能研究等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 新鲜鸡蛋- 生理盐水- 灭菌滤纸- 鸡胚培养液- 培养皿- 显微镜- 培养箱- 计时器2. 实验仪器：- 研钵- 研杵- 灭菌镊子- 灭菌剪刀- 灭菌移液器四、实验步骤1. 鸡胚培养液的准备：- 将生理盐水加入研钵中，用研杵搅拌均匀；- 将生理盐水倒入培养皿中，用灭菌滤纸过滤；- 将过滤后的生理盐水倒入培养瓶中，加入鸡胚培养液，充分混合。
2. 鸡胚的收集：- 将鸡蛋放入温水中浸泡，待鸡蛋表面温度与室温相近；- 将鸡蛋敲碎，取出蛋黄和蛋白，弃去；- 将鸡蛋清加入鸡胚培养液中，搅拌均匀。
3. 鸡胚的接种：- 将鸡胚培养液倒入培养皿中，厚度约1cm；- 将鸡胚放入培养皿中，用灭菌镊子轻轻压平；- 将培养皿放入培养箱中，保持适宜的温度和湿度。
4. 鸡胚的观察：- 每日观察鸡胚的发育情况，记录发育过程；- 利用显微镜观察鸡胚的形态变化，如胚胎细胞分裂、器官形成等。
5. 实验结果分析：- 根据观察结果，分析鸡胚的发育规律和机制；- 结合相关文献，探讨鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用。
五、实验结果1. 鸡胚发育过程：- 鸡胚在培养过程中，细胞分裂迅速，胚胎逐渐形成；- 随着时间的推移，胚胎细胞分化出不同的器官，如心脏、肝脏、肺等。
2. 鸡胚形态变化：- 通过显微镜观察，可见鸡胚细胞分裂、胚胎形成、器官发育等过程；- 鸡胚的形态变化与相关文献描述相符。
六、实验讨论1. 鸡胚培养在生物科学研究和医学领域的应用：- 鸡胚培养可用于病毒分离和疫苗制备；- 鸡胚培养可用于基因功能研究和疾病模型构建；- 鸡胚培养为研究胚胎发育规律和机制提供了有力工具。
研究中药血管生成活性和作用的鸡胚绒毛尿囊膜试验模型的应用
研究中药血管生成活性和作用的鸡胚绒毛尿囊膜试验模型的应用中国中医基础医学杂志1999年第5期第5卷实验研究作者：张树成吴志奎王蕾王弘毅王介东单位：张树成王弘毅王介东(国家计划生育委员会科学技术研究所北京100081)；吴志奎王蕾(中国中医研究院广安门医院北京100053)关键词：血管生成；鸡胚；试验模型摘要目的建立研究中药血管生成活性和作用的实验模型并进行初步应用。
方法将服用中药后的动物血清、组织匀浆、生药等被测物置于鸡胚绒毛尿囊膜(Chicken Chorioallantoic Membrane, CAM)表面的不同载体上，被测物作用3d后制取CAM标本，显微镜下计数血管生成数目。
结果不同被测物均可在CAM模型完成观察，6种载体中研究血管生成抑制和促进作用应分别选择明胶海棉和羧甲基纤维素、微孔滤膜。
结论中药具有的血管生成活性和作用应引起重视。
Application of chicken chorioallantoic membrane as a model for study of effects of chinese medicine on angiogensisZhang Shucheng, Wu Zhikui, Wang Lei, Wang Hongyi, Wang Jiedong(National Research Institute for Family Planning, Beijing 100081 and Guang Anmen Hospital,Chinese Medical research Institute of Sinica, Beijing 100053)Abstract: Objec:Angiogensisi plays an important role in phyisological and pathological process of body and is a hot field of research inernationally.Present works introduce chicken chorioallantoic membrane (CAM) model into traditional chinese medical research.It is suggested that we should pay attention to angiogenic activity and effect of herb medicine.Key words:experimental model, chicken chorioallantoic membrane, angiogenesis血管生成是指从已存在的血管中生成新毛细血管的过程。
鸡胚发育照蛋与解剖图
第 7 胚 龄 照 蛋
白茫茫的羊水增多，胚胎活动尚不强， 似沉在羊水中，俗称“沉”，正面已 布满扩大的卵黄和血管
第 8 胚 龄 照 蛋
胚胎较易看到，象在羊水中浮游一 样，俗称为“浮” ，卵黄已扩大到 背面，蛋转动时二边卵黄不易晃动， 俗称为“边口发硬”
第 9 胚 龄 照 蛋
蛋转动时，二边卵黄容易晃动，故俗 称为“晃得动”，接着背面尿囊血管 迅速伸展越出卵黄，故俗称为“发边”
第 21 胚 龄 照 蛋
出壳
第 21 胚 龄 照 蛋
第21胚龄外观
未受精蛋1未受精蛋2受精蛋1受精蛋2蛋黄表面有一颗颜色稍深四周稍亮的圆点俗称鱼眼珠或白光珠可以看到卵黄囊血管区其形状很象樱桃形故俗称为樱桃珠卵黄囊血管的形状象静止的蚊子俗称蚊虫珠卵黄颜色稍深的下部似月牙俗称月牙蛋转动时卵黄不易跟随着转动俗称为钉壳胚胎和卵黄囊血管形状象一只小的蜘蛛故又称小蜘蛛明显看到黑色的眼点俗称起珠单珠起眼若为5天整还可见到些羊胚胎形似电话筒一端是头部另一端为弯曲增大的躯干部俗称双珠可以看到羊水白茫茫的羊水增多胚胎活动尚不强似沉在羊水中俗称沉正面已布满扩大的卵黄和血管胚胎较易看到象在羊水中浮游一样俗称为浮卵黄已扩大到背面蛋转动时二边卵黄不易晃动俗称为边口发硬蛋转动时二边卵黄容易晃动故俗称为晃得动接着背面尿囊血管迅速伸展越出卵黄故俗称为发边尿囊血管继续伸展在蛋的小头合拢整个蛋除气室外都布满了血管俗称为合拢长足血管开始加粗血管颜色开始加深主要观察小头发亮的部分随着胚龄的增大而逐日缩小主要观察小头发亮的部分随着胚龄的增长而逐小蛋内黑影部分随着胚龄增大而加大这就是胚胎体增长的标志主要观察小头发亮的部分随着胚龄的增长而逐小蛋内黑影部分随着胚龄增大而加大这就是胚胎体增长的标志以小头对准光源再看不到发亮的部分俗称为关门封门以小头对准光源再看不到发亮的部分俗称为关门封门气室向一方倾斜这是胚胎转身的缘故俗称为斜口转身气室内可以看到黑影在闪动俗称为闪毛起初是胚胎喙部穿破壳膜伸入气室内称为起嘴接着开始啄壳称为见嘌
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2020/3/2
30
鸡胚模型的应用
➢CAM模型用在肿瘤研究、子宫内膜异位症发病研究 ➢目前，抑制肿瘤血管形成已被公认为一种崭新的抗 癌战略，以肿瘤血管生成为靶点，开发血管生成抑制 剂在抗肿瘤研究中是一个新的活跃研究领域。抗血管 生成治疗的研究现已推广到新生儿血管瘤病、类风湿 性关节炎、银屑病、糖尿病性视网膜病变等疾病的治 疗；而促血管生成对心血管疾病、胃肠道消化性溃疡 等疾病的治疗也有一定的意义。
与传统的肿瘤治疗方法相比，抗血管生成治疗 具有高效性、特异性强、不易产生耐药性、毒副作 用小和可治疗多种肿瘤等优点。
抗血管生成治疗是当今肿瘤生物靶向治疗领域 的研究前沿和临床关注热点,是肿瘤控制治疗新策 略的组成部分。
2020/3/2
6
2001年，中国医学科学院肿瘤医院联 合全国24家临床医院，对恩度进行了近500 例的大规模临床实验。2005年9月12日，恩 度获得国家新药证书，成为拥有自主知识 产权的国家一类新药。
2020/3/2
对照组
高浓度药物实验组
25
对照组
低浓度药物实验组
2020/3/2 中浓度药物实验组
高浓度药物实验组
26
➢ 解剖显微镜下以相同放大倍数计数血管，以实验部位 边缘(即徽孔滤膜载体边缘) 1mm范围内为一级血管， 5mm范围内为二级血管．凡属趋向性生长的血管，即以 载体为中心发出，与滤膜半径的夹角小于45°者均计数 ，而穿行，绕行的血管则不计算在内．一、二级血管分 别观察计数，然后对一、二级血管数分别进行统计学分 析和拍照记录。
2020/3/2
罗永章
7
海洋低温溶菌酶
Marine low-temperature lysozyme（MLTL）
通过生物发酵方法从一种海洋微生物中提取纯 化 。20℃下将菌株振荡培养发酵40h，低温离心获 取上清后经浓缩、透析、层析及色谱分别纯化后即 可得到纯酶，相对分子量为39KD，纯度>98%。
2020/3/2
19
2020/3/2
20
鸡胚绒毛尿囊膜模型
I. 鸡胚的生物学构造 尿囊
卵黄囊
2020/3/2
21
鸡胚模型的意义
I. 生理情况下．新生血管形成主要发生在胚胎发育 和女性月经周期内膜修复过程：在某些病理情况 下。如损伤修复、炎症等也常伴发血管生成。特 别是肿瘤生长和转移与血管生成密切相关。早在 1912年，鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型首次成功用于 肿瘤研究。
➢ 设置对照组和实验组：对照组加生理盐水，实验组按 照预先设定的药物浓度分别加药，药物加在无菌滤纸 薄片上，置薄片于血管较细、密度较小部位
2020/3/2
23
2020/3/2
24
➢ 小心把对照组和实验组放回温箱， 37℃，55％相对 空气湿度，3%CO2浓度继续孵育，但不再翻动
➢ 孵育至第8～10天，连续观察结果并拍照记录。
2020/3/2
2
2020/3/2
3
I.
上世纪70年代，美国科学家、哈佛大学医学院教授Judah Folkman 提出了著名的“饿死肿瘤疗法”，即通过阻断肿瘤新生血管生成， 切断肿瘤营养供给，从而达到抑制和治疗癌症的目的，为癌症治疗
指出了一条新的途径。
2020/3/2
4
2020/3/2
5
“饿死肿瘤”疗法的优点
2020/3/2
15
2020/3/2
16
模式生物的发展
早在20世纪最初的20年中，甚至更早到20世纪的 “上世纪”，人们就发现，如果把关注的焦点集中在相 对简单的生物上则发育的现象难题可以得到部分解答 （细胞数量更少，分布相对单一，变化也较好观察；由 于进化的原因，细胞生命在发育的基本模式方面具有相 当大的同一性）所以利用位于生物复杂性阶梯较低级位 置上的物种来研究发育共通规律是可能的。尤其是当在 有不同发育特点的生物中发现共同形态形成和变化特征 时，发育的普遍原理也就得以建立。因为对这些生物的 研究具有帮助我们理解生命世界一般规律的意义，所以 它们被称为“模式生物”。
开放性实验
溶菌酶对鸡胚尿囊膜血管发育抑制观察
人体机能学试验中心
2020/3/2
1
血管生成抑制药物在临床肿瘤治 疗中的意义
恶性肿瘤在全球范围内已成为常见病、多发病，据世 界卫生组织报告，全球50多亿人口中，每年新诊断的肿瘤 患者约为900万人，因肿瘤而死亡者达700万人，占总病死 率的近20%。
传统的肿瘤治疗方法如手术、放疗和化疗虽有一定的 进展，但都有它们本身的局限性。
2020/3/2
8
前期实验结果显示MLTL可抑制体外培养的牛 主动脉内皮细胞增殖，在动物模型中抑制肿瘤生长 和血管生成，但对体外培养的肿瘤细胞没有明显作 用。这些结果表明MLTL有可能通过抗血管生成进而 抑制肿瘤生长。
2020/3/2
9
2020/3/2
10
2020/3/2
11
2020/3/2
2020/3/2
17
模式生物的特点
I. 生理特征能够代表生物界的某一大类群 II. 容易获得并易于在实验室中饲养繁殖 III.容易进行实验操作
胚
斑马鱼作为模式生物的特点： I. 斑马鱼基因与人类基因的相似度达到87％，这意味
着在其身上做药物实验所得到的结果在多数情况下 也适用于人体，因此它受到生物学家的重视 ； II. 斑马鱼的胚胎是透明的，所以生物学家很容易观察 到药物对其体内器官的影响 ; III.雌性斑马鱼可产卵200枚，胚胎在24小时内就可发 育成形，这使得生物学家可以在同一代鱼身上进行 不同的实验，进而研究病理演化过程并找到病因
2020/3/2
27
2020/3/2
28
注意事项
➢ 药物加入时间选择： 鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成大约经历早期、中期
和晚期3个阶段。早期胚胎的第5～7天，毛细血管网 以出芽的方式形成新生血管；中期胚胎发育的第8～ 12天，套叠生长是主要的生长方式；而晚期胚胎的第 l3～l4天，血管结构已经基本成熟，此时的血管形成 主要以毛细血管网的膨胀方式进。
II. 鸡胚对抑制血管生成的药物较敏感．是一种较理 想的研究抗血管形成药物的筛选模型．是研究血 管形成和抗血管形成的最佳体内模型之一。
2020/3/2
22
操作过程
I. 获取种蛋，于37℃，55％相对空气湿度下孵育，每天 翻动3次；
II. 孵育至第七天，无菌条件下加药：
➢ 确定气室及胚头位置
➢ 75%酒精清洗卵壳，无菌眼科镊、剪在气室处开窗， 直径为2.0cm左右，小心移去蛋壳及其内侧的壳膜， 观察绒毛膜尿囊血管生成情况
12
2020/3/2
13
2020/3/2
14
在体观察血管发育的模式生物
模式生物：通常指人们研究生命现象过程中长期、 反复作为研究材料的物种，如，果蝇、线虫、斑马鱼、 鸡胚、拟南芥等。人们在对这些物种的形态、解剖、生 理、生化、细胞及遗传进行全面分析和归纳的基础上， 把它们作为典范，将对其研究得出的规律，推演到相关 的生物物种中，从而加快了对其他各种生物的研究。
因此，选择胚胎4～10天进行抗血管形成试验， 此时血管形成以出芽和套叠的方式进行，处于血管生 长高峰阶段，便于结果的观察。
2020/3/2
29
➢ 药物载体的选择： 在CAM 法中，固态待测物可直接加入，液态物质
需要适宜载体，使药物在局部缓释起效及定位．常用 的药物戴体有 (1)明胶海绵，(2)中速定性滤纸，(3) 快速定性滤纸，(4)混合纤维素滤膜，(5)双蒸水配制 浓度为0.5％ 的M-450甲基纤维素溶液。高温高压灭， 150ｕl甲基纤维素溶液分6次加入直径为5mm 的半圆 形模具中，60℃ 烤箱烘干成盘状，80℃烤箱中烘烤 60min消毒，备用．前四种载体制成直径5mm的圆片， 湿热灭菌，4℃冰箱保存备用。
2020/3/2
31