藻类培养基
化学农药环境安全评价试验准则 第14部分：藻类生长抑制试验-最新国标
化学农药环境安全评价试验准则第14部分：藻类生长抑制试验1 范围本文件规定了化学农药藻类生长抑制试验的试验条件、试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤、试验数据处理、质量控制以及试验报告等的基本要求。
本文件适用于为化学农药登记而进行的藻类生长抑制试验。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
NY/T 3273 难处理农药水生生物毒性试验指南NY/T 4195.6 农药登记环境影响试验生物试材培养第6部分：近头状尖胞藻3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1半效应浓度median effective concentration在生长抑制试验中，与对照相比，引起受试藻生物量增长或者平均生长速率下降50％时的被试物浓度，用EC50表示。
在本文件中，通过藻类生物量增长的抑制率计算而得到的EC50用E y C50表示，通过藻类平均生长速率的抑制率计算而得的EC50用E r C50表示。
注：单位为毫克每升（mg/L）。
3.2平均生长速率average growth rate （average specific growth rate）特定暴露时段内的平均生长速率，即暴露结束与暴露开始时受试藻生物量的自然对数值之差除以时长（如3 d），用μ表示。
3.3生物量增长量yield特定暴露时段内的生物量增长量，即暴露结束时的生物量减去暴露开始时的生物量，用Y表示。
4 原理用被试物及藻类培养基配制一系列不同浓度的试验药液，将试验药液与藻液混合后，连续染毒72 h。
试验期间观察受试藻的生长抑制情况，求出半效应浓度72 h- EC50（E y C50、E r C50）及其95％置信区间。
5 试验条件试验期间应满足以下条件：a) 环境温度21 ℃～24 ℃，但单次试验应控制在±1 ℃；b) 连续均匀光照，光源为400 nm～700 nm波长的冷白灯或日光灯，光照强度4440 lux～8880 lux，不同位点光照强度差异应控制在15%范围内；c) 空白对照pH变化范围不超过1.5；d) 以一定转速持续振荡或搅拌藻液，例如每分钟（100±20）转。
小球藻的培养
小球藻的培养一、小球藻小球藻是单细胞植物，种类较多，多数生活在淡水中，少数生活在海洋里。
按植物学分类，小球藻属于小球藻纲绿藻目原球藻科生物，其体型小，直径一般为3～5μm，在显微镜下，需要放大400～600倍才能看到，我们肉眼看到的只不过是含有小球藻的绿色的水。
小球藻所含的营养成分很高，其蛋白质含量达到50%～60%（相当于花生米的2倍、鸡蛋的5倍），含脂肪10%～30%，还含有多种维生素。
小球藻的生物活性物质糖蛋白和多糖体的含量也相当高，这些生物活性物质具有增强人体免疫力、抗癌、降血压、抑制血糖上升、排除体内毒素和迅速恢复机体损伤等功能。
因此，小球藻的培养前景广阔。
作为培养原料的小球藻，可以到较清洁的池塘、水坑中采集绿色的水，在显微镜下鉴定，然后再用。
也可以向培养它的人索取。
1 容器的准备小规模的培养可用瓶、缸等，大规模的培养可用水泥池。
首先，要对所使用的容器进行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水冲刷数次。
(100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平称量5g2%漂白粉澄清液；②定量转移至容量瓶中；③加水至1L；④混匀。
2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水搅匀，再加水至100毫升，充分调匀后，待澄清后取上清液使用。
）2 培养液的准备（1）BG11液体培养基配方：Stock1 定容100mL 柠檬酸0.3g 柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78g MgSO4·7H2O 1.5gStock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9g Stock4 定容100mL Na2CO3 2gStock5 定容1000mL H3BO3 2.86g MnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222gNa2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g Co(NO3)2·6H2O 0.049gStock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL 总定容1000mL（2）购买2000元/套，九种原液各200ml（稀释1000倍），10瓶。
Zarrouk 培养基基础（不含微量元素）使用说明书
Zarrouk培养基基础（不含微量元素）使用说明书储存条件：粉末常温保存，溶液2-8℃保存。
产品编号：AMP271（不含微量元素）产品说明：Zarrouk培养基又名Z氏培养基，常用于螺旋藻、微小色球藻的培养。
A5和B6单独配制，要低温或冷冻保存，使用前要充分的摇动。
新培养基的pH值为8.2-8.5，可能会有少量沉淀产生，不影响藻类生长。
Zarrouk培养基套装组成（货号AMP271）：产品组成规格编号Zarrouk培养基基础250g AMP271A5微量元素12mL（自备）AML101B6微量元素12mL（自备）AML121注：1.A5和B6已做无菌处理，并注意无菌操作，使用前要充分摇动。
2.如需制作培养基平板，应在灭菌前加入琼脂（15g/L）。
3.不同文章中Zarrouk培养基略有差异，可联系本公司定制。
液体培养基使用方法：1.烧杯中加入1L去离子水，打开磁力搅拌，缓慢加入22.04g粉末培养基，至完全溶解（可能会有少量沉淀或者浑浊，）；2.pH值调节为8.2-8.5（可根据需要调整）；3.121℃高压灭菌15min，冷却至室温，加入微量元素A5和B6各1mL。
固体培养基使用方法：22.04g粉末溶解于500mL去离子水；30g琼脂粉解于500mL去离子水，分别高压灭菌，之后再混合（如果培养基和琼脂一起高压灭菌，最终的培养基会变红色）。
Zarrouk培养基组分含量表：配方1（AMP272）配方2（AML331）基础配方（AMP271）组分工作液/L工作液/L工作液/L NaCl 1.00g 1.00g 1.00gCaCl20.08g0.08g0.08gNaNO3 2.5g 2.5g 2.5gFeSO4·7H2O0.01g0.01g0.01gNa2EDTA0.08g0.08g0.08gK2SO4 1.00g 1.00g 1.00g MgSO4·7H2O0.2g0.2g0.2gNaHCO316.8g16.8g16.8gK2HPO40.5g0.5g0.5gA5储备液1mL2mL-B6储备液1mL--注：1.Zarrouk培养基有多种配方，可联系我司定制。
小球藻的培养
小球藻的培养一、小球藻小球藻是单细胞植物，种类较多，多数生活在淡水中，少数生活在海洋里。
按植物学分类，小球藻属于小球藻纲绿藻目原球藻科生物，其体型小，直径一般为3～5μm，在显微镜下，需要放大400～600倍才能看到，我们肉眼看到的只不过是含有小球藻的绿色的水。
小球藻所含的营养成分很高，其蛋白质含量达到50%～60%（相当于花生米的2倍、鸡蛋的5倍），含脂肪10%～30%，还含有多种维生素。
小球藻的生物活性物质糖蛋白和多糖体的含量也相当高，这些生物活性物质具有增强人体免疫力、抗癌、降血压、抑制血糖上升、排除体内毒素和迅速恢复机体损伤等功能。
因此，小球藻的培养前景广阔。
作为培养原料的小球藻，可以到较清洁的池塘、水坑中采集绿色的水，在显微镜下鉴定，然后再用。
也可以向培养它的人索取。
1 容器的准备小规模的培养可用瓶、缸等，大规模的培养可用水泥池。
首先，要对所使用的容器进行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水冲刷数次。
(100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平称量5g2%漂白粉澄清液；②定量转移至容量瓶中；③加水至1L；④混匀。
2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水搅匀，再加水至100毫升，充分调匀后，待澄清后取上清液使用。
）2 培养液的准备（1）BG11液体培养基配方：Stock1 定容100mL 柠檬酸0.3g 柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78g MgSO4·7H2O 1.5gStock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9g Stock4 定容100mL Na2CO3 2gStock5 定容1000mL H3BO3 2.86g MnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222gNa2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g Co(NO3)2·6H2O 0.049gStock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL 总定容1000mL（2）购买2000元/套，九种原液各200ml（稀释1000倍），10瓶。
document_A040306_盐藻藻种培养
盐藻藻种培养：1．藻种培养设施：藻种的培养要在保种室中进行，保种室要求通风条件好，光线条件好，温度可控性好，保种室要配有空调、冰箱、具有人工光源的培养架等。
培养中常用培养仪器有显微镜、解剖镜等，容器有三角烧瓶、广口玻璃瓶等。
保种室要严格消毒，防止病菌的侵入。
2．容器、工具的消毒：进行单细胞藻类的纯培养，容器、工具、培养基都要进行严格灭菌，但一般生产性的单种培养，则只须达到消毒目的就可以了。
常用的消毒方法有高温消毒法和化学药品消毒法。
高温消毒法是利用高温杀死微生物的方法。
不耐高温的容器如塑料和橡胶制品等不能利用高温法消毒。
a、直接灼烧消毒接种环、镊子等金属小工具，试管口、瓶口等可以直接在酒精灯火焰上短暂灼烧消毒。
载玻片、小刀等则最好先蘸酒精，然后在酒精灯火焰上点燃，等器具上的酒精烧完，也就完成了灭菌操作。
b、煮沸消毒把容器、工具放入锅中，加水煮沸消毒，一般煮沸10-20分钟。
大型锥形瓶消毒，可在瓶口上放一普通的玻璃漏斗，再在漏斗上放一称量瓶盖，在锥形瓶内加少量淡水，置电炉上加热煮沸5-10分钟，可使整个瓶壁消毒。
消毒完毕即用消毒的纸或消毒的纱布包扎瓶口。
此法适合消毒小型的容器工具。
c、烘箱干燥消毒将玻璃容器、金属工具用清水洗干净后，放入烘箱。
关闭烘箱门，打开通气孔，接通电源加热。
当温度上升到120℃时，关闭通气孔，停止加热。
如果进行纯培养，容器必须灭菌，当温度上升到105℃时，关闭通气孔，继续加热至160℃，保持温度，恒温2小时，然后停止加热。
必须要等到温度下降到60℃以下，才能打开烘箱门。
有棉塞和纸包扎的容器、工具灭菌，不能超过180℃，以免烘焦。
化学药品消毒主要用于生产性大量培养中，大型容器、工具、水泥池等常用化学药剂消毒。
a、漂白粉消毒工业用漂白粉一般含有效氯25%~35%，消毒时按万分之1-3的含量配成水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡半小时，再用消毒水冲洗3~4次即可。
b、酒精消毒酒精消毒常用于中小形容器和工具，方法是用纱布蘸70%酒精在容器、工具的表面涂抹即可。
小球藻的培养
小球藻的培养一、小球藻小球藻是单细胞植物，种类较多，多数生活在淡水中，少数生活在海洋里。
按植物学分类，小球藻属于小球藻纲绿藻目原球藻科生物，其体型小，直径一般为3～5μm，在显微镜下，需要放大400～600倍才能看到，我们肉眼看到的只不过是含有小球藻的绿色的水。
小球藻所含的营养成分很高，其蛋白质含量达到50%～60%（相当于花生米的2倍、鸡蛋的5倍），含脂肪10%～30%，还含有多种维生素。
小球藻的生物活性物质糖蛋白和多糖体的含量也相当高，这些生物活性物质具有增强人体免疫力、抗癌、降血压、抑制血糖上升、排除体内毒素和迅速恢复机体损伤等功能。
因此，小球藻的培养前景广阔。
作为培养原料的小球藻，可以到较清洁的池塘、水坑中采集绿色的水，在显微镜下鉴定，然后再用。
也可以向培养它的人索取。
1 容器的准备小规模的培养可用瓶、缸等，大规模的培养可用水泥池。
首先，要对所使用的容器进行消毒，一般用100mg/L的漂白粉水溶液浸泡，再用水冲刷数次。
(100mg/L的漂白粉水溶液的配制：①天平称量5g2%漂白粉澄清液；②定量转移至容量瓶中；③加水至1L；④混匀。
2％漂白粉上清液的配制法：取漂白粉2克，加少量水搅匀，再加水至100毫升，充分调匀后，待澄清后取上清液使用。
）2 培养液的准备（1）BG11液体培养基配方：Stock1 定容100mL 柠檬酸0.3g 柠檬酸铁胺0.3g EDTANa2 0.05gStock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78g MgSO4·7H2O 1.5gStock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9g Stock4 定容100mL Na2CO3 2gStock5 定容1000mL H3BO3 2.86g MnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222gNa2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.079g Co(NO3)2·6H2O 0.049gStock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL 总定容1000mL（2）购买2000元/套，九种原液各200ml（稀释1000倍），10瓶。
小球藻最简单繁殖方法
小球藻最简单繁殖方法小球藻是一种单细胞藻类，无颜色，呈现球形，体积一般在1-2微米之间，其细胞结构简单，生长快，具有很高的适应性和遗传稳定性，因此在生物学研究中被广泛应用。
小球藻的繁殖方式也很特殊，下面介绍一下小球藻最简单的繁殖方法。
第一步，准备培养基和小球藻。
小球藻的繁殖需要有营养的培养基，通常采用的是含有氮、磷、钾、镁等元素的培养液，在室温下保存，尽量避免光照和震动。
同时要选用健康且生长繁殖较快的小球藻，这有利于后续的繁殖。
第二步，将小球藻转移到新的培养基中。
在生长过程中，小球藻会释放出一定数量的母细胞，这些母细胞包含了小球藻细胞质和核酸，是小球藻繁殖的基本单位。
将这些母细胞过滤筛选出来，然后转移到新的培养基中，这样可以使小球藻的繁殖速度加快。
第三步，控制培养条件。
小球藻的繁殖需要有一定的培养条件，如光照强度、温度、pH值等，这些条件都会影响小球藻的生长速度和繁殖率。
要合理调整这些条件，使小球藻处于最适宜的生长条件下，从而加速小球藻的繁殖速度。
第四步，监测繁殖情况。
在繁殖过程中，要定期监测小球藻的生长情况，观察细胞数量、大小、形态等变化。
如果发现有异常的情况，要及时排查原因，调整培养条件，从而保证小球藻的繁殖效果。
通过上述步骤，小球藻的最简单繁殖方法就完成了。
值得注意的是，小球藻的繁殖速度非常快，可以在很短的时间内繁殖出大量的细胞。
但是在繁殖过程中，一定要注意控制细胞密度，避免过高的密度导致养分不足，从而影响小球藻的生长和繁殖效果。
另外，小球藻是一种重要的环境保护和生态修复材料，其繁殖还具有重要的科学意义和社会价值。
金球藻培养实验报告
金球藻培养实验报告金球藻是一种常见的淡水微型藻类，具有很高的生物学研究价值。
为了更好地了解金球藻的生长特性和培养条件，我们进行了金球藻的培养实验。
我们准备了培养金球藻所需的培养基。
金球藻是一种光合作用藻类，所以培养基中需要添加光合作用所需的营养物质，如碳源、氮源和矿物元素等。
我们选择了含有碳酸氢钠、硝酸铵和磷酸二氢钾等营养物质的培养基来培养金球藻。
在制备培养基的过程中，我们严格控制了各种营养物质的浓度，以保证金球藻的正常生长。
接下来，我们将金球藻分装到装有培养基的培养皿中，并将培养皿放置在恒温恒湿的培养箱中。
为了保证充足的光照，我们将培养箱放置在有良好自然光照的地方，同时也可以使用专业的植物生长灯提供光源。
在培养过程中，我们对培养箱的温度和湿度进行了严格控制，以提供最适宜的生长环境。
在培养的过程中，我们定期观察金球藻的生长情况。
金球藻一般呈现绿色，形状呈现球状或椭圆状。
我们观察到，在适宜的培养条件下，金球藻的生长速度较快，藻体数量逐渐增多。
同时，我们还注意到金球藻的生长与光照强度、温度和营养物质浓度等因素密切相关。
过高或过低的光照强度、温度或营养物浓度都会对金球藻的生长产生负面影响。
在实验过程中，我们还进行了金球藻的采样和观察。
我们用显微镜观察了金球藻的细胞结构和细胞分裂现象。
金球藻的细胞呈现圆形或椭圆形，细胞质中含有叶绿体和细胞核等细胞器。
在适宜的培养条件下，金球藻的细胞分裂速度较快，每个细胞可以分裂成两个新的细胞。
通过本次实验，我们对金球藻的生长特性和培养条件有了更深入的了解。
金球藻是一种适应能力强、生长速度快的藻类，可以广泛应用于生物学研究和环境保护等领域。
同时，我们也发现金球藻的生长与光照强度、温度和营养物浓度等因素密切相关，为进一步优化金球藻的培养条件提供了参考。
金球藻的培养实验为我们提供了了解金球藻生长特性和培养条件的重要信息。
通过进一步的研究和实验，我们可以更好地利用金球藻的优势，并在生物学和环境保护等领域发挥更大的作用。
红球藻的养殖方法和注意事项
红球藻的养殖方法和注意事项红球藻，又称红藻球菌，是一种常见的食用藻类，具有丰富的营养价值和药用价值。
红藻球菌的养殖方法相对简单，只要掌握正确的操作技巧并注意一些注意事项，就可以成功地养殖红球藻。
下面将详细介绍红球藻的养殖方法和注意事项。
1. 培养基的配置：红球藻的培养需要使用合适的培养基。
常见的培养基包括藻类培养基、海水培养基、养殖池中的淡水和氨氮等。
根据具体的培养要求，可以选择合适的培养基进行配置。
2. 光照条件：光照是红球藻正常生长和繁殖的重要因素。
红球藻喜欢弱酸性环境，适宜的光照强度是3000-10000勒克斯。
在培养过程中，可采用自然光照或人工照明，保持每天8-10小时的光照时间。
3. 温度控制：红球藻的适宜生长温度为20-30摄氏度，最适宜的生长温度为25摄氏度。
在养殖过程中，要控制好水温，保持恒温状态，避免温度过高或过低对红球藻的生长造成不利影响。
4. pH值控制：红球藻生长的适宜pH值范围为7.5-9.0，最适宜的pH值为8.0。
因此，在养殖过程中，要定期检测和调整培养基的pH值，保持在适宜范围内。
5. 氧气供应：红球藻对氧气的需求量较大，因此要保证培养基中的氧气含量充足。
可以通过增加水面面积、提供适量的搅拌和增加通风设备等方式，有效提高培养基的氧气供应。
6. CO2浓度调控：红球藻需要充足的二氧化碳进行光合作用，因此可通过增加培养基中的二氧化碳浓度，提高红球藻的生长速度和产量。
7. 避免污染源：在红球藻的养殖过程中，要避免污染源的进入，以免影响红球藻的生长和质量。
定期清理养殖池的污物和残渣，保持培养环境的清洁和卫生。
8. 提供充足的营养物质：红球藻的生长需要充足的营养物质供应，如氮、磷、钾等。
可以添加适量的氨氮、磷酸氢二铵等营养物质，促进红球藻的生长和繁殖。
9. 适时采摘：红球藻的生长周期较短，一般为7-10天。
在红球藻达到一定密度后，可适时进行采摘。
采摘时应注意采用无菌操作，并及时清理残渣，避免感染和细菌繁殖。
单细胞藻类的培养336h
氯化钾 30 硅酸钙 100 碳酸氢钠 3 土壤浸出液 4mL 水 1000mL
水生硅2号是用化肥尿素过磷酸钙为
氮磷来源，适于大量培养硅藻时选用， 生长适温为20～30℃；光强为 2,000～5,000米烛光。
3．朱氏10号培养液：适用于培养硅藻、蓝 绿藻等。
H2O 1000mL Ca(NO3)2 0.04 g K2HPO4 0.01 g MgSO4· 7H2O 0.025 g Na2CO3 0.02 g Na2SiO3 0.025 g FeCl3 0.008 g 使用时按1/2、1/4、1/10稀释使用。
3．藻种的保存：
一、 单细胞藻类的特性
单细胞藻类(Unicelluler
algae)，简称 单胞藻。因藻体微小，又称微藻 （Microalgae）。 单胞藻具有利用太阳光能效率高、营 养丰富、生长繁殖迅速、对环境的适 应性强和容易培养等重要特性，因而 受到重视。
通过研究人们发现单胞藻在下列6个方面，可 以开发利用： 1、作为植物生理研究的试验材料。 2、单胞藻的营养丰富，蛋白质含量高，氨基酸 的种类组成及配比合理。脂肪含量高，富含动 物需要的不饱和脂肪酸。还含有各种维生素和 药用成分。可利用为人类的营养食品和健康食 品。 3、可作为水产动物的饵料和禽、畜饲料添加剂。
硝酸氨120硫酸镁70磷酸氢二钾40磷酸二氢钾80氯化钙20氯化钠10硅酸钠100柠檬酸铁土壤浸出液20硫酸锰1000mlph70尿素150氯化钾30过磷酸钙50硅酸钙100硫酸镁50碳酸氢钠土壤浸出液4mledta号是用化肥尿素过磷酸钙为氮磷来源适于大量培养硅藻时选用生长适温为2030
单细胞藻类的培养
2．接种： 在分离到单纯藻群后，就可接种到培 养液中进行培养，进而移养扩大培养。接 种方法有液体接种和干藻接种。前者是将 藻液直接加入培养液中进行搅拌，加入的 藻种分量视水温而定，水温较低（10℃以 内）时，多加；约占培养液总量的30～40 ％左右，水温适宜时（25～30℃左右）， 可加5～8％左右。后者若用干藻的藻体接 种，接种量为0.1～0.2％。
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一．编号
铜绿微囊藻（FACHB-912）、水华微囊藻（FACHB-1028）、螺旋藻（FACHB-901）
小球藻（FACHB-1028）
二．培养基及培养条件
（1）螺旋藻采用Zarrouk培养基，
藻种纯化：在Zarrouk 培养基中加入 1.5%琼脂粉，制成固体培养基平板，再将待分离纯化的藻液通过划线方法接种在平板上，置于培养箱中，29℃、光照强度2000 Lux下培养7 d。
从平板上挑取单藻落接入250 mL三角瓶中(含100 mL Z氏培养基)，于光照培养箱中静置培养，每天摇3 次，7 d 后作为实验备用藻种.
培养条件：温度30℃，光照4000 Lux，光暗比12:12。
（2）铜绿微囊藻、水华微囊藻、小球藻(绿藻)培养采用BG11培养基
培养条件：温度25℃，光照2000 Lux，光暗比12:12。