浓缩蛋白方法
蛋白浓缩SOP
蛋白浓缩SOP一、浓缩管Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD和3KD）1、选择应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3的超滤管，2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。
然后将水倒出；若为旧柱子，则需将其中的乙醇倒出，用水清洗几次后加入水平侵泡，超滤管需要插在冰上预冷。
3、向超滤管中加入蛋白液，以不超过管顶的白线为准。
以3500-4000rpm,4℃离心99min.4、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul5、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。
再离心10min。
倒出残留的NaOH溶液，将管芯浸入MilliQ水的烧杯中,放置几个小时。
6、向管芯中加满20%乙醇，放4度保存，直到下次使用。
一般来说，按照上述步骤和注意事项，每根管用三四年不会坏。
二、PEG20000将透析好的样品连同透析袋一起放在白色盒子中，用预冷的聚乙二醇20000固体包埋。
30min后将吸水后呈浆糊状的聚乙二醇去除，加入新的固体聚乙二醇。
每隔10min观察一次，一旦出现浑浊立即停止浓缩。
透析袋用完后，洗净，保存于20%乙醇中4°存放。
注意：浓缩过度后会有白色小颗粒或絮状晶体出现，由于透析袋使溶液成薄层状，透明度较高，不易发现小颗粒或絮状沉淀，要看仔细。
如果看不到，可根据自己估计的蛋白量留1-2ml 体积。
用透析液将透析袋表面的聚乙二醇洗掉，吸取其中的溶液分装后-20度保存。
大豆浓缩蛋白生产工艺
大豆浓缩蛋白生产工艺
大豆浓缩蛋白是指从大豆中提取纯化蛋白质的产品，其主要用途是作为食品添加剂和营养补充剂。
大豆浓缩蛋白的生产工艺可以分为以下几个步骤：
1. 大豆磨碎：首先将大豆清洗干净后磨碎成粉末状。
这一步既可以手工完成，也可以使用机械设备如磨粉机进行。
2. 提取大豆油：使用溶剂如正己烷将大豆粉末中的大豆油提取出来。
溶剂方法是目前应用最多的方法，它可以高效地提取大豆油。
提取出的大豆油可以用于食用油或其他工业用途。
3. 溶解大豆蛋白：将去除大豆油后的残渣溶解在适量的溶剂中，使大豆蛋白质溶解在溶剂中。
4. 沉淀和过滤：将溶解的大豆蛋白溶液加入酸或者盐溶液中，使蛋白质发生沉淀。
然后通过过滤将沉淀分离出来。
5. 除去杂质：将分离得到的蛋白质沉淀经过多次洗涤和离心，除去杂质和溶剂。
6. 干燥：将洗涤好的蛋白沉淀通过烘箱或流化床干燥器进行脱水，直至获得所需的蛋白质干粉。
7. 浓缩：利用膜过滤、蒸发等技术将蛋白干粉中的水分去除，使其浓缩，并达到所要求的浓度。
8. 除味和调节PH值：M和R酸、碱或氧化剂等物质调节蛋白质的酸碱度，同时去除蛋白质中的异味，使其达到食品安全标准。
9. 包装和存储：将处理好的蛋白质产品进行包装，通常采用防潮、防氧化等包装材料，储存于干燥、避光的地方，以保持其质量和保质期。
大豆浓缩蛋白的生产工艺需要注意对溶剂的选择和使用，避免对环境和人体造成污染。
此外，工艺中的每一个步骤都需要控制好温度、时间、pH值等参数，以保证产品的质量和稳定性。
蛋白浓缩方法
蛋白浓缩方法概述蛋白质是生物体内重要的功能分子，对于研究蛋白质的结构和功能具有重要意义。
在许多实验室研究中，需要从混合物中将蛋白质有效地浓缩出来，以便后续的分析和研究。
本文将介绍常用的蛋白浓缩方法，包括凝胶过滤、离心浓缩和亲和层析。
二级标题1：凝胶过滤法凝胶过滤法是一种常用的蛋白浓缩方法，基于凝胶的分子筛效应。
以下是凝胶过滤法的步骤： 1. 准备一个合适孔径的凝胶过滤离心管。
2. 将待浓缩的蛋白混合物按照比例加入离心管中。
3. 使用低速离心，使混合物通过凝胶过滤器。
4. 进行高速离心，将蛋白质浓缩到凝胶过滤器中。
5. 从凝胶过滤器中收集浓缩的蛋白质溶液。
二级标题2：离心浓缩法离心浓缩法是一种通过离心作用将蛋白质浓缩的方法。
以下是离心浓缩法的步骤：1. 将待浓缩的蛋白质混合物加入一个离心管中。
2. 选择适当的离心管和离心机参数，进行离心。
3. 根据离心力的大小和离心时间的长短，可以控制蛋白质的浓缩程度。
4. 倒置离心管，将浓缩的蛋白质收集在管底。
5. 通过取出上层液体，得到浓缩的蛋白质溶液。
二级标题3：亲和层析法亲和层析法是一种基于蛋白质与亲和基质之间的特异性相互作用的浓缩方法。
以下是亲和层析法的步骤： 1. 选择合适的亲和基质，根据蛋白质的特性和目的进行选择。
2. 预先处理亲和基质，使其具有高度的亲和性。
3. 将待浓缩的蛋白质混合物与亲和基质充分混合，并进行孵育反应。
4. 通过洗脱步骤，将与亲和基质结合的其他物质洗去，只留下蛋白质。
5. 从洗脱液中收集蛋白质，得到浓缩的蛋白质溶液。
三级标题1：凝胶过滤法的优点与缺点凝胶过滤法的优点：•适用于大部分蛋白质，具有较好的适用范围和通用性。
•操作简单，不需要特殊设备。
•可以一次性浓缩大量样品，高效。
凝胶过滤法的缺点：•需要特定的凝胶过滤器，成本较高。
•浓缩效果受到凝胶孔径和蛋白质分子量的限制。
三级标题2：离心浓缩法的优点与缺点离心浓缩法的优点：•操作简单，不需要特殊设备。
13种蛋白质的浓缩方法及应用过程
13种蛋白质的浓缩方法及应用过程浓缩蛋白质是生物化学和生物工程领域中的常见实验操作，它可以分离和浓缩蛋白质的目标分子，提高下游实验的灵敏度和检测效果。
下面将介绍13种常见的蛋白质浓缩方法及其应用过程。
1.直接加浓缩液法：这种方法是将蛋白质溶液直接加入浓缩液中，在高浓度的浓缩液中使蛋白质沉淀，然后通过离心将上清液倒掉，留下蛋白质沉淀。
该方法适用于蛋白质浓度较低、浓缩液和蛋白质之间无明显相互作用的情况。
2.乙醇沉淀法：将蛋白质溶液中加入适量的冷乙醇，使蛋白质沉淀，然后通过离心将上清液倒掉，留下蛋白质沉淀。
该方法适用于大多数蛋白质的浓缩，但对于糖蛋白等极性蛋白质效果较差。
3.磷酸铵沉淀法：将蛋白质溶液中加入磷酸铵，并通过逐渐增加磷酸铵浓度的方式使蛋白质沉淀。
然后通过离心将上清液倒掉，留下蛋白质沉淀。
该方法适用于对蛋白质溶液中的杂质进行除去和蛋白质浓缩。
4.透析法：将蛋白质溶液置于透析袋或膜中，溶液中的小分子物质可以通过透析膜，而蛋白质则被滞留在透析袋或膜中。
通过不断更换新的缓冲液，透析蛋白质的杂质，达到蛋白质的浓缩效果。
5.正交两步纯化法：通过两步纯化的方法，即先使用亲和层析等手段分离目标蛋白质，再使用乙醇沉淀等方法进行浓缩。
该方法可获得高纯度和高浓度的目标蛋白质。
6.冰醋酸沉淀法：将蛋白质溶液中加入适量的冰醋酸，使蛋白质沉淀，然后通过离心将上清液倒掉，留下蛋白质沉淀。
该方法适用于大多数蛋白质的浓缩，但对于糖蛋白等极性蛋白质效果较差。
7.膜超滤法：利用膜的过滤作用，将蛋白质溶液在压力作用下通过膜，小分子物质通过膜孔，而蛋白质则被滞留在膜上，从而实现蛋白质的浓缩。
8.离心滤膜浓缩法：将蛋白质溶液加入装有滤膜的离心管中，通过离心作用剥离溶液中的液相，使蛋白质滞留在滤膜上。
最后通过逆离心将蛋白质从滤膜上洗脱下来，达到浓缩的目的。
9.聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩法：将蛋白质溶液经过聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后将蛋白质从凝胶上切割下来，再使用电泳缓冲液洗脱蛋白质。
蛋白浓缩方法
蛋白浓缩方法蛋白浓缩方法在生物学研究中，常常需要从混合物中提取单一的蛋白质。
蛋白浓缩是一种有效的方法，可以将目标蛋白质从复杂的混合物中分离出来。
以下是一些常用的蛋白浓缩方法：1. 盐析法盐析法是一种将目标蛋白质从混合物中分离出来的传统方法。
该方法利用了不同蛋白质在高盐浓度下溶解度的差异。
通过逐渐加入盐类，使得某些蛋白质逐渐沉淀并分离出来。
步骤：1）制备含有目标蛋白质的混合物；2）逐渐加入盐类（如氯化钠），同时搅拌样品；3）等待沉淀形成后，将上清液收集下来；4）重复以上步骤直到得到足够纯净的目标蛋白质。
2. 膜过滤法膜过滤法是一种利用半透性膜筛选出目标分子的方法。
该方法基于不同分子大小和形状之间的差异，通过选择合适的膜孔径和压力，将目标蛋白质从混合物中分离出来。
步骤：1）制备含有目标蛋白质的混合物；2）选择合适的膜孔径和压力，将混合物通过滤膜；3）收集通过滤膜的上清液，其中包含了目标蛋白质。
3. 离心浓缩法离心浓缩法是一种利用离心力将目标分子从大量液体中聚集在一起的方法。
该方法适用于大分子量蛋白质的浓缩。
步骤：1）制备含有目标蛋白质的混合物；2）使用超速离心机以高速旋转离心管，使得目标蛋白质在管底沉积；3）移除上清液，并重复以上步骤直到得到足够纯净的目标蛋白质。
4. 电泳法电泳法是一种利用电场将带电粒子分离的方法。
该方法适用于具有不同电荷、大小或形状的多种生物大分子。
步骤：1）制备含有目标蛋白质的混合物；2）将混合物加入凝胶电泳板，并施加电场；3）根据蛋白质的电荷和大小，目标蛋白质将在凝胶中移动并分离出来；4）收集目标蛋白质所在的凝胶区域，并进行进一步处理。
总结：以上四种方法都可以用来浓缩目标蛋白质，每种方法都有其优缺点。
选择最适合的方法取决于所需浓缩的蛋白质类型、样品量和实验条件等因素。
蛋白质浓缩与纯化技术
★ ★★★ 需要有机溶剂 中，有损失生
物活性的风险
宁馨阁
提示： 1、 通过组和各种方法使纯化步骤之间的样品处理减至最少，以避免需要调节样品。第一
个步骤的产物的洗脱条件应适宜于下一个步骤的起始条件。 2、 硫酸铵沉淀是常用的样品澄清和浓缩方法，所以 HIC 是捕获阶段的理想方法。 3、 GF 很适宜在由浓缩效应的方法（IEX、 HIC、 AC）后使用，凝胶过滤对上样体积有限
宁馨阁
前者进行反应时，配体（类似底物）是固相存在；后者进行反应时，底物呈液相存在。实质 上亲和层析是把具有识别能力的配体 L（对酶的配体可以是类似底物、抑制剂或辅基等）以 共价键的方式固化到含有活化基团的基质 M（如活化琼脂糖等）上，制成亲和吸附剂 M－L， 或者叫做固相载体。而固化后的配体仍保持束缚特异物质的能力。因此，当把围相载体装人 小层析柱（几毫升到几十毫升床体积）后，让欲分离的样品液通过该柱。这时样品中对配体 有亲和力的物质 S 就可借助静电引力、范德瓦尔力，以及结构互补效应等作用吸附到固相 载体上，而无亲和力或非特异吸附的物质则被起始缓冲液洗涤出来，并形成了第一个层析峰。 然后，恰当地改变起始缓冲 液的 PH 值、或增加离子强度、或加人抑③剂等因子，即可把 物质 S 从固相载体上解离下来，并形成了第 M 个层析峰（见图 6－2）。显然，通过这一操 作程序就可把有效成分与杂质满意地分离开。如果样品液中存在两个以上的物质与固相载体 具有亲和力（其大小有差异）时，采用选择性缓冲液进行洗脱，也可以将它们分离开。用过 的固相载体经再生处理后，可以重复使用。
宁馨阁
二．重组蛋白纯化的基本策略
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蛋白质溶液的浓缩方法
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2.1 透析袋吸附法
• 透析袋吸附法在透析技术的基础 上改良而来的。 传统的透析是基于分子质量大小 的液相分离技术，它由透过半透 膜的选择性扩散来实现。但是纯 粹的透析主要用于除去小分子类 的溶质，而要达到浓缩（即除去 溶剂）的目的则费时较长。 透析袋吸附法是将透析液换成可 以吸水的溶液或者固体吸附剂， 这样可实现很好的浓缩作用。
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4.3 超滤膜的选择
超滤膜
相对流速(ml/min/cm2)
性能特点
聚醚砜，pH范围1 ~ 14
3,000 MWCO
0.05
5,000 MWCO
0.24
10,000 MWCO
0.41
30,000 MWCO
0.41
50,000 MWCO
0.45
100,000 MWCO
0.35
三醋酸纤维素，pH范围4 ~ 8
（2）选用一种水溶性非离子多聚物，使蛋白质在 同一液相中，由于分子相互排斥而凝聚导致蛋白析出。该 方法操作时先离心除去大悬浮颗粒，调整溶液PH值和温 度至适度，然后加入中性盐和多聚物至一定浓度，冷贮一 段时间，即形成沉淀。
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2. 吸附法
2.1 透析袋吸附法 2.2 凝胶吸附法
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吸附法
• 定义：通过吸附剂直接去除溶液中的水分子以达到浓缩蛋 白质溶液的目的。 吸附法是最简单快速的浓缩蛋白质溶液的方法，所需 仪器简单，特别适用于稳定性较差的蛋白质。
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2.2 凝胶吸附法
蛋白质的浓缩方法
蛋白质的浓缩方法目前蛋白浓缩方法基本主要有以下几种：1. 透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。
将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。
也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。
吸水剂用过后，可放入温箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。
主要用于更换蛋白质的缓冲液，有透析袋即可，不需要特殊的仪器。
2. 冷冻干燥浓缩法这是浓缩蛋白质的一种较好的办法，它既使蛋白质不易变性，又保持蛋白质中固有的成分。
它是在冰冻状态下直接升华去除水分。
具体做法是将蛋白液在低温下冰冻，然后移置干燥器内（干燥器内装有干燥剂，如NaOH、CaCl2和硅胶等）。
密闭，迅速抽空，并维持在抽空状态。
数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末。
干燥后的蛋白质保存方便，应用时可配成任意浓度使用。
也可采用冻干机进行冷冻干燥。
在冷冻状态下让扬品种的液体升华3. 吹干浓缩法将蛋白溶液装入透析袋内，放在电风扇下吹。
此法简单，但速度慢，且温度不能过高，最好不要超过15℃。
4. 超滤膜浓缩法此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出，而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的。
有两种方法进行浓缩：一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内，在不断搅拌之下过滤；另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上，负压抽气，而使袋内液体渗出。
主要针对小体积蛋白质溶液（几ml）此法更不易引起变性，不过得有浓缩器，不是哪个实验室都有的。
5. 凝胶浓缩法选用孔径较小的凝胶，如SephadexG25或G50，将凝胶直接加入蛋白溶液中。
根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。
放入冰箱内，凝胶粒子吸水后，通过离心除去。
6. 浓缩胶浓缩法浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物，具有很强的吸水性能。
每克干胶可吸水120ml～150ml。
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1，透析袋浓缩法
利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。
将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外
即可。
也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。
吸水剂用过后，可放入
温箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。
主要用于更换蛋白质的缓冲液，有透析袋即可，不需要特殊的仪器。
2，冷冻干燥浓缩法
这是浓缩蛋白质的一种较好的办法，它既使蛋白质不易变性，又保持蛋白质中固有的成分。
它是在冰冻状态下直接升华去除水分。
具体做法是将蛋白液在低温下冰冻，然后移置干燥器内（干燥器内装有干燥剂，如NaOH、CaCl2和硅胶等）。
密闭，迅速抽空，并维持在抽空状态。
数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末。
干燥后的蛋白质保存方便，应用时可配成任意浓度使用。
也可采用冻干机进行冷冻干燥。
在冷冻状态下让扬品种的液体升华
3，吹干浓缩法
将蛋白溶液装入透析袋内，放在电风扇下吹。
此法简单，但速度慢，且温度不能过高，最好不要超过15℃。
4，超滤膜浓缩法
此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出，而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的。
有两种方法进行浓缩：一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内，在不断搅拌之下过滤；另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上，负压抽气，而使袋内液体渗出。
主要针对小体积蛋白质溶液（几ml）此法更不易引起变性，不过得有浓缩器，不是哪个实验室都有的。
5，凝胶浓缩法
选用孔径较小的凝胶，如SephadexG25或G50，将凝胶直接加入蛋白溶液中。
根据干胶的吸水量和蛋白液
需浓缩的倍数而称取所需的干胶量。
放入冰箱内，凝胶粒子吸水后，通过离心除去。
6，浓缩胶浓缩法
浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物，具有很强的吸水性能。
每克干胶可吸水120ml～150ml。
它能
吸收低分子量的物质，如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等，适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。
浓缩后，蛋白质的回收率可达80％～90％。
比凝胶应用方便，直接加入被浓缩的溶液中即可。
必须注意，浓
缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点，否则在浓缩胶表面产生阳离子交换，影响浓缩物质的回收率。
7，丙酮沉淀法：
试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。
8，免疫沉淀法：
通过免疫沉淀法，用蛋白质特异性能够定量能够分离目的蛋白。
有三个步骤组成：首先将特异性抗体加入细胞提取物，第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌，以确保形成大量沉淀。
这些细菌通过蛋白质A和抗体形
成复合物，蛋白质A与免疫球蛋白的Fc部分有高度的亲和性。
或者说，纯化的蛋白A结合Sephrarose树脂，为从细胞提取物中分离出抗原抗体复合物，提供一个固体基质。
最后通过洗脱，除去尚未沉淀的杂质。
为了除去已破碎的或固定差的细胞，在用于免疫沉淀（作用）之前可以与纤细地金黄色葡萄球菌细胞，如果要用蛋白质ASephrarose树脂,参考厂家说明书。
9，硫酸铵沉淀法：
利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析），选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济.
10， (低温)有机溶剂沉淀法：
强调低温（0-4度以下）是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性，可用乙醇，丙酮等。
注意：Mg2+离子，pH值。
11，聚乙二醇（PEG）沉淀法：
PEG是一个水溶性非离子多聚体，使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性！他溶解是散热低，形成沉淀的平衡时间短，通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀。