EB病毒血清学检测
EB病毒检测及EB病毒感染相关疾病的分析
EB病毒检测及 EB病毒感染相关疾病的分析【摘要】目的：分析EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）检测、EB病毒感染疾病的关联性，为疾病诊治工作提供参考。
方法：选择我院2019年3月-2020年10月期间的200例EBV受检者，取静脉血进行EB病毒检测。
酶联免疫吸附法检测免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM），检查采用进行，分析EBV 抗体阳性患者感染情况。
结果：200例受检者中，EBV 抗体阳性血清患者140例（70.00％）。
140例患者中，男性患者占较大比例，未成年患者占较大比例，P<0.05。
EB病毒感染相关疾病方面，发病率从高到低的疾病依次为传染性单核细胞增多症、上呼吸道感染等。
结论：EB病毒发病方面，男性患者居多、未成年患者居多，需加以重视。
另外，为了提升患者的安全性，需早诊断、早治疗。
【关键词】：EB病毒；病毒感染；性别情况；发病情况年龄情况EB病毒是常见疱疹科病毒，可引发传染性单核细胞增多症、呼吸道感染、再生障碍性充血等诸多疾病[1]。
临床发现EB病毒感染所致的感染率一直较高，鉴于疾病预后差的特点，需早诊断、早治疗。
本文就此进行研究：1资料与方法1.1基线资料研究对象均为EBV受检者（n=200），时间选自2019年3月-2020年10月。
纳入标准：（1）伦理委员会审核；（2）患者与家属知情同意；（3）受试者具备配合能力；（4）基线资料完整。
排除标准：（1）传染疾病者；（2）血液疾病者；（3）重大脏器疾病者；（4）丧失配合能力者。
200例患者中，男性130例、女性70例；年龄＜18岁患者120例，≥18岁患者80例，患者平均年龄（29.50±4.50）岁。
1.2方法提前告知受检者相关注意事项，检验前禁止用药。
于清空腹情况下，取受检者的静脉血（3mL），样本置于抗凝管中后保存，送检，以酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ，ELISA）检测EB病毒感染情况。
EB病毒感染实验室检测方法
EB病毒感染实验室检测方法摘要本文档详细描述了EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）感染的实验室检测方法，包括病毒培养、血清学检测、核酸扩增和病毒载量测定等。
这些检测方法在临床诊断、流行病学研究以及疫苗研发等领域具有重要意义。
1. 病毒培养1.1 原理EBV属于疱疹病毒科，是一种专性细胞内寄生的DNA病毒。
病毒培养可以充分展示病毒的感染性、复制能力和生物学特性。
1.2 方法1. 选择合适的细胞系，如B95-8或Daudi细胞。
2. 将临床样本（如唾液、血液等）接种至细胞系。
3. 在适宜的条件下（如37°C、5% CO2）培养细胞，观察病毒复制和感染现象。
4. 定期观察细胞病变，如细胞增大、核固缩等。
5. 采用免疫荧光染色、电子显微镜等方法检测病毒颗粒。
2. 血清学检测2.1 原理血清学检测基于病毒感染后诱导的免疫反应，通过检测特异性抗体来诊断EBV感染。
2.2 方法1. 收集患者血清样本。
2. 使用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测EBV特异性抗体，如VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG等。
3. 采用免疫荧光染色、免疫组化等方法进行抗体检测。
4. 根据抗体类型和滴度判断感染状态，如急性感染、慢性感染或回忆性感染。
3. 核酸扩增3.1 原理核酸扩增技术通过特异性引物和DNA聚合酶酶链反应（PCR）来检测EBV的DNA序列。
3.2 方法1. 提取临床样本的DNA。
2. 设计针对EBV DNA的特异性引物，进行巢式PCR或实时定量PCR（qPCR）。
3. 扩增EBV特异性基因，如EBNA1、EBNA2、LMP1等。
4. 分析扩增产物，判断病毒感染情况。
4. 病毒载量测定4.1 原理病毒载量测定通过检测病毒颗粒的数量来评估病毒感染的程度。
4.2 方法1. 提取临床样本的病毒颗粒。
2. 采用实时定量PCR、定量荧光显微镜等方法测定病毒载量。
3. 根据病毒载量判断感染程度，为临床治疗提供依据。
EB病毒血清学联合DNA定量检测_省略_婴儿传染性单核细胞增多症中的意义_朱芹
组别
VCA-IgM
VCA-IgG EBV-DNA 阳性
<1 岁组
5/18（27.8）
14/18（77.8）
11/18（61.1）
1 岁组
7/17（41.2）
15/17（88.2）
11/17（64.7）
2~3 岁组
8/13（61.5）
13/13（100.0）
9/13（69.2）
≥4 岁组
25/30（83.3） 30/30（100.0） 24/30（80.0）
州 310000
[摘要] 目的 评估 EB 病毒抗体 VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG、EBNA-IgG 及 EBV-DNA 载量检测在婴儿传染性单
核细胞增多症（IM）中的诊断意义。 方法 用 ELISA 法检测 78 例 IM 患儿血清中 EBV 四种抗体及 PCR 荧光定量
法检测外周血单个核细胞 EBV-DNA 载量。 结果 在 IM 急性期 VCA-IgM 阳性率在<1 岁患儿中为 27.8%，而≥4
[基金项目] 浙江省自然科学基金资助项目（LZ12H08001）
染性单核细 胞增多症患 儿的四种抗 EBV 抗体及 EBV-DNA 载量测定进行分析，以评价此两种检测指标 在 IM 患儿中的诊断意义。
1 资料与方法 1.1 一般资料
选 取 2010 年 1 月～2012 年 12 月 在 绍 兴 市 人 民 医院住院治疗的 78 例 诊断为 IM 的 病例，IM 诊断标
EB virus serology and DNA quantitative detection in the diagnosis of infantile infectious mononucleosis
1000例急性呼吸道感染性疾病患儿EB病毒血清学检测结果分析
1000 例急性呼吸道感染性疾病患儿 EB 病毒血清学检测结果分析【摘要】目的：分析1000例急性呼吸道感染性疾病患儿EB病毒血清学检测结果。
方法：选取2020年1月-2021年6月于重庆市永川区妇幼保健院就诊的1000名呼吸道感染的患儿进行血清学检测，分析该疾病患儿EB病毒感染情况。
结果：不同年龄组之间的NA-IgG、VCA-IgG、VCA-IgM、EA-IgM以及 EBV-DNA 的阳性率差异均有统计学意义（P＜0．05）；NA-IgG以及VCA-IgG阳性率中，随着年龄的增长，阳性率越高。
VCA-IgM、EA-IgM以及EBV-DNA中，12岁以下，随着年龄的增长，阳性率越高；但在13岁以上，这三种指标的阳性率显著降低。
结论：急性呼吸道感染性疾病患儿多合并EB病毒感染，可通过EB病毒血清学检测能够有效鉴别该疾病患儿有无感染EB病毒。
【关键词】急性呼吸道感染性疾病；血清学检测；EB病毒；检测结果呼吸道感染属于儿童群体的高发疾病，对儿童的健康造成严重威胁。
而在小儿感染中，EB病毒属于常见的致病病毒，并有相关研究发现[1]，约90%以上的3-5岁儿童有被该病毒感染史。
本文旨在分析通过EB病毒血清学检测了解本地患儿呼吸道感染性疾病情况，特做此研究。
1资料与方法1.1一般资料选取2020年1月-2021年6月于重庆市永川区妇幼保健院就诊的约1000名呼吸道感染的患儿进行血清学检测。
研究在院伦理委员会批准的条件下开展。
患儿中，男525例，女475例。
年龄1个月～16岁，平均年龄（10.03±0.43）岁。
纳入标准：①符合疾病诊断标准；②所有参与研究人员的家属均签订知情同意书者。
符合上述所有选项者纳入本研究。
排除标准：①合并凝血障碍、血液系统疾病者；②合并哮喘等其他呼吸道疾病。
具备上述任意1项者不纳入本研究。
1.2方法EB病毒核酸定量检测、EBV早期抗原检测以及检测仪分别由中山大学达安基因有限公司、德国欧蒙实验诊断有限公司、美国ABI公司提供。
2020版：肠道EB病毒感染组织检测和病理诊断共识(全文)
2020版：肠道EB病毒感染组织检测和病理诊断共识（全文）中国人群EB病毒(Epstein-Barr virus)血清学阳性率高达95%以上[1,2,3]，绝大部分属于潜伏感染。
当全身或局部免疫力低下时，可引起EB 病毒的再激活，导致EB病毒机会性感染。
IBD患者肠道局部炎症刺激和免疫抑制剂的使用，易导致EB病毒重激活并加重病情[4,5]。
肠道EB病毒感染的诊断及其对IBD病情发展的影响日益受到关注。
结肠黏膜活组织检查(以下简称活检)标本中EB病毒感染检测是确定肠道EB病毒感染的主要方法。
为统一肠道EB病毒感染的组织标本检测及判读方法，并进一步规范肠道EB病毒感染的临床病理诊断，中华医学会消化病学分会消化病理协作组组织专家进行了肠道病理组织EB病毒感染检测质量控制和EB病毒感染意义共识讨论会，对EB病毒感染的检测方法、判读、计数和临床病理意义等开展广泛讨论并达成共识。
一、肠道黏膜活检取材肠道EB病毒感染时，病毒在黏膜组织中分布不均，溃疡处病毒负荷显著高于非溃疡黏膜[5,6]，为确定有无EB病毒感染，内镜活检取材部位应重点位于溃疡处。
但是初诊患者或诊断不明的患者，为明确诊断，内镜活检应为系统性活检，上消化道活检部位应包括食管、胃体、胃窦和十二指肠，下消化道活检部位应包括回肠末端、盲肠、升结肠、横结肠、降结肠、乙状结肠和直肠，取材应取溃疡旁黏膜组织，避免只在溃疡底部取材。
二、EB病毒感染检测方法EB病毒感染检测方法包括原位杂交、PCR和免疫组织化学技术。
原位杂交检测EB病毒编码的小RNA(Epstein-Barr virus-encoded RNA, EBER)在EB病毒潜伏期和病毒复制期均大量存在于感染细胞的细胞核内，EBER原位杂交可在组织切片确定EB病毒感染细胞及其在组织中的定位[7,8,9]。
PCR可定量检测EB病毒DNA，但无法确定感染细胞及其在组织中的定位，常用于检测外周血EB病毒负荷[10]。
eb病毒血清抗体检测在鼻咽癌早期诊断中的应用
2023-11-11
目录
• 鼻咽癌概述 • eb病毒概述 • eb病毒血清抗体检测的方法和原
理 • eb病毒血清抗体检测在鼻咽癌早
期诊断中的价值
目录
• eb病毒血清抗体检测的实践应用 和前景
• 参考文献
01
鼻咽癌概述
鼻咽癌的定义和症状
鼻咽癌的定义
检测技术改进
目前eb病毒血清抗体检测的灵敏度和特异性仍需进一步提高，以降 低假阳性或假阴性的概率。
联合诊断
为提高诊断准确性，可将eb病毒血清抗体检测与其他诊断方法（如病 理学检查、影像学检查等）相结合。
在鼻咽癌筛查和预防中的应用前景
早期诊断
eb病毒血清抗体检测对于鼻咽癌的早期诊断具有重要意义，可帮 助发现早期病变，为及时治疗和提高生存率提供支持。
Lo YM, Chan YS, Cheung ST, et al. Serum antibodies against EpsteinBarr virus nuclear antigen 1 in the early detection of nasopharyngeal carcinoma. J Natl Cancer Inst. 1992;84(18):1432-6.
eb病毒血清抗体检测的方法
酶联免疫吸附法（ELISA）
将eb病毒抗原包被在固相载体上，然后与患者血清中的特异性抗体结合，最后通过酶标显色反应检测抗体的存在 。
免疫荧光法（IF）
利用荧光素标记的抗人IgG抗体与患者血清中的特异性抗体结合，在荧光显微镜下观察荧光信号的强度，从而判 断抗体的含量。
检测的敏感性和特异性
VS
临床试验
儿童EB病毒感染相关疾病诊断标准
⼉童EB病毒感染相关疾病诊断标准EB病毒（Epstain-Barr virus，EBV）是⼀种双链 DNA病毒，属于疱疹病毒科，亚科，⼈感染EBV后建⽴终⾝潜伏感染，⼈群感染率超过 90％。
EBV是⼀种重要的肿瘤相关病毒，与⿐咽癌、淋巴瘤等多种肿瘤的发⽣密切相关。
IM诊断标准：以第7版《实⽤⼉科学》的诊断标准为依据，根据临床表现、外周⾎象和⾎清学检查确诊。
伴多脏器功能损害的IM病例为重症IM。
⽬前对重症IM诊断⽆统⼀标准，有研究认为伴有⾄少2个系统受累即可诊断为重症IM。
有以下临床特征时⾼度重视：（1）持续⾼热（>1周），肝脾明显肿⼤；（2）外周⾎象2系或3系显著下降，但未达到EBV-HLH标准；（3）转氨酶显著异常，尤其是乳酸脱氢酶（LDH）显著增⾼；（4）呼吸和吞咽困难，并发胸腔积液、肺炎等；（5）⼼电图异常，⼼肌炎。
慢性活动性EBV感染（CAEBV）诊断标准：（1）有持续或反复发作的IM表现，即发热、持续性肝功能损害、多发性淋巴结病、肝脾肿⼤、全⾎细胞减少、视⽹膜炎、间质性肺炎、⽜痘样⽔疱及蚊⾍过敏等症状持续 3 个⽉以上。
（2）EBV感染及引起组织病理损害的证据如满⾜下述标准中的1条或1条以上：①⾎清EBV抗体滴度异常增⾼，包括抗VCA-IgG≥1：640 或抗EA-IgG≥1：160， VCA/EA-IgA 阳性；②在感染组织或外周⾎中检测出 EBER-1 阳性细胞；③外周⾎ PBMC 中 EBV-DNA ⽔平⾼于 102.5 拷贝/g DNA；④受累组织中EBV-EBERS原位杂交或EBV-LMP1免疫组化染⾊阳性；⑤ Southern 杂交在组织或外周⾎中检测出EBV-DNA。
（3）排除上述临床表现系由其他已知疾病所致。
EBV 相关噬⾎淋巴组织细胞增多症（EBV-HLH）的诊断：（1）HLH 诊断标准依据HLH-2004⽅案，即符合以下8 项中的 5 项可诊断 HLH：①发热；②脾脏增⼤；③外周⾎⾄少两系减少（⾎红蛋⽩＜90 g/L、⾎⼩板＜100 × 109/L、中性粒细胞＜110 ×109/L）；④⾼⽢油三酯⾎症和（或）低纤维蛋⽩原⾎症；⑤⾻髓、脾脏或淋巴结中有噬⾎现象；⑥NK细胞活⼒降低或缺乏；⑦⾎清铁蛋⽩≥500 mg/L；⑧可溶性CD25（SIL-2R）≥2400 U/mＬ。
EB病毒感染及特异性抗体检测的临床意义
EB病毒(EBV)感染及特异性抗体检测的临床意义EB病毒（EBV）于1964年由英国病毒学家Epstein和Barr首次从Burkitt淋巴瘤患者病理活检片中分离出来[1]。
感染EBV细胞体外培养实验证明该病毒具有显著的细胞转化能力[2，3]。
目前已有的研究表明EBV感染与多种肿瘤疾病的发生和发展具有密切相关性。
（见表1）表1：EB病毒感染与肿瘤疾病的相关性相关疾病高危人群与EBV感染相关性传染性单个核细胞增多症年轻人多数伴X染色体淋巴组织增生症（XLP）XLP基因突变的男性多数B淋巴组织增生症（BLPD）LP移植后<90%HIV感染患者原发性中枢神经系统淋巴瘤100外周淋巴瘤<80%Burkitt淋巴瘤（BL）非洲儿童（疫区）97%-100%HIV感染患者<25%Hodgkin病（HD）发展中国家的儿童40%-80%具有传单病史的年轻人40%-80%鼻咽癌亚洲人群100%NK淋巴瘤EBV慢性感染患者10%-100%HIV感染患者10%-100%一、EB病毒生物学特性1）结构和形态EB病毒是DNA病毒，属疱疹科病毒，人类是其唯一天然宿主。
电镜下呈球形，直径约200-300nm。
最外层的外膜为典型的类脂双层膜，上面有短的突起。
外膜下为内直径100-110nm的衣壳。
在衣壳和外膜之间常有一层称之为壳皮的无定型球状物质。
最内侧的核心为缠绕有DNA的核心蛋白。
EB病毒长期潜伏在淋巴细胞内，以环状DNA形式游离在胞浆中，并整合到染色体内。
2）EBV感染流行病学EB病毒在全球范围人群中广泛感染，主要传播途径包括唾液、喷嚏、咳嗽、共用餐具和输血等。
根据血清学调查，我国3~5岁儿童EB病毒VCA-IgG抗体阳性率达90%以上。
与所有的疱疹病毒相同，EBV感染后病毒可在宿主体内持续存在，但多数无明显症状，或引起轻症咽炎和上呼吸道感染[4]。
青年期发生原发性感染，约50%出现传染性单核细胞增多症[5]。
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NPC检测策略
VCA IgA • 研究得较早 • 在中国唯一经过大样本量普查 • 研究得较早 • 特异性极高 • 灵敏度一般 EA IgA
• 临床症状前3年（平均）即可显 阳性
• 灵敏度高
方案1：CA-IgA、EA-IgA同时检测，最大限度保证检出率与可靠性。 方案2： CA-IgA用于初筛，必要时采用EA-IgA用于验证。
血清学检测——传统策略
CA-IgM单项检测 ——有一定诊断意义。 ——信息量少，结果不可靠。
传统检测策略的问题
• 在个别情况下， CA-IgM会在复发或持续感 染过程中产生可测出的应答 • CMV感染可能造成CA-IgM假阳性
推荐检测策略
CA-IgG + CA-IgM + EA-IgG + NA-IgG + CA-IgG亲合力
不适合于中国人群检测
病毒载量检测
• 在原发感染两周内，DNA 水平达到峰值，然后回落 到低点（甚至检测不到） • 变化曲线会有个体差异， 有些患者会在曲线下落后 出现反弹。 • DNA检测对于免疫抑制的 非常态患者是一种有效的 补充。
血清学检测（主流方法）
主要关注的抗原类型 VCA(CA): 衣壳抗原 EA ：早期抗原 EBNA： 核抗原 主要关注的抗体类型IgG、 IgM
靶抗原
CA EA NA
抗体类型
IgA/IgG/IgM IgA/IgG IgG
抗原及来源
感染EBV的人B细胞裂解 物(IgM-只含天然gp125)
亲合力检测
提供 不提供
大肠杆菌表达的重组EA-D
昆虫细胞表达的重组蛋白
不提供
鼻咽癌 (nasopharyngeal carcinoma)
——与EBV有明确关联的疾病
鼻咽癌（NPC）
• 发生于鼻咽粘膜的上ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ性 恶性肿瘤 • 具有明显的区域性和人种 倾向性
• 西方国家属于不常见疾病， 发病率为1/100,000人/每年
• 东南亚国家常见癌症之一， 发病率10~53/100,000人
• 中国南部发病率 15~30/100,000
NPC 诊断
早期基本无症状，出现症状就医时基本已到晚期 早期治疗，5年生存率可达90%以上。晚期治疗，不超过20%（癌转 移） 高发区人群中的例行筛查意义重大 找到合适的早期诊断指标至关重要
EBV检测的临床应用及产品简介
主要内容
• • • • EBV简介 所致疾病特点 推荐的检测策略 欧蒙所提供的产品
EUROIMMUN
EBV的特点
• 一种常见的疱疹病毒 • 潜伏感染普遍存在 • 我国约90%的个体为病毒携带者，多为婴 儿时期感染。 （婴儿期感染EB病毒，不产生症状，病毒 在体内长期存在，表现为潜伏感染）
传单的发病
• 在婴儿时期未感染EBV的个体，在少儿或 青春期初次感染EBV，即有约50%的个体 会出现“传单”病症。
EUROIMMUN
临床症状
• • • • • •
发热（38-40度） 淋巴结肿大 咽部疼痛 肝脾肿大 皮疹 神经系统症状（少数严重病例）
发病人群
• 发达国家：15-25岁高发 • 我国：多为学龄或学龄前少儿发病
尿素
欧蒙EBV产品系列总览
EUROIMMUN
EBV 血清学检测: IIFT
亲合力检测 EBV-CA (IgG) EBV-CA (IgG) with urea
早期
EBV-CA (IgM) EBV-EA (IgG)
既往 EBNA (IgG)
Patient 1
真正的全参数检测！
血清学检测的标准方法！
ELISA系列产品
欧蒙解决方案
• ELISA
靶抗原 CA EA 抗体类型 IgA/IgG/IgM IgA/IgG/IgM 订货号 EI2791 EI2795
• IFT
靶抗原 CA + EA 抗体类型 IgA 订货号 FI2791-2A
Thank you!
多个抗体指标同时检测
EBV感染后的抗体滴度变化特征
多项血清学组合检测的结果解释
注：关于亲合力检测
: 低亲合力 : 高亲合力
根据机体的免疫应答区分新近感染和既往感染
抗体亲合力
• 低亲合力抗体：初次免疫
急性（原发）感染
• 高亲合力抗体：再次免疫
既往感染；感染后复发
低亲合力抗体
尿素
高亲合力抗体
检测方法
嗜异性抗体
病毒载量检测
血清学 (主流方法）
嗜异性抗体
• 由多克隆B细胞产生，多为IgM型，具有一定诊 断价值。 • 阳性率为80%左右，但在儿童患者中经常出现假 阴性结果（四岁以下儿童不能产生此抗体）。 • 在其他感染，如HIV、风疹、细小病毒等。甚至 在SLE、淋巴瘤等患者中可能出现假阳性结果。
EUROIMMUN
EBV相关疾病及临床应用
非肿瘤相关
传染性单核细胞增多症
&
肿瘤相关
鼻咽癌
慢性活动性EBV感染
X性连锁淋巴细胞增生 综合征
伯基特瘤
霍奇金病 · · · · · · ·
传染性单核细胞增多症 (Infectious Mononucleosis,IM)
——EBV原发感染导致的疾病