血清学实验指导
血清鉴定实验实训报告单
实验名称：血清鉴定实验实验日期：____年__月__日实验地点：____实验室实验人员：____、____、____实验指导教师：____一、实验目的1. 熟悉血清鉴定实验的基本原理和操作方法。
2. 掌握常用血清学检测指标及检测方法。
3. 学会分析实验结果，提高实验技能。
二、实验原理血清鉴定实验是通过检测血清中的特定指标，了解人体的生理和病理状态。
本实验主要检测以下指标：1. 蛋白质：血清蛋白质分为白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等，其含量和种类变化可以反映肝脏、肾脏等器官的功能状况。
2. 电解质：血清电解质主要包括钠、钾、氯、钙、镁等，其含量变化可以反映电解质平衡状况。
3. 生化指标：包括血糖、胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐等，可以反映代谢和肾功能状况。
4. 血常规指标：包括红细胞计数、血红蛋白、白细胞计数、血小板计数等，可以反映血液系统的功能状况。
三、实验材料1. 试剂：血清蛋白定量试剂盒、电解质试剂盒、生化试剂盒、血常规试剂盒等。
2. 仪器：自动生化分析仪、血液分析仪、离心机、水浴箱、移液器等。
3. 样本：健康人血清样本。
四、实验方法1. 样本处理：将血清样本离心分离，取上清液待检。
2. 蛋白质测定：采用双缩脲法测定血清蛋白质含量。
3. 电解质测定：采用电极法测定血清电解质含量。
4. 生化指标测定：采用自动生化分析仪测定血糖、胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐等指标。
5. 血常规指标测定：采用血液分析仪测定红细胞计数、血红蛋白、白细胞计数、血小板计数等指标。
五、实验步骤1. 样本处理：将血清样本离心分离，取上清液待检。
2. 蛋白质测定：（1）将血清样本与双缩脲试剂混合，室温下放置5分钟；（2）用分光光度计在540nm波长下测定吸光度；（3）根据标准曲线计算蛋白质含量。
3. 电解质测定：（1）将血清样本与电解质试剂混合，室温下放置5分钟；（2）用分光光度计在特定波长下测定吸光度；（3）根据标准曲线计算电解质含量。
公卫医师考试辅导：血清学诊断
公卫医师考试辅导：血清学诊断
血清学诊断是公卫医师考试大纲所包含的内容，我们搜集整理相关内容供大家学习参考。
（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫试验（RIA）及免疫荧光试验（IF）
ELISA、RIA及IF均为用于检测感染者血清中特异性抗体或抗原的方法，均为应用标记的抗原检测血清中抗异性抗体，或应用标记的抗体检测血清中特异性抗原。
（2）蛋白印迹试验（Westernblot，WB）
蛋白印迹试验（WB）是在ELISA应用原理基础上发展的一项新技术，用于检测微生物的特异性蛋白抗原或患者相对应的蛋白抗体的实验室诊断方法。
若用此试验检测患者血清特异性抗体，可用已知微生物蛋白抗原捕捉患者血清中特异性抗体，再结合酶标记抗人抗体并观察结果。
我们搜集整理。
（3）中和试验（NT）
中和试验（NT）为在检测病原微生物（病毒、细菌等）的血清学试验过程中，先在被检血清或其他液体标本中加人已知的特异性抗体或抗原，使其发生中和反应后，再检测被检血清中其特异性抗原或抗体。
（4）试管凝集试验
肥达氏试验是辅助诊断伤寒或副伤寒病常用的一种血清学
试验，即用已知伤寒沙门氏菌的菌体抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）及甲型或乙型副伤寒杆菌的鞭毛抗原（PA或PB抗原），
测定人血清中相应抗体效价。
梅毒血清学检测的操作规范
检测操作
血清分离
抗凝处理：加入抗凝剂如肝 素钠
离心分离：将血液样本放入 离心机中，以一定速度离心
采集静脉血：使用无菌注射 器抽取静脉血
分离血清：将离心后的血液 分为血清和血细胞两部分
抗原检测的原理
抗原检测
抗原检测的方法
抗原检测的注意事项
抗原检测的结果解释
抗体检测
采集样本：采 集静脉血液样 本，确保样本
一次性使用的针头、针管、玻片等物品，应按照医疗废物处理。 检测过程中产生的废弃标本，应按照生物安全要求进行高压灭菌或化学消毒处理。
检测过程中产生的废弃试剂、缓冲液等，应按照实验室废弃物处理规定进行分类处理。
检测结束后，应对实验室进行全面清洁和消毒，确保环境安全。
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汇报人：
频率：每周至少进行一次室内质控，并记录相关数据
室间质评
定义：室间质评是指实验室与其他实验室之间对相同或相似项目进行比较和评价
目的：提高实验室检测结果的准确性和可靠性
实施方式：通过参加权威机构组织的室间质评活动，对实验室的检测能力进行评估和 验证
意义：帮助实验室发现存在的问题和不足，及时采取措施进行改进，提高实验室的整 体水平
假阴性结果：可 能由于窗口期、 检测方法等原因 导致，需要结合 临床判断
注意事项
生物安全防护
实验室布局与设施：合理规划实验室空间，确保空 气流通，使用专用实验台和防护服
单击此处输入你的正文，请阐述观点
废弃物处理：正确处理实验废弃物，防止交叉感染 和环境污染
单击此处输入你的正文，请阐述观点
严格遵守实验室操作规程，确保实验结果的准确性 和可靠性
静脉血：采集肘静脉血
采集部位
梅毒血清学检测操作规范
实验室应保持整洁、 干燥、通风良好， 定期进行消毒和清 洁工作。
实验室废弃物应按 照医疗废物处理规 定进行分类、存放 和处置。
实验室应建立安全 管理制度，对工作 人员进行安全培训 和考核，确保实验 室安全运行。
正确处理医疗废物和废液
医疗废物分类：感染性废物、病理性废物、损伤性废物、药物性废物和化学性废物 医疗废物处理：使用专用容器收集，及时送往医疗废物处理中心 废液处理：使用专用容器收集，加入消毒剂后，按照医疗废物处理方式处理 注意事项：避免医疗废物和废液对环境和人体造成危害
穿刺：用采血针穿刺静脉，轻轻回 抽，使血液流入采血管
止血：用止血带压迫穿刺部位，止 血后取下止血带
记录：记录采血时间、部位、样本 量等信息
标记样本并记录相关信息
标记样本：在采 集样本时，需要 使用唯一标识符 对样本进行标记， 确保每个样本的 唯一性和可追溯 性
记录相关信息： 在采集样本时， 需要记录与样本 相关的信息，如 患者姓名、性别、 年龄、采集时间、 采集部位等，以 便后续的检测和 分析
样本容器：采集 的样本需要存放 在适当的容器中， 容器需要保持清 洁、干燥，并使 用适当的标签进 行标识
样本保存：采集 的样本需要按照 规定的温度和时 间进行保存，以 确保样本的稳定 性和可靠性
保证样本质量和安全
采集前准备：确保采集器具无菌、干燥、密封 采集方法：选择合适的采集部位，避免污染 采集时间：在合适的时间段内采集，避免影响结果 样本保存：低温保存，避免细菌繁殖
记录和文档管理
记录检测过程和结果
记录检测过程：详细记录检测的操作步骤、试剂使用、仪器校准等信息 记录检测结果：准确记录每个样本的检测结果，包括阴阳性、滴度等数据 记录保存：将检测记录妥善保存，以便后续查阅和审核 记录规范：遵循统一的记录规范，确保记录清晰、准确、完整
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。
2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。
3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。
4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。
本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。
应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。
5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。
6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。
7.3按照要求进行血液采集。
将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。
并填写《外来标本交接记录》及相关记录。
7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。
7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。
先天性梅毒 病情说明指导书
先天性梅毒病情说明指导书一、先天性梅毒概述先天性梅毒（congenital syphilis）又称胎传梅毒，是梅毒螺旋体由母体经过胎盘进入胎儿血液循环中所致的疾病。
本病可出现于新生儿期、婴儿期和儿童期。
梅毒螺旋体由母体经过胎盘进入胎儿血液循环是本病的病因。
多数新生儿出生时症状和体征不明显，约2/3的病例在出生后3～8周至3个月出现消瘦、发热、贫血、黄疸、肝、脾肿大等全身症状和皮肤黏膜损害、骨损害等表现。
梅毒螺旋体抗原试验可用于本病的确诊，本病在宫内或出生后早期经青霉素充分治疗者，预后良好。
英文名称：congenital syphilis。
其它名称：胎传梅毒。
相关中医疾病：暂无资料。
ICD疾病编码：暂无编码。
疾病分类：感染性疾病。
是否纳入医保：部分药物、耗材、诊治项目在医保报销范围，具体报销比例请咨询当地医院医保中心。
遗传性：与遗传无关。
发病部位：皮肤,全身,鼻,口腔,眼。
常见症状：消瘦、发热、贫血、黄疸、肝脾肿大、皮肤黏膜损害、骨损害、鼻炎、结节性梅毒疹和梅毒瘤。
主要病因：梅毒螺旋体感染。
检查项目：体格检查、X线、梅毒螺旋体检查、非梅毒螺旋体抗原血清试验、梅毒螺旋体抗原试验、脑脊液检查。
重要提醒：常规孕前筛查梅毒可有效预防先天性梅毒的发生，先天性梅毒在宫内或出生后早期经青霉素充分治疗者，预后良好。
临床分类：基于年龄分类：1、早期梅毒2岁以内者。
2、晚期梅毒2岁以上者。
包括皮肤黏膜骨梅毒、心血管梅毒（少见）、神经梅毒（少见）和先天潜伏。
二、先天性梅毒的发病特点三、先天性梅毒的病因病因总述：先天性梅毒由梅毒螺旋体经胎盘传播感染引起。
母亲怀孕时梅毒螺旋体可轻易通过胎盘及脐静脉由母体传染给胎儿，分娩过程中新生儿亦可在通过产道时接触患早期梅毒母亲外生殖器的初疮发生接触性感染。
其中，胎盘传播多发生在妊娠4个月后，孕早期由于绒毛膜朗格汉斯细胞层的阻断，螺旋体不能进人胎儿，妊娠4个月后，朗格汉斯细胞层退化萎缩，胎儿则易被感染。
鉴定血型的实验报告
鉴定血型的实验报告一、实验目的本实验旨在通过血清学方法鉴定一个人的血型，以便了解其红细胞的抗原和抗体特性，以及输血或接受器官移植时的兼容性。
二、实验原理血型鉴定是基于抗原和抗体的特异性反应。
红细胞表面所携带的抗原与血清中的抗体相互作用，通过观察是否发生凝集反应来判断血型。
本实验将采用经典的ABO血型系统进行鉴定。
三、实验步骤1、准备试剂和器材：抗A抗体、抗B抗体、抗D抗体、生理盐水、微量移液器、离心机、试管、滴管等。
2、采集样本：使用微量移液器从受试者静脉中抽取50微升血液。
3、实验操作：a.将50微升血液分别加入抗A抗体和抗B抗体试管中；b.用生理盐水将试管中的血液稀释至100微升；c.用滴管缓慢加入5滴抗D抗体；d.摇匀后，观察凝集反应；e.用离心机分离血清和红细胞，观察结果。
4、结果记录：记录每个试管中的凝集反应情况，包括凝集颗粒的数量、颜色变化等。
5、结果分析：根据记录的凝集反应情况，判断受试者的血型。
四、实验结果与分析1、实验结果：在加入抗A抗体的试管中，受试者血液呈现凝集反应，形成明显的凝集颗粒；而在加入抗B抗体的试管中，血液未发生凝集反应。
2、结果分析：根据ABO血型系统的特点，受试者的红细胞表面可能携带A抗原，而未携带B抗原。
因此，可以初步判断受试者为A型血。
为了进一步确认血型，可以继续进行Rh血型等其他血型系统的鉴定。
五、结论本实验通过血清学方法成功鉴定了受试者的ABO血型为A型。
这一结果对于了解受试者的红细胞抗原和抗体特性，以及输血或接受器官移植时的兼容性具有重要意义。
在实际应用中，鉴定血型是确保医疗安全和有效治疗的关键环节之一。
红细胞血型系统课件一、引言红细胞血型系统是生物学和医学领域中的一个重要概念。
红细胞血型是指红细胞表面抗原的特异性，这些抗原在个体之间存在差异。
了解红细胞血型系统对于临床输血、器官移植、新生儿溶血病等疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本课件将介绍红细胞血型系统的基本概念、分类和应用。
志贺氏菌属诊断血清说明书
志贺氏菌属诊断血清学试验操作程序1.目的制定标准化的志贺氏菌属诊断血清操作程序，指导对志贺氏菌属的检测2.原理用志贺氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理诊断各型志贺氏菌。
3.试剂及实验设备3.1志贺氏菌属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为22种的志贺氏菌属诊断血清3.2试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。
3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、电热高温接种灭菌器。
4.程序步骤4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。
4.2选择符合志贺氏菌属培养特性，并经初步生化检测符合志贺菌属生物特性的疑似菌落。
4.3菌群分析将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，分别用志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验，凝集阳性时，再分别用群多价血清做玻片凝集试验，群多价血清凝集阳性时，再分别与相应的单价血清做玻片凝集试验，最终确定其血清分型。
如果志贺氏菌属4种多价血清做玻片凝集试验均为阴性，可能有以下3种可能性：①K抗原的存在，处理方法：取待检菌的纯菌落于生理盐水中制成浓度约2麦氏单位的菌悬液，置于100°C水浴中煮沸30min，泠却至室温后再用诊断血清进行玻片凝集试验；②非典型菌落，处理方法：通过在营养琼脂平板上的传代让其恢复抗原性，再用诊断血清进行玻片凝集试验；③诊断血清型以外的可送市或省CDC检测。
4.4玻片凝集试验法取18~24h血平板上纯培养的待检菌，用生理盐水制成2麦氏单位的菌悬液，取诊断血清20μL于洁净玻片上，然后取20μL待检菌悬液与血清混匀，轻轻摇动玻片，1min内呈现明显凝集者为阳性，呈均匀浑浊者为阴性，每次凝集试验均应以生理盐水作为阴性对照试验。
若与福氏志贺氏菌单价血清呈现凝集可参照福氏志贺氏菌诊断抗原表（见附表）及生化特性做菌型诊断。
5.质量控制志贺氏菌属4种多价血清选择福氏志贺氏菌属为阳性对照株；选择大肠埃希菌ATCC25922为阴性对照菌株。
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实验目录
实验一：0.01M pH7.4磷酸盐缓冲液的制备
实验二：1%鸡红血球悬液的制备
实验三：禽流感血凝试验
实验四：禽流感血凝抑制试验
实验五：口蹄疫病毒3ABC-ELISA抗体检测技术实验六：猪瘟病毒ELISA抗体检测技术
实验一 0.01M pH7.4磷酸盐缓冲液的制备
一、目的要求
掌握磷酸盐缓冲液的制备方法，为后续的血清学检测奠定基础。
二、药械及耗材
电子天平，小电炉，药匙，1000ml烧杯，玻棒，500ml三角瓶（带棉塞），pH试纸；
Na2HPO4.12H2O、KH2PO4、NaCl、蒸馏水；1 N NaOH、1N HCl（滴管瓶塞）。
三、试验程序
配方：Na2HPO4.12H2O 2.9克
KH2PO4 0.3克
NaCl 8.0克
蒸馏水1000ml
将上述成分称量在烧杯中，加热搅拌溶解，待完全溶解以后，调整pH值至7.4。
然后分装在3个三角瓶中（每瓶大约330ml），加棉塞，橡皮筋捆扎，置高压灭菌器中121℃15min灭菌处理，备用。
实验二 1％鸡红血球悬液的制备
一、目的要求
掌握鸡红血球悬液的制备方法，为后续的血凝和血凝抑制试验奠定基础。
二、药械与耗材
公鸡，玻璃注射器（30ml），16＃大针头，5％柠檬酸钠；800型离心机，玻璃离心管（10ml），洗耳球，10ml移液管，2ml移液管，棉花；0.01M pH7.4磷酸盐缓冲液。
三、试验程序
※从心脏采集公鸡的抗凝血约25ml，平均分装3支离心管；
※作对称平衡以后，3000rpm离心10min，弃上清液，保留红血球泥；
※加入适量PBS，用乳头滴管轻轻地洗涤红血球，然后作对称平衡，3000rpm 离心10min，弃上清液，保留红血球泥；
※重复上述操作2～3次，直至上清液清亮透明；
※用10ml移液管轻轻地吸去上清液弃之，保留红血球泥；
※用10ml移液管向三角瓶中加入49.5mlPBS，再用2ml移液管吸取0.5ml 红血球泥，棉花擦去移液管外壁粘附的红血球。
将0.5ml红血球泥放入
49.5mlPBS中，混匀置于4℃冰箱备用。
实验三禽流感血凝（HA）试验
一、目的要求
流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体结构，HA试验由此得名。
本试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。
可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
二、药械与耗材
磷酸盐缓冲液、3.8%柠檬酸盐溶液、96孔V型血凝板、50μL移液枪、25μL 移液枪、微量振荡器。
1%鸡红细胞悬液制备，参照实验二。
三、诊断试剂和待检样本
禽流感病毒血凝素分型抗原。
四、试验程序
※在微量反应板的1~12孔均加入25μL PBS，换滴头。
※吸取25μL病毒悬液加入第1孔，混匀。
※从第1孔吸取25μL病毒液加入第2孔，混匀后吸取25μL加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取25μL弃去，换滴头。
※每孔再加入25μL PBS。
※每孔均加入25μL 1%鸡细胞悬液（注：勿必将红细胞悬液摇匀）。
※振荡混匀，在室温（20~25℃）下静置40分钟后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。
对照孔红细胞将成为明显的钮扣状沉到孔底。
结果判定：将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。
完全血凝（不流淌）
的抗原或病毒最高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。
以使红细胞100%凝集的抗原最高稀释倍数作为血凝效价。
实验四禽流感血凝抑制（HI）试验
一、目的要求
流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。
本试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。
可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
二、药械与耗材
磷酸盐缓冲液、3.8%柠檬酸盐溶液、96孔V型血凝板、50ul移液枪、25ul 移液枪、微量振荡器。
1%鸡红细胞悬液制备，参照实验二。
三、诊断试剂和待检样本
禽流感病毒血凝素分型抗原和标准分型血清以及阴性血清。
四、试验程序
根据HA试验结果配制4HAU的病毒抗原。
以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4，即为含4HAU的抗原的稀释倍数。
例如，如果血凝的终点滴度为1：256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1：64（256/4）。
※在微量反应板的1～11孔加入25ulPBS，第12孔加入50μL PBS。
※吸取25ul血清加入第1孔内，充分混匀后吸25μL于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取25μL弃去。
※1～11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液25μL，室温静置至少30分钟。
※每孔加入25μL 1%鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40分钟，对照红细胞将呈钮扣状沉于孔底。
结果判定：以完全抑制4HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
只有阴性对照孔血清滴度不大于22，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。
HI价小于或等于判定HI试验阴性；HI价等于23为可疑需重复试验;HI
价大于或等于24为阳性。
实验五口蹄疫非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验
(NSP 3ABC-I-ELISA)
一、目的要求
口蹄疫(FMD)是一种高度接触性传染病,传播迅速,可形成世界性大流行,对养殖业和国际畜产品贸易具有严重的负面影响。
控制和消灭FMD策略包括疫苗免疫和屠宰可疑畜群在采用疫苗的国家,大多数动物血清口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白和病毒相关抗原(VIAA,即3D)抗体均为阳性。
因此,一些基于结构蛋白和VIAA的诊断方法很难确定口蹄疫病毒感染与否。
只有将感染动物和隐性带毒动物与疫苗免疫动物加以区分，才能为FMD的控制和消灭提供科学的依据。
目前的疫苗生产工艺，在病毒纯化过程中去除绝大部分非结构蛋白，因此灭活疫苗免疫动物体内没有病毒非结构蛋白3BC抗体产生，而自然感染动物体内既有结构蛋白抗体，也有非结构蛋白3ABC抗体。
因此检测FMDV非结构蛋白3ABC 抗体的ELISA方法不但可以检测隐性感染动物，而且可以区分感染动物和免疫动物。
本试验采用FMD NSP 3ABC-I-ELISA试剂盒检测FMDV非结构蛋白3ABC 抗体。
用于活畜进口调运、疫区净化检疫和群体无症状感染评价，区分感染和免疫动物。
二、药械及耗材
2ml指弹头离心管，吸水纸，1～10ul移液枪，10～100ul移液枪,500ul移液枪，250ml烧杯，液体稀释槽，小、中、大移液枪尖。
三、诊断试剂和待检样本
3ABC-I-ELISA诊断试剂盒、待检血清样本。
四、试验程序
※将试剂盒配备的25倍浓缩PBST用无离子水或蒸馏水做1：25倍稀释待
用。
※待检血清样品和阳性、阴性对照血清用血清稀释液1：21倍稀释（120ul 血清稀释液加血清6ul），每孔加入100ul，阴、阳性对照血清样品平行加两孔，用封口膜封口，37℃结合30分钟。
※取掉封口膜，每孔加满洗涤液，洗涤5次，最后一次拍干。
※用血清稀释液按1：100比例稀释酶标二抗，每孔加入100ul，用封口膜封口，37℃结合30分钟。
※取掉封口膜，每孔加满洗涤液，洗涤5次，最后一次拍干。
※每孔加入50ul底物溶液B（H2O2）和50ul底物溶液A（TMB）混匀。
封口膜封口，37℃避光作用10-15分钟。
※每孔加入100ul终止液（H2SO4）。
※轻轻摇振混匀，测定波长450nm吸光值。
结果判定：阳性对照平均OD值应大于0.6；阴性对照应小于0.2。
结果计算：样品效价为：（OD样品-OD阴性）/（OD阳性-OD阴性）。
若效价<0.2，为阴性；效价在0.2～0.3之间为可疑；效价>0.3为阳性。
可疑样品进行复测，仍为可疑判为阳性。
五、试验安排与结果
设一套阴、阳性对照。
判定样品效价。
图 96孔酶标板布局图
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A
C
D
E
F
G
H。