植物蛋白质提取方法总汇
蛋白质提取方法(个人总结篇)
植物蛋白质提取方法汇总（本人经验总结）一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm 以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm 以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
植物总蛋白提取
一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度2个小时(必要时过夜)，4度25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。
2．苯酚（phenol）提取法花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。
将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。
3．直接IEF buffer提取蛋白质直接IEF buffer提取蛋白质，花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，然后加入IEF buffer(8M尿素，20mmDTT,4%CHAPS，5mmEDTA，5mmTris base,2%ampholyte,PH:3-10).如方法1。
植物蛋白质提取方法
一、植物蛋白质提取1. TCA-丙酮法（1）称量一定量的样品置于液氮预冷的研钵中，加少许PVPP，反复加液氮研磨至粉末。
（2）研磨好的样品用10 倍体积（w/V）的10%的TCA-丙酮溶液悬浮，加入0.1 M PMSF、1 M DTT 至终浓度为1 mM PMSF、10mM DTT，超声5 分钟，于-20℃静置6 小时或过夜后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。
（3）沉淀用10 倍体积于样品的丙酮溶液重悬浮，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。
（4）重复步骤（3）一次。
（5）沉淀用10 倍体积于样品的乙醇/乙醚=1:1 洗，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。
（6）重复步骤（3）一次。
（7）取出沉淀真空干燥约5 分钟，除尽有机溶剂。
（8）按10mg 干粉末加200 微升裂解液的比例，加入1 mM PMSF、10mM DTT，超声5分钟，充分溶解1 小时，10℃，35000g 离心30 分钟，上清为所需的蛋白溶液。
（9）用Bradford 法测定蛋白样品的蛋白浓度。
（10）蛋白样品溶液小量分装，-80℃保存。
注意事项：（1）TCA 有利于去除酚类色素等物质，但不利于蛋白的抽提，使用浓度不宜过高，在后面丙酮处理中，尽量除去。
（2）蛋白样品保存：样品浓度不宜过高，建议将高浓度样品适度调整，为避免反复冻融应分装保存，长期保存用-80℃，短期保存用-20℃。
（3）1M DTT：0.1542g DTT 用1ml MilliQ 水溶解，-20℃保存。
（4）0.1M PMSF：0.0174g PMSF 用1ml 异丙醇溶解，-20℃保存。
蛋白质的十种提取方法
蛋白质的十种提取方法.txt大人物的悲哀在于他们需要不停地做出选择；而小人物的悲哀在于他们从来没有选择的机会。
男人因沧桑而成熟，女人因成熟而沧桑。
男人有了烟，有了酒，也就有了故事；女人有了钱，有了资色，也就有了悲剧。
蛋白质提取方法-------列举10种方法[ 来源：绿谷生物网点击数： 4587 更新时间： 2008年05月30日 ][ 收藏本文 ] 一、植物组织蛋白质提取方法（summer）1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法 (summer)三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1 小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm 以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA 和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜（newinbio）目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE 提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE 用量）振荡，置室温20min离心： 7500g，5 min，4 度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2 次沉淀中加入100％乙醇 2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20 度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS 后沉淀不溶解，还是很大的一块，4 度离心后又多了白色沉定，SDS 结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
不同组织的蛋白提取方法
不同组织的蛋白提取方法•相关推荐不同组织的蛋白提取方法不同组织的蛋白提取方法一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！或者用三氯醋酸—丙酮沉淀法，离子浓度小的1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3-204℃8000rpm以上13、的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上14、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000r pm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
二、组织：肠黏膜应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于BLOT存在的问题：加入1％SDS4度离心后又多了白色沉定，SDS左右。
植物蛋白提取
植物全蛋白提取方法：TCA丙酮沉淀法、Tris-HC1法、Trizol沉淀法提取法。
1 TCA丙酮沉淀法基于蛋白在酸或疏水条件下变性使蛋白浓缩并去除污染物原理的TCA丙酮沉淀法，最早用于小麦蛋白的提取，是目前提取植物蛋白的常用方法之一。
具有降低次生代谢物质的干扰、减少蛋白降解等优点。
TCA能有效地抑制蛋白酶对蛋白质的水解作用，保证在制样过程中蛋白质不被降解；丙酮溶液能除去样品中的酚类及色素等干扰物质，同时实验过程中采用的高速离心办法能较好地去除多糖的影响。
然而该方法的一个最大缺点是蛋白质很难重新溶解，而且样品中的非蛋白成分很难除去，可能会丢失膜蛋白和疏水性蛋白，导致2-DE图谱上有明显的横纵条纹。
在研磨样品时加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)用来吸附样品中富含的酚、醌类物质。
它们能通过疏水键与酚类形成复合物，离心可以去除该复合物。
然而，TCA丙酮沉淀法中与蛋白共沉淀的污染物在随后的有机溶剂清洗步骤中通常难以去除，可以通过振荡和延长蛋白沉淀在裂解缓冲液中温育时间的方法来增加蛋白的溶解能力。
在提取的过程中同时加入了TCA、β-巯基乙醇及DTT 3 种药剂可以更好的抑制蛋白质的水解及去除干扰物质。
TCA丙酮提取法耗时少且容易操作，一般作为植物蛋白提取的初始方案，该方法常用于幼嫩组织中蛋白的提取，对更为复杂的植物组织该方法并非最佳选择。
但该方法还是在植物蛋白的提取中占有重要位置，很多木本植物的样品应用该方法效果很好，如鹅掌楸叶片、巴东木莲的雌蕊柱头、槟榔叶片、银杏叶片及枝条、茶树叶片及芽、红豆杉的愈伤组织、石斛叶片等。
草本植物中的大豆叶片、生菜叶片、黄瓜叶片、番茄子叶、龙胆花芽、灰木相思叶片等应用该方法都获得了较清晰的2-DE图谱。
TCA protein precipitation protocolStock Solutions: 100% (w/v) Trichloroacetic acid (TCA)recipe: dissolve 500g TCA (as shipped) into 350 ml dH2O, store at RT.Precipitation Protocol:1. Add 1 volume of TCA stock to 4 volumes of protein sample.i.e. in 1.5ml tube with maximum vol., add 250µl TCA to 1.0ml sample.2. Incubate 10 min at 4°C.3. Spin tube in microcentrifuge at 14K rpm, 5 min.4. Remove supernatant, leaving protein pellet intact. Pellet should be formed from whitish,fluffy ppt.5. Wash pellet with 200µl cold acetone.6. Spin tune in microfuge at 14K rpm, 5min.7. Repeat steps 4-6 for a total of 2 acetone washes.8. Dry pellet by placing tube in 95°C heat block for 5-10 min to drive off acetone.9. For SDS-PAGE, add 2X or 4X sample buffer (with or without bME) and boil smaple for10 min in 95°C herat block before loading smaple onto polyacrylamide gel.2 Trizol沉淀法与TCA 丙酮沉淀法相比，Trizol沉淀蛋白质的方法可有效地除去色素、酚类等干扰电泳的化学物质，特别是对植物样品中高丰度蛋白——Rubisco1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase，通常简写为RuBisCO）。
植物蛋白质提取方法
植物蛋白质提取方法1.机械破碎法机械破碎法是最常用的蛋白质提取方法之一、这种方法使用高速离心或超声波破碎将植物细胞破碎，释放细胞内的蛋白质。
然后通过离心或过滤将残渣去除，得到植物蛋白质溶液。
2.酸碱提取法酸碱提取法是利用酸碱条件使植物细胞膜溶解，从而释放出蛋白质。
首先将植物材料切碎，然后浸泡在酸碱溶液中。
酸性条件下可溶解细胞壁，碱性条件下可溶解细胞质膜，从而释放蛋白质。
最后通过离心或过滤将杂质去除，得到纯化的植物蛋白质。
3.毛细管电泳法毛细管电泳法是一种利用电场和毛细管将植物蛋白质按照电荷和大小进行分离的方法。
首先将植物材料研磨成粉末，然后将粉末溶解在缓冲液中，再将溶液注入毛细管。
通过施加高电压，蛋白质会被带动在毛细管中移动，根据蛋白质的电荷和大小的不同，移动速度也不同，从而实现分离。
4.总蛋白质沉淀法总蛋白质沉淀法是一种简单且高效的蛋白质提取方法。
首先将植物样品研磨成粉末，然后加入缓冲液进行溶解。
接着加入有机溶剂如酒精或丙酮，使蛋白质沉淀。
将沉淀经过离心后，去除上清液，然后用溶液再次洗涤沉淀。
最后用适当的溶剂溶解沉淀，得到纯净的植物蛋白质。
5.亲和层析法亲和层析法是利用一些特定亲和剂与目标蛋白质之间的特异结合来分离纯化蛋白质的方法。
首先将亲和剂固定在其中一种固定相上，列入柱中。
然后将植物蛋白质样品加入柱中，目标蛋白质与亲和剂结合，其他杂质被洗脱。
然后调整条件，将目标蛋白质洗脱下来，得到纯化的植物蛋白质。
综上所述，植物蛋白质提取方法有多种选择，根据实际需求和植物材料的特性，可以选择合适的提取方法进行蛋白质的纯化。
这些方法都有各自的优缺点，需要根据具体的实验条件和目的进行选择。
植物提取蛋白质的方法
植物提取蛋白质的方法植物提取蛋白质是一项关键的实验技术，它可以用于分离纯化和研究各种不同的植物蛋白质。
在这篇文章中，我将介绍一些常见的植物提取蛋白质的方法。
一、机械法提取蛋白质机械法提取蛋白质是最常见的提取方法之一。
机械方法能够充分破碎植物细胞壁，释放细胞液中的蛋白质。
这一方法相对简单，并且适用于大多数植物材料。
首先，将植物样品切碎，例如使用搅拌器或切割机。
然后，将样品置于高速搅拌器中，加入一定量的提取缓冲液。
提取缓冲液的选择会因不同植物而异，常见的包括Tris-HCl缓冲液、PBS缓冲液等。
随后，搅拌样品，使其充分混合，一般搅拌时间为30分钟到1小时。
搅拌完成后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度会因样品的不同而有所变化。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
二、化学法提取蛋白质化学法提取蛋白质是一种革命性的方法，它可以应用于很多不同类型的植物材料。
化学法提取蛋白质通常使用表面活性剂来破坏细胞膜，从而释放蛋白质。
一个常用的化学法是使用Tween-20。
首先，将植物样品切碎，然后将样品与一定量的提取缓冲液一起加入离心管中。
提取缓冲液中含有Tween-20等表面活性剂，作用是破坏细胞膜结构。
然后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度的选择会因样品的不同而有所不同。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
化学法提取蛋白质相比机械法来说，可以更彻底地破坏细胞膜，更有效地释放蛋白质。
但是，使用化学方法也要注意表面活性剂的种类和浓度，过高的浓度可能会使得蛋白质变性。
三、酶解法提取蛋白质酶解法提取蛋白质是一种选择性高、过程温和的方法。
它利用酶的特异性作用，选择性地降解植物组织中的细胞壁，从而释放蛋白质。
酶解法的步骤较为简单。
首先，将植物样品切碎，然后加入适量的酶解缓冲液和适当浓度的酶。
酶解缓冲液的选择会因不同酶而异，常见的包括PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液等。
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植物蛋白质提取方法总汇
一、植物组织蛋白质提取方法
1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml
1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml
2、甘油(Glycerol)75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！
二、植物组织蛋白质提取方法
氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm 以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS 溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml)，使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！
三、组织：肠黏膜
目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达
应用TRIPURE提取蛋白质步骤：
含蛋白质上清液中加入异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量)
倒转混匀，置室温10min
离心：12000 g，10min，4度，弃上清
加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：(2ml每1mlTRIPURE用量)
振荡，置室温20min
离心： 7500g，5 min，4度，弃上清
重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次
沉淀中加入100％乙醇 2ml
充分振荡混匀，置室温20 min
离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀
1％SDS溶解沉淀
离心：10000g，10min，4度
取上清-20度保存(或可直接用于WESTERN BLOT)
存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。
四、植物材料：水稻苗，叶鞘，根
1、200毫克样品置于冰上磨碎
2、加lysis buffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清
3、重复离心5min
lysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40
五、蛋白质样品制备
秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等(1986)的方法进行。
100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5 ml 10% 三氯乙酸(丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇)，混匀，-20℃沉淀1小时，4℃，15000 r/min离心15 min，弃上清，沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清，(有必要再用80％丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。
按每mg干粉加入20μl(可调) UKS液[9.5 M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc，pH3.5-10)，6% Triton X-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度 (温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰)16000 r/min
离心15 min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳。
或者-70度保存。
六、植物根中蛋白质的抽取
(1) sample, 液氮研磨
(2) 装1.5 ml centrifuge 用tube
(3) 加 1M KH2PO4 K2HPO4 700 ul
(4) 12000 rpm, 4度, 10-15minite
(5) 取上层液，蛋白质就在里面。