植物总蛋白提取
植物总蛋白提取演示教学
植物总蛋白提取精品文档一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度 2个小时(必要时过夜)，4度 25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度 1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。
2．苯酚（phenol）提取法花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。
将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。
植物总蛋白提取
一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度2个小时(必要时过夜)，4度25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。
2．苯酚（phenol）提取法花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。
将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。
3．直接IEF buffer提取蛋白质直接IEF buffer提取蛋白质，花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，然后加入IEF buffer(8M尿素，20mmDTT,4%CHAPS，5mmEDTA，5mmTris base,2%ampholyte,PH:3-10).如方法1。
植物蛋白提取方法和工艺流程
植物蛋白提取方法和工艺流程Plant protein extraction is a vital process for industries producing plant-based products such as protein powders, meat alternatives, and dairy substitutes. The method and process used for extracting plant proteins play a crucial role in determining the quality, yield, and functionality of the final product. Generally, plant protein extraction involves breaking down the plant cell wall to release proteins from the plant cells. This can be achieved through various physical and chemical methods such as grinding, pressing, and extraction with solvents.植物蛋白提取是生产植物蛋白粉、肉类替代品和奶制品替代品等植物基产品的行业的重要过程。
用于提取植物蛋白的方法和过程对最终产品的质量、产量和功能起着决定性作用。
通常，植物蛋白提取包括破坏植物细胞壁以释放细胞中的蛋白质。
这可以通过各种物理和化学方法来实现，如研磨、压榨和用溶剂提取。
One common method used for plant protein extraction is the solvent extraction method, which involves using organic solvents such as ethanol or hexane to dissolve the proteins from the plant material.This method is effective in extracting a wide range of proteins but may also result in the denaturation of proteins due to the harsh conditions. Another method is the aqueous extraction method, which uses water as the solvent to extract proteins. This method is gentler and more environmentally friendly but may not be as efficient in extracting proteins compared to solvent extraction.一种常用于植物蛋白提取的方法是溶剂提取法，其中使用有机溶剂如乙醇或正己烷来溶解植物材料中的蛋白质。
拟南芥总蛋白提取
河北经贸大学毕业论文拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析专业名称：生物技术班级：2003 02学生姓名：***指导教师：**完成时间：2007年6月河北经贸大学毕业论文摘要植物蛋白提取方法有很多种，不论使用哪一种方法，均必须在操作中保存生物大分子结构的完整性，保存活性防止变性及降解现象的发生。
因蛋白空间结构主要依靠氢键、盐键和范德华力的存在，遇酸、遇碱、高温、剧烈的机械作用及强烈的辐射等均可导致活性丧失，因此选择的条件应为十分温和。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术作为分离鉴定生物大分子的一种实验技术手段，已经成为分子生物学实验室中的重要技术之一。
本试验采用三种不同的方法（两种蛋白溶解法，一种蛋白沉淀法）分别提取拟南芥不同组织（拟南芥整个植株，拟南芥叶片，拟南芥愈伤组织）的蛋白，然后用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行电泳分析，通过分析凝胶电泳图谱比较分析不同提取液提取蛋白的效果优劣从而确定较好的蛋白提取法，以及拟南芥植株不同组织含有的不同蛋白。
实验结果表明提取液2提取蛋白的效果最好，电泳条带最清楚，提取液3即三氯乙酸丙酮次之，提取液1即PBS溶液最次；并且拟南芥总蛋白跑的电泳谱带最多且最清晰，叶片蛋白谱带最少且较模糊，说明植物各组织的蛋白含量与种类存在差异，这与其功能性质具有相关性，叶片电泳谱带少说明叶片蛋白只含有总蛋白的一部分，由于根部蛋白受培养基中的琼脂的影响而出现一条粗带。
另外，本实验采取了快速脱色和脱色液脱色两种不同的脱色法，结果表明快速脱色法不仅简单方便效果更好适于推广致用。
关键词SDS-PAGE电泳；拟南芥蛋白；蛋白质分析I河北经贸大学毕业论文AbstractThere are many methods of the withdrawtion of the plant proteins, no matter any method, it must preserve the biology macromolecular structure to be integrity in the operation, preserve activity to prevent the degradation and degeneration phenomenon. Space for protein structure mainly rely on hydrogen bonding, salt bonding and the Vander Waals bonding, the existence of the event acid, alkali treatment, high temperature, Mechanical dramatic role and strong radiation can lead to the loss of activity, it should choose the conditions for the very modest. SDS-PAGE as the isolation and identification of biological macromolecules in one of laboratory means, it has become one of the important laboratory technique in Molecular biology.This experiment uses three different methods (two methods are proteins todissolve solution, one method is protein precipitation) withdraws the tissues, protein of Arabidopsis thaliana ( all the protein of Arabidopsis thaliana, the leaf protein of Arabidopsis thaliana, the injuries tissue protein of Arabidopsis thaliana),and then the protein atlas in different tissues and organs of Arabidopsis thaliana were analyzed with SDS polyacrylamidegel, and then, through the analysis of the SDS-PAGE picture we can analysis the different extract buffer and the different protein of the different organizations.Finally, the results indicate that the best method is extract buffer 2 —the SDS-PAGE picture is the clearest, the extract buffer 3 that is the trichloroacetic acid acetone next, the last is the extract buffer 1 which is PBS. The kinds of protein in the whole Arabidopsis thaliana were most and clearest in these three tissues, the kinds of protein in the leaf were least, this phenomenon can be explained by that the protein's content and the protein's type are different, this indicates that the number of the strip belt band has the relevance with the function nature, the phenomenon that the number of the leaf protein is the least indicate that the content and type of the leaf protein are only a part of the whole protein of Arabidopsis thaliana; as aII河北经贸大学毕业论文result of that the culture medium has influence with the root protein, the picture of the whole protein has a thick belt. In addition, this experiment takes two different bleaching methods, one is rapid bleaching, the other is bleaching liquid, the result shows that the rapid bleaching method not only simple and convenient, but also have a better effect, so we can use it extensively.Keywords SDS-PAGE electrophoresis; Arabidopsis thaliana protein; The protein analysisIII河北经贸大学毕业论文目录1 引言 (1)1.1拟南芥简介 (1)1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (2)1.3拟南芥蛋白提取 (3)1.4实验研究的意义 (3)1.5展望 (4)2材料、主要试剂及主要仪器 (4)2.1实验材料 (4)2.1.1拟南芥培养 (4)2.1.2培养拟南芥愈伤组织 (4)2.2主要试剂及药品 (5)2.2.1溶液的配置 (5)2.2.2所用主要药品和试剂 (7)2.3 主要仪器 (8)3实验方法 (8)3.1样品蛋白的制备——蛋白质的提取 (8)3.1.1提取液1、2和水提取蛋白 (8)3.1.2提取液3提取蛋白 (9)3.1.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (9)4结果与分析 (10)4.1不同方法提取拟南芥不同组织蛋白的效果比较分析 (10)4.2丙酮法提取蛋白与其它提取法的比较 (11)4.3拟南芥蛋白分子量分析 (13)5讨论 (13)5.1金属离子螯合剂在蛋白提取中起重要作用 (13)5.2关于谱带倾斜现象 (13)5.3关于拟南芥各组织蛋白 (13)5.4染色、脱色 (14)6结论 (15)参考文献 (16)致谢 (18)1河北经贸大学毕业论文拟南芥蛋白不同提取方法的SDS—PAGE凝胶电泳分析1 引言1.1 拟南芥简介拟南芥（Arabidopsis thaliana）十字花科。
植物蛋白提取
植物全蛋白提取方法：TCA丙酮沉淀法、Tris-HC1法、Trizol沉淀法提取法。
1 TCA丙酮沉淀法基于蛋白在酸或疏水条件下变性使蛋白浓缩并去除污染物原理的TCA丙酮沉淀法，最早用于小麦蛋白的提取，是目前提取植物蛋白的常用方法之一。
具有降低次生代谢物质的干扰、减少蛋白降解等优点。
TCA能有效地抑制蛋白酶对蛋白质的水解作用，保证在制样过程中蛋白质不被降解；丙酮溶液能除去样品中的酚类及色素等干扰物质，同时实验过程中采用的高速离心办法能较好地去除多糖的影响。
然而该方法的一个最大缺点是蛋白质很难重新溶解，而且样品中的非蛋白成分很难除去，可能会丢失膜蛋白和疏水性蛋白，导致2-DE图谱上有明显的横纵条纹。
在研磨样品时加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)用来吸附样品中富含的酚、醌类物质。
它们能通过疏水键与酚类形成复合物，离心可以去除该复合物。
然而，TCA丙酮沉淀法中与蛋白共沉淀的污染物在随后的有机溶剂清洗步骤中通常难以去除，可以通过振荡和延长蛋白沉淀在裂解缓冲液中温育时间的方法来增加蛋白的溶解能力。
在提取的过程中同时加入了TCA、β-巯基乙醇及DTT 3 种药剂可以更好的抑制蛋白质的水解及去除干扰物质。
TCA丙酮提取法耗时少且容易操作，一般作为植物蛋白提取的初始方案，该方法常用于幼嫩组织中蛋白的提取，对更为复杂的植物组织该方法并非最佳选择。
但该方法还是在植物蛋白的提取中占有重要位置，很多木本植物的样品应用该方法效果很好，如鹅掌楸叶片、巴东木莲的雌蕊柱头、槟榔叶片、银杏叶片及枝条、茶树叶片及芽、红豆杉的愈伤组织、石斛叶片等。
草本植物中的大豆叶片、生菜叶片、黄瓜叶片、番茄子叶、龙胆花芽、灰木相思叶片等应用该方法都获得了较清晰的2-DE图谱。
TCA protein precipitation protocolStock Solutions: 100% (w/v) Trichloroacetic acid (TCA)recipe: dissolve 500g TCA (as shipped) into 350 ml dH2O, store at RT.Precipitation Protocol:1. Add 1 volume of TCA stock to 4 volumes of protein sample.i.e. in 1.5ml tube with maximum vol., add 250µl TCA to 1.0ml sample.2. Incubate 10 min at 4°C.3. Spin tube in microcentrifuge at 14K rpm, 5 min.4. Remove supernatant, leaving protein pellet intact. Pellet should be formed from whitish,fluffy ppt.5. Wash pellet with 200µl cold acetone.6. Spin tune in microfuge at 14K rpm, 5min.7. Repeat steps 4-6 for a total of 2 acetone washes.8. Dry pellet by placing tube in 95°C heat block for 5-10 min to drive off acetone.9. For SDS-PAGE, add 2X or 4X sample buffer (with or without bME) and boil smaple for10 min in 95°C herat block before loading smaple onto polyacrylamide gel.2 Trizol沉淀法与TCA 丙酮沉淀法相比，Trizol沉淀蛋白质的方法可有效地除去色素、酚类等干扰电泳的化学物质，特别是对植物样品中高丰度蛋白——Rubisco1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase，通常简写为RuBisCO）。
动植物总蛋白微量提取试剂盒说明书
动植物总蛋白微量提取试剂盒说明书产品编号：BTN90707规格：50T产品及特点：本产品用于快速提取动植物总蛋白，用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析以及蛋白活性测定等。
本产品的其主要特点是：1.提取过程十分简便，匀浆离心即可，整个过程只需要十几分钟。
2.采用独特的温和裂解成分，蛋白保持天然活性。
3.适用于各种动植物组织材料，包括新鲜或冰冻的材料。
4.得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、Western印迹分析以及蛋白活性测定等下游实验。
5.一次可以处理100mg左右的样品，足够进行几十次SDS-PAGE mini胶电泳检测。
规格及成分：成分规格溶液A50ml5×SDS-PAGE上样液1ml说明书1份保存条件：常温运输，4℃保存，5×SDS-PAGE上样液短期4℃保存，长期可放-20℃保存，有效期一年。
使用方法：使用前，最好请在溶液A中加入自备的1M DTT溶液50μL。
一：匀浆法注意：对致密的实体组织（如肌肉），最好用Polytron式匀浆机匀浆处理。
1.称取动物或植物组织样品100mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到10-15mL的塑料离心管中。
2.加入1ml溶液A，在冰上用Polytron式匀浆机匀浆，直到没有肉眼可见的组织块。
为了避免产热，可以分多次匀浆，其间放冰上让匀浆液冷却。
3.将匀浆液全部转移到1.5mL的塑料离心管中。
4.4℃12,000g离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
5.将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。
如果要测定蛋白浓度，请使用BCA方法，不要使用Bradford方法（如果要使用，也需要把样品稀释10倍后再测定，否则溶液A中的成分会影响浓度侧定）。
如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分到离心管中，加入5×SDS-PAGE上样缓冲液（终浓度为1×），在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。
一种植物总蛋白的提取方法及其专用提取液
一种植物总蛋白的提取方法及其专用提取液
高效蛋白提取是生物学研究中许多生物活性蛋白质的重要技术，同时是天然植物来源高效产出有效复合成制剂的有效技术。
近年来，微生物静电纺丝已成为一种快速、有效和经济的植物总蛋白提取方法，可以有效地提取出植物中的多种活性蛋白，并使其得到有效的应用。
专用总蛋白提取液由水、醇类和有机酸组成，使得植物蛋白质更容易溶解，有效降低蛋白质的结构及生物活性，从而可以获得植物总蛋白，并提高抽取特定集合体的活性蛋白。
此外，专用植物总蛋白提取液还可以采用无纤维素或低纤维素方法进一步提高植物总蛋白的抽取效率，节省时间成本。
专用提取液能够提取植物总蛋白，也有助于保护植物总蛋白，具有抗氧化特性和抗酶水解性，还可以促进蛋白质的活性和高纯度纯化。
同时，专用提取液具有高灵敏度、快速性和无毒性，因此几乎所有的植物级别都可以采用此种专用提取液提取总蛋白。
综上所述，静电纺丝专用植物总蛋白提取液具有许多独特的优点，包括快速、有效、低成本、抗酶水解性和抗氧化性，是生物学研究中活性蛋白质的一种重要技术，也是植物来源高效产出有效复合剂的一种有效技术。
三氯醋酸丙酮沉淀法提取植物总蛋白注意事项
三氯醋酸丙酮沉淀法提取植物总蛋白注意事项嘿呀！今天咱们来好好聊聊“三氯醋酸丙酮沉淀法提取植物总蛋白注意事项”。
这可是个相当重要的话题呢！首先呀，咱们得搞清楚实验材料和设备的准备工作。
选择新鲜、健康的植物材料那是至关重要的呀！哎呀呀，要是材料有问题，后面的步骤可就全白搭啦！还有呢，各种实验仪器得齐全，像离心机、移液器、冰箱这些，都得事先检查好，确保能正常工作。
在操作过程中，提取液的配制可得小心谨慎呢！三氯醋酸和丙酮的比例要精准控制，稍微有点偏差，可能就会影响提取效果。
哇！还有温度的控制，这也是个关键因素。
提取过程中，温度过高或者过低都会对蛋白的稳定性产生影响。
提取时的搅拌速度和时间也不能马虎呀！搅拌速度太快，可能会破坏蛋白的结构；搅拌时间太长或太短，都无法充分提取出总蛋白。
哎呀呀，这可真是需要耐心和细心来把握的！提取结束后，离心这一步也有讲究。
离心机的转速和离心时间要根据具体情况进行调整。
转速太低，蛋白沉淀不充分；转速太高，又可能会导致蛋白变性。
接下来，蛋白沉淀的清洗也很重要呢！要用适量的冷丙酮进行清洗，去除杂质。
但要注意，清洗次数不能太多，不然会损失蛋白。
还有呀，在整个实验过程中，一定要注意保持环境的清洁和无菌。
哪怕是一点点的污染，都可能导致实验失败。
提取出来的蛋白保存也是个大学问！要选择合适的温度和保存条件，不然蛋白很容易降解或者失活。
另外，实验人员自身的操作规范也不能忽视。
必须严格按照操作规程进行，做好防护措施，避免对自身造成伤害。
哇！总之，用三氯醋酸丙酮沉淀法提取植物总蛋白，每一个环节都需要我们用心去对待，注意每一个细节，才能得到满意的结果呢！怎么样，是不是对这个提取方法的注意事项有了更清楚的了解啦？希望大家在实验中都能顺顺利利的，提取出高质量的植物总蛋白！。
植物提取蛋白质的方法
植物提取蛋白质的方法植物提取蛋白质是一项关键的实验技术，它可以用于分离纯化和研究各种不同的植物蛋白质。
在这篇文章中，我将介绍一些常见的植物提取蛋白质的方法。
一、机械法提取蛋白质机械法提取蛋白质是最常见的提取方法之一。
机械方法能够充分破碎植物细胞壁，释放细胞液中的蛋白质。
这一方法相对简单，并且适用于大多数植物材料。
首先，将植物样品切碎，例如使用搅拌器或切割机。
然后，将样品置于高速搅拌器中，加入一定量的提取缓冲液。
提取缓冲液的选择会因不同植物而异，常见的包括Tris-HCl缓冲液、PBS缓冲液等。
随后，搅拌样品，使其充分混合，一般搅拌时间为30分钟到1小时。
搅拌完成后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度会因样品的不同而有所变化。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
二、化学法提取蛋白质化学法提取蛋白质是一种革命性的方法，它可以应用于很多不同类型的植物材料。
化学法提取蛋白质通常使用表面活性剂来破坏细胞膜，从而释放蛋白质。
一个常用的化学法是使用Tween-20。
首先，将植物样品切碎，然后将样品与一定量的提取缓冲液一起加入离心管中。
提取缓冲液中含有Tween-20等表面活性剂，作用是破坏细胞膜结构。
然后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度的选择会因样品的不同而有所不同。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
化学法提取蛋白质相比机械法来说，可以更彻底地破坏细胞膜，更有效地释放蛋白质。
但是，使用化学方法也要注意表面活性剂的种类和浓度，过高的浓度可能会使得蛋白质变性。
三、酶解法提取蛋白质酶解法提取蛋白质是一种选择性高、过程温和的方法。
它利用酶的特异性作用，选择性地降解植物组织中的细胞壁，从而释放蛋白质。
酶解法的步骤较为简单。
首先，将植物样品切碎，然后加入适量的酶解缓冲液和适当浓度的酶。
酶解缓冲液的选择会因不同酶而异，常见的包括PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液等。
植物蛋白的提取方法
植物蛋白的提取方法
植物蛋白啊，那可是个宝！你知道从植物中提取它都有哪些奇妙的方法吗？咱就拿大豆来说吧，那可是植物蛋白的丰富来源。
可以通过浸泡，让大豆吸饱水，就像人喝足了水一样精神饱满。
然后呢，把它们磨碎，哎呀，这就像是把宝藏给挖掘出来了。
还有啊，像花生，那也是提取植物蛋白的好材料呀！把花生炒熟了，香气扑鼻，然后再去提取蛋白，感觉就像是在烹饪一道美味的大餐。
再说说小麦，通过一些特别的工艺，也能从中获取珍贵的植物蛋白呢。
这就好像是在一堆麦粒中寻找闪闪发光的金子。
提取植物蛋白的过程可不简单呢，需要精心的操作和耐心的等待。
这就跟培养一个优秀的孩子一样，得花费好多心思。
难道不是吗？
在这个过程中，每一个步骤都很关键啊。
从选择合适的植物原料，到运用恰当的提取技术，就像走在一条充满挑战的道路上，但一旦成功，那收获可是满满的呀！想想看，得到了纯净的植物蛋白，那是多么让人兴奋的事情。
而且啊，植物蛋白对我们的身体有那么多好处，能提供能量，让我们活力四射。
这就如同给身体注入了一股强大的力量，让我们能够勇往直前。
不用 animal 蛋白，咱用植物蛋白也能打造出健康又美味的食物，这多厉害呀！这就好像我们有了一把神奇的钥匙，可以打开健康生活的大门。
所以呀，大家可别小看了植物蛋白的提取，这可是一项充满魅力和价值的事情呢！。
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一提取植物总蛋白（以植物花粉为例）：
1.三氯乙酸法（TCA）/丙酮(acetone)提取花粉总蛋白质
花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，用含10%TCA和1%DTT的acetone沉淀蛋白质，-20度2个小时(必要时过夜)，4度25000g离心20min后去上清，用含1%DTT的acetone溶液悬浮沉淀，-20度1个小时,再次离心去上清，将真空干燥的沉淀在等电聚焦缓冲液中(8M urea，20mmDTT,4%CHAPS,2%ampholyte,PH:3-10) 20度震荡1小时，20度25000g离心20min，收集上清，沉淀再次用IEF缓冲液离心收集上清，可为后续试验做准备。
2．苯酚（phenol）提取法
花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，添加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）继续研磨5min,加提取缓冲液（0.1mol/L 8.8 Tr i s –HCl，5mmEDTA,20mmDTT,30%sucrose）。
将样本转移至离心管中，4度震荡30min，25000g离心10min，将上层的phenol层转移进另一个试管，将下边的水相层加1ml的phenol（tris 8.8 缓冲液）及提取缓冲液，震荡，离心，将再次收集到的phenol与前边收集的混合，加5倍体积的0.1 M ammonium acetate in 100%methanol，在-20度震荡沉淀蛋白质，必要时过夜，4度 25000g离心10min，将沉淀用0.1 M ammonium acetate in 100%methanol及80% acetone各洗两次, 含10mmDTT的80% acetone再洗一次，在每一步中蛋白沉淀都要完全重悬— -20度震荡30min，4度 25000g离心20min，洗剂完成后，沉淀真空干燥，IEF buffer提取蛋白质，如方法1。
3．直接IEF buffer提取蛋白质
直接IEF buffer提取蛋白质，花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，然后加入IEF buffer(8M尿素，20mmDTT,4%CHAPS，5mmEDTA，5mmTris base,2%ampholyte,PH:3-10).如方法1。
4．Tris-HCL缓冲液法
花粉在liquid nitrogen中研磨成粉末，加入Tris-HCL缓冲液（50mm,8.8,Tris-HCL, 5mmEDTA,20mmDTT,100mmKCL,2mmPMSF）,在融化后，混合液在4度放30min, 25000g离心20min,收集上清，对沉淀重新提取一次，将收集到的上清混合，用5倍体积的100%丙酮沉淀蛋白质，-20度孵育2h,离心后，用80%的丙酮洗剂沉淀2次，IEF buffer重悬沉淀，方法如1
5．利用Bradford试剂法估测提取的总蛋白浓度，并调整浓度行蛋白电泳，-80度保存。
本人翻译的，具体方法流程见附件原文。
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