植物组织蛋白提取方法
植物膜蛋白提取方法
植物膜蛋白提取方法说实话植物膜蛋白提取这事，我一开始也是瞎摸索。
我试过超声破碎法来提取。
就像敲鸡蛋，想把里头的东西弄出来那种感觉。
把植物组织放在缓冲液里，然后用超声仪来破碎细胞。
可是我发现这种法子很容易把膜也给弄破喽，得到的膜蛋白纯度不咋高，好多其他乱七八糟的东西都混进去了。
这就好比炒菜的时候把不该放的调料都倒进去了，最后味道全乱套了。
后来呢，我又尝试了差速离心法。
这就像挑豆子，把大的小的分开那样。
先把植物组织破碎后，通过不同的离心速度把细胞器啊什么的和膜蛋白分离开。
开始的时候我老是掌握不好离心速度和时间，要么离心速度不够，那些东西分不开，要么就是离心太久了，把想要的膜蛋白都给弄丢了一部分。
经过好多次的尝试，我才慢慢摸准了一点规律。
比如说，先低速度短时间离心去掉那些大的残渣，然后再逐步提高离心速度和延长时间来纯化膜蛋白。
我有段时间还听别人说密度梯度离心法好使。
这方法有点像从水里分层捞东西。
就是用不同浓度的溶液形成一个密度梯度，然后离心，让膜蛋白在适合它密度的那个层面停下来，这样和其他物质分离开。
但是这个方法操作起来比较麻烦，各种溶液的配制就要很精确，我就老在这上面出错，溶液配不对后续根本得不到像样的结果。
还有就是用化学试剂来提取。
比如说表面活性剂。
这就跟用清洁剂去油污有点像，表面活性剂能把膜蛋白从细胞膜上给“扒拉”下来。
不过这化学试剂的种类和浓度可得选好了，选错了就像洗衣粉放太多把衣服都洗坏了似的，膜蛋白的活性啥的就全没了。
我就在选择表面活性剂的种类和浓度上栽过跟头，试了好多种，结果都不理想，不是蛋白没有提取出来就是提取出来的蛋白变性了失去活性了。
如果是新手上路的话，我觉得差速离心法可以先试试，毕竟相对来说比较直白一点，虽然可能会碰到不少问题，但是在调整离心速度和时间的过程中可以慢慢学习。
可千万别像我刚开始的时候，只知道按照书上的数值来，实际情况和书上可能有差别，要多做尝试才行。
在操作的全过程里，实验设备的清洁也很重要。
蛋白质提取方法(个人总结篇)
植物蛋白质提取方法汇总（本人经验总结）一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm 以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm 以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
植物组织蛋白提取方法
植物蛋白质提取方法总汇一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g 样品加入3.5ml 提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4 C或11100rpm20min4 °C4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1 、1Mtris-HCl （PH8）45ml2、甘油（Glycerol ）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone ）6g这种方法针对SDS-PAGE垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1 、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20 C的条件下过夜，然后离心（4 C 8000rpm以上1 小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的3 -巯基乙醇），摇匀后离心（4C 8000rpm 以上1 小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15C 8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在 4 C待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80 C备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的3 -巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS 溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLO检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每ImITRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4 度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95 %乙醇：（2ml每ImITRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g ，5 min ，4 度，弃上清重复0.3M 盐酸胍/95 %乙醇步2 次沉淀中加入100%乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心：7500g ，5min，4 度，弃上清吹干沉淀1 % SDS溶解沉淀离心：10000g，10min ，4 度取上清-20 度保存（或可直接用于WESTERN BLO）T存在的问题：加入1%SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
植物组织蛋白提取
蛋白提取方法：1、液氮研磨成粉2、转移粉末（0.1-0.3g）到2ml离心管中，加10%TCA/丙酮至满管，涡旋混匀；4°；16000g；离心3min；弃上清。
3、用含0.1M醋酸铵的甲醇加满离心管，混匀；4°；16000g离心3min；弃上清。
4、用丙酮加满离心管，涡旋混匀；4°；16000g离心3min；弃上清。
5、室温晾干，去除残余丙酮。
6、按0.4-0.8ml/0.1g比例的起始材料加SDS extraction buffer混匀30min；4°；16000g离心3min；保留上清。
加与上清等体积的苯酚（ph8.0）彻底混匀30min；4°；16000g离心3min；转移酚相，加与酚相等体积的水，水洗一次，保留酚相至一新的离心管中，加0.1M乙酸铵的甲醇至满管；-20°过夜；4°16000g 离心5min；小心地移除上清，可见沉淀。
7、用甲醇清洗沉淀一次，丙酮清洗至沉淀为白色（5-6次）每次混匀都要涡旋混匀如上离心。
将蛋白空气晾干（不要太干，丙酮挥发完即可否则蛋白干粉不好溶）。
溶液配比：1、TCA/丙酮（10%TCA；0.07%巯基乙醇）：10g TCA（三氯乙酸）70ul巯基乙醇丙酮定容至100ml2、丙酮（含0.07%巯基乙醇）：140ul巯基乙醇加入200ml丙酮中。
3、SDS extraction buffer：30%蔗糖；2%SDS；0.1M Tris-HCl(Ph8.0)5%巯基乙醇；即：30g蔗糖；2g SDS；5ml巯基乙醇；用[0.1M Tris-HCl(ph8.0)]定容至100ml。
4、0.1M Tris-HCl(ph8.0)：Tris:1.21g溶于80ml的超纯水，浓HCl调ph8.0，定容至100ml。
5、0.1M乙酸铵/甲醇：乙酸铵1.54g；甲醇定容至200ml。
6、甲醇7、Tris饱和的苯酚（ph8.0）。
植物细胞质蛋白提取方法
1. 提取液制备：每 500ul 预冷的蛋白提取液 A 中加入 2ul 蛋白酶抑制剂；每 200ul
蛋白提取液 B 中分别加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的 200mg 植物组织样本剪碎，采用以下一种方
法处理：
i. 加入 500ul 提取液 A 后用匀浆机/匀浆器匀浆。
7. 在步骤 6 中的上清中加入 50ul 胞质提取液 B，高速涡旋振荡 15 秒，充分混匀。
8. 置冰上 40 分钟，每隔 10 分钟高速涡旋振荡 15 秒。
9. 在 4℃，16000×g 条件下离心 10 分钟。
10. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到细胞质蛋白。 11. 将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。
有效期： 一年。
产品简介： 贝博植物细胞质蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种植物细胞和各种实体植
物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取细胞质蛋白。提取过程简单方便，可在 1 小时 内完成。制备的蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于 Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白 研究。
磷酸化蛋白富集试剂盒 膜蛋白提取试剂盒 BCA 蛋白定量试剂盒 蛋白 Marker 细菌膜蛋白提取试剂盒 植物总蛋白提取试剂盒 植物膜蛋白提取试剂盒 蛋白酶抑制剂混合物 磷酸酶抑制剂混合物 SDS-PAGE 上样 Buffer
BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
不同组织的蛋白提取方法99
不同组织的蛋白提取方法2017-07-18不同组织的蛋白提取方法一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！或者用三氯醋酸―丙酮沉淀法，离子浓度小的1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3-204℃8000rpm以上13、的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上14、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000r pm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的'DTT65ul/ml。
二、组织：肠黏膜应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于BLOT存在的问题：加入1％SDS4度离心后又多了白色沉定，SDS左右。
植物提取蛋白质的方法
植物提取蛋白质的方法植物提取蛋白质是一项关键的实验技术，它可以用于分离纯化和研究各种不同的植物蛋白质。
在这篇文章中，我将介绍一些常见的植物提取蛋白质的方法。
一、机械法提取蛋白质机械法提取蛋白质是最常见的提取方法之一。
机械方法能够充分破碎植物细胞壁，释放细胞液中的蛋白质。
这一方法相对简单，并且适用于大多数植物材料。
首先，将植物样品切碎，例如使用搅拌器或切割机。
然后，将样品置于高速搅拌器中，加入一定量的提取缓冲液。
提取缓冲液的选择会因不同植物而异，常见的包括Tris-HCl缓冲液、PBS缓冲液等。
随后，搅拌样品，使其充分混合，一般搅拌时间为30分钟到1小时。
搅拌完成后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度会因样品的不同而有所变化。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
二、化学法提取蛋白质化学法提取蛋白质是一种革命性的方法，它可以应用于很多不同类型的植物材料。
化学法提取蛋白质通常使用表面活性剂来破坏细胞膜，从而释放蛋白质。
一个常用的化学法是使用Tween-20。
首先，将植物样品切碎，然后将样品与一定量的提取缓冲液一起加入离心管中。
提取缓冲液中含有Tween-20等表面活性剂，作用是破坏细胞膜结构。
然后，使用离心机将混合液离心，离心时间和速度的选择会因样品的不同而有所不同。
离心完成后，上清液中富含蛋白质，可以用于进一步的分离纯化。
化学法提取蛋白质相比机械法来说，可以更彻底地破坏细胞膜，更有效地释放蛋白质。
但是，使用化学方法也要注意表面活性剂的种类和浓度，过高的浓度可能会使得蛋白质变性。
三、酶解法提取蛋白质酶解法提取蛋白质是一种选择性高、过程温和的方法。
它利用酶的特异性作用，选择性地降解植物组织中的细胞壁，从而释放蛋白质。
酶解法的步骤较为简单。
首先，将植物样品切碎，然后加入适量的酶解缓冲液和适当浓度的酶。
酶解缓冲液的选择会因不同酶而异，常见的包括PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液等。
植物蛋白质提取方法总汇
1、根据样品重量(1g样品加进3.5ml提取液，可根据材料不同适当加进)，预备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加进提取液中在冰上静置(3-4小时)。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl(PH8)45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加进样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
3、加进等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加进裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放进-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的往离子水中(终体积为5ml)，使用前再加进1M 的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！目的：WESTERNBLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加进异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量) 倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加进0.3M盐酸胍/95％乙醇：(2ml每1mlTRIPURE用量)振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加进100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存(或可直接用于WESTERNBLOT)存在的题目：加进1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
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植物蛋白质提取方法总汇一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm 以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS 溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。
四、植物材料：水稻苗，叶鞘，根1、200毫克样品置于冰上磨碎2、加lysis buffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清3、重复离心5minlysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40五、蛋白质样品制备秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等（1986）的方法进行。
100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇），混匀，-20℃沉淀1小时，4℃，15000 r/min离心15 min，弃上清，沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清，（有必要再用80％丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。
按每mg干粉加入20μl（可调）UKS液[9.5 M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc，pH3.5-10)，6% Triton X-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度（温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰）16000 r/min离心15 min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳。
或者-70度保存。
六、植物根中蛋白质的抽取(1) sample, 液氮研磨(2) 装1.5 ml centrifuge 用tube(3) 加1M KH2PO4 K2HPO4 700 ul(4) 12000 rpm, 4度, 10-15minite(5) 取上层液，蛋白质就在里面三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm 以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！植物组织蛋白质提取方法（一）1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃蛋白质提取液：300ml4、提取上清夜，样品制备完成。
1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！植物组织蛋白质提取方法（二）三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm 以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！TCA-丙酮沉淀法，有人做过落叶松的的花粉步骤：1、液氮研磨充分2、加入含10%TCA、0.07%的巯基乙醇的丙酮溶液，-20度沉淀过夜3、4度，1000rpm离心1个小时，弃上清。
4、加100%丙酮，含0.07%的巯基乙醇，沉淀一小时5、4度，1000rpm离心15分钟，弃上清6、重复第4、5步7、80%丙酮，含0.07%的巯基乙醇，沉淀一小时8、重复第5步9、沉淀干燥。
10.低温保存样品TCA/丙酮法：（1）取4g果肉，用液氮在研钵中将其研磨成粉。
（2）加入12.5%冰冷的TCA/丙酮（含0.07%β-巯基乙醇），匀浆液在-20 ºC下，放置3h，纱布过滤。
（3）滤液在20000g离心30min，收集沉淀。
（4）用冷丙酮洗3次，沉淀在4ºC下干燥，备用。
2. 匀浆法：（1）称取4g果肉，用液氮在研钵中研磨成粉。
（2）加入4ml的匀浆缓冲液(匀浆液中含有20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 250 mM sucrose, 10 mM EGTA, 1 mM PMSF, 1 mM DTT, 以及1% Triton X-100)，继续研磨。
（3）匀浆液20000g离心30min。
（4）将上清转移到新的离心管中，加入终浓度为10%TCA溶液，4ºC下放置2 h。
（5）20000g离心40min，收集沉淀。
（6）用冷丙酮洗3次，沉淀在4ºC下干燥，备用。
3. 酚提取法：（1）称取4g果肉，用液氮在研钵中研磨成粉。
（2）加入4ml的匀浆缓冲液(匀浆液中含有20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 250 mM sucrose, 10 mM EGTA, 1 mM PMSF, 1 mMDTT, 以及1% Triton X-100)，继续研磨。
（3）匀浆液20000g离心30min。
（4）在上清液中加入等体积的pH7.8 Tris-饱和酚，充分摇荡，混匀，10000g，4ºC下离心30min，上层为水相，中间白色物质为杂质，下层为酚相。
（注：当提高匀浆缓冲液中sucrose 的浓度到1M时，酚相会出现在上层。
）（5）回收酚相，加入5倍体积含0.1M乙酸铵的预冷甲醇，充分混匀，-20ºC下过夜，沉淀蛋白。
（6）沉淀用含0.1M 乙酸铵的预冷甲醇洗2次。
预冷丙酮洗2次。
（7）沉淀在4ºC下干燥，备用。